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Produção de anticorpos IgY anti-Aeromonas hydrophila aplicados no imunodiagnóstico e imunoterapia em tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus) /

Fernandes, Dayanne Carla. January 2019 (has links)
Orientador: João Martins Pizauro / Coorientador: Samir Issa Samara / Coorientador: Marco Antonio de Andrade Belo / Banca: Eduardo Maffud Cilli / Banca: Monica Valdyrce dos Anjos Lopes Ferreira / Banca: Fabiana Garcia / Banca: Luiz Flávio José dos Santos / Resumo: A Aeromonas hydrophila é um patógeno oportunista com capacidade de infectar peixes, mamíferos e humanos. É cosmopolita e responsável por infecções hospitalares em humanos e causadora da aeromonose em peixes. O uso de antibióticos na água, como forma terapêutica na aquicultura, apesar de controlar a infecção, favorece o desenvolvimento de resistência microbiana através do efeito residual destes fármacos no peixe e consequentemente no consumidor final humano, tornando-se um agravo para a saúde pública. Pensando nisso, foi produzido uma imunoglobulina Y (IgY), extraída da gema do ovo de galinhas poedeiras, específica para as proteínas de membrana e citoplasmática de A. hydrophila. No início, a IgY foi validada quanto a capacidade de detectar o patógeno no tecido de tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus) infectadas com a bactéria homóloga. Após a validação da IgY anti- A. hydrophila, a mesma foi testada in vitro na imunoterapia, e seus efeitos na atividade fagolisossômica de macrófagos (MΦs) de tilápias-do-nilo, infectados com A. hydrophila viva opsonizada/ neutralizada ou não. Os resultados provaram a eficácia e a aplicação da IgY para o ensaio de imunofluorescência direta (IMF) e imuno-histoquímica (IHC) validando a IgY para o diagnóstico e estudo fisiopatológico da infeção por A. hydrophila em tilápias-do-nilo. Na imunoterapia in vitro a IgY anti-A. hydrophila teve efeito positivo no controle da infecção, postulando ainda, o uso dos MΦs da tilápia-do-nilo como um importante ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aeromonas hydrophila is an opportunistic pathogen with the capacity to infect fish, mammals and humans. It is cosmopolitan and is responsible for hospital infections among humans and for aeromonosis in fish. Although using antibiotics in water for therapeutic purposes in fish-farming has the effect of controlling infection, it also favors development of microbial resistance through the residual effect of these drugs on fish and consequently on the final human consumers. Thus, their use has become a public health hazard. With the aim of investigating alternative ways of combating A. hydrophila, an immunoglobulin Y (IgY) extracted from the yolk of the eggs of laying hens that was specific for the proteins of the membrane and cytoplasm of A. hydrophila was produced. This IgY was firstly validated regarding its capacity to detect A. hydrophila in the tissues of Nile tilapias (Oreochromis niloticus) that were infected with the homologous bacterium. The anti-A. hydrophila IgY was then tested in vitro for immunotherapy to determine its effects on the phagolysosomal activity of macrophages (MΦs) in Nile tilapias that were infected with live A. hydrophila that was either opsonized/neutralized or not. The results demonstrated that application of IgY was effective. Direct immunofluorescence (IMF) tests and immunohistochemical (IHC) analysis validated IgY for diagnosing the presence of A. hydrophila and for conducting physiopathological studies on A. hydrophila in Nile tilapias. In in vi... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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O papel da HSP 60 nas células leucocitárias da placenta bovina / The role of HSP 60 in leucocytes cells of bovine placenta

Monteiro, Janaína Munuera 27 November 2009 (has links)
A tolerância materno-fetal envolve, além do sistema imune, muitas peculiaridades quanto ao tipo de placenta e placentação. A placenta em bovinos é considerada não invasiva, e como conseqüência de uma implantação superficial, sem invasão endometrial, se estabelece uma barreira placentária complexa que se interpõe entre a circulação materna e fetal. Aliado a isso, a placenta um órgão que se encontra em constante diferenciação e proliferação celular além da alta atividade metabólica, fontes constantes de estresse e desafio para o sistema imune. Atuando nesse contexto, destacamos as proteínas de choque térmico (heat shock proteins HSP), proteínas que são expressadas em condições fisiológicas mas, em situações de estresse, sua expressão aumenta. Na placenta bovina já se constatou a expressão das HSP 60 e 70; contudo notou-se uma maior peculiaridade na expressão da HSP 60, que é maior no primeiro trimestre da gestação. Observando-se o perfil da presença e expressão dessa proteína na placenta bovina e, tendo em vista a característica desse órgão em apresentar populações leucocitárias funcionalmente distintas das do sangue periférico, levantou-se a hipótese da influência desta proteína sobre as células placentárias, particularmente sobre os leucócitos no processo de tolerância materno fetal. Desta forma, esse trabalho analisou a participação da HSP 60 em mecanismos imunes junto à alguns leucócitos placentários por meio de ensaio de proliferação pela técnica de CFSE, ensaio de fagocitose e ensaios bioquímicos como peroxidação lipídica; ciclo celular e potencial de membrana mitocondrial de células placentárias em cultivo. Nossos resultados mostraram que a HSP 60 não influencia a proliferação de linfócitos e outras células placentárias nas diversas condições testadas. Em contrapartida a HSP 60 aumenta a fagocitose e apoptose no terceiro terço gestacional, bem como a produção de radicais oxidados poliinsaturados e o potencial de membrana mitocondrial. Tendo em vista esses resultados, podemos observar que a HSP 60 nas células da placenta bovina possivelmente esteja modulando a cinética da ativação de mecanismos de sinalização de morte celular programada entre as células da placenta e o sistema imunológico. Esta hipótese assegura que, no concepto a termo, as variações hormonais e o sistema imune possam estar regulando o processo para o nascimento do feto. / The maternal-fetal tolerance involves, besides the immune system, many peculiarities regarding the type of placenta and placentation. The bovine placenta is considered not invasive and, as consequence of a superficial implantation without endometrial invasion, it establishes itself as complex barrier that interposes between the maternal and fetal circulation. In addition to that, placenta is an organ that undergoes continuous differentiation and cellular proliferation besides the high metabolic activity that represents a constant source of stress and challenge for the immune system. As an important component in this context, we highlight the heat shock proteins - HSP, that are usually expressed in physiological conditions but, in situations of stress, their expression increases. In the bovine placenta the expression of HSP 60 and 70 has already been verified; however HSP 60 showed a peculiar expression behavior, with higher staining in the first trimester of pregnancy. Considering the presence and expression profiles of HSP 60 in the bovine placenta allied to the particularity of presenting functional distinct leucocytes populations, a hypothesis was raised regarding the influence of this protein on the placental cells, particularly on the leucocytes in the process of fetal-maternal tolerance. Therefore, this work analyzed the role of HSP 60 in immune mechanisms related to some placental leucocytes by several approaches like proliferation assay by CFSE technique, phagocytosis assay and biochemical assays as lipoperoxidation; cell cycle phases and mitochondrial membrane potential of placental cells in culture. Our results showed that HSP 60 does not influence the proliferation of lymphocytes or any other placental cells in various conditions tested. On the other hand, HSP 60 increases phagocytosis and apoptosis in the third trimester, as well as the production of polyunsaturated oxide radicals and the mitochondrial membrane potential. In view of these results, we may infer that HSP 60 may be modulating the kinetics of activation mechanisms for signaling programmed cellular death between placental and immune cells. This hypothesis assures that, on the termed conceptus, the hormonal variation and the immune tolerance may be responsible for regulating the parturition process.
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Avaliação da capacidade fagocítica de mastócitos frente ao periodontopatógeno Aggregatibacter actinomycetemcomitans / Evaluation of the phagocytic ability of mast cells against the periodontopathogens Aggregatibacter actinomycetemcomitans

Lima, Heliton Gustavo de 25 May 2011 (has links)
As doenças periodontais afetam os tecidos de suporte dos dentes e são desencadeadas por microrganismos que possuem a capacidade de invadir os tecidos periodontais. A evolução desta doença é influenciada pela resposta inflamatória e imunológica do hospedeiro e envolve a participação de diversos tipos celulares. Atualmente, existem evidências de que os mastócitos, além de outras funções, possuem a capacidade de eliminar bactérias, através da fagocitose. Assim sendo, este estudo teve por objetivo avaliar a capacidade fagocítica dos mastócitos frente ao periodontopatógeno A. actinomycetemcomitans, além de comparar sua capacidade fagocítica com a dos macrófagos, considerados fagócitos profissionais. Para este fim, foram realizados ensaios fagocíticos in vitro utilizando mastócitos e macrófagos murinos, desafiados ora com A. actinomycetemcomitans ora com Escherichia coli, opsonizados ou não, sob diferentes proporções célula: bactérias. Após 1 hora de desafio, as células foram coradas com laranja de acridina e avaliadas qualitativamente utilizando-se microscópio de varredura confocal a laser e quantitativamente através do microscópio de fluorescência convencional. Nossos resultados demonstraram que os mastócitos murinos se mostraram eficientes quanto a sua capacidade fagocítica frente a A. actinomycetemcomitans. Os valores percentuais de mastócitos com A. actinomycetemcomitans internalizados, na ausência de opsonização com complemento, foram maiores que aqueles na presença da opsonização, sugerindo a participação de receptores opsoninas-independentes no reconhecimento deste patógeno pelos mastócitos, além do receptor de complemento tipo 3 (CR3). Comparando os dois tipos celulares, verificou-se que ambas as células apresentaram importante atividade fagocítica contra A. actinomycetemcomitans, porém os valores percentuais de mastócitos com bactérias internalizadas sem complemento foram maiores que aqueles de macrófagos com bactérias internalizadas com complemento, em uma das proporções (1:10). Os resultados deste trabalho sugerem o papel dos mastócitos como fagócitos profissionais na patogênese da doença periodontal induzida por placa dentobacteriana. / Periodontal diseases affect the supporting tissues of the teeth and are triggered by microorganisms which are capable of invading periodontal tissues. The evolution of this disease is influenced by inflammatory and immune response of the host and involves the participation of different cell types. Currently, there is evidence that mast cells, among other functions, have the ability to eliminate bacteria by phagocytosis. Thus, this study aimed to evaluate the phagocytic ability of mast cells against the periodontopathogens A. actinomycetemcomitans, and compare with the phagocytic capacity of macrophages, which are considered professional phagocytes. Therefore, in vitro phagocytic assays were conducted using murine mast cells and macrophages, challenged with A. actinomycetemcomitans or Escherichia coli, at the same time, opsonized or not, under different proportions cell: bacteria. After 1 hour of challenge, cells were stained with acridine orange and qualitatively assessed by using a confocal laser scanning electron microscope and quantitatively by the conventional scanning fluorescence microscope. The results demonstrated that phagocytic ability of murine mast cells was effective against A. actinomycetemcomitans. The percentages of mast cells with A. actinomycetemcomitans internalized in the absence of opsonization with complement, were higher than those in the presence of opsonization, suggesting the involvement of opsonin-independent receptors in recognition of this pathogen by mast cells, as well as complement receptor type 3 (CR3). Comparing the two cell types, it was observed that both cells showed significant phagocytic activity against A. actinomycetemcomitans, however, the percentages of mast cells with internalized bacteria without complement were higher than those of macrophages with internalized bacteria with complement, in one of the proportions (1:10). The results suggest the role of mast cells as professional phagocytes in the pathogenesis of periodontal disease induced by dental plaque.
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Caracterização da ação da crotalfina sobre a função de macrófagos peritoneais de ratos. / Characterization of crotalphine actions on function of rat macrophages.

Velhote, Fernanda Bredariol 25 November 2013 (has links)
Crotalfina (CRF) é um peptídeo produzido do veneno da serpente Crotalus durissus terrificus com efeito antinociceptivo tipo opióide detectado apenas na presença de inflamação. Estudos sobre mecanismos de analgesia relatam a ação de opióides em células imunes e macrófagos são apontados como alvos para os efeitos destes. Este estudo caracterizou a ação da CRF sobre funções de macrófagos e avaliou a importância de seus receptores opióides nestas ações. Os resultados indicam que CRF inibe fagocitose, liberação de H2O2 e produção de NO• e TNF-a, modula IL-6 e estimula IL-1b por macrófagos residentes e inflamatórios. Ensaios de expressão e ativação mostram que macrófagos residentes expressam receptores opióides k seguido de m e d e macrófagos inflamatórios expressam receptores m seguido de k e d. A CRF interferiu, de maneira distinta, com a expressão destes receptores, dependendo do estado de ativação destas células. Antagonistas destes receptores bloquearam a ação da CRF, mostrando que este peptídeo possui ação imunomodulatória mediada por receptores opióides. / Crotalphine (CRF) is a peptide isolated from the venom of Crotalus durissus terrificus with type opioid antinociceptive effect only detected in the presence of inflammation. Studies on mechanisms of analgesia reported the action of opioids in immune cells and macrophages are considered as targets for these effects. This study characterized the action of CRF on functions of macrophages and assessed the importance of opioid receptors in these actions. The results indicate that CRF inhibits phagocytosis, release of H2O2 and production of NO• and TNF-a, modulates IL-6 and stimulates IL-1b production by resident and inflammatory macrophages. Expression and activation assays show that resident macrophages express k receptors followed by m and d. Inflammatory macrophages express m receptors followed by k and d. CRF interfered differently with the expression of these receptors, depending on the activation state of these cells. Antagonists of these receptors blocked the action of CRF, showing that this peptide has immunomodulatory action mediated by opioid receptors.
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Leucotrienos como moduladores da imunidade inata a fungos. / Leukotrienes as modulators of innate immunity to fungi.

Marques, Mariana Morato 30 August 2012 (has links)
Leucotrienos (LTs) são mediadores lipídicos derivados do ácido araquidônico. Existem evidências que receptores da imunidade inata interagem com receptores para LTs amplificando funções efetoras de macrófagos. Investigamos se LTs modulam a fagocitose e a atividade microbicida via receptores Manose, Dectina -1 e PTX3 em macrófagos alveolares (AMs) e os mecanismos moleculares envolvidos. Nossos resultados mostram que: 1) AMs sintetizam LTs quando fagocitam C. albicans, Zy e Zy-PTX3; 2) LTs potencializam a fagocitose de C. albicans e Zy, mas não de Zy-PTX3. Este efeito dos LTs depende: do reconhecimento via receptor manose (LTB4) e Dectina-1 (LTD4); da integridade de lipid rafts; da ação em mecanismos de polimerização de actina; do aumento dos níveis de F-actina por inativação da Cofilina-1; da ativação das LIMKs, que regulam Cofilina-1; da ativação de PKC<font face=\"Symbol\">d e PI3K3) LTs aumentam a capacidade de AMs em matar C. albicans por ativação de NADPH oxidase. Em conjunto, mostramos que LTs potencializam programas de sinalização específicos para determinados PRRs. / Leukotrienes (LTs) are lipid mediators derived from arachidonic acid. There is evidence that innate immunity receptors and leukotrienes receptors interact and amplify macrophage effector functions. We investigated if LTs receptors modulate phagocytosis and microbicidal activity mediated by Mannose receptor, Dectin-1 and PTX3 in alveolar macrophages (AMs) and the molecular mechanisms involved. Our results showed that: 1) AMs produce LTs when stimulated with C.albicans, Zy, Zy-PTX3; 2) LTs enhance phagocytosis of C.albicans and Zymosan, but not Zy-PTX3. This is dependent on: recognition via mannose receptor (LTB4) and Dectin-1 (LTD4); integrity of lipid rafts; its action on actin polimerization mechanisms; enhancement of F-actin levels by induction of Cofilin-1 inactivation; activation of LIMKs that regulate Cofilin-1; activation of PKC<font face=\"Symbol\">d and PI3K3) LTs enhance killing of C.albicans by activation of NADPH oxidase. Taken together, our results showed that LTs specifically influence signaling programs of keys PRRs.
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Mecanismos efetores da resposta imune à malária experimental. / Effector mechanisms of the immune responses to experimental malaria.

Silva, Henrique Borges da 11 April 2014 (has links)
O sistema imune exerce uma contribuição fundamental na proteção contra a infecção pelo plasmódio, o agente causador da malária. Entre os mecanismos envolvidos no controle dos parasitas do sangue destacam-se aqueles mediados por anticorpos. Entretanto, outros mecanismos do sistema imune também parecem exercer papéis fundamentais, e ao mesmo tempo foram pouco estudados. O presente trabalho teve como objetivo descrever alguns dos mecanismos efetores importantes na resposta imune à malária experimental. O projeto subdivide-se em duas partes: a) verificar a relação entre o priming por IFN-g e a imunidade ao parasita durante a fase crônica da infecção sanguínea pelo Plasmodium; e b) descrever separadamente o papel de células dendríticas e macrófagos do baço na fagocitose de eritrócitos infectados durante a infecção em modelo experimental, e o subsequente papel destas células na resposta imune durante esse período. Os resultados obtidos neste projeto deverão contribuir para a compreensão dos mecanismos envolvidos na imunidade contra a malária. / The immune system is considered crucial for the protection against Plasmodium infection. Among the mechanisms involved in the control of blood-stage parasites, the ones mediated by antibodies are widely recognized. However, other mechanisms of immune system can also exert fundamental roles, being less studied. This work had the objective of describing some of the effector mechanisms important in the immune response to blood-stage experimental malaria. This work was subdivided in two main branches: a) to verify the relation between the IFN-g-induced priming and the protective immunity to the parasite during the chronic phase of blood-stage infection; and b) to describe separately the role of dendritic cells and splenic macrophages as phagocytic cells during acute Plasmodium chabaudi infection, and the subsequent role of these cells in the immune responses during this period. The results obtained in this project may contribute for the comprehension of the mechanisms involved in the immunity against malaria.
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Potencial da migalina (Acilpoliamina) como agente imunomodulador das funções de macrófagos murinos. / The potential of Mygalin (Acylpolyamine) as an immunomodulator agent of murine macrophage functions.

Nassar, Rafael Salim 01 August 2013 (has links)
As poliaminas são essenciais para o controle dos mecanismos celulares nos seres vivos. A Migalina é uma acilpoliamina isolada de A. gomesiana com atividade microbicida contra E. coli, contudo, seu efeito imunomodulador é desconhecido. Sabendo que os mediadores imunes produzidos por macrófagos são críticos para a regulação da resposta imune, investigamos o efeito in vitro da Migalina sobre estas células. Demonstramos que a Migalina não induziu citotoxicidade, mas ativou iNOS, potencializando a síntese de nitrito. Aumentou a produção de TNF-<font face=\"Symbol\">a, mas não de IL-12p40. IL-1<font face=\"Symbol\">b não foi detectada. Além disto, Inibiu a produção de TNF-<font face=\"Symbol\">a e IL-12p40 induzida por LPS e quando associada à Polimixina B não alterou a síntese de TNF-<font face=\"Symbol\">a. Macrófagos deficientes de MyD88 não produziram TNF-<font face=\"Symbol\">a em resposta a Migalina, sugerindo que a sinalização mediada por TLR via MyD88 é requerida para a produção desta citocina. Comprovamos que a Migalina modula a atividade de macrófagos através de mediadores da resposta imune inata e pode ser explorada como estratégia no controle de infecções. / Polyamines are present in most living organisms. Mygalin is an acylpolyamine isolated from A. gomesiana that showed microbicide activity against E. coli, however, its immunomodulator effect has not been explored. Immune mediators produced by macrophages are essential for the regulation of immune responses. Our results showed that murine macrophages stimulated in vitro with Mygalin didnt induce cytotoxicity, but activated iNOS, inducing nitrite synthesis. The production of TNF-<font face=\"Symbol\">a was enhanced, but IL-12p40 was not. The presence of IL-1<font face=\"Symbol\">b was not detected. In higher concentrations, Mygalin inhibited significantly the production of IL-12p40 and TNF-<font face=\"Symbol\">a induced by LPS, and its association with Polymixine B did not altered the production profile of TNF-<font face=\"Symbol\">a. Macrophages deficient in MyD88 molecule activated with Mygalin did not induce the synthesis of TNF-<font face=\"Symbol\">a. Our results showed that Mygalin is capable of modulating the macrophage activity by inducing mediators of innate immune response and can be explored as a strategy in the studies to control pathogen infections.
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Estudo da participação de 2-integrina nas atividades fagocítica e microbicida de macrófagos alveolares e peritoneais na histoplasmose / Study of Participation of 2-integrin in the Phagocytic and Microbicidal Activities of Alveolar and Peritoneal Macrophages in the Histoplasmosis

Soares, Elyara Maria 10 August 2009 (has links)
O Histoplasma capsulatum (H.capsulatum) é um fungo dimórfico patogênico e responsável por graves lesões pulmonares, as quais se caracterizam pelo acúmulo de leucócitos ao redor do fungo, resultando na formação de granulomas. A infecção ocorre principalmente pela inalação de conídios ou pequenos fragmentos de micélio que alcançam os alvéolos, onde se transformam em leveduras, que é a forma patogênica do fungo. Na resposta imune do hospedeiro, as integrinas participam nos mecanismos fagocíticos, essenciais na resposta à histoplasmose. As 2integrinas contêm uma cadeia 2, também conhecida como CD18, comum a várias moléculas de adesão, e uma cadeia variável. Até o momento foram identificadas quatro cadeias distintas: L, a qual forma o dímero L2, também conhecido como LFA-1 (do inglês leukocyte function antigen-1) ou CD11aCD18; m, formando m2, chamado Mac-1 (do inglês macrophage differentiation antigen 1) ou CR3 (do inglês complement receptor 3) ou CD11bCD18; x, formando x2, CD11cCD18, gp150, 95 ou CR4 (do inglês complement receptor 4) e a cadeia d, formando d2, CD11dCD18. Neste trabalho, investigamos o papel da molécula CD18 em macrófagos alveolares (MAs) e macrófagos peritoneais (MPs) nas funções efetoras contra H. capsulatum e a relação do leucotrieno B4 (LTB4) nestas respostas. Inicialmente confirmamos que MAs e MPs provenientes dos animais CD18low, expressam baixa porcentagem de CD11bCD18 (CR3). Demonstramos que, como esperado, MAs e MPs de ambos os grupos fagocitam mais leveduras opsonizadas com complemento do que não opsonizadas. Surpreendentemente, MAs de animais CD18low fagocitam 136% mais leveduras opsonizadas do que MAs de C57BL/6. Também, MPs destes animais fagocitam aproximadamente 240% mais leveduras quando infectados com H. capsulatum e opsonizados, quando comparados aos MPs de C57BL/6. A adição de LTB4 aumenta a atividade fagocítica em 520% por MAs de animais C57BL/6 e 200% por MAs de CD18low, enquanto que a adição de LTB4 aumentou a fagocitose dos MPs de animais C57BL/6 em 600% vezes quando comparado aos MPs de CD18low. Este fenômeno foi inibido pela pré-incubação destas células com antagonista específico do receptor BLT1 apenas em animais C57BL/6. A adição de LTB4 na cultura de MPs reduziu a porcentagem de morte das leveduras apenas nos animais C57BL/6. Os animais CD18low produzem espontaneamente mais LTB4 e apresentaram um grande aumento na produção de óxido nítrico quando comparados aos animais C57BL/6. Pacientes acometidos pela Doença Granulomatosa Crônica (DGC) possuem deficiência congênita da molécula CD18. Células fagocíticas isoladas do sangue periférico de pacientes com DGC foram incubadas com leveduras opsonizadas e assim como macrófagos de animais deficientes de CD18, fagocitam mais leveduras opsonizadas (900%) ou não (300%), quando comparado com células de indivíduos sadios. Sugerimos que a molécula CD18 tem importante participação nos mecanismos efetores da imunidade inata, por mecanismo dependente de mediadores lipídicos, como o LTB4, no controle dos mecanismos de defesa contra H. capsulatum. / Histoplasma capsulatum (H. capsulatum) is a pathogenic dimorphic fungus and its infection is characterized by accumulation of leukocytes and granuloma formation. Infection occurs mainly by fungal inhalation that reaches the alveoli, which became yeast (the pathogenic form). in the immune response of host, integrins participate in phagocytic mechanisms, fundamental in the response against histoplasmosis.,8^2-integrin has a 02 chain known as CD18, usual to many adhesion molecules, and a variable a chain. Until the moment, it was identified four variable a chains: aL, that constitutes the dimer aL,82, also known as LFA-1 (leukocyte function antigen) or CD11aCD18; am forming the a^m,B^2 or Mac-1 (macrophage differentiation antigen 1) and CR3 (complement receptor 3) and CD11bCD18; ax, constituting the dimer Able CD11cCD18, gp150, 95 or CR4 (complement receptor 4) and ad chain, that constitutes a^d,8^2, CD11dCD18. In the present study, we sought to investigate the effect of CD18 in alveolar (AMs) and peritoneal macrophages (PMs) effecter functions against H. capsulatum and the relation of LTB^4 in those responses. We confirm that AMs and PMs of CD18\'°^W mice have low expression of ,32-integrin compared to wild type mice (WT). We demonstrate that, as expected, AMs and PMs from WT and CD18\'°^W, phagocytosed more complement (C)-opsonized yeasts than the unopsonized yeasts. Surprisingly, AMs from CD18\'°^Wmice phagocytosed 136% more (C)-opsonized yeasts than AMs obtained from WT. Also, PMs of CD18^b°^W mice phagocytosed 240% more (C)-opsonized yeasts than PMs of WT. The addition of LTB^4, increases the phagocytic activity by AMs of WT mice in 520% and by AMs from CD18\'°^W mice in 200%, while the addition of LTB^4 only increased the phagocytosis of C-opsonized H. capsulatum by PMs of C57BL/6 mice in 600%, when compaired with PMs from CD18\'°^W mice. This phenomenon was inhibited by pretreatment of these cells with an especific BLT1 receptor antagonist only in PMs from C57BU6 mice. The addition of LTB^4 in the culture of MPs reduced the percentage of death of yeasts in animals C57BL/6. CD18\'°^W mice, spontaneously produce more LTB^4 and showed a large increase in the production of nitric oxide when compared to C57BU6. Patients affected by Chronic Granulomatous Disease (DGC) have congenital deficiency of the CD18 molecule. Phagocytic cells isolated from peripheral blood of patients with DGC were incubated with C-opsonized yeasts and as well as macrophages from CD18\'°^W, phagocytosed more C-opsonized yeasts (900%) or not (300%) when compared with cells from healthy individuals.Therefore, we suggest that the CD18 molecule has important participation in the effector mechanisms of innate immunity, a mechanism dependent on lipid mediators such as LTB^4, to control these mechanisms in defense against H. capsulatum.
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Avaliação dos fagócitos no leite de búfalas (Bubalus bubalis) hígidas criadas no Estado de São Paulo / Evaluation of phagocytes from healthy buffaloes (Bubalus bubalis) milk bred in Sao Paulo state

Libera, Alice Maria Melville Paiva Della 13 December 2002 (has links)
O presente estudo teve por objetivo avaliar quantitativa e qualitativamente os fagócitos presentes no leite de búfalas (Bubalus bubalis) hígidas criadas nos Estado de São Paulo. Para tal, o experimento foi subdividido em três etapas, designadas capítulos, conforme os objetivos: (1) determinar e estudar a celularidade do leite de búfalas hígidas; (2) estabelecer metodologia adequada para a recuperação das células somáticas do leite de búfalas, possibilitando a avaliação in vitro; (3) descrever e avaliar as provas de atividade fagocítica das células presentes no leite de búfalas hígidas, através de testes de mensuração direta (espraiamento e fagocitose de partículas de Zymosan) e por testes indiretos, que mensuram os metabólitos de oxigênio gerados na “explosão respiratória". Foram colhidas 132 amostras de leite de 35 búfalas hígidas (sem alterações ao exame físico da glândula mamária, bem como resultado da prova de CMT e exame microbiológico negativos). Após as avaliações do CMT, da CCS, da contagem diferencial, da viabilidade celular, do exame bacteriológico, dos testes de fagocitose, de espraiamento e da liberação de peróxido de hidrogênio, concluiu-se que: (1) os resultados das contagens de células somáticas, microscópica e automática, foram semelhantes, mas a predominância celular diferiu conforme a técnica empregada, sendo identificadas percentualmente mais células mononucleares na lâmina de suspensão celular citocentrifugada, e mais polimorfonucleares no leite submetido à técnica de Prescott e Breed; o leite diluído e citocentrifugado permitiu melhor avaliação da morfologia celular sendo identificados: 61,1% de monócitos e macrófagos; 32,9% de neutrófilos; 5,3% de linfócitos e 0,7% de eosinófilos; os fagócitos mononucleares apresentaram uma acentuada plasticidade na estrutura, com variados padrões morfológicos; (2) a baixa celularidade do leite necessitou maiores volumes da amostra mas, o aumento do volume da amostra aumenta a concentração celular obtida, mas não de forma ilimitada pois pode passar a comprometer a viabilidade das mesmas pelo excesso de manipulação e tempo exigidos pelas amostras mais volumosas; não foi necessária a elicitação, sendo possível a recuperação de 2 x 106 células viáveis/mL de leite de búfalas hígidas com 500 mL de leite, no mínimo; (3) os macrófagos aderidos espraiaram significativamente, além de apresentarem correlação com outro marcador de ativação celular, no caso, a liberação de peróxido de hidrogênio; mais da metade dos macrófagos aderidos fagocitaram partículas de Zymosan; os fagócitos mantêm sua capacidade de liberar peróxido de hidrogênio, espontaneamente ou não, em grau máximo, com uma significativa variação entre amostras / The aim of this study was to make a quantitative and a qualitative evaluation of phagocytes from healthy buffaloes (Bubalus bubalis) milk bred in Sao Paulo state. For this purpose, the experiment was divided in three parts, called chapters, as specific objectives: (1) establish and study the cellularity of healthy buffaloes milk; (2) establish an adequate method for the recuperation of somatic cells from buffaloes milk, making possible an in vitro evaluation; (3) standardize and evaluate the phagocytic activity tests of cells from healthy buffaloes milk, through direct measurement methods (spreading and phagocytosis of Zymosan particles) and indirect methods, which measure the oxygen metabolites from the respiratory burst. Milk samples (n=132) of healthy 35 buffaloes (without alterations on the physical examination of the mammary gland, and also negative results on CMT and microbiologic exams) were obtained. After the evaluations of CMT, SCC, differential cells count, cellular viability, bacteriologic exam, phagocytic tests, spreading and hydrogen peroxide liberation, the conclusions were: (1) the results of somatic cells count, microscopic and automatic, were similar but the cellular predominance differed with the utilized method, being percentually identified more mononuclear cells on slide of cytocentrifugation cellular suspension and more polymorphonuclear on milk submitted to the Prescott and Breed methods; the diluted and cytology by cytocentrifugation of milk permitted a best evaluation of the cellular morphology, being identified: 61.1% of monocytes and macrophages; 32.9% of neutrophils; 5.3% of lymphocytes and 0.7% of eosinophils; mononuclear phagocytes showed a high plasticity on structure with many morphological patterns; (2) a lower cellularity on milk requires higher quantities of the samples but an increase on sample volume increases cellular concentrations obtained, not on an unlimited way because it can compromise the cells viability with the excess of manipulation and time required by the biggest samples; it was not necessary the elicitation, being possible the recuperation of 2 x 106 viable cells/mL on milk of healthy buffaloes with 500 mL of milk minimum (3) adherent macrophages spreaded and were correlated with hydrogen peroxide release; majority of adherent macrophages phagocyted Zymosan particles; milk phagocytes showered a high oxidative metabolism, undependably of PMA stimulation, but with a great individual variation.
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Eferocitose de células de carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço por macrófagos : influência da galanina, dos produtos solúveis secretados por células tumorais e do fenótipo dos macrófagos /

González Maldonado, Laura Andrea January 2018 (has links)
Orientador: Carlos Rossa Júnior / Resumo: Os macrófagos representam uma das principais pontes entre imunidade inata e adaptativa e estão presentes em grande número tanto no estroma circundando tumores sólidos quanto no interior da massa tumoral (TAMs, tumor-associated macrophages), onde podem representar até 50% da massa da lesão. Nos carcinomas espinocelulares de cabeça e pescoço (HNSCC), TAMs apresentam predominantemente o perfil M2 (pró-tumoral), e a quantidade de TAMs é inversamente relacionada ao prognóstico. A efetividade do tratamento não-cirúrgico (quimio/radioterapia ou imunoterapia) dos tumores sólidos é diretamente relacionada à indução de morte das células neoplásicas. No processo de reparo, as células apoptóticas são removidas por fagocitose por outros tipos celulares, num processo denominado eferocitose. Embora seja um processo importante para o reparo e homeostasia tecidual, a eferocitose pode afetar o fenótipo dos macrófagos, favorecendo a polarização para o perfil M2, associado à progressão de HNSCC. A galanina é um peptídeo de 29 aminoácidos amplamente distribuída no organismo e com amplo espectro de efeitos biológicos. A expressão constitutiva de galanina por células de OSCC está associada à maior agressividade do tumor e tem sido estudado como marcador prognóstico de agressividade do tumor e também como um possível alvo terapêutico de HNSCC. O objetivo do presente trabalho é determinar a influência dos produtos secretados pelas células de carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço, bem como da ga... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Macrophages are a major link between innate and adaptive immunity and are present both in the surrounding stroma and within various solid tumors (when they are denominated tumor-associated macrophages, TAMs), where these cells may represent up to 50% of the tumor mass. In head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC), TAMs are predominantly of the M2 phenotype and the prognosis is inversely correlated with their abundance. The effectiveness of non-surgical treatment of solid tumors (chemotherapy/radiotherapy) is directly related to the induction of neoplasic cell death. In the repair process, apoptotic/dead cells must be removed by phagocytosis by other cell types (particularly macrophages), in a process called efferocytosis. Although this is a critical step in the repair and reestablishment of tissue homeostasis, efferocytosis itself may affect the phenotype of macrophages, skewing the cells towards an M2 phenotype, which is deemed as a 'pro-tumoral' phenotype. Galanin is a 29 aminoacid peptide of 29 produced by various cell types and with a broad spectrum of biological effects. The constitutive expression of galanin by head and neck cancer cells is associated with the increased of tumor aggressiveness and has been proposed as a biomarker of tumor aggressiveness and also as a possible therapeutic target in HNSCC. Thus, the goal of the present study was to determine the role of secreted products from head and neck cancer cells, and of galanin independently, on macrophage phe... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

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