Os processos fibrogênicos, ativados por mecanismos como estresse oxidativo, podem levar a um quadro de cirrose hepática, que representa uma das principais causas de morte no ocidente. Entretanto, em alguns estudos, substâncias fenólicas, como o Ácido Gálico (AG), demonstraram inibir e até regredir esses processos. O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos do composto fenólico AG no processo fibrogênico hepático murino. Os mesmos foram avaliados tanto na fase de progressão da fibrose, como na cirrose hepática estabelecida pela administração crônica de tetracloreto de carbono em camundongos C57. Para isso foram realizadas análises histológicas, imuno-histoquímicas, PCR e Western-bloting, estimando-se fatores relacionados à fibrogênese e mediadores inflamatórios associados. Observou-se uma diminuição importante na percentagem de áreas coradas pelo Sirius red, ou seja, redução na percentagem de fibrose nos grupos tratados com AG, tanto durante a prevenção (p<0,05), quanto na regressão da cirrose (p<0,05). Esta melhora foi acompanhada de redução no número de células marcadas pela SMA nos grupos tratados (p<0,05). Estes mesmos parâmetros foram confirmados através da análise genômica para colágeno, assim como pelo TIMP e pelo TGF 1; e proteômica para NFB e p38 MAPK. Os achados do presente estudo demonstraram o efeito do AG sobre a prevenção e reversão do processo fibrogênico hepático. Os principais mecanismos deste processo envolvem atividades anti-inflamatórias via TGF-1 e p38 MAPK, principalmente durante a indução de fibrose; assim como restrição da capacidade anti-apoptótica do NFB sobre as células estreladas hepáticas (CEH) na cirrose já estabelecida. / The fibrogenic processes activate by mechanisms such as oxidative stress can lead to a picture of liver cirrhosis, which represents a major cause of death in West. However, in some studies, phenolic substances, such as Gallic Acid (GA) shown to inhibit and even regress theses processes. The aim of this study was to investigate the effects of the phenolic compound GA in murine liver fibrogenic process. They were evaluated both in progression of fibrosis and in liver cirrhosis established by administration carbon tetrachloride im mice C57. For this, was performed histological, immunohistochemical, PCR and Western blotting analysis, estimating factors related to fibrogenesis and inflammatory mediators associated. There was a significant decrease of area stained by Sirius Red, which means reduction in the percentage of fibrosis in the groups treated with GA. Both for prevention (p<0,05) and for the regression of the cirrhosis (p<0,05). This improvement was accompanied by a reduction in the number of cells marked by SMA in the treated groups (p<0,05). These parameters was confirmed by genomic analysis for collagen, as well as by TIMP 1 and TGF 1, and proteomics for p38 MPK and NFkB. The findings of this study demonstrade the effect of GA in the prevention and of liver fibrogenic process. The main mechanisms of this process involves anti-inflammatory activity via TGF 1 and p38 MAPK, especially during induction of fibrosis, as well as restriction of antiapoptotic capacity of NFkB on the CEH in established cirrhosis.

Embora exista considerável progresso na área de biossensores, ainda é primordial aprimorar muitos desses dispositivos. Este trabalho tem por objetivo contribuir para o contínuo crescimento dos biossensores a base de enzimas e de moléculas de DNA, sendo dois biossensores eletroquímicos descritos. O primeiro trata-se de um biossensor enzimático utilizando tirosinase (Tyr) imobilizada por intermédio de cistamina (CYS) e glutaraldeído (GA) para a detecção de compostos fenólicos. Eletrodos de carbono impressos (SPCE) foram modificados com nanobastões de ouro (AuNRs) em filme de poli(amido amina) (PAMAM) geração 4 para o favorecimento da transferência direta de elétrons (DET) entre o eletrodo e o sítio ativo da enzima. Para caracterizar os AuNRs e AuNRs-PAMAM, espectroscopia de absorção no UV-Visível, espalhamento de luz dinâmico (DLS) e microscopia eletrônica de varredura (SEM) foram empregadas. As etapas do biossensor foram estudadas por voltametria cíclica e linear, amperometria e microscopia de força atômica (AFM) na presença de dois analitos: catecol (CAT) e dopamina (DA). A faixa linear para CAT foi de 2,8 a 30,3 &mu;mol L-1 com um limite de detecção (LD) de 1,0&mu;mol L-1 enquanto para a DA, a faixa linear foi de 27,8 a 448,7 &mu;mol L-1 e LD de 10,0 &mu;mol L-1. Além de apresentar ótima resposta frente a possíveis interferentes, o sensor também mostrou excelente desempenho em amostras reais, que atrelados aos testes de repetibilidade e reprodutibilidade mostram a estabilidade e acurácia do biossensor. O segundo sensor, trata-se de um sensor de DNA impedimétrico em eletrodo de ouro para a detecção da mutação c.68_69del relacionada à predisposição ao câncer de mama. A imobilização da sequência de captura (SH-ssDNA) no eletrodo ocorreu pela ligação ouro-enxofre (Au-S) e o modelo de hibridização escolhido foi a hibridização direta. O genossensor distinguiu eficientemente entre as sequências alvo (tarDNA) e não-complementar (ncsDNA), apresentando faixa linear de 1,0 a 200,0 nmol L-1 e LD de 0,14 nmol L-1. Os resultados sugerem que ambos biossensores têm potencial e que as estratégias propostas são promissoras para o desenvolvimento de outros biossensores. / Despite a considerable progress in the area of biosensors, it is still crucial to improve most of these sensors. This study aims to contribute to the ongoing growth of enzyme- and DNA-based biosensors, being described two electrochemical biosensors. The first one is an enzyme-based biosensor with immobilized Tyrosinase (Tyr), through cystamine (CYS) and glutaraldehyde (GA), for detection of phenolic compounds. Screen-printed carbon electrodes (SPCE) were modified by gold nanorods (AuNRs) stabilized with poly(amide amine) PAMAM generation 4 to facilitate direct electron transfer (DET) between electrode and enzyme active site. AuNRs and AuNRs-PAMAM were characterized using UV-Visible absorption spectroscopy, dynamic light scattering (DLS) e scanning electron microscopy (SEM). Biosensor stages were studied by cyclic and linear voltametry, amperommetry and atomic force microscopy (AFM) and tested agains two analytes: catechol (CAT) and dopamine (DA). Detection limit (LD) for CAT is 1 &mu;mol L-1 and linear range from 2.8 to 30.3 &mu;mol L-1, for DA, LD is 10.0 &mu;mol L-1 and linear range 27.8 to 448.7 &mu;mol L-1. Besides, the biosensor shows great response in the presence of interferents, it also had an excellent performance in real samples that along with repeatability and reproducibility tests indicate stability and accuracy of the biosensor. The second sensor is an impedimetric DNA sensor prepared on gold electrode to detect c.68_69del mutation related to breast cancer predisposition. Capture sequence (HS-ssDNA) immobilization occurred due to gold-sulfur bond (Au-S) and direct hybridization was the chosen hybridization model. The genosensor was able to distinguishing between target sequence (tarDNA) and non-complementary sequence (ncsDNA) and linear range and LD were found to be 1.0 to 200.0 nmol L-1 and 0.14 nmol L-1, respectively. Results suggest both biosensors have potential and proposed strategies are promising for other biosensors development.

Floral color change is a widespread phenomenon in angiosperms, but poorly understood from the genetic and chemical point of view. This thesis aimed to investigate this phenomenon in Tibouchina pulcha, a native species whose flowers change from white to dark pink. To reach this goal, flavonoid biosynthetic gene expression and compounds were profiled. By using hyphenated techiniques (UPLC-HRMS and NMR), thirty phenolic compounds were quantified and identified, being sixteen described for the first time in T. pulchra. Moreover, an inedite compound was also identified. Five key genes of the flavonoid biosynthetic pathway were partially cloned, sequenced, and the mRNA levels were analyzed (RT-qPCR) along flower development. Collectively, the obtained results demonstrated that the flower color change in T. pulchra is regulated at transcriptional level. Additionally, a metal quantification suggests that Fe3+ ion might influence the saturation of the color at dark pink stage / A mudança de cor em flores é um fenômeno generalizado entre as angiospermas, mas pouco compreendido do ponto de vista genético e químico. Este estudo teve como objetivo investigar esse fenômeno em Tibouchina pulcha , uma espécie nativa brasileira, cujas flores mudam do branco para rosa escuro. Para alcançar o objetivo, os perfis dos compostos e de expressão de genes da via de biossíntese de flavonoides foram estudados. Utilizando técnicas hifenadas (UPLC-HRMS and NMR), trinta compostos foram quantificados e identificados, sendo: dezesseis descritos pela promeira vez em T. pulchra. Além idsso, um composto inédito foi identificado. Cinco genes que codificam para enzimas chaves da via foram parcialmente clonados, sequenciados, e os níveis de mRNA foram analisados (RT-qPCR) durante o desenvolvimento das flores. Coletivamente, os dados obtidos demonstram que a mudança de cor em flores de T. pulchra é regulada transcricionalmente. Além disso, quantificações de metais sugerem que o ion Fe3+ esteja relacionado a saturação da cor no estágio rosa escuro

As proantocianidinas da canela são compostos fenólicos responsáveis por diversos efeitos benéficos à saúde atribuídos a essa planta. No entanto, para usufruir desses efeitos, seria necessário consumir grande quantidade da especiaria, que apresenta algumas características sensoriais indesejáveis, como sabor forte e também causam sensação de adstringência. Pensando em resolver esses problemas, o presente trabalho teve como objetivo a obtenção do extrato de canela rico em proantocianidinas, sua encapsulação pela técnica de coacervação complexa e aplicação em sorvete. Inicialmente foram otimizadas as condições de processo para a obtenção do extrato com o maior teor de proantocianidinas. Utilizando-se canela em casca triturada, etanol 50% e variando-se condições de temperatura, razão sólido:solvente e tempo, as condições foram otimizadas em: temperatura (60 °C), razão sólido:solvente (1:7,5) e tempo de extração (30 min). Os principais compostos presentes nesse extrato foram isolados em sistema de CLAE e identificados como sendo uma mistura de proantocianidinas com graus de polimerização de 2-4, ácido cinâmico e cinamaldeído. A capacidade antioxidante dessas frações também foi determinada mostrando que as proantocianidinas são as que mais contribuem para esse potencial. O extrato foi seco por atomização e liofilização sendo avaliadas as seguintes propriedades: capacidade antioxidante, atividade inibidora da &alpha;-amilase e &alpha;-glicosidase e atividade antimicrobiana. Os extratos secos, principalmente o atomizado, apresentaram alta capacidade antioxidante e alto potencial de inibir as enzimas digestivas, porém perderam a capacidade antimicrobiana em relação ao extrato líquido. O extrato atomizado foi encapsulado pela técnica de coacervação complexa utilizando gelatina como polímero anfótero e diferentes polissacarídeos (goma arábica, pectina, goma de cajueiro, carboximetilcelulose e &kappa;-carragena) como polímeros aniônicos. As micropartículas foram caracterizadas em relação a: teor de umidade, atividade de água, higroscopicidade, solubilidade, morfologia, tamanho e distribuição. Houve diferença entre as amostras em todos esses parâmetros avaliados. Foram estudados os espectros de infravermelho dos ingredientes e das partículas obtidas por coacervação, onde foi observada claramente a interação entre a proteína e o polissacarídeo na formação das partículas. As micropartículas foram submetidas a condições de stress em meios aquosos e se mostraram resistentes em diversos valores de pH, temperatura, concentração de sal e sacarose. Durante a estocagem as partículas perderam parte dos fenólicos e proantocianidinas totais e a amostra produzida com gelatina/&kappa;-carragena, foi a que mais preservou esses compostos. Essa amostra também mostrou potencial para ser utilizada como sistema para liberação controlada de compostos fenólicos no intestino. A análise sensorial das amostras de extrato livre e encapsulado comprovou que o processo de encapsulação foi eficiente em mascarar o sabor forte e a sensação de adstringência do extrato de canela. As amostras do extrato de canela encapsulado, aplicadas em sorvete, obtiveram maior aceitação global, foram melhor avaliadas quanto ao sabor e também apresentaram maior intenção de compra pelos provadores em comparação à amostra de sorvete contendo o extrato livre. / Proanthocyanidins from cinnamon are phenolic compounds responsible for many beneficial health effects attributed to this plant. However, to take advantage of these effects, it would be necessary to consume large amount of the spice, which presents some undesirable sensory characteristics such as strong flavor and also cause sensation of astringency. Thinking of solving these problems, this study aimed to obtain a cinnamon extract rich in proanthocyanidins, its encapsulation by complex coacervation technique and application in ice cream. Initially, the conditions were optimized to obtain the extract with higher proanthocyanidins content. Using crushed cinnamon bark, 50% ethanol and varying temperature, solid to solvent ratio and time, the conditions were optimized in: temperature (60 °C) solid:solvente ratio (1:7.5), and time extraction (30 min). The main compound present in this extract were isolated on an HPLC system and identified as a mixture of proanthocyanidins with degrees of polymerisation of 2-4, cinnamaldehyde and cinnamic acid. The antioxidant capacity of these fractions was also determined showing that the proanthocyanidins are the main responsible for this potential. The extract was spray-dried and freeze-dried being evaluated the following properties: antioxidant capacity, inhibition of &alpha;-amylase and &alpha;-glucosidase and antimicrobial activity. Dried extracts, particularly the atomized one, showed high antioxidant capacity and high potential to inhibit digestive enzymes, but lost antimicrobial capacity in relation to the liquid extract. The atomized extract was encapsulated by the complex coacervation technique using gelatin as a amphoteric polymer and different polysaccharides (gum arabic, pectin, cashew gum, carboxymethylcellulose and &kappa;-carrageenan) as the anionic polymers. The microparticles were characterized in relation to: moisture content, water activity, hygroscopicity, solubility, morphology, size and distribution. There were differences between the samples in all of these parameters evaluated. Were studied the infrared spectra of ingredients and particles obtained by coacervation, where it was clearly observed interaction between the protein and the polysaccharide in particle formation. The microparticles were submitted to stress conditions in aqueous media and were resistant to various pH values, temperature, salt concentration and sucrose. During storage, the particles have lost part of phenolics and total proanthocyanidins, and in the sample produced with gelatin/&kappa;-carrageenan, these compounds were more preserved. This sample also showed potential to be used as a system for controlled release of phenolic compounds in the intestine. Sensory analysis of free and encapsulated extract samples proved that the encapsulation process was effective at masking the strong taste and the sensation of astringency of the cinnamon extract. Samples of the encapsulated cinnamon extract, added in ice cream, obtained a greater global acceptance, were further evaluated for flavor and also had a higher purchase intent by the consumers compared to the ice cream containing free extract.

Introdução: As doenças crônicas não transmissíveis (DCNT), como o diabetes, apresenta estreita relação com os marcadores do estresse oxidativo e da inflamação. Estes marcadores podem ser modulados pelos compostos bioativos presentes nos alimentos. Os compostos fenólicos presentes no alecrim (Rosmarinus officinalis L.) possuem atividades biológicas importantes, como antioxidante, antiinflamatória, anticarcinogênica, entre outras. Objetivo: Avaliar o efeito dos compostos fenólicos do alecrim (Rosmarinus officinalis L.) na inflamação aguda e sobre os marcadores de estresse oxidativo de ratos diabéticos induzidos por estreptozotocina. Métodos: Extrato aquoso (EA) e frações ricas em compostos fenólicos foram obtidos das folhas de alecrim e avaliados quanto à sua composição em fenólicos e capacidades antioxidante e anti-inflamatória in vitro. Ratos Wistar, machos, foram tratados com EA, fração hidroalcoólica (FHA) ou fração de ácidos fenólicos livres (AFL). O efeito do EA, FHA e AFL foram avaliados em ratos diabéticos. Foi avaliada a atividade anti-inflamatória in vivo do EA nos modelos de inflamação aguda: edema de pata e bolsa de ar. O efeito do EA também foi investigado em células de hepatócitos humano (HepG2). Para análise dos resultados utilizou-se a análise de variância (ANOVA, post-hoc Tukey), adotando como nível de significância p<0,05. Resultados: O EA e suas frações apresentaram alto conteúdo em compostos fenólicos, entre eles os flavonoides. Os ácidos rosmarínico e carnósico foram os compostos majoritários das frações de ácidos fenólicos. A composição em compostos fenólicos contribuiu significativamente para a expressiva capacidade antioxidante e inibitória da lipoxigenase in vitro. O EA de alecrim alterou positivamente a atividade das enzimas antioxidantes, reduziu as concentrações séricas de TNF-&#945 e IL-6; e aumentou níveis de LTB4 em animais diabéticos quando comparado ao grupo controle diabético (D-H2O). A AFL não atenuou os marcadores de estresse oxidativo do diabetes. Na inflamação aguda, o EA reduziu o edema de pata semelhante à indometacina (p>0,05). Houve redução significativa (p<0,05) das concentrações de LTB4, PGE2, TNF-&#945; e IL-6 em exsudatos de ratos pré-tratados com EA e submetidos ao estímulo inflamatório com carragenina no modelo de bolsa de ar. Esta redução foi acompanhada pela diminuição no recrutamento de neutrófilos, quando comparados ao grupo controle (p<0,05). Foi observada redução na produção de óxido nítrico em neutrófilos tratados com EA e estimulados com LPS. O EA nas concentrações de 1 a 50 &#181;g/mL manteve a viabilidade de células HepG2 e reduziu a produção de espécies reativas em condições basais e hiperglicêmicas, além de manter os níveis de GSH e aumentar a expressão dos genes HO-1 e SOD-2 em células tratadas com 10 &#181;g/mL de extrato quando comparados ao grupo normoglicêmico (p<0,05). Conclusão: O EA de alecrim apresenta propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias, observadas tanto in vitro como em animais, podendo apresentar benefício nas DCNT, nas quais o estresse oxidativo e a inflamação atuam de forma significativa, como no diabetes. / Introduction: Non-transmissible chronic diseases, such as diabetes, are strongly associated with oxidative stress and inflammation markers, which are known to be modulated by bioactive compounds found in foods. Polyphenols present in rosemary (Rosmarinus officinalis L.) display important biological activities, including among others, antioxidant, anti-inflammatory and anticarcinogenic effects. Objective: To assess the effects of polyphenols from rosemary (Rosmarinus officinalis L.) on acute inflammation and oxidative stress markers in rats with streptozotocin-induced diabetes. Methods: Aqueous extract and phenolic acid fractions were obtained from rosemary leaves and assayed for their phenolic composition and in vitro antioxidant and anti-inflammatory activities. The effects of the aqueous extract (EA), the hydroalcoholic fraction (FHA) and the free phenolic fraction (AFL) were assessed in diabetic male Wistar rats. The in vivo anti-inflammatory activity of EA was evaluated against two models of acute inflammation: paw edema and air pouch. The effect of EA was also investigated in human hepatocyte cells (HepG2). Results were compared using a one-way Analysis of Variance (ANOVA) and the Tukey post-test at a significance level of p<0.05. Results: Polyphenols, mainly flavonoids, occurred in high quantities in EA and its fractions. Rosmarinic and carnosic acids were found chiefly in the phenolic fractions. The rich phenolic composition contributed significantly to the high in vitro antioxidant activity and lipoxygenase inhibiting capacity observed. The rosemary aqueous extract (EA) positively affected antioxidant enzyme activities, reduced serum TNF-&#945; and IL-6 concentrations and elevated LTB4 levels in diabetic rats, compared with those in the diabetic control group (D-H2O). Treatment with AFL did not attenuate the oxidative stress markers altered by diabetes. In the acute inflammation models, paw edema was reduced by EA as successfully as by indomethacin (p>0.05) and LTB4, PGE2, TNF-&#945; and IL-6 concentrations in air pouch exudates in carrageenan-stimulated rats were significantly lowered by treatment with EA (p<0.05). Neutrophil recruitment was also reduced, compared with the control group (p<0.05). Treatment with EA also led to the reduction in nitric oxide production by LPS-stimulated neutrophils. In addition to preserving HepG2 cell viability, EA at concentrations between 1 and &#181;50 g.mL-1 was also able to diminish ROS production under basal and hyperglycemic conditions, preserve GSH levels and increase HO-1 e SOD-2 gene expression in cells (extract at &#181;10 g.mL-1), compared with the normoglycemic group (p<0.05). Conclusion: The aqueous extract of rosemary exhibits antioxidant and anti-inflammatory activity in vitro and in animals. This could be of great benefit in the treatment of nontransmissible chronic diseases, such as diabetes, which are strongly associated with oxidative stress and inflammation.

O auxílio terapêutico exercido pelas própolis de abelhas Apis mellifera é conhecido desde tempos imemoriais e suas propriedades têm sido amplamente estudadas. Contudo, as própolis produzidas por abelhas sem ferrão foram ainda pouco investigadas. Desta forma, este trabalho se propôs a avaliar algumas características químicas e atividades biológicas de própolis de abelhas sem ferrão da espécie Frieseomelitta varia obtidas em épocas e locais diferentes. Para tanto, obtiveram-se extratos etanólicos de própolis coletadas na região de Alfenas-MG (Fv1, Fv2 e FvA), os quais foram avaliados quanto ao perfil de absorção da luz UV visível, composição por flavonoides (com base em quercetina), compostos fenólicos (com base em ácido gálico) e perfil químico por cromatografia em camada delgada (CCD). Adicionalmente, Fv1, Fv2 e FvA foram submetidos a testes in vitro que analisaram suas atividades antimicrobiana, antioxidante e antiproliferativa. O espectro de absorção da luz UV visível apresentou picos característicos de fenólicos e flavonoides e os testes quantitativos mostraram baixos valores destes compostos fitoquímicos. A CCD, por sua vez, revelou a presença de terpenoides em todas as amostras. Quanto às propriedades biológicas, verificou-se baixa atividade antioxidante. As atividades antimicrobiana e antiproliferativa, no entanto, foram bastante relevantes. A amostra Fv1 mostrou capacidade para inibir totalmente o crescimento de células de câncer de ovário multirresistente a drogas em uma concentração de 7,6µg/mL, valor inferior ao necessário do padrão Doxorrubicina para inibir esta mesma linhagem celular. Nos testes de atividade antimicrobiana, Fv1 também se destacou por sua ação bactericida sobre Streptococcus agalactiae em concentração contida entre 15,62-31,25µg/mL, valor também inferior ao obtido com o padrão Cloranfenicol. Os resultados encontrados nesta pesquisa evidenciam o grande potencial biológico das própolis de Frieseomelitta varia, que pode se modificar conforme local e época de coleta. / The therapeutic aid exercised by propolis of honeybee Apis mellifera is known since immemorial times and their properties have been widely studied. However, the stingless bee propolis has been little investigated. In this way, this work proposed to assess some chemical characteristics and biological activities of propolis produced by Frieseomelitta varia stingless bees. The samples (Fv1, Fv2 and FvA) were obtained in different times and places in the city of Alfenas-MG. Extraction were made with them in ethanol and the resultant extracts were submitted to some evaluations: UV-visible absorption profile, composition by flavonoids (quercetin), phenolic compounds (based on Gallic acid) and chemical profile by thin-layer chromatography (TLC). Additionally, Fv1 Fv2 and FvA were examined by in vitro biological assays, such as antimicrobial, antioxidant and antiproliferative activities. The absorption spectrum of UV-visible light showed characteristic peaks of phenolic compounds and flavonoids, on the other hand, the quantitative tests showed low values of these phytochemicals. The TLC result revealed the presence of terpenoides in all the samples. With regard to biological properties, low antioxidant activity was found. However, the antimicrobial and antiproliferative results, were quite relevant. The sample Fv1 showed ability to inhibit fully the growth of ovarian cancer cells resistant to drugs at a concentration of 7.6µg/mL, below the required value of the standard Doxorubicin to inhibit this same cell line. In the antimicrobial assays, Fv1 also stood out for its bactericidal action on Streptococcus agalactiae in concentration contained between 15.62 -31.25µg/mL, also lower than the value obtained with the standard Chloramphenicol. The results found in this research show the great biological properties of Frieseomelitta varia propolis, which can change according to location and time of collection. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A espécie Leonotis nepetifolia é amplamente distribuída no Brasil e no mundo, é uma erva daninha utilizada com diversas finalidades terapêuticas pela população, porém há poucos estudos a cerca de sua composição química e atividade biológica. O presente estudo tem a finalidade de caracterizar quimicamente os extratos hidroetanólicos de caule, folhas, glomérulo e raízes de L. nepetifolia e avaliar a atividade biológica destes. A caracterização química foi realizada em cromatógrafo líquido de alta eficiência acoplado ao detector de arranjo de diôdos. Quanto o perfil químico dos extratos, foi quantificado o teor de fenóis e flavonoides totais. A atividade antirradicalar foi avaliada pelos testes de DPPH˙ e poder redutor dos extratos. A atividade antimicrobiana foi avaliada pelo teste de microdiluição em placa para fungos e bactérias. Foi realizada a triagem dos extratos quanto a atividade antileishmania, atividade antiamastigota e antipromastigota em Leishmania amazonensis. A atividade citotóxica dos extratos foi avaliada em macrófagos peritoneais murinos. Os cromatogramas e os espectros em UV/vis revelaram a presença de polifenóis e flavonoides em maior abundancia nos extratos das folhas e glomérulo, comparados com as raízes e caule. Os extratos de folhas e glomérulos apresentaram maior atividade antirradicalar, poder redutor e concentrações quantificadas de compostos polifenólicos e flavonoides. Todos os extratos inibiriam o crescimento de 50% da população bacteriana sendo que extrato do caule apresentou maior atividade frente a bactérias Gram-positivas, principalmente para Bacillus cereus. Todos os extratos foram capazes de inibir o crescimento de 50% e 100% da população fúngica, os extratos das folhas e raízes demonstraram maior atividade contra formas promastigotas e amastigotas de L. amazonensis sendo que o extrato das raízes apresentou maior potencial citotóxico em macrófagos murinos. Os extratos brutos de L. nepetifolia apresentaram atividades significantes que se relacionam com os metabólitos secundários presentes na espécie principalmente os polifenóis e flavonoides caracterizados no presente estudo. / The specie Leonotis nepetifolia is widely distributed in Brazil and worldwide, is a weed treatments used for various purposes by the population, but there are few studies about its chemical composition and biological activity. The purpose of this study is to characterize chemically hydroethanolic extracts of stem, leaves, inflorescences glomerulus and roots of Leonotis nepetifolia and evaluate the biological activity of these. The chemical characterization was performed in HPLC - UV on the chemical profile of the extracts was quantified the level of total phenols and flavonoids. The antioxidant activity was assessed for DPPH˙ and reduce power of the extracts. The microbial activity test was used for broth microdilution methods for bacteria and fungi. We performed screening of the extracts and the activity against promastigotes e amastigotes forms of Leishmania amazonensis. The cytotoxic activity of the extracts was evaluated in murine peritoneal. The chromatograms and UV spectra revealed the presence of polyphenols and flavonoids in greater abundance in extracts of leaves and inflorescences glomerulus, compared with the roots and stem the quantitative analyses showed the same result. The extracts of the stem showed higher activity against Gram positive bacteria, mainly Bacillus cereus, all extracts inhibited the growth of 50% of the bacterial population , all extracts were able to inhibit the growth of 50% and 100% of the extract showed no fungal growth and extracts of the leaves and roots showed greater activity against promastigotes and amastigotes forms of L. amazonensis and the roots extracts showed greater cytotoxic potential in murine macrophages. The crude extracts from Leonotis nepetifolia showed significant activities that relate to the secondary metabolites present in the species mainly polyphenols and flavonoids, performed int this study. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Euphorbia cotinifolia apresenta muitas atividades biológicas sendo utilizada na medicina popular para cauterizar feridas e como um purgante em pequenas doses. O presente estudo teve como objetivo determinar o teor de compostos fenólicos e flavonoides, a atividade antimicrobiana, antioxidante e a toxicidade dos extratos hidroetanólicos de raiz, caule, folha e fruto de E. cotinifolia. Foi realizada triagem fitoquímica, dosagem de compostos fenólicos pelo método de Folin-Ciocalteau, flavonoides pelo método de cloreto de alumínio e análise química por CLAE. A atividade antimicrobiana foi determinada pela técnica de difusão em ágar e a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) pela técnica de diluição em caldo utilizando cepas padrões. Foi determinada também a concentração microbicida mínima (CMM). A atividade antioxidante foi determinada pelo método do sequestro do radical livre DPPH. A citotoxicidade foi avaliada pelo método MTT em cultura celular BHK. Todos os extratos hidroetanólicos de Euphorbia cotinifolia apresentaram compostos fenólicos, bem como a presença de metabólitos secundários como taninos e flavonoides, atividade antimicrobiana e antioxidante. A análise em CLAE sugeriu a presença de ácido cafeico para os extratos de folha fresca e seca e demonstrou uma maior concentração de compostos fenólicos na folha seca. Nenhum dos extratos apresentou atividade antimicobacteriana e citotoxicidade in vitro. / Euphorbia cotinifolia has many biological activities being used in folk medicine to cauterize wounds and as a purgative in small doses. The present study aimed to determine the content of phenolic compounds and flavonoids, antimicrobial and antioxidant activity and toxicity of hydroethanolic extracts of root, stem, leaf and fruit of E. cotinifolia. Was performed chemical screening, measurement of phenolic compounds by Folin-Ciocalteau reagent method, flavonoids by aluminum chloride method, chemical analysis by HPLC. The antimicrobial activity was determined by agar diffusion and minimum inhibitory concentration (MIC) by broth dilution technique using standard strains. The minimum microbicidal concentration (CMM) was also determined. The antioxidant activity was determined by the kidnapping of DPPH free radical method. Cytotoxicity was assessed by the MTT method in BHK cell culture. All hydroethanolic extract of Euphorbia cotinifolia presented phenolic compounds, as well as presence of secondary metabolites such as tannins and flavonoids, antimicrobial and antioxidant activity. The HPLC analysis suggested the presence of caffeic acid for extracts of dry leaf and fresh. Dry leaf showed a higher concentration of phenolic compounds. None of the extracts showed antimicrobial activity and cytotoxicity in vitro. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

As espécies da família Annonaceae são amplamente utilizadas na medicina popular para diversos fins terapêuticos. Pesquisas têm demonstrado que o marolo (Annona crassiflora Mart.) contém muitas classes de fitoquímicos biologicamente ativos. Neste contexto, este estudo teve por objetivo realizar as análises fitoquímicas e avaliar as atividades antimicrobianas, leishmanicidas, antioxidantes e antidiabéticas do extrato hidroetanólico 70% (v/v), das frações hidroetanólicas e do extrato acetato de etila. A obtenção do extrato hidroetanólico 70% (v/v) ocorreu por percolação, às frações hidroetanólicas por cromatografia em coluna (Sephadex LH-20) e o extrato acetato de etila por maceração. As folhas de Annona crassiflora Mart foram o material de escolha para esse estudo. Inicialmente, realizou-se uma triagem fitoquímica preliminar, por meio da Cromatografia em Camada Delgada, tanto dos extratos como das frações, que permitiram a detecção de compostos como: alcaloides, flavonoides, taninos, terpenos, ácidos fenólicos e catequinas. Posteriormente, os extratos e as frações foram analisados em espectrômetro de massas, no modo full scan negativo e positivo, podendo sugerir alguns constituintes químicos, baseando-se na massa molecular e nos mecanismos de fragmentação propostos pela literatura, como os flavonoides, ácidos fenólicos, procianidinas e alcaloides. As análises químicas quantitativas demonstraram que os teores de fenóis no extrato seco hidroetanólico 70% (v/v) (262,02 ± 0,20 mg EAG/g) foram superiores à concentração obtida nas frações hidroetanólicas. Os teores de flavonoides também foram superiores no extrato hidroetanólico 70% (v/v) (27,56 ± 0,40 mg EQ/g). Nas avaliações da atividade antioxidante observou-se que o pontecial das frações hidroetanólicas demonstraram resultados mais significativos em relação ao extrato hidroetanólico e acetato de etila, sendo que a fração hidroetanólica FHsdx2: 12-17 apresentou os melhores resultados. A atividade antioxidante in vivo foi realizada pelo método da peroxidação lipídica, no homogeneizado renal e hepático, através da determinação das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico. A administração do extrato hidroetanólico 70% (v/v) reduziu a peroxidação lipídica no fígado e rins de animais tratados. A análise da atividade antimicrobiana revelou que o extrato hidroetanólico 70% (v/v) teve menores valores de concentração inibitória mínima (MIC) obtidos para Candida albicans (7,81 µg.mL-1), Candida tropicali (15,62 µg.mL-1), Candida glabrata (3,90 µg.mL-1) e Candida parapsilosis (7,81 µg.mL-1). A Candida krusei foi mais susceptível a fração hidroetanólica FHsdx2: 70-104, apresentando MIC de 3,90 µg.mL-1. Para avaliar o possível efeito da espécie Annona crassiflora em ratos diabéticos, determinou-se os níveis glicêmicos, as concentrações de frutosamina, uréia, creatinina, ASL e ALT em amostras de soro de animais tratados com 300 mg/kg do extrato hidroetanólico 70% (v/v). Essas análises bioquímicas foram realizadas em aparelho automatizado Humanstar 80. Com base nos resultados obtidos, pode-se avaliar que o a administração do extrato, conforme o protocolo adotado, não alterou os parâmetros bioquímicos analisados no soro de ratos normais e diabéticos. A atividade leishmanicida foi realizada utilizando placas de 96 poços. Na atividade leishmanicida, o extrato acetato de etila apresentou-se ativo contra as formas promastigotas e amastigotas de Leishmania amazonensis com IC50 respectivamente de 4,35 µg.mL-1 e 42,50 µg.mL-1. Utilizou-se o método colorimétrico MTT para avaliação da citotoxicidade do extrato acetato de etila frente aos macrófagos peritoniais de ratos Wistar. Os resultados mostraram redução de 86 % dos macrófagos. Por fim, os resultados obtidos podem fornecer informações relevantes, não somente para os estudos relacionados à prevenção e/ou tratamento de patologias associadas ao estresse oxidativo, leshmanioses e antimicrobianas, como também para assegurar o consumo racional de plantas medicinais. / The species of Annonaceae family are broadly used in popular medicine for several therapeutic purposes. In this context, this study aimed to perform chemical analysis and evaluate the antimicrobial, leishmanicidal, antioxidant and anti-diabetic activiteis of hydroethanolic extract 70% (v/v), of hydroethanolic fractions and extract ethyl acetate. A obtaining of extract hydroethanolic 70% (v/v) by percolation, of hydroethanolic fractions obtained by chromatography (Sephadex LH-20) and of ethyl acetate extract by maceration. The leaves of Annona crassiflora Mart. were material of choice for this study. Initially, the phytochemical’s screening preliminary was performed by Thin Layer Chromatography, thus the extracts as fractions, it allowing the detection of compounds such as: alkaloids, flavonoids, tannins, terpenes, phenolic acids and catechins. Subsequently, the extracts and fractions was analyzed in mass spectrometer, in full scan mode negative and positive, some chemical constituents can been suggest, based in molecular mass and fragmentation mechanisms proposed in the literature such as flavonoids, phenolic acids, procyanidins and alkaloids. Quantitative chemical analyses have showed that phenol contents in the dry extract hydroethanolic 70% (v/v) (262.02 ± 0.20 mg GAE/g) was higher than the concentration obtained in hydroethanolic fractions. The flavonoid levels were also higher in hydroethanolic extract 70% (v/v) (27.56 ± 0.40 mg EQ/g). it was observed in the evaluations of antioxidant activity that the pontecial the hydroethanolic fractions and ethyl acetate showed results more significant in regarding the hydroethanolic extract, where in the fractions hydroethanolic FHsdx2: 12-17 showed the best results. The antioxidant activity in vivo was realized by the method of lipid peroxidation, in kidney and liver homogenized, through determination of reactive substances to thiobarbituric acid. The administration of the hydroethanolic extract 70% (v/v) reduced the lipid peroxidation in liver and kidneys of animals treated. The analysis of antimicrobial activity revealed that the hydroethanolic extract 70% (v/v) had lower values of the minimum inhibitory concentration (MIC) obtained for Candida albicans (7.81 µg.mL-1), Candida tropicalis (15.62 µg.mL-1), Candida glabrata (3.90 µg.mL-1) and Candida parapsilosis (7.81 µg.mL-1). Candida krusei was more susceptible to hydroethanolic fraction FHsdx2: 70-104, with MIC of 3.90 µg.mL-1. To evaluate the possible effect of Annona crassiflora Mart. species, in diabetic rats, blood glucose levels, concentrations of fructosamine, urea, creatinine, ASL and ALT was determined in serum samples from animals treated with 300mg/kg of hydroethanolic extract 70 % (v/v) of the sheets. These biochemical analyzes was performed by automated apparatus Humanstar 80. Based on the results obtained in this study, the administration of the extract could be evaluated, as the protocol adopted, don’t change the biochemical parameters analyzed in the serum of normal and diabetic rats. The antileishmanial activity was performed using 96-well plates. In leishmanicidal activity, the ethyl acetate extract up showed active against Leishmania amazonensis promastigotes and amastigotes forms with IC50 respectively 4.35 µg.mL-1 and 42.50 µg.mL-1. We used the method colorimetric MTT for evaluating the cytotoxicity of the ethyl acetate extract front of peritoneal macrophages from Wistar rats. The results showed a reduction of 86% of macrophages. Finally, the results can provide relevant information, not only for studies related to the prevention and/or treatment of diseases associated with oxidative stress, leishmaniasis and diseases caused by yeast, as well to human ensure and rational use of medicinal plants. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A Garcinia brasiliensis, conhecida como Bacupari, é uma espécie que se destaca por apresentar metabólitos secundários com várias atividades biológicas. Porém, na natureza a produção destes compostos é muito pequena. Para aumentar a produção de metabólitos secundários, de interesse econômico ou medicinal, vem sendo estudadas estratégias biotecnológicas como produção destes compostos in vitro. A adição de elicitores, tais qual o ácido salicílico (AS) e o ácido jasmônico (AJ), no meio de cultura em cultivo de células pode ser uma alternativa para maximizar a produção destes compostos. Neste contexto, o trabalho teve como objetivo avaliar o efeito elicitor do AS e do AJ na produção de compostos fenólicos e flavonoides totais em calos de embriões zigóticos de G. brasiliensis. Para calogênese foram testadas diferentes combinações da 2-iP (0; 9; 18; 36; 72 µM e 2,4-D (0; 2,05; 10,26; 18,47; 28,73 µM) em meio de cultura Wood Plant Medium (WPM). Cortes de calos com 20 dias foram corados com azul de toluidina e lugol para avaliações histológicas. As áreas cobertas por calos nos explantes foram medidas por meio do programa ImageJ®. Para indução da produção de compostos fenólicos e flavonoides totais os calos foram subcultivados em meio WPM contendo AS (0,1; 1; 10; 100 µM) na ausência de 2-iP e 2,4-D e AS (0,1; 1; 10; 100 µM) com presença de 72 µM de 2-iP e 28,73 µM de 2,4-D e AJ nas concentrações 0,1; 1; 10; 100 µM. Os calos ficaram incubados por 150 dias, a 25º C e ausência de fotoperíodo. A cada 30 dias, calos foram submetidos à análise de conteúdo de fenólicos e flavonoides totais. Para determinação da cinética dos calos, estes foram pesados a cada 30 dias (para tratamentos com AS) e 15 dias (para tratamentos com AJ), traçando-se a curva de crescimento. Os calos com 30 e 90 dias de incubação foram analisados quanto ao teor de fukugetina e 7-epiclusianona. Ao fazer as avaliações histológicas pode-se notar que as células dos calos expostos as concentrações que proporcionaram maior calogênese (72 µM de 2-iP com 28,73 µM de 2,4-D) se mostraram de tamanhos bem variados e com espaço intercelular, caracterizando um tecido desorganizado. Quanto a área dos calos, constatou-se que o tratamento que melhor proporcionou calogênese foi 72 µM de 2-iP com 28,73 µM de 2,4-D. Na elicitação, altas concentrações de AS (10 e 100 µM) e maior tempo de exposição (120 e 150 dias) não implicaram maior acúmulo de compostos fenólicos e flavonoides totais. A concentração de 0,1 µM de AS foi eficiente na produção de fukugetina e 7-epiclusianona quando os calos ficam expostos 30 dias em meio de cultura. Porém, quando o AS foi adicionado ao meio juntamente com 2-iP e 2,4-D, a concentração que mais elicitou à produçao de fukugetina e 7-epiclusianona foi 10 µM de AS com 90 dias de exposição. A concentração de 0,1 µM de AJ promoveu o incremento da massa dos calos de G. brasiliensis e, com aumento do tempo de exposição, foi favorável a produção de fenóis e de flavonoides. As maiores concentrações testadas de AJ (10 e 100 µM) foram as mais eficientes na estimulação da produção da fukugetina e 7-epiclusianona quando os calos permaneceram 90 dias expostos ao elicitor. Para a produção de fukugetina, a condição mais favorável foi a exposição por 30 dias em meio de cultura WPM contendo 10 µM de AJ. Enfim, pode-se concluir que para obter melhor calogênese em embriões de Bacupari é necessário altas concentrações de 2-iP e 2,4-D. O AS e o AJ demonstraram serem elicitores abióticos eficiente na otimização de metabólitos secundários em calos de G. brasiliensis. Levando em consideração a curva de crescimento dos calos de Bacupari, pode-se concluir que o melhor período para a extração dos metabólitos secundários dos calos de G. brasiliensis foi o início da fase estacionária. / Garcinia brasiliensis, known as Bacupari, is a species that stands out for presenting secondary metabolites with different biological activities. However, the nature of the production thereof is very small. To increase production of secondary metabolites, economic and medical interest, biotechnological strategies have been studied as production of these compounds in vitro. The addition of elicitors, such that salicylic acid (SA) and jasmonic acid (AJ), in the culture medium for cell culture may be an alternative to maximize the production of these compounds. In this context, the work was to evaluate the effect of elicitor AS and AJ in the production of phenolics and total flavonoids in callus of zygotic embryos of G. brasiliensis. For callus induction were tested different combinations of 2-iP (0; 9; 18; 36; 72 µM) and 2,4-D (0; 2.05; 10.26; 18.47; 28.73 µM) in the medium of culture Wood Plant Medium (WPM). Callus with 20 days were stained with toluidine blue and lugol for histological evaluation. The areas covered by callus on explants were measured through ImageJ® program. For induction of phenolic compounds and total flavonoid callus were subcultured on WPM containing AS (0.1, 1, 10, 100 µM) in the absence of 2-iP and 2,4-D and AS (0.1, 1, 10, 100 µM) with presence of 72 uM 2-iP and 28.73 mM of 2,4-D and AJ in concentrations 0.1, 1, 10;. 100 uM. The callus were incubated for 150 days at 25 ° C and absence of photoperiod. Every 30 days, callus were subjected to phenolic content analysis and total flavonoid. To determine the kinetics of calluses, these were weighed every 30 days (for treatments with AS) and 15 days (for treatments AJ) to the growth curve. Callus with 30 and 90 days of incubation were analyzed for content of fukugetin and 7-epiclusianone. By making the histological evaluations can be noted that the cells of calluses exposed to the conditions that gave greater callus formation (72 µM of 2-iP with 28.73 µM of 2,4-D) have proved very varied sizes and intercellular space, featuring a disorganized tissue. The area of ​​callus, it was found that the treatment gave better callus induction was 72 uM 2-iP with 28.73 uM 2,4-D. In elicitation, high concentrations of AS (10 and 100 µM) and longer exposure time (120 and 150 days) did not entail greater accumulation of phenolic compounds and total flavonoids. The concentration of 0.1 µM AS was efficient in producing fukugetina and 7-epiclusianone in callus when they are exposed 30 days in culture medium. But when the AS was added to the medium with 2-iP and 2,4-D, the concentration that elicited the production of more fukugetina and 7-epiclusianone was 10 uM AS with 90 days of exposure. The concentration of 0.1 µM AJ promoted the increase of the mass of calluses and G. brasiliensis, increasing the exposure time was favorable production of phenols and flavonoids. The highest concentrations tested AJ (10 and 100 µM) were more efficient in stimulating the production of fukugetina and 7-epiclusianone when the calli 90 days remained exposed to the elicitor. For the production of fukugetin, the most favorable condition for the exposure was 30 days in WPM containing 10 µM of AJ. Anyway, it can conclude that for better callus induction in Bacupari embryos is necessary high concentrations of 2-iP and 2,4-D. The AS and AJ shown to be effective abiotic elicitors on the optimization of secondary metabolites in callus of G. brasiliensis. Taking into account the growth curve of bacupari callus, it can be concluded that the best period for the extraction of secondary metabolites of G. brasiliensis callus was the early stationary phase.