PASSOS, M.J. Efeito da Proteína Morfogenética Óssea 15 (BMP-15) e do Hormônio Folículo Estimulante (FSH) sobre o desenvolvimento de folículos ovarianos bovinos. 2012. 239 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2012. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-01T12:13:07Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_mjpassos.PDF: 1449315 bytes, checksum: 7fe646701a8e49c19398e06093742c0d (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-27T15:07:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_mjpassos.PDF: 1449315 bytes, checksum: 7fe646701a8e49c19398e06093742c0d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-27T15:07:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_mjpassos.PDF: 1449315 bytes, checksum: 7fe646701a8e49c19398e06093742c0d (MD5) Previous issue date: 2012 / This study aims to 1) evaluate the effect of BMP-15 and FSH, alone or in different combinations on the in vitro development, survival and antrum formation of bovine secondary follicles and 2) quantify the levels of mRNA expression for BMP-15 receptors (BMPR-IB and BMPR-II), FSH receptor and Kit Ligand in follicles grown in vivo and in vitro. With regard to culture, secondary follicles were microdissected and cultured for twelve days in α-MEM+ alone, or supplemented with BMP-15 and/or FSH, alone or in various associations. After culture, follicular diameter were evaluated, viability and rate of antrum formation. For the analyzes gene expression, by real time PCR, were used follicles cultured in the different treatments for comparisons of the levels of mRNA. After the culture period it was found that the association of BMP+FSH (0-12) stimulated a significant increase in follicular diameter in relation to other treatments (p<0.05), as well as stimulated the formation of antral cavity more effectively the control (MEM) and BMP-15 alone (p<0.05). However, for survival, after 12 days treatment BMP+FSH (0-12) significantly reduced follicular viability when compared to other treatments (p<0.05). The results showed that the levels of mRNA for BMP receptor type I (BMPR-IB) were significantly higher in follicles cultured with MEM when compared to other treatments, while levels of mRNA for the receptor type II (BMPR-II) did not differ between treatments. The highest levels of mRNA for the FSH receptor were detected in follicles cultured with BMP-15 alone. In conclusion, this study demonstrated that combination of BMP-15+FSH (D0-D12) accelerates the growth of bovine preantral follicles cultured for 12 days, but this effect reduces the follicular viability, affecting the ultrastructural integrity of the follicles. Furthermore, the addition of BMP alone increased expression levels of RNAm for FSHR after 12 days of culture , showing that BMP-15 and FSH may contribute significantly to the in vitro development of preantral follicles cultured for 12 days in this specie. / Este trabalho tem como objetivo 1) avaliar o efeito da BMP-15 e do FSH, sozinhos ou em diferentes associações sobre o crescimento, sobrevivência e formação de antro em folículos secundários bovinos e 2) avaliar os níveis de expressão do RNAm para os receptores de BMP-15 (BMPR-IB e BMPR-II) em folículos crescidos in vitro. Com relação ao cultivo, folículos secundários foram microdissecados e cultivados por doze dias em α-MEM+ sozinho, ou suplementado com BMP-15 e/ou FSH, sozinhos ou em diferentes associações. Após o cultivo, foram avaliados o diâmetro folicular, a viabilidade e a taxa de formação de antro. A análise de expressão gênica foi realizada por PCR em tempo real, utilizando folículos cultivados nos diferentes tratamentos, para comparações dos níveis de RNAm. Após o período de cultivo verificou-se que a utilização da BMP+FSH (0-12) estimulou um aumento significativo no diâmetro folicular em relação aos demais tratamentos (p<0,05), bem como estimulou a formação da cavidade antral de forma mais efetiva que o controle (MEM) e a BMP-15 sozinha (p<0,05). No entanto, em relação à sobrevivência, após12 dias o tratamento BMP+FSH (0-12) reduziu significativamente a viabilidade folicular em relação aos demais tratamentos (p<0,05). Os resultados mostraram que os níveis de RNAm para o receptor de BMP-15 do tipo I (BMPR-IB) foram significativamente maiores nos folículos cultivados com MEM quando comparado aos demais tratamentos, enquanto que os níveis de RNAm para o receptor do tipo II (BMPR-II) não diferiram entre os tratamentos. Os maiores níveis de RNAm para o receptor de FSH foram detectados em folículos cultivados com BMP-15 sozinha. Em conclusão, este estudo demonstrou que a combinação de BMP-15 + FSH durante todo o período de cultivo (D0-D12) acelera o crescimento de folículos pré-antrais bovinos cultivados por 12 dias, mas este efeito reduz a viabilidade folicular, afetando a integridade ultra-estrutural dos folículos. Além disso, a adição de BMP isoladamente aumentou os níveis de expressão de RNAm para FSHR após 12 dias de cultivo,mostrando que BMP-15 e FSH podem contribuir significativamente para o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais cultivados por 12 dias nesta espécie.

Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-03-30T14:58:19Z No. of bitstreams: 1 LuãBM_DISSERT.pdf: 1732522 bytes, checksum: 8ab1e4a3686c8d21f9bc08fcc449f393 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-30T14:58:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LuãBM_DISSERT.pdf: 1732522 bytes, checksum: 8ab1e4a3686c8d21f9bc08fcc449f393 (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leptin, a cytokine produced by adipose cells, is the target of the scientific community for believing that it has an impact on the reproduction of the animals promoting puberty, folliculogenesis and oogenesis, estrous cycle and aiding in fertilization. The understanding of the mechanisms controlling the reproductive activity of Spix's Yellow-toothed Cavy (Galea spixii) plays a relevant role in the preservation of the species. Thus, the present work proposed to analyze the immunolocalization of leptin receptors (Ob-R) in the ovary of cavies. Ovaries from 20 adult, non-pregnant, healthy females were collected. The samples were fixed in 4% phosphate buffered paraformaldehyde, embedded in paraffin and sectioned for immunohistochemistry. The sections were photomicrographs and intensity of the reaction was measured. Strong immunoreaction was observed in oocyte and theca cells, moderate in ovarian stromal cells and large luteal cells and weak stained in granulosa, endothelial, perivascular and small luteal cells. When compared to receptor expression along follicular development it was observed that the oocyte and the theca cells remained with expression at the same intensity. However, the granulosa cells presented strong stained in the preantral stages, whereas in the antral follicles it presented low intensity. We conclude that in the ovaries of Galea spixii there is the presence of Ob-R in the main structures of the ovary sugesting that this hormone plays a fundamental role in the reproduction of this species / A leptina, uma citocina produzida pelas células adiposas, possui ação na reprodução dos animais promovendo a puberdade, foliculogênese e oogênese, ciclo estral e auxiliando na fecundação. A compreensão dos mecanismos que controlam a atividade reprodutiva de preás (Galea spixii) possui papel relevante para a preservação da espécie. Desta forma, o presente trabalho propôs analisar a imunolocalização dos receptores de leptina (Ob-R) no ovário de preás. Coletaram-se os ovários de 20 fêmeas adultas, não prenhes e saudáveis. As amostras foram fixadas em paraformaldeído a 4% em tampão fosfato, incluídas em parafina e seccionadas para a realização de imunohistoquímica. As secções foram fotomicrografadas e avaliadas quanto à intensidade da reação. Observou-se forte imunorreação no oócito e nas células da teca, moderada nas células do estroma ovariano e nas células luteínicas grandes e fracamente coradas nas células da granulosa, endoteliais, perivasculares e células luteínicas pequenas. Quando comparado a expressão de receptores ao longo do desenvolvimento folicular foi observado que o oócito e as células da teca se mantiveram com expressão na mesma intensidade. Entretanto, as células da granulosa apresentaram forte marcação nos estádios pré-antrais enquanto que nos folículos antrais apresentou fraca intensidade. Concluímos que em ovários de Galea spixii existe a presença de Ob-R nas principais estruturas do ovário sugerindo que este hormônio desempenhe papel fundamental na reprodução desta espécie / 2017-03-30

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pre textuais.pdf: 419949 bytes, checksum: 16c33c78cc5fa05473d5d08f666f2827 (MD5) Previous issue date: 2009-08-21 / Bovine estrous cycle activates the pathways of MAPKs (mitogen activated protein) via oscillation of hypothalamus-pituitary-gonad axis hormones. The objective of this work was to evaluate in vivo the frequency of expression of active (phosphorylated) form, of p-MEK 1/2 and p-ERK1/2 in all types of ovarian follicles and corpora lutea in different phases of the estrous cycle of cattle. Bovine ovaries were harvested in a local slaughterhouse and the phase of the estrous cycle was determined, considering seven stages, defined as experimental groups: days 1-3 (n = 2), 4-6 (n = 5), 7-9 (n = 5), 10-12 (n = 3), 13-15 (n = 5), 16-18 (n = 5) and 19-21 (n = 5). After processing, the histological sections were subjected to immunohistochemistry using antibodies that specifically recognize the phosphorylated form of MEK 1/2 and ERK 1/2. Histological sections containing corpora lutea were also subjected to immunohistochemistry with antibodies that recognize p-BCL2 (B cell phospho lymphoma 2) and COX-2 (COX-2). The frequency of marked follicles was evaluated for the presence or absence of markup for the two cellular enzymes. The fragments of the corpus luteum were evaluated according to the scores of intensity for positive staining of the four antibodies. The frequencies of the markers studied in the follicles were compared using the chi-square. In preantral follicles, both MEK and ERK 1/2 showed high levels between 16 to 18 days. In the case of p-MEK, the greater activation of primordial follicles and primary held from 7 to 9. In secondary follicles, the less marked for p-MEK occurred in group 4 to 6. Levels of p-ERK began to rise from 13 to 15 days and subsequently decreased. Comparing the frequencies of MEK and ERK, there was statistic difference (p <0.0001) in antral follicles compared to other types of follicles. It was concluded that the intensity of activation of MAPKs MEK / ERK varies with the phases of the estrous cycle and follicular class studied. Since the corpora lutea were evaluated by analysis of variance after transforming the data, it was observed that the proteins studied showed variation in expression profile, in relation to the development, survival and death of the corpus luteum. Since COX-2, a precursor of prostaglandin, is capable of activating the pathways of MEK / ERK 1/2, it reduces the frequency of expression of cell survival factor BCL-2, leading to the corpus luteum at luteolysis. The in vivo evaluation of the activation profile of MAPKs without the use of hormonal protocols demonstrated the importance of this enzyme during the physiological reproductive process, raising new inquiries and providing opportunities to expand knowledge about the functioning of the hormone and its association with the cellular mechanisms activated by hormones / A ocorrência do ciclo estral bovino, a partir de variações dos hormônios do eixohipotálamo- hipófise-gônadas, ativa as vias das MAPKs (proteína ativada por mitógenos) O objetivo desta tese foi avaliar in vivo a freqüência de expressão da forma ativa (fosforilada), de todos os tipos foliculares ovarianos e corpo lúteo para p- MEK 1/2 e p-ERK1/2, em diferentes fases do ciclo estral de bovinos. Para tal, foram coletados em abatedouros locais ovários de bovinos e determinada a fase do ciclo estral, caracterizando sete fases, definidas como grupos experimentais: dias 1-3 (n=2), 4-6 (n=5), 7-9 (n=5), 10-12 (n=3), 13-15 (n=5), 16-18 (n=5) e 19-21 (n=5). Após o processamento histológico os cortes foram submetidos à imunoistoquímica, utilizando anticorpos que reconhecem especificamente a forma fosforilada da MEK 1/2 e ERK 1/2. Cortes histológico que apresentavam corpos lúteos foram submetidos ainda a imunoistoquímica com anticorpos que reconhecem p-BCL2 (fosfo células B de linfoma 2) e COX-2 (ciclooxigenase 2). As freqüências de folículos marcados foram avaliadas em relação à presença ou não de marcação celular para as duas enzimas. Já os fragmentos de corpo lúteo foram avaliados de acordo com escores de intensidade de marcação para os quatro anticorpos. As freqüências das marcações nos folículos estudados foram comparadas por meio do teste qui-quadrado. Em folículos pré-antrais, tanto a MEK quanto a ERK 1/2 apresentaram níveis elevados entre os dias 16 a 18. No caso da p-MEK, a maior ativação dos folículos primordiais e primários ocorreu entre os dias 7 a 9. Em folículos secundários, a menor presença de folículos marcados para p-MEK ocorreu no grupo 4 a 6. Os níveis de p-ERK começaram a se elevar a partir de 13 a 15 dias, e posteriormente diminuíram. Quando comparadas as freqüências de MEK e ERK, foram registradas diferenças (p<0,0001) nos folículos antrais em comparação aos demais tipos foliculares. Concluiu-se que a intensidade de ativação das MAPKs MEK/ERK varia de acordo com as fases do ciclo estral e com a classe folicular estudada. Já os corpos lúteos foram avaliados por meio de análise de variância, após transformação dos dados, na qual foi observada que as proteínas estudadas apresentam variação no perfil de expressão, estando relacionada com o desenvolvimento, sobrevivência e morte do corpo lúteo. Sendo que o COX-2, um precursor da prostaglandina, tem capacidade de ativar as vias das MEK/ERK 1/2, diminuindo a freqüência de expressão do fator de sobrevivência celular BCL-2, levando o corpo lúteo ao momento da luteólise. Assim a avaliação do perfil de ativação das MAPKs in vivo, sem a utilização de protocolos hormonais, demonstrou a importância desta via enzimática durante o processo fisiológico reprodutivo, abrindo espaço para futuras indagações e possibilidades de ampliação de conhecimento a cerca do funcionamento hormonal e sua associação com os mecanismos celulares ativados pelos hormônios