Submitted by ALINE MENDES DE SOUSA GOUVEIA null (alinemendgouv@hotmail.com) on 2016-03-11T18:04:01Z No. of bitstreams: 1 Gouveia_Aline M Sousa_ dissertação final.pdf: 1929135 bytes, checksum: afef42c043c33f7c7a9cdcb09f7f4188 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-03-14T17:13:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gouveia_ams_me_bot.pdf: 1929135 bytes, checksum: afef42c043c33f7c7a9cdcb09f7f4188 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-14T17:13:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gouveia_ams_me_bot.pdf: 1929135 bytes, checksum: afef42c043c33f7c7a9cdcb09f7f4188 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O rabanete pode ser cultivado entre o período de safra de outras culturas de ciclo mais longo, sendo uma opção interessante aos pequenos produtores rurais que enxergaram nesta hortaliça uma possibilidade de incremento na rentabilidade das suas áreas. Devido a poucas informações na literatura que mostrem os efeitos do potássio na produção, qualidade e nas características bioquímicas do rabanete, objetivou-se com este trabalho avaliar os efeitos da adubação potássica aplicado em cobertura na produção e qualidade pós-colheita da cultura do rabanete armazenado sob refrigeração. O experimento foi conduzido na Fazenda Experimental da FCA/UNESP, em São Manuel/SP e as avaliações foram realizadas no Departamento de Horticultura da Faculdade de Ciências Agronômicas (FCA/UNESP). O delineamento experimental foi em blocos ao acaso, composto por cinco tratamentos de doses de potássio (K2O) (0; 22,5; 45; 67,5 e 90 kg ha-1) na forma de cloreto de potássio em cobertura, com cinco repetições. Foram avaliadas as características vegetativas da planta, acúmulo de nutrientes na raiz e produtividade. Para as características de qualidade (físico-química e bioquímica) as raízes colhidas foram armazenadas a temperatura de 5 ± 1 °C e UR de 85 ± 5 % durante 28 dias, sendo avaliadas a cada 7 dias, quanto a perda de massa, pH, acidez titulável, sólidos solúveis, açúcares redutores, ácido ascórbico (vitamina C), compostos fenólicos, pigmentos (carotenoides e antocianinas totais) e atividade enzimática (peroxidase). Para as características de produção do rabanete, obtiveram-se respostas lineares significativas em função das doses de potássio aplicadas em cobertura para: altura de plantas, massas da matéria fresca da parte aérea, raiz e total, com incremento de 0,46 cm, 0,61 g, 1,05 g, e 2,02 g por planta para cada 10 kg ha-1 de K2O aplicados, respectivamente. Para produtividade, houve u¬¬¬¬¬¬m incremento em 1,05 t ha-1 a cada 10 kg ha-1 de K2O aplicados. Para a porcentagem de raízes comerciais, houve ajuste da equação quadrática, sendo a dose 52,4 kg ha-1 K2O apresentou maior percentual (97,7 %) de raízes comercializáveis. A ordem decrescente dos macronutrintes acumulados pela raiz em média foi de: K > N > Ca > P > S > Mg. Para as caraterísticas ¬¬físico-químicas e bioquímicas, observou-se aumento em função do aumento das doses de potássio para acidez titulável e diminuição para perda de massa, pH, sólidos solúveis, açúcares redutores, pigmentos (carotenoides e antocianinas totais), compostos fenólicos e na atividade da peroxidase, mantendo-se estável os teores de ácido ascórbico. Já em função do período de armazenamento, observou-se aumento para perda de massa, acidez titulável e pigmentos (carotenoides e antocianinas totais), diminuição para sólidos solúveis, açúcares redutores e manteve-se estável os teores de ácido ascórbico, compostos fenólicos e atividade da peroxidase. / The radish is grown in consortium with other longer-cycle crops, but now small farmers have seen in the vegetable, a chance to increase the profitability of their areas. The literature has little information as to potassium’s effects on the production, quality and the biochemical Radish characteristics. This study is aimed to evaluate the effects of potassium fertilizer applied in coverage in the production and culture of post-harvest quality radish under refrigeration. The experiment was conducted at the Experimental Farm of FCA/UNESP in San Manuel / SP and the evaluations were carried out in the Department of Horticulture, Faculty of Agricultural Sciences (FCA / UNESP). The experimental design was in randomized blocks, comprising of five treatments of potassium (K2O) (0; 22,5; 45; 67,5 and 90 kg ha-1) in coverage, with five repetitions. We evaluated the vegetative characteristics of the plant, nutrient accumulation in the shoots, roots and productivity. For the quality features, physical chemistry and biochemistry harvested roots were stored at 5 ± 1 °C and RH 85 – 90 % for 28 days were evaluated every 7 days, the mass loss, pH, titratable acidity, soluble solids, reducing sugars, ascorbic acid (vitamin C), phenolic compounds, pigments (carotenoids and anthocyanins) and enzyme activity (peroxidase). For radish production characteristics, we obtained significant responses as a function of potassium doses on coverage for plant height, mass of fresh matter of the aerial part, root and total, an increase of 0,46 cm, 0,61 g, 1,05 g and 2,02 g per plant per 10 kg ha-1 K2O applied, respectively. The decreasing order of macronutrintes accumulated by the root is: K> N> Ca> P> S> Mg. For productivity, there was an increase by 1,05 t ha-1 every 10 kg ha-1 K2O applied and the dose 52,4 kg ha-1 K2O with the highest percentage (97,7 %) in marketable yield. For the physicochemical and biochemical characteristics as a function of potassium doses, were obtained rise to acidity, decreased to mass loss, pH, soluble solids, reducing sugars, pigments (carotenoids and anthocyanins), phenolic compounds and activity peroxidase and remained stable ascorbic acid content. Already a function of storage time, we obtained increased to weight loss, titratable acidity and pigments (carotenoids and anthocyanins), decreased to soluble solids, reducing sugars and remained stable ascorbic acid content, phenolic compounds and activity peroxidase.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3716.pdf: 15456968 bytes, checksum: 4a39e68e7b10a9e50bb83087365cf289 (MD5) Previous issue date: 2011-09-26 / Financiadora de Estudos e Projetos / Ten herbs used in traditional medicine supported by literature for its effectiveness to osteoarticular diseases were selected to conduct a screening of inhibition activity against the cathepsin K, an important enzyme responsible for cleavage of collagen, the main constituent of extracellular matrix of cartilage and bone. Out of the ten herbs selected (ginger, saffron, camellia, cat s claw, mentrasto , moringa , babaçu , devil s claw, urtica e pequi ), one, gengibre (Z. officinale), should be highlighted by a high inhibitory activity of its extracts and fractions against cathepsin K and due to its ancient use as a therapeutic agent. From the dichloromethane fraction obtained of the crude extract of the rhizome of Z. officinale were isolated and identified 18 compounds (4-gingerol, 6-gingerol, 8-gingerol, 6-shogaol, 8-shogaol, 10-shogaol, 6- paradol, 6-gingerdiol, methyl 6-gingerol, methyl 6-shogaol, diacetoxy-6-gingerdiol, methyl diacetoxy-6-gingerdiol, zingerone, gingerenone A, galanolactone, 3-acetoxy- 5-hydroxy-1,7-bis(4 -hydroxy-3 -methoxyphenyl)-heptane and hexahydrocurcumin). From the hexane fraction and essential oil were identified two monoterpenes and four sesquiterpenes. The most active compounds against cathepsin K were gingerols and shogaols with longer alkyl chain. Optimization of the separation of major compounds (6, 8 and 10-gingerol) and an overload study of C18 column was performed using HPLC, obtained as result dozens to hundreds of milligrams of each gingerol with high purity. Structural modifications of 6-gingerol were carried out and of the seven derivatives obtained 4 presented significant increase in inhibition of cathepsin K. Of all the compounds, three, SSi6, 10-gingerol, 6-shogaol, were selected for later tests: determinating of the mode the inhibition against cathepsin K, inhibition against cathepsin K and inhibition of nitric oxide (NO) production, in cellular culture. The inhibitions determined were: partially noncompetitive, partially uncompetitive and complete uncompetitive for the SSi6, 10-gingerol and 6-shogaol, respectively. Excellent inhibition activity against the cathepsin K, in cellular culture, can be observed for SSi6 and 6-shogaol. In the inhibition assay of NO production, the 6- shogaol was the only compound that appeared as effective. / Dez plantas utilizadas pela medicina tradicional com indicativos na literatura de suas eficácias frente a doenças osteoarticulares foram selecionadas para a realização de uma triagem de atividade inibitória frente à catepsina K, uma importante enzima responsável pela clivagem do colágeno, principal constituinte da matriz extracelular da cartilagem e ossos. Das dez plantas selecionadas (gengibre, açafrão, camélia, unha-de-gato, mentrasto, moringa, babaçu, garra-do-diabo, urtigão e pequi), uma, gengibre (Zingiber officinale), merece destaque pela alta inibição de seu extrato e frações frente à catepsina K e por seu uso milenar como agente terapêutico. Da fração de diclorometano obtida do extrato bruto dos rizomas de Z. officinale isolou-se e identificou-se 18 substâncias (4-gingerol, 6-gingerol, 8-gingerol, 6-shogaol, 8- shogaol, 10-shogaol, 6-paradol, 6-gingerdiol, metil-6-gingerol, metil-6-shogaol, diacetato de 6-gingerdioila, diacetato de metil-6-gingerdioila, zingerona, gingerenona A, galanolactona, 3-acetato de 5-hidroxi-1,7-bis(4 -hidroxi-3 -metoxifenil)-heptila e hexaidrocurcumina). Da fração de n-hexano e do óleo essencial, foram identificados 2 monoterpenos e 4 sesquiterpenos. As substâncias mais ativas frente à catepsina K foram os gingerois e shogaois de maior cadeia alquílica. Otimização da separação das substâncias majoritárias (6, 8 e 10-gingerol) e um estudo de sobrecarga de uma coluna C18 por CLAE, foram realizados, obtendo-se como resultado o isolamento de dezenas a centenas de miligramas de cada gingerol com considerável grau de pureza. Modificações estruturais do 6-gingerol foram realizadas e, das sete substâncias obtidas, 4 tiveram um aumento considerável do poder inibitório. Das substâncias obtidas, três, SSi6, 10-gingerol, 6-shogaol, foram selecionadas para ensaios posteriores: determinação do tipo de inibição frente à catepsina K, inibição da catepsina K e inibição da produção de óxido nítrico (NO), em meio celular. As inibições determinadas foram não-competitiva parcial, acompetitiva parcial e acompetitiva completa, para o SSi6, 10-gingerol e 6-shogaol, respectivamente. Excelentes atividades de inibição frente à catepsina K, em meio celular, puderam ser observadas para o SSi6 e 6-shogaol. No ensaio de inibição da produção de NO, o 6- shogaol foi a única substância que se apresentou como efetivo.

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-11Bitstream added on 2015-03-03T12:07:20Z : No. of bitstreams: 1 000809501.pdf: 784712 bytes, checksum: 0ea0788bc46ef920205857dd55beb4e2 (MD5) / A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma zoonose parasitária causada pelo protozoário Leishmania infantum transmitido principalmente pela picada do vetor flebotomíneo da espécie Lutzomyia longipalpis. O presente estudo objetivou avaliar a prevalência da LVC em cães, a distribuição de flebotomíneos e os fatores de riscos associados à doença, em uma área rural periurbana denominada por Cinturão Verde, localizada do município de Ilha Solteira, SP. Dessa forma, amostras de 250 cães, incluindo aspirados de linfonodos, de sangue e de suabe conjuntival foram coletadas para a realização dos exames parasitológico direto (PA), sorológico (ELISA e RIFI) e PCR (suabe conjuntival). A positividade dos cães para LVC foi de 31,6% (79/250) à RIFI, 28,8% (72/250) ao teste ELISA, 25,2% (63/250) ao PA e 20,4% (49/240) à PCR. A concordância entre os métodos, quando analisada pelo índice Kappa (p ? 0,05), foi considerada excelente entre ELISA x RIFI (94,5%), moderada entre ELISA x PA (81,7%) e entre RIFI x PA (78,3%), mas foi baixíssima entre PCR e os demais testes analisados. Os flebotomíneos da espécie Lu. longipalpis foram capturados com auxilio de armadilhas luminosas do tipo CDC (“Center for Disease Control and Prevention”), colocadas mensalmente no peridomicílio das propriedades rurais do Cinturão Verde, no período de setembro/2012 a agosto/2013, com três coletas em três dias consecutivos por mês. O numero de flebotomíneos capturados totalizou 65 machos e 25 fêmeas em 12 meses. O maior número de flebotomíneos capturados foi nos meses de dezembro/2012, fevereiro/2013, maio/2013 e julho/2013. Os fatores de riscos associados à LVC foram determinados estatisticamente pela análise univariada, os quais foram estatisticamente significativos (p ? 0,05) para os cães de porte grande, mostrando serem estes os mais susceptíveis à LVC, além da presença de galinhas nas propriedades ... / Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) is a parasitic zoonosis caused by Leishmania infantum, which is transmitted by the bite of Phebotominae insect of the Lutzomyia longipalpis species (sandfly). This study aimed to survey the prevalence of CVL in dogs, the distribution of sand flies and the risk factors associated with the disease in a rural area called “Cinturão Verde”, located in the municipality of Ilha Solteira, SP. Thus, samples of lymph node aspirates and blood were collected from 250 dogs for ELISA and indirect fluorescence antibody test (IFAT) and direct parasitological (PA) exams. In addition, conjunctival swab samples were also collected for Polymerase Chain Reaction (PCR). 79/250 (31.6%) dogs were positive by IFAT; 72/250 (28.8%) by ELISA; 63/250 (25.2%) by PA and 49/240 (20.4%) by PCR. The concordance of methods when statistically analysed two by two by the Kappa índexes (p ? 0.05) were considered of excellent agreement between ELISA and IFAT (94.5%), moderate between ELISA and PA (81.7%) and between IFAT and PA (78.3%), but when PCR was compared with the other tests, the agrrement indexes were very low. Lu. longipalpis were captured with the help of CDC (Center for Disease Control and Prevention) light traps, placed three consecutive times per month in the rural peridomiciliary properties of the “Cinturão Verde”, from September/2012 to August/2013 in 100 % of the properties visited. The parasite density ranged from 01 to 12 per month including males and females, totaling 64 males and 25 females over 12 months. The largest number of insects captured was in December 2012, February/2013, May/2013 and July/2013. The univaried statistical analysis of risk factors associated with CVL revealed that the big size-dogs, the presence of chickens in the properties as well as the lack of knowledge by the rural population about the CVL disease were considered indicators to predict infection ...

Nesse trabalho foram produzidas lipases da levedura Pseudozyma hubeiensis (HB85A) em reator de 14 L. Após produção da enzima, a lipase foi imobilizada por adsorção em suporte hidrofóbico por processo contínuo em reator de leito fixo. As melhores condições de imobilização foram: tempo de imobilização de 2 h e 29 min., pH de 4,76 e quantidade de enzima livre adicionada por grama de suporte de 1282 U/ g de suporte, sendo que, a máxima atividade da lipase imobilizada obtida foi de 143 U/g de suporte. O sobrenadante contendo lipase e o biocatalisador heterogênio foram caracterizados por planejamento fatorial. A máxima atividade da enzima imobilizada (71 U/g de suporte) foi obtida em pH 6,0 à temperatura de 52 °C. A imobilização da lipase resultou em um aumento na estabilidade dessa enzima em temperaturas altas, pH ácidos e neutros, presença de detergentes não-iônicos e altas concentrações de solventes orgânicos como iso-propanol, metanol e acetona. Foi possível a reutilização da lipase imobilizada por apenas uma vez na reação de hidrólise, havendo uma perda de 72 % da atividade após o primeiro reuso. Analisou-se ainda a estabilidade da lipase livre e imobilizada durante 40 dias de armazenamento a 4 °C. Durante o período de armazenamento, a lipase imobilizada manteve 50 % de sua atividade original e a lipase livre apresentou 80 %. O catalisador heterogêneo foi testado quanto a sua eficácia na produção de biodiesel. A reação de transesterificação foi realizada na ausência de co-solvente utilizando-se como matérias-primas metanol, etanol e iso-propanol e quatro fontes diferentes de triglicerídeo (óleo de soja, óleo de mamona, óleo residual de restaurante e a gordura bovina). A partir dos testes realizados, obteve-se um rendimento máximo quanto à produção de biodiesel de 3,15 % utilizando-se óleo de mamona e iso-propanol como matéria-prima pelo período de 24 h. A produção de biodiesel utilizando diferentes quantidades de lipase imobilizada e também a lipase livre como catalisador foi testada na presença de hexano, iso-propanol e óleo de mamona pelo período de 24 h nas temperaturas de 40, 50 e 60 °C. No entanto, não houve produção de biodiesel nas condições analisadas. / In this work, lipases from yeast Pseudozyma hubeiensis (strain HB85A) were produced in a 14 L reactor. After lipase from yeast P. hubeiensis (strain HB85A) production, the enzyme was immobilized by adsorption in polyestyrene divinylbenzene hydrophobic support in a packet bed column. The best conditions for lipase immobilization were: 2 h and 29 min. immobilizing time, pH 4.76 and rate of free enzyme added per gram of support equal to 1282 U/g. The maximum activity of immobilized lipase was reached of 143 U/g. The lipases of P. hubeiensis (HB85A) supernatant culture and the heterogeneous catalyst were characterized through response surface methodology by factorial design. The maximum activity of immobilized lipase was reached for a support rate of 71 U/g, with pH 6.0 and temperature of 52 °C. It was detected that lipase immobilization increased enzyme stability under high temperatures, neutral and acid pH levels, non-ionic detergent and high concentration of organic solvent like iso-propanol, methanol and acetone. The reuse of immobilized lipase was possible only once for hydrolysis reaction, with activity losses of 72 % after first re-use. Also, it was tested lipase stability in a period of 40 days, under 4 °C storage conditions. During storage period, immobilized lipase kept 50 % of its original activity. Free lipase kept 80 %. After the development of heterogeneous catalyst, its efficiency as catalyst for biodiesel production was analyzed in this study. The transesterification reaction was tested in co-solvent absence using as raw material three differents sources of alcohols (methanol, ethanol and iso-propanol) and four differents triglicerides source (soybean oil, castor oil, waste cooking oil and bovine fat) and as catalystis the immobilized lipase. Based in test results, the maximum biodiesel production yield was 3.15 % using castor oil and methanol as raw material for 24 h. The biodiesel production was also tested with different amount of immobilized lipase and with free lipase as catalystis at the presence of methanol, castor oil and the co-solvent hexane for 24 h at 40, 50 e 60 °C. However there was no biodiesel production at the tested conditions.

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Ricardo Luiz Moro de Sousa / Banca: José Moacir Marin / Banca: Eduardo Hilário / Banca: Maria da Glória Buzinaro / Resumo: Foram realizadas a clonagem e expressão do gene da nucleoproteína (N) de uma estirpe vacinal de referência M41 do vírus da bronquite infecciosa (VBI), como proteína recombinante de fusão, contendo uma cauda de poli-histidina na extremidade carboxi-terminal, em 2 sistemas hospedeiros; na levedura metilotrófica, Pichia pastoris e na bactéria Escherichia coli. A proteína N derivada de um isolado variante do VBI de surtos a campo no Brasil, também foi expressa em E. coli. As características bioquímicas e imunoquímicas de tais proteínas recombinantes, foram determinadas, tendo sido evidenciado maior eficiência de produção no sistema hospedeiro constituído por E. coli, comparativamente ao sistema composto por P. pastoris. Uma vez obtidas, caracterizadas e purificadas, através da técnica de cromatografia de afinidade em resina de níquel-sepharose, as preparações de proteína N recombinante expressas em E. coli e derivadas ou da estirpe de referência M41 ou do novo isolado de campo no Brasil, foram utilizadas de forma bem sucedida, como antígenos alvo de ensaios indiretos de ELISA, que foram aplicados na detecção e mensuração de anticorpos dos isótipos IgG e IgM em aves infectadas com estirpes homóloga ou variantes do VBI. Foi, também, investigada a atividade imunogênica da proteína N recombinante em aves, que depois de imunizadas e re-imunizadas com essas proteínas recombinantes, produziram no soro sanguíneo e na secreção lacrimal quantidades elevadas de anticorpos anti-VBI específicos, mas não desenvolveram proteção efetiva contra o desafio com a estirpe homóloga desse vírus. Concluindo, a proteína N recombinante do VBI expressa pela E. coli possui elevada imunogenicidade, no sentido de induzir altos níveis de anticorpos específicos, e reatividade cruzada com proteínas N de outras variantes desse vírus, tendo um grande potencial de ser aplicada em ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Two host systems, represented by Escherichia coli and Pichia pastoris were used for cloning and protein expression of the nucleoprotein (N) gene of M41 strain of infectious bronchitis virus (IBV) as a fusion recombinant protein containing a poli-histidine tag. The N protein from a new variant Brazilian field isolate was also cloned and expressed by E. coli system. The biochemical and immunochemical properties of these recombinant N proteins were determined and higher efficiency on protein production was achieved by using the E. coli expression system. Both recombinant N proteins expressed by E. coli were purified in nickel-sepharose resin and used as antigen in indirect ELISA methods for the detection of IgG and IgM antibodies in birds infected with homologous and variant IBVs. The immunogenicity of N recombinant protein was also evaluated by immunizing and re-immunizing birds and high antibody levels were generated in lachrymal secretion and serum, but no effective protection against challenge with homologous virulent stain of IBV was induced. Concluding, the recombinant N IBV protein expressed by E. coli is highly immunogenic for inducing specific and crossreactive antibodies, and can be applied in the immuno-diagnosis of IB / Doutor

Submitted by Luciana Sebin (lusebin@ufscar.br) on 2016-09-14T19:04:53Z No. of bitstreams: 1 DissLACon.pdf: 3897175 bytes, checksum: 00c39fb2aaba768abfa726b4ee62d2cc (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-15T14:24:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissLACon.pdf: 3897175 bytes, checksum: 00c39fb2aaba768abfa726b4ee62d2cc (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-15T14:24:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissLACon.pdf: 3897175 bytes, checksum: 00c39fb2aaba768abfa726b4ee62d2cc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T14:24:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissLACon.pdf: 3897175 bytes, checksum: 00c39fb2aaba768abfa726b4ee62d2cc (MD5) Previous issue date: 2015-07-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / This study addressed the use of solid residues from the process of cellulosic ethanol production using the enzymatic hydrolysis of sugarcane bagasse for the production of cellulose nanocrystals (CNCs). Bagasse submitted to two types of pretreatments (steam explosion - SESB and hydrothermal - HSB) was hydrolyzed with two different enzymatic loads using a commercial enzymatic extract. The solid residues generated after the hydrolysis were purified with NaOH 5% (w/w) at 55 °C and H2O2 35% (v/v) followed by an acid hydrolysis at 45 °C with H2SO4 60% (w/w) and extraction of 30 min in order to obtain the CNCs. The samples of SESB and HSB presented cellulose contents of 61 and 54%, respectively. The conversion in the enzymatic hydrolysis step ranged from 25 to 55% for SESB and 33 to 59% for HSB, along with the increase of enzymatic loading. And besides the release of glucose into the liquid phase, it was also generated solid residues with significant quantity of cellulose to be used for CNCs production. Due to decreasing of the cellulose crystallinity indexes (CI%) of the residual solid, a purification procedure was necessary, which raised the CI by about 30% for SESB residues and approximately 25% for HSB residues. The resulting CNCs presented proper physical and chemical characteristics, such as degradation temperature exceeding 230°C and crystallinity around 79% for both matrices. The CNCs obtained feature of needle with length between 193 and 246 nm and diameter of between 17 and 30 nm. These results indicate that CNCs produced from the residual streams of enzymatic route of cellulosic ethanol production from the sugarcane bagasse have the characteristics suitable for this type of product. Therefore, the use of these solids residues for new materials production, such as NCCs for use in different applications proved to be potentially promising for adding value to the bioenergy sector. / O presente estudo avaliou o emprego dos resíduos sólidos do processo de produção de etanol celulósico a partir da hidrólise enzimática do bagaço de cana-de-açúcar para a produção de nanocristais de celulose (NCCs). Bagaço submetido a dois tipos de pré-tratamentos (explosão a vapor - BEX e hidrotérmico - BH) foi hidrolisado com duas diferentes cargas enzimáticas utilizando um extrato enzimático comercial. Os resíduos sólidos gerados após a hidrólise foram purificados com NaOH 5% (m/m) a 55oC e H2O2 35% (v/v) seguido de uma hidrólise ácida a 45oC com H2SO4 60% (m/m) e extração de 30 min, visando a obtenção dos NCCs. As amostras de BEX e BH apresentaram teores de 61 e 54% de celulose, respectivamente. A conversão na etapa de hidrólise enzimática variou de 25 a 55% para o BEX e de 33 a 59% para o BH, com o aumento da carga enzimática. Assim, além da liberação da glicose para a fase líquida, na etapa de hidrólise enzimática foi gerado um resíduo sólido com quantidade significativa de celulose para os processos subsequentes de obtenção de NCCs. Devido à diminuição dos índices de cristalinidade da celulose (IC%) dos sólidos residuais, foi necessário um procedimento de purificação que elevou o IC% em aproximadamente 30% para os resíduos do BEX e aproximadamente 25% para os resíduos do BH. A partir disso, os NCCs apresentaram características físico-químicas adequadas, como temperatura de degradação superior a 230°C e cristalinidade próxima de 79% para ambas as matrizes. Os NCCs obtidos apresentaram formato de agulha com comprimento entre 193 e 246 nm e diâmetro entre 17 e 30 nm. Esses resultados indicam que os NCCs produzidos a partir das correntes residuais da rota enzimática de produção de etanol celulósico a partir do bagaço de cana-de-açúcar possuem as características adequadas para esse tipo de produto. Portanto, a utilização desses resíduos sólidos para a produção de novos materiais, tais como os NCCs para aplicações em diversos setores industriais, mostrou-se potencialmente promissora para a agregação de valor ao setor de bioenergia.

Submitted by Luciana Sebin (lusebin@ufscar.br) on 2016-09-27T12:20:20Z No. of bitstreams: 1 TeseRNF.pdf: 5131887 bytes, checksum: 5f32fa62636719671f0675a379d2cd24 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-27T19:55:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseRNF.pdf: 5131887 bytes, checksum: 5f32fa62636719671f0675a379d2cd24 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-27T19:55:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseRNF.pdf: 5131887 bytes, checksum: 5f32fa62636719671f0675a379d2cd24 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-27T19:55:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseRNF.pdf: 5131887 bytes, checksum: 5f32fa62636719671f0675a379d2cd24 (MD5) Previous issue date: 2016-01-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / The search for new sustainable alternative energy sources has followed the increasing concerns with common welfare and fossil fuel shortage. In this context, Bioethanol is a good option and lignocellulosic biomass is an interesting way of obtaining it. The enzymatic conversion of lignocellulosic biomass in fermentable sugars still is a costly process, which makes characterization mechanisms indispensable to make it economically viable. Being of great importance in the lignocellulosic biomass convertion, β-glucosidases catalyzed reaction is the last step in the saccharification processes. Beta glucosidase hydrolyze non-reduced β-D-glycoside terminals, releasing β-D-glucose. GH 1 and GH 3 are the families of those most studied enzymes. However, structural and functional data from this GH 3 family of enzymes are still scarce. This work aimed at the biochemical and structural characterization of β-glucosidase from Bifidobacterium adolescentis (BaBgl). This enzyme has a catalytic domain (CCD) and a fibronectin III-like domain (FnIII) whose function is still unknown. Biochemical data showed optimal conditions for enzyme activity at pH from 6.0 to 6.5, temperature at 45 ° C and synthetic substrate specificity of 4-nitrophenyl- -Dglucopyranoside (pNPG). The values of kinetic parameters, KM and Vmax, were 0.32±0.03 mM e 0.37±0.01 nmol/min, respectively. The enzyme doesn’t have transglycosylation mechanisms, indicating only hydrolytic activity. Some monosaccharides such as xylose and galactose increased the enzyme activity significantly, while glucose and arabinose inhibited it. The crystal structural model of the BaBgl revealed an N-terminal domain with fold like a TIM barrel, an intermediate sandwich α / β domain and a third C-terminal like FnIII domain. In this work we also studied the transglycosylation mechanisms of two β-glucosidases from Trichoderma harzianum (ThBgl1 and ThBgl2). Both enzymes exhibit transglycosylation reaction but the ThBgl1 showed a hydrolysis/transglycosylation ratio lower than the one for ThBgl2. Crystallographic structures shows a typical folding for GH family 1 β-glucosidases, folding in the form of a TIM barrel (α / β)8. However, ThBgl2 has a more polar active site and therefore, favorites the interaction with water molecules, promoting better the hydrolysis reaction when compared to ThBgl1. / A preocupação ambiental e com a qualidade de vida da população aliados com o esgotamento dos combustíveis fósseis, tem aumentado a busca por energias alternativas e sustentáveis. Neste contexto, a hidrólise da biomassa lignocelulósica é uma opção interessante para obtenção de bioetanol. A utilização de enzimas para conversão da biomassa lignocelulósica a açúcares fermentescíveis ainda é um processo de custo elevado, o que torna imprescindível os estudos de caracterização dos mecanismos dessas enzimas afim de torná-las economicamente mais viáveis. A reação catalisada por β-glicosidases é a última etapa da sacarificação da celulose, sendo de grande relevância na conversão da biomassa ignocelulósica. β- glicosidases hidrolisam terminais não reduzidos β-D-glicosil liberando β-D-glicose e GH 1 e GH 3 são as famílias dessas enzimas mais estudadas. Entretanto dados estruturais e funcionais das enzimas da família GH 3, ainda são escassos. O presente trabalho apresenta a caracterização bioquímica e estrutural de uma β-glicosidase de Bifidobacterium adolescentis (BaBgl). Essa enzima possui um domínio catalítico (CCD) e um domínio do tipo fibronectina III (FnIII) cuja função ainda é desconhecida. Os dados bioquímicos revelaram condições ótimas para atividade da enzima em pH entre 6,0 e 6,5, temperatura de 45 °C e especificidade pelo substrato sintético 4- nitrofenil-β-D-glicopiranosídeo (pNPG). Os parâmetros cinéticos KM e Vmáx apresentaram valores de 0,32±0,03 mM e 0,37±0,01 nmol/min respectivamente. A enzima não apresentou mecanismos de transglicosilação, indicando apenas atividade hidrolítica. Ensaios com monossacarídeos como xilose e galactose aumentaram significativamente a atividade enzimática enquanto que glicose e arabinose inibiram sua atividade. O modelo da estrutura cristalográfica da BaBgl revelou um domínio Nterminal enovelado como um barril TIM, um domínio intermediário na forma de sanduíche α/β e um terceiro domínio C-terminal do tipo FnIII. Neste trabalho também foram estudados os mecanismos de tranglicosilação de duas β-glicosidases de Trichoderma harzianum (ThBgl1 e ThBgl2), sendo que ambas realizam reação de transglicosilação, porém a ThBgl1 possui relação hidrólise/tranglicosilação menor que a ThBgl2. As estruturas cristalográficas demonstram um enovelamento típico para as β-glicosidases da família GH 1, com o enovelamento na forma de um barril TIM (α/β)8. Contudo, a ThBgl2 apresenta sítio ativo mais polar e portanto propício à interação com moléculas de água, favorecendo a reação de hidrólise quando comparada à ThBgl1.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:53:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2894312 bytes, checksum: 8e4e6d33bfbb1f07f987dfb380479055 (MD5) Previous issue date: 2010-07-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The coffee tree is a demanding plant in micronutrients, especially Zn, and the P x Zn interaction is an important issue for the management of tropical soils, due to the use of high doses of P in soils with low availability of this nutrient. In this work was studied the seedlings response of Coffea arabica L. cv. Catuaí to doses of Zn and P, including the supply of P corresponding to a high availability of P, therefore, a high antagonism potential to the availability of Zn. The experiment was carried out in a greenhouse in the period between the October/2009 and January/2010 (122 days of conducting the experiment), using 4 × 4 factorial design, distributed in randomized blocks, with three replications, being four doses of Zn (0, 5, 15, and 45 mg / dm 3 of soil) and P (0, 200, 600 and 1,800 mg / dm 3 of soil). On the soil, having as a source ZnSO 4 .7 H 2O, the doses of Zn were applied trough a soil solution and P levels were incorporated, being the source the triple superphosphate. It was used samples of a Red Yellow sandy-loam originating from Três Marias - MG and coffee seedlings with four pairs of leaves, which were transplanted to pots (2 dm 3 of soil), maintaining soil moisture near to field capacity. It was evaluated the total content of Zn in plant parts (leaf, stem and root), the soluble fraction of Zn (leaf), the levels of total P (leaf, stem and root), the enzyme superoxide dismutase (SOD) , plant height, number of nodes per plant, average length of internodes and dry matter production (leaf, stem and root). There were no significant changes in levels of total Zn in leaves with increasing doses of P added to soil, although the levels of soluble Zn (active) have fallen, indicating, in this case, antagonistic interaction between the variables. The SOD activity was reduced with increasing doses of Zn added to soil. The growth of coffee seedlings was influenced by the interaction between P and Zn. / O cafeeiro é uma planta exigente em micronutrientes, especialmente, em Zn, e a interação P x Zn é uma questão importante para o manejo de solos tropicais, haja vista a utilização de altas doses de P em solos com baixa disponibilidade deste nutriente. Neste trabalho foi estudada a resposta de mudas de Coffea arabica L. cv. Catuaí às doses de Zn e P, incluindo-se o suprimento de P que correspondeu a uma alta disponibilidade de P, portanto, a um alto potencial de antagonismo em relação à disponibilidade de Zn. O experimento foi conduzido em casa-de-vegetação entre o período de outubro/2009 a janeiro/2010 (122 dias de condução do experimento), utilizando esquema fatorial 4 × 4, distribuído em blocos casualizados, com três repetições, sendo quatro doses de Zn (0, 5, 15, e 45 mg/dm3 de solo) e quatro doses de P (0, 200, 600 e 1.800 mg/dm3 de solo). No solo, tendo como fonte ZnSO4.7H2O, as doses de Zn foram aplicadas em solução via solo, e as doses de P foram incorporadas, sendo a fonte o superfosfato triplo. Utilizaram-se amostras de um Latossolo Vermelho Amarelo textura franco-arenosa originário de Três Marias – MG e mudas de café com quatro pares de folhas, que foram transplantadas para vasos (2 dm3 de solo), mantendo-se a umidade do solo próxima à capacidade de campo. Avaliaram-se o teor total de Zn nos órgãos das plantas (folha, caule e raiz) e a fração solúvel de Zn (folha), os teores totais de P (folha, caule e raiz), atividade da enzima superóxido dismutase (SOD), altura de plantas, número de nós por planta, comprimento médio dos entrenós e produção de matéria seca (folha, caule e raiz). Não houve alterações significativas nos teores de Zn total nas folhas com o aumento das doses de P adicionadas ao solo, embora os teores de Zn solúvel (ativo) tenham diminuído, indicando, neste caso, interação antagônica entre as variáveis. A atividade da SOD foi reduzida com o aumento nas doses de Zn adicionadas ao solo. O crescimento das mudas de café foi influenciado pela interação P e Zn.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA15MA172.pdf: 630395 bytes, checksum: f43d3e3e988e19b889727b435ec35757 (MD5) Previous issue date: 2015-06-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objective of this study was to evaluate the use of soluble and insoluble fractions of protein hydrolysates of different waste sardines (Clupeidae), on the performance of juvenile catfish. We tested two types of muscle hydrolyzate, soluble fraction and insoluble assessed individually (WSF and FIM) and combined with each other (WSF + END), and two types of viscera hydrolyzed soluble fraction of natural guts and industrialized (FSVN FSVI E) . The experimental design was completely randomized with five treatments (type hydrolyzate) and five repetitions. The juveniles are kept in tanks of 30 liters with densidadel 8 fish per tank, to which were cultured for 56 days. The results were analyzed using parametric variance analysis (ANOVA) and subjected to the Duncan test (5% significance). The final best results, weight gain, feed conversion and protein efficiency ratio were obtained with the diet containing a combination of soluble and insoluble fractions of the hydrolyzate muscle, and the diet containing the soluble fraction of the hydrolyzate of industrial offal. A diet containing hydrolyzed soluble industrial viscera was also the most consumed by the animals. A diet containing hydrolyzed insoluble muscle was the one that gave the worst results consumption. The worst feed conversion was obtained for the diet containing the soluble hydrolyzed muscle. Survival, body composition and ammonia excretion did not differ between treatments. The best performance results are obtained using crude hydrolysates which combine the benefits of both fractions. The degree of hydrolysis has a direct effect on feed intake. Furthermore, it was shown that soluble hydrolysates can be used at high levels of inclusion, from which nutrients are adequately balanced diets / O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização das frações solúveis e insolúveis de hidrolisados proteicos de diferentes resíduos de sardinha (Sardinella sp.), sobre o desempenho de juvenis de jundiá. Foram testados dois tipos de hidrolisado de músculo, fração solúvel e insolúvel avaliadas individualmente (FSM e FIM) e combinadas entre si (FSM+FIM), e dois tipos de hidrolisado de vísceras, fração solúvel de vísceras natural e industrializada (FSVN E FSVI). O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com cinco tratamentos (tipos de hidrolisado) e cinco repetições. Os juvenis foram mantidos em aquários de 30 litros, com densidade de 8 peixes por aquário, ao qual foram cultivados por 56 dias. Os resultados foram analisados por meio de Análise de Variância Paramétrica (ANOVA), e submetidos ao teste de Duncan (5% de significância). Os melhores resultados de peso final, ganho de peso, conversão alimentar e taxa de eficiência proteica foram obtidas com a dieta contendo a combinação das frações solúveis e insolúveis do hidrolisado de músculo, e com a dieta contendo a fração solúvel do hidrolisado de vísceras industrial. A dieta contendo hidrolisado solúvel de vísceras industrial também foi a mais consumida pelos animais. A dieta contendo o hidrolisado insolúvel de músculo foi a que proporcionou os piores resultados de consumo. A pior conversão alimentar foi obtida para a dieta contendo o hidrolisado solúvel de músculo. A sobrevivência, a composição corporal e a excreção de amônia não diferiram entre os tratamentos. Os melhores resultados de desempenho são obtidos com hidrolisados brutos que combinam os benefícios das duas frações. O grau de hidrólise tem efeito direto sobre o consumo de ração. Além disso, foi demonstrado que os hidrolisados solúveis podem ser utilizados em níveis elevados de inclusão, desde que os nutrientes das dietas sejam adequadamente balanceados

Submitted by Michel Ricardo Gracioli (michel-rg@hotmail.com) on 2018-04-17T15:51:19Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Michel.pdf: 1706772 bytes, checksum: 1d66fae75b86a68d89ec8bceca0d2f31 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Aparecida Puerta null (dripuerta@rc.unesp.br) on 2018-04-18T14:13:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gracioli_mr_me_rcla.pdf: 1697470 bytes, checksum: 82696e96fe2dfed0fbd786c7230a8994 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-18T14:13:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gracioli_mr_me_rcla.pdf: 1697470 bytes, checksum: 82696e96fe2dfed0fbd786c7230a8994 (MD5) Previous issue date: 2018-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / As enzimas xilanases são de grande interesse biotecnológico em função da sua habilidade na degradação da molécula de xilana, a principal hemicelulose presente na parede celular de plantas. Tais enzimas encontram aplicações nos mais diversos ramos da indústria como na produção de alimentos e bebidas, de cosméticos, de ração animal, de biocombustíveis entre outros. Em razão da sua composição química, os subprodutos lignocelulósicos, produzidos em grande quantidade pela agroindústria, se apresentam como uma potencial fonte sustentável para a produção de valiosos compostos como biocombustíveis, fertilizantes, rações, produtos químicos e enzimas. Assim, tendo em vista esse contexto, foi desenvolvido o presente trabalho, cujo objetivo foi caracterizar e purificar a principal endoxilanase produzida por uma linhagem de Aspergillus hortai cultivado em estado sólido e aplicá-la, nas formas bruta e purificada, na hidrólise de subprodutos agroindustriais. A purificação da enzima foi alcançada após três etapas cromatográficas, respectivamente, uma cromatografia de troca iônica seguida por cromatografias de interação hidrofóbica e exclusão molecular. Ao final das etapas, a enzima purificada apresentou recuperação de 1,1% e fator de purificação de 15,8 vezes. A enzima bruta e purificada se mostrou tolerante ao NaCl na presença de até 4 M do sal. Por outro lado, foi pouco tolerante à presença de íons e alguns compostos como Hg2+, Cu2+, SDS, Triton X-100 e TWEEN 20/80. Em contrapartida, DTT e β-mercaptoetanol a 10 mM estimularam a atividade da enzima bruta em 13 e 19%, respectivamente. Para a enzima bruta, a temperatura e pH ótimos de reação foram, respectivamente, 60 °C e 6,0 tanto na ausência quanto na presença de NaCl 0,5 e 2,5 M. Apresentou boa estabilidade térmica a 40 °C na ausência de NaCl, e foi ativada na presença de 0,5 M e 2,5 M do sal durante as 4 h de incubação. A enzima bruta e purificada foi estável em uma ampla faixa de pHs (3,0-8,0) na ausência e na presença de NaCl e apresentou alta especificidade pelas xilanas birchwood, beechwood e oat spelt, não tendo sido detectadas atividades endoglucanase sobre CMC, exoglucanase em Avicel e β-xilosidase em ρNPX. Após a purificação, os perfis de temperatura e pH ótimos de reação se mantiveram em 60 °C e 6, respectivamente. A enzima pura foi, também, bastante estável a temperatura de 40 °C, mantendo mais de 50% da atividade controle durante as 4 h de incubação, e ao pH, variando de 3,0-8,0, na ausência e na presença de NaCl. Xilobiose e xilo-oligossacarídeos superiores foram os produtos formados na hidrólise da xilana oat spelt pela enzima purificada, sugerindo ação enzimática do tipo endoxilanase. A massa molecular aparente, após a purificação, foi estimada em 25,0 kDa por SDS-PAGE e em 14,8 kDa por exclusão molecular. Os parâmetros cinéticos Km e Vmáx em xilana de beechwood sofreram variações em resposta a presença de NaCl, sendo a maior eficiência catalítica obtida na presença de 2,5 M do sal (kcat/km 40,91). A análise da composição química dos subprodutos - sabugo, palha e folha de milho - revelou, respectivamente, 25,6%, 45,3% e 34,9% de carboidratos, 19,7%, 15,2% e 17,6% de lignina e 9,0%, 17,4% e 24,0% de extrativos para a biomassa in natura e, 33,3%, 25,2% e 38,8% de carboidratos e 6,5%, 8,9% e 12,3% de lignina para a xilana extraída desses subprodutos. A extração das hemiceluloses utilizando tratamento alcalino oxidativo resultou em um rendimento de 64% para o sabugo, 18% para a palha e 50% para a folha. A enzima bruta e purificada foi capaz de hidrolisar as biomassas na forma in natura, bem como as xilanas extraídas desse material produzindo majoritariamente xilopentoses e xilohexoses. Sendo assim, pode-se afirmar que a xilanase bruta e purificada em estudo apresentou propriedades interessantes para a aplicação industrial, especialmente na produção de xilo-oligossacarídeos e em processos conduzidos sob elevada salinidade. / Xylanases raise a biotechnological interest due to its ability to degrade xylan. Such enzymes find use in a variety of industrial processes such as the production of food and beverage, cosmetics, animal feed, second generation ethanol, among many others. As for its chemical composition, lignocellulosic byproducts, widely produced by agroindustry, presents itself as a potential sustainable source for production of valuable composts like soil fertilizers, animal feed, chemical products and enzymes. In this context, the main xylanase produced by an Aspergillus hortae strain, cultivated in solid state (SSF), was characterized, purified and applied in the hydrolysis of hemicellulose from corn by-products. Enzyme purification was achieved after three chromatographyc steps, respectively, an ion exchange chromatography followed by hydrophobic interaction and molecular exclusion chromatographys. After the purification steps, a final yield of 1.1% and purification fold of 15.8 was achieved. Both crude and purified enzyme showed high tolerance to NaCl in the presence of up to 4 M of the salt. The enzyme displayed a very low tolerance to some metal ions and chemical compounds, especially Hg2+, Cu2+, SDS, Triton X-100 and TWEEN 20/80. On the other hand, DTT and β- mercaptoetanol at 10 mM stimulated crude enzyme activity in 13% and 19%, respectively. As for the crude enzyme, optimum temperature and pH were, respectively, 60 °C and 6.0, in the absence and presence of 0.5 and 2.5 M NaCl. It showed good thermal stability at 40 °C in the absence of NaCl and was activated in the presence of 0.5 and 2.5 M of the salt throughout the 4 h incubation time. Crude and purified enzyme was also stable over a wide pH range (3.0 - 8.0) both in the absence and presence of NaCl and presented high specificity for birchwood, beechwood and oat spelt xylans, not showing detectable endoglucanase, exoglucanase and β- xylosidase activities. After purification, optimum temperature and pH profiles remained at 60 °C and 6.0, respectively. Purified enzyme showed good stability at 40 °C, being able to retain more than 50% of the control activity during 4 h of incubation, and to the pH, varying from 3.0 to 8.0, in the absence and in the presence of NaCl. Xylobiose and xilooligosaccharides were the products of oat spelt xylan hydrolysis by the purified enzyme, suggesting an endoxilanase mode of action. The apparent molecular mass, after purification, was estimated to be 25.0 kDa by SDS-PAGE and 14.8 kDa by exclusion chromatography. Kinetic parameters of Km and Vmáx using beechwood xylan were 5.12 mg/mL and 14.25 μmol/min.mL, respectively, in the absence of NaCl, 9.56 mg/mL and 20.80 μmol/min.mL in the presence of 0.5 M and 3.13 mg/mL and 9.22 μmol/min.mL in the presence of 2.5 M of the same salt. Chemical analysis of the biomasses from corn cob, stover and leaves, revealed a composition of, respectively, 25.6%, 45.3%, 34.9% carbohydrates, 19.7%, 15.2%, 17.6% lignin and 9.0%, 17.4%, 24.0% extractives for in natura biomasses and 33.3%, 25.2%, 38.8% carbohydrates and 6.5%, 8.9%, 12.3% lignin for the extracted hemicelluloses. Hemicellulose extraction yields were of 64% for corn cob, 18% for stover and 50% for leaves. Both crude and purified enzyme was capable of hydrolyzing in natura biomasses, as well as the extracted hemicelluloses from these materials, producing mainly xylopentoses and xyloheoses. In summary, the xylanase presented attractive properties for industrial applications, especially in the production of xyloolygossacharides and in those carried out under high NaCl concentration. / CNPq: 130841/2016-1.