O setor avícola apresenta o maior crescimento em volume produzido dentre todos os setores cárneos no Brasil. A grande participação dos produtos avícolas na alimentação humana somada ao risco do desenvolvimento de resistência bacteriana, levaram a União Européia (UE) a abolir utilização de antimicrobianos como aditivos e de forma profilática na ração de animais. A remoção dos aditivos associada ao sistema de criação intensivo acabaram por fazer que doenças, até então consideradas controladas, se tornassem reemergentes. A enterite necrótica aviária (NE) é considerada um exemplo. De forma geral, condições estressoras predispõem ao desenvolvimento de doenças, sendo o calor um dos estressores mais comuns que ocorrem em granjas aviárias. Este estudo enfoca o efeito do estresse térmico por calor (35±1ºC) sobre o desenvolvimento da NE em frangos de corte. Para isso, 60 frangos de corte machos foram divididos em 6 grupos experimentais: 1 Grupo Controle; 2 Grupo Controle Estressado (C/HS35); 3 Grupo Tioglicolato (T); 4 Grupo Tioglicolato Estressado (T/HS35); 5 Grupo Infectado (I); 6 Grupo Infectado Estressado (I/HS35). A infecção experimental com Clostridium perfringens foi feita por via oral, com a bacteria em meio de cultura misturada a ração, do 15º ao 21º dia de vida nos grupos I e I/HS35. O estresse por calor (35±1º C) foi realizado do 14º ao 21º dia de vida das aves dos grupos estressados. Durante todo período experimental os animais foram mantidos em isoladores. Em relação aos animais não estressados, os animais submetidos ao estresse por calor apresentaram: 1- menor escore lesional macro e microscópico no intestino delgado; 2- maior concentração de IgA no lavado intestinal do duodeno; 3 - menor concentração de IgA no jejuno; 4 - redução dos níveis séricos de IgA e IgY; 5 - maior concentração sérica de IgM; 6 - diminuição qualitativa evidente dos heterofilos intestinais em relação aos animais infectados e estressados. Portanto, mostrou-se que o estresse por calor apresentou efeito imunomodulador importante, ao reduzir a inflamação intestinal. Este achado associa-se provavelmente à diminuição da imunidade inata por redução da migração de heterófilos para a mucosa intestinal, desta forma prevenindo a manifestação de um um quadro clínico mais grave de NE, fato associado à diminuição das lesôes desencadeadas pelo processo inflamatório heterofílico. / The poultry sector presented the highest growth in the volume of production among all meat sectors in Brazil. The great participation of poultry products on human diet together with the risk of food and environmental contamination by resistant bacteria led the European Union (EU) countries to abolish the use of antibiotics as feed additives in animal production. This fact associated with the intensive farming system are being reported as responsible for the re-emergence of some already controlled diseases. The avian necrotic enteritis (NE) exemplify such an effect. Generally, stressful conditions are predisponent factors for disease development; heat stress is one of the most common stressor in poultry farms. This study focuses on the effects of heat stress (35 ± 1 º C) on the development of NE in broilers. For this purpose, 60 male broilers were divided into 6 groups: 1 - control group, 2 - stressed control group (C/HS35) 3 - thioglycolate group (T) 4 - thioglycolate stressed group (T/HS35); 5 - infected group (I) 6 - infected stressed group (I/HS35). Experimental infection with Clostridium perfringens, grown in thioglycollate broth medium, was given through the feed to the birds of groups I and I/HS35 from the 15th to 21st days of life. The heat stress (35 ± 1 °C) was induced continuously from the 14th to the 21st day of life in birds of the stressed groups. Throughout the experimental period the animals were kept in isolators. Compared to non-stressed animals, broilers subjected to heat stress showed: lower gross and microscopic score lesions in the small intestine; increased concentrations of IgA in duodenal lavage and decreased IgA concentrations in the jejunum; smaller concentrations of serum IgA and IgY; increased concentration of serum IgM; reduction in gut number of heterophils in the thioglycolate treated and in the infected groups. Therefore, this experimental model showed that heat stress presented a significant immunomodulatory role on the induced NE, most probably because it reduced intestinal inflammation via decrease in heterophils migration to the intestinal mucosa, which in turn might had reduced tissue damage during infamation, hence preventing the development of a more severe form of NE.

Setenta e seis amostras intestinais de lotes de perus apresentando ou não sinais clínicos de enterite foram avaliadas quanto à presença de adenovírus grupo 1 (TAV), vírus da enterite hemorrágica dos perus (HEV), astrovírus tipo 1 e 2 (TAstV-1 e TAstV-2), coronavírus dos perus (TCoV), reovírus, rotavírus e vírus da nefrite aviária (ANV) através da reação em cadeia da polimerase. Os resultados obtidos foram analisados quanto à região geográfica de origem das amostras, idade das aves e presença de sinais clínicos nos lotes. Foi detectada elevada positividade das amostras para pelo menos um vírus (93,4%), e grande número de amostras com associações de mais de um vírus (69,7%). Santa Catarina foi o estado com maior média de número de vírus detectados em associação nas amostras (3,14) e Goiás o estado com menor média (1,73). As amostras provenientes de aves em fase inicial de criação (1 a 4 semanas de idade) tiveram média de 3,20 vírus detectados por amostra, e 85% de detecção de TAstV-1 e TCoV (os mais frequentes), enquanto que na fase de terminação (5 a 18 semanas) foi observada menor média de vírus associados nas amostras (2,41), e os agentes mais detectados foram TAstV-1 (57,1%) e rotavírus (51,8%), no entanto, todos os vírus apresentaram menor frequência na fase de terminação do que na inicial, com exceção do TAV e reovírus. Quando os sinais clínicos estavam presentes todos os vírus foram detectados em maior percentual (sendo TAstV-1, TAstV-2 e TCoV os mais frequentes) do que nos lotes sem sinais clínicos, onde TAstV-1 e rotavírus foram os mais frequentes. Estudos posteriores são necessários para a compreensão do papel de cada vírus no desenvolvimento de enterites. / Intestinal samples from seventy-six Brazilian turkey flocks affected or not with intestinal disorders were evaluated for the presence of Adenovirus group 1 (TAV), hemorrhagic enteritis virus (HEV), Astrovirus type 1 and 2 (TAstV-1 e TAstV-2), turkey Coronavirus (TCoV), Reovirus, Rotavirus and avian nephritis virus (ANV) using the polimerase chain reaction. Geographic location, age of the flocks and the presence of clinical signs were analyzed in order to find a relationship with the viral detection. A high frequency of positive samples for at least one virus was observed (93,4%) and 69,7% of the samples showed an association of more than one agent. The highest average number of viruses detected in association (3,14) was found in the state of Santa Catarina and Goias showed the lowest average (1,73). An average of 3,20 viruses per sample was detected in poults in initial phase of the production cycle (1 to 4 weeks of age), and TAstV-1 and TCoV were detected in 85% of the samples (the most frequent viruses), while the terminanting phase (5 to 18 weeks) showed lower average number of viruses in association (2,41), and the most frequent viruses were TAstV-1 (57,1%) and rotavírus (51,8%). However, all the viruses were detected more frequently in the initial phase rather than in the terminating phase, in exception of TAV and reoviruses. A higher detection of the viruses was observed in poults with clinical signs (as TAstV-1, TAstV-2 and TCoV were the most frequent) compared to normal birds (as TAstV-1 and rotavirus were the most frequent). Furher researches should focus on the description and comprehension of the role of each virus, and the different combinations of viruses, in the development of enteric disease.

O resultado deste estudo foi dois artigos relacionados às lesões intestinais encontradas e presença de agentes associados a infecção por PCV2 e um terceiro artigo sobre a associação entre a presença de lesões histopatológicas em diferentes porções do trato intestinal e a carga viral presente nestas regiões e nas fezes. O primeiro artigo apresenta as lesões macroscópicas e microscópicas encontradas em 79 animais da fase de crescimento. As principais lesões macroscópicas foram: aumento de tamanho dos linfonodos mesentéricos (56), enterite necrótica (24), edema mesentérico (20), linfangectasia (15) e espessamento da parede do íleo (5). Marcação IHQ anti-PCV2 foi associada com depleção de células caliciformes (24), atrofia e fusão de vilosidades do íleo (18) e dilatação de vasos linfáticos (11). Foi observada a presença de co-infecções por Escherichia coli (5) Lawsonia intracellularis (1), Brachyspira spp.(4), Salmonella spp. (17), rotavírus (6) e calicivírus entérico (6). O segundo artigo avaliou 63 casos de enterite necrótica, nos quais o cólon foi o principal local onde foi observada necrose, aparecendo em 55 casos. Em 24 casos observou-se co-infecção de PCV2 e Salmonella spp. As alterações descritas: depleção de células caliciformes, índice apoptótico elevado em enterócitos do cólon, e marcação de IHQ positiva no citoplasma de enterócitos sugerem o envolvimento de PCV2 nos casos de enterocolite necrótica. A carga viral de PCV2 no trato intestinal, fezes e sangue de suínos, avaliada pela técnica de PCR em tempo real, associada com lesões histológicas e marcação de IHQ, bem como a interpretação destes resultados foi detalhadamente descrita no terceiro artigo. / The result of this study are presented in two articles describing intestinal lesions and the presence of associated agents with PCV2 and a third article that describes the association between the presence of histopathological lesions in different areas of the intestinal tract and viral load present in those areas and in the feces. The first report showed macroscopical and microscopical lesions in samples collected from 79 growing pigs. The main macroscopical lesions were: enlargement of mesenteric lymph-nodes (56), necrotic enteritis (24), mesenteric edema (20), limphangectasy (15) and thickening of the ileal wall (5). Immunohistochemistry (IHC) staining anti-PCV2 was associated with depletion of goblet cells (24), villous fusion and atrophy of the ileum (18) and dilatation of lymphatic vessels (11). It was observed the presence of co-infections with Escherichia coli (5) Lawsonia intracellularis (1), Brachyspira spp. (4), Salmonella spp. (17), rotavirus (6) and enteric caliciviruses (6). The second article evaluated 63 cases of necrotic enteritis, in which the colon was the main target of necrotic lesions, observed in 55 cases. In 24 cases co-infection with PCV2 and Salmonella spp. was observed. The main findings described: depletion of goblet cells, high apoptotic rate in colon enterocites and positive anti-PCV2 IHC staining in cytoplasm of enterocites suggests the involvement of PCV2 in cases of necrotic enterocolitis. The viral load of PCV2 in intestinal tract, feces and blood of swine, associated with histological lesions and IHC staining, evaluated by Real time PCR technique, as well as the interpretation of these results were described in details in the third article.

Doenças infecciosas entéricas das aves comerciais apresentam uma etiologia complexa e são distribuídas mundialmente, acarretando elevadas perdas econômicas. Aliadas à possibilidade de infecções únicas ou concomitantes entre diversos patógenos, as gastroenterites podem se refletir em outros sistemas, contribuindo ainda mais para a queda da performance dos lotes. Recentemente, foi detectado um coronavírus no conteúdo intestinal de aves apresentando despigmentação e diarréia. Este vírus, denominado de CECoV (chicken enteric coronavírus) é sugestivo de pertencer ao grupo 2, divergente dos demais coronavírus comuns em aves, pertencentes ao grupo 3 do gênero Coronavirus. No Brasil, há uma grande necessidade no conhecimento acerca da participação dos agentes virais nas diarréias de aves, sendo este um passo fundamental para o estabelecimento de medidas profiláticas específicas e para a exportação de produtos avícolas. Este estudo teve por objetivos detectar este coronavírus do grupo 2 em aves de corte, poedeiras comerciais e matrizes com e sem diarréia pela técnica de PCR dirigida ao gene codificador da RNA-polimerase RNA-dependente (gene RdRp) dos coronavírus do grupo 2, estabelecer a relação genealógica entre diversas amostras detectadas deste vírus com base em seqüências dos genes RdRp, gene codificador da proteína de espícula (S), gene codificador da proteína hemaglutinina-esterase (HE), gene 5, gene 3 e região 3\'UTR e realizar o diagnóstico diferencial com reovírus, rotavírus, variedades enterotrópicas do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBIG), astrovírus e adenovírus. O coronavírus CECoV foi detectado em 25 de 119 amostras de conteúdo entérico de aves de corte, matrizes e poedeiras com e sem diarréia, em diversas granjas produtoras no Brasil, pela técnica da reação em cadeia pela polimerase dirigida ao gene RdRp. O CECoV tem papel como agente primário e secundário em processos patológicos do trato digestório de aves e, ao serem analisadas filogeneticamente, diferentes amostras de CECoV formaram um grupo único com base no gene RdRp dentro do grupo 2 do gênero Coronavirus, possuindo homologia com coronavírus do grupo 3 na região 3\'UTR, sendo sua origem sugerida como um evento de recombinação entre coronavírus dos grupos 2 e 3. Através do estabelecimento de uma rotina de diagnóstico diferencial, as freqüências de ocorrência de vírus entéricos em aves de produção criadas nas 119 granjas no Brasil foram: rotavírus=48,74%, reovírus=2,52%, VBIG=65,54%, CECoV=21% e astrovírus=3,36%. / Infectious enteric diseases in poultry have a complex etiology and a worldwide distribution, causing large economic losses. Along with the possibility of single or multiple infections by different pathogens, enteric diseases may also be reflected in other systems, contributing even more to the fall of performance in the affected flocks. Recently, a coronavirus was detected in the intestinal contents of chickens with depigmentation and diarrhea. This virus, named CECoV (chicken enteric coronavirus), has been suggested as belonging to group 2, divergent of the common avian coronaviruses, which belongs to the group 3 of the genus Coronavirus. In Brazil, there is a great need for the knowledge on the role of viral agents in diarrhea of poultry, what is a fundamental step for the establishment of specific prophylactic measures and for the exportation of poultry-derived products. The present study aimed the detection of this group 2 coronavirus in broilers, laying hens and breeders with and without diarrhea using a PCR targeted to the gene coding for the RNA-dependent RNA-polymerase (RdRp) of group 2 coronaviruses, the establishment of the genealogical relationship among the different strains detected based on sequences of the RdRp, the genes coding for the spike protein (S gene), hemagglutinin-esterase protein (HE gene), gene 5, gene 3 and the 3\' UTR and the differential diagnosis with reovirus, rotavirus, enterotropic strains of infectious bronchitis virus (IBV), astrovirus and adenovirus. CECoV was found in 25 out of 119 samples of enteric contents of broilers, breeders and laying hens in different farms in Brazil using the PCR to the RdRp. CECoV has a role as a primary and secondary pathogen in pathological processes of the enteric tract of poultry and the phylogenetic analysis showed that different strains of CECoV formed an unique cluster based on the RdRp inside the group 2 of coronaviruses, harboring homology with group 3 coronaviruses in the 3\'UTR, being its origin suggested as a recombination event between coronaviruses of groups 2 and 3. By the establishment of a routine of diagnosis, the frequencies of enteric viruses in the 119 poultry farms surveyed were: rotavirus = 48.74%, reovirus = 2.52%, IBV = 65.54%, CECoV = 21% and astrovirus = 3.36%.

Setenta e seis amostras intestinais de lotes de perus apresentando ou não sinais clínicos de enterite foram avaliadas quanto à presença de adenovírus grupo 1 (TAV), vírus da enterite hemorrágica dos perus (HEV), astrovírus tipo 1 e 2 (TAstV-1 e TAstV-2), coronavírus dos perus (TCoV), reovírus, rotavírus e vírus da nefrite aviária (ANV) através da reação em cadeia da polimerase. Os resultados obtidos foram analisados quanto à região geográfica de origem das amostras, idade das aves e presença de sinais clínicos nos lotes. Foi detectada elevada positividade das amostras para pelo menos um vírus (93,4%), e grande número de amostras com associações de mais de um vírus (69,7%). Santa Catarina foi o estado com maior média de número de vírus detectados em associação nas amostras (3,14) e Goiás o estado com menor média (1,73). As amostras provenientes de aves em fase inicial de criação (1 a 4 semanas de idade) tiveram média de 3,20 vírus detectados por amostra, e 85% de detecção de TAstV-1 e TCoV (os mais frequentes), enquanto que na fase de terminação (5 a 18 semanas) foi observada menor média de vírus associados nas amostras (2,41), e os agentes mais detectados foram TAstV-1 (57,1%) e rotavírus (51,8%), no entanto, todos os vírus apresentaram menor frequência na fase de terminação do que na inicial, com exceção do TAV e reovírus. Quando os sinais clínicos estavam presentes todos os vírus foram detectados em maior percentual (sendo TAstV-1, TAstV-2 e TCoV os mais frequentes) do que nos lotes sem sinais clínicos, onde TAstV-1 e rotavírus foram os mais frequentes. Estudos posteriores são necessários para a compreensão do papel de cada vírus no desenvolvimento de enterites. / Intestinal samples from seventy-six Brazilian turkey flocks affected or not with intestinal disorders were evaluated for the presence of Adenovirus group 1 (TAV), hemorrhagic enteritis virus (HEV), Astrovirus type 1 and 2 (TAstV-1 e TAstV-2), turkey Coronavirus (TCoV), Reovirus, Rotavirus and avian nephritis virus (ANV) using the polimerase chain reaction. Geographic location, age of the flocks and the presence of clinical signs were analyzed in order to find a relationship with the viral detection. A high frequency of positive samples for at least one virus was observed (93,4%) and 69,7% of the samples showed an association of more than one agent. The highest average number of viruses detected in association (3,14) was found in the state of Santa Catarina and Goias showed the lowest average (1,73). An average of 3,20 viruses per sample was detected in poults in initial phase of the production cycle (1 to 4 weeks of age), and TAstV-1 and TCoV were detected in 85% of the samples (the most frequent viruses), while the terminanting phase (5 to 18 weeks) showed lower average number of viruses in association (2,41), and the most frequent viruses were TAstV-1 (57,1%) and rotavírus (51,8%). However, all the viruses were detected more frequently in the initial phase rather than in the terminating phase, in exception of TAV and reoviruses. A higher detection of the viruses was observed in poults with clinical signs (as TAstV-1, TAstV-2 and TCoV were the most frequent) compared to normal birds (as TAstV-1 and rotavirus were the most frequent). Furher researches should focus on the description and comprehension of the role of each virus, and the different combinations of viruses, in the development of enteric disease.

No description available.

Some ill. mounted / Bibliography: leaves 109-129 / xiii, 129, [ca. 60] leaves : ill. (some col.) ; 30 cm. / Title page, contents and abstract only. The complete thesis in print form is available from the University Library. / Thesis (Ph.D.)--University of Adelaide, Dept. of Microbiology and Immunology, 1984

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniversitet, 2006. / Härtill 4 uppsatser.

A enterite necrótica causada por Clostridium perfringens é, comprovadamente, um grande problema para frangos de corte, seja sob a forma clínica ou subclínica , com elevados prejuízos produtivos. Em perus, não está claramente identificada a influência deste patógeno sobre os resultados produtivos, e provavelmente por razões econômicas, o volume de pesquisa nesta área é limitado. Em dois experimentos consecutivos, conduzidos em granjas experimentais diferentes, e sobre cama nova e reutilizada, perus de 14 dias, sem medicação com anticoccidianos, foram inoculados, a partir de uma amostra de campo patogênica, com uma superdosagem de aproximadamente 1 x 1010 UFC/ml de Clostridium perfringens, tipo A; bactéria anaeróbica Gram positiva, que compõe a microflora intestinal dos perus. Lesões necróticas severas, com grande destruição da mucosa intestinal, foram observadas após o 4º dia de inoculação. Nos dois experimentos, a resposta dos perus à infecção foi diferente da descrita em frangos de corte. A mortalidade foi muito baixa ou nula e a recuperação das aves, independente da medicação utilizada, foi rápida com pouco ou nenhum comprometimento zootécnico. Escores das lesões histológicas foram desenvolvidos, para tentar correlacionar as lesões macroscópicas com as lesões microscópicas, mas a correlação foi baixa. Frente ao alto desafio observado, não foi possível avaliar adequadamente a ação do antimicrobiano utilizado. As respostas frente aos desafios de Clostridium perfringens nos perus, aparentam ser diferentes em relação às observadas em frangos de corte, sendo necessária cautela ao extrapolar padrões de uma espécie para outra. O uso de critérios subjetivos nas avaliações podem comprometer a tomada de decisão em relação aos tratamentos e as respostas esperadas. / Necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens represents a major challenge in broilers, causing clinical or sub clinical diseases, and results in important economic losses for the poultry industry. In turkeys, however, the importance of this pathogen is not clearly defined, and there are few studies assessing its effects on the performance of turkeys, most probably for economic reasons. In two consecutive trials, conducted in two experimental farms, 14 day old turkey poults were reared on new and reused wood shavings litter, without any anticoccidials in the feed, and were inoculated with an overdose of approximately 1x1010 CFU/ml of a pathogenic field sample of Clostridium perfringens type A. This Gram positive anaerobic bacterium is a normal inhabitant of the gut micro flora in the enteric tract of turkeys. Severe necrotic lesions, with major damage to the intestinal mucosa were observed on Day 4 after inoculation. In both trials, the response to the turkeys to the clostridial infection was clearly different from what is described in the literature for broilers. The mortality rate was very low or inexistent, and the birds in all treatments groups recovered very fast, with little or no impact on performance results. An attempt was made to establish a pattern to correlate histological lesion scores with macroscopic and microscopic lesions, but the resulting correlation was very low. Considering the high level of challenge induced in both trials, it was not possible to evaluate in activity of the antibiotic in proper terms. The response of turkeys to a high level of challenge with Clostridium perfringens seems to be different when compared to what is observed in broilers under similar experimental conditions, and caution should be applied when using the same diagnostic methods for different species. The use of subjective criteria to assess and describe the lesions can lead to erroneous treatments decisions and misinterpretation of the responses to treatment.

O resultado deste estudo foi dois artigos relacionados às lesões intestinais encontradas e presença de agentes associados a infecção por PCV2 e um terceiro artigo sobre a associação entre a presença de lesões histopatológicas em diferentes porções do trato intestinal e a carga viral presente nestas regiões e nas fezes. O primeiro artigo apresenta as lesões macroscópicas e microscópicas encontradas em 79 animais da fase de crescimento. As principais lesões macroscópicas foram: aumento de tamanho dos linfonodos mesentéricos (56), enterite necrótica (24), edema mesentérico (20), linfangectasia (15) e espessamento da parede do íleo (5). Marcação IHQ anti-PCV2 foi associada com depleção de células caliciformes (24), atrofia e fusão de vilosidades do íleo (18) e dilatação de vasos linfáticos (11). Foi observada a presença de co-infecções por Escherichia coli (5) Lawsonia intracellularis (1), Brachyspira spp.(4), Salmonella spp. (17), rotavírus (6) e calicivírus entérico (6). O segundo artigo avaliou 63 casos de enterite necrótica, nos quais o cólon foi o principal local onde foi observada necrose, aparecendo em 55 casos. Em 24 casos observou-se co-infecção de PCV2 e Salmonella spp. As alterações descritas: depleção de células caliciformes, índice apoptótico elevado em enterócitos do cólon, e marcação de IHQ positiva no citoplasma de enterócitos sugerem o envolvimento de PCV2 nos casos de enterocolite necrótica. A carga viral de PCV2 no trato intestinal, fezes e sangue de suínos, avaliada pela técnica de PCR em tempo real, associada com lesões histológicas e marcação de IHQ, bem como a interpretação destes resultados foi detalhadamente descrita no terceiro artigo. / The result of this study are presented in two articles describing intestinal lesions and the presence of associated agents with PCV2 and a third article that describes the association between the presence of histopathological lesions in different areas of the intestinal tract and viral load present in those areas and in the feces. The first report showed macroscopical and microscopical lesions in samples collected from 79 growing pigs. The main macroscopical lesions were: enlargement of mesenteric lymph-nodes (56), necrotic enteritis (24), mesenteric edema (20), limphangectasy (15) and thickening of the ileal wall (5). Immunohistochemistry (IHC) staining anti-PCV2 was associated with depletion of goblet cells (24), villous fusion and atrophy of the ileum (18) and dilatation of lymphatic vessels (11). It was observed the presence of co-infections with Escherichia coli (5) Lawsonia intracellularis (1), Brachyspira spp. (4), Salmonella spp. (17), rotavirus (6) and enteric caliciviruses (6). The second article evaluated 63 cases of necrotic enteritis, in which the colon was the main target of necrotic lesions, observed in 55 cases. In 24 cases co-infection with PCV2 and Salmonella spp. was observed. The main findings described: depletion of goblet cells, high apoptotic rate in colon enterocites and positive anti-PCV2 IHC staining in cytoplasm of enterocites suggests the involvement of PCV2 in cases of necrotic enterocolitis. The viral load of PCV2 in intestinal tract, feces and blood of swine, associated with histological lesions and IHC staining, evaluated by Real time PCR technique, as well as the interpretation of these results were described in details in the third article.