Submitted by MARIANA DE SOUZA DORNA null (mari_dorna@yahoo.com.br) on 2016-04-12T12:59:53Z No. of bitstreams: 1 Tese Mariana Dorna Final.pdf: 2044261 bytes, checksum: 5b4fff48d33c5f6bf6496fa5e80f2b82 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-04-13T16:08:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dorna_ms_dr_bot.pdf: 2044261 bytes, checksum: 5b4fff48d33c5f6bf6496fa5e80f2b82 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-13T16:08:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dorna_ms_dr_bot.pdf: 2044261 bytes, checksum: 5b4fff48d33c5f6bf6496fa5e80f2b82 (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Introdução. O virus da Hepatite C é um ads principais causa de cirrose hepática e carcinoma hepatocelular. O objetivo do tratamento com Interferon Peguilado e ribavirina é alcançar a cura. Não obstante, ainda não há metodologia padrã-ouro para a valiação da composição corporal desses pacientes. O obejtivo desse estudo foi avaliar a associação dos valores pré-tratamento do Ângulo de Fase, e sua variação, com a resposta virológica na semana 24 e resposta virológica sustentada no tratamento com Interferon Peguilado e Ribavirina. Método. Foi realizado um estudo prospectivo, por 6 meses, de Abril de 2010 a Junho de 2013. Bioimpedância Elétrica, tetrapolar, unifrequência foi realizada no pré-tratamento e na semana 24 de tratamento. Exames bioquímicos e biópsia hepática foram coletados dos prontuários médicos. Resultados. Foram avaliados 87 pacientes com idade média de 49.78 ± 10.51,47.12% do sexo masculino. A media do ângulo de fase foi de 6.56 ± 0.78°. No total, 49 (56.32%) obtiveram resposta virológica na semana 24 de tratamento e 43 (49.4%) atingiram resposta virológica sustentada. Em relação aos pacientes genótipo-1 51% obtiveram resposta virológica na semana 24, 24, 46% resposta virológica sustentada e 54% foram não-respondedores. Na população estudada, 38.88% dos pacientes virgens de tratamento e do genótipo- 1alcançaram resposta virológica sustentada,36.84% dos pacientes em retratamento obtiveram resposta virológica sustentada. Quanto aos pacientes nãogenótipo-1 57.14% obtiveram resposta virológica sustentada, e, entre eles,70% eram virgens de tratamento. No que diz respeito à resposta virológica sustentada (p>0.05). Em relação a resposta virológica na semana 24, os valores do ângulo de fase não mostraram diferença estatística entre os grupos. Ângulo de Fase não esteve associado à resposta virológica na semana 24(OR:1.423; CI95%: 0.328- 6.172; p: 0.637). A variação do ângulo de fase durante as 24 semanas de tratamento esteve, no entanto, associado à resposta virológica na semana 24 de tratamento antiviral(OR:1.099; CI95%:1.027-1.176; p:0.006). Conclusão. Nossos achados sugerem que os valores do ângulo de fase no pré-tratamento não estiveram associados nem a resposta virológica na semana 24, nem a resposta virológica sustentada. No entanto, sua variação (delta) nas 24 semanas de tratamento esteve associado a resposta virológica na semana 24. / Background. Hepatitis C virus is one of the major causes of liver chirrosis and hepatocellular carcinoma. The objective of the treatment with Pegylated Interferon and Ribavirin was to achieve the cure of the virus. So far, we have no gold-standard methodology to assess the body composition of these patients. The aim of our study was to evaluate the association of baseline Phase Angle (PhA), and it’s variation, with virological response treatment week 24 with Pegylated Interferon and Ribavirin and sustained virological response. Methods. Patients were prospectively evaluated for 6 months, from April 2010 to June 2013. A tetrapolar single-frequency bioimpedance were performed at baseline and at treatment week 24. Biochemical and liver biopsy data were collected from the patient´s medical chart. Results. A total of 87 patients with mean age of 49.78 ± 10.51 y were studied ,47.12% were male. The phase angle mean was 6.56 ± 0.78°.A total of 49 (56.32%) of them achieved virological response at treatement week 24 and 43 (49.4%) reached sustained virological response. Considering the genotype- 1 population 51% achieved virological response at tw 24, 46% SVR and 54% were non-responders. Among the population studied, 38.88% of näive genotype-1 patients achieved sustained virological response, 36.84% of previous NR achieved sustained virological resposnse. Regarding non gentotype-1 population 57.14% achieved SVR and among them 70% were naive. Considering sustained virological response, baseline Phase Angle values showed no statistical difference between the groups (p>0.05).Regarding virological response at treatment week 24, Phase Angle values showed no statistical difference between the groups Phase angle was not associated with virological response at treatment week 24 (OR:1.423; CI95%: 0.328-6.172; p: 0.637). The variation of phase angle during the 24 weeks of treatment was associated with virological response at 24 week (OR:1.099; CI95%:1.027-1.176; p:0.006). Conclusion. Our findings suggest that PhA was not associated neither with virological response at treatment week 24 to sustained virological response. However, its variation (delta) within 24 weeks of treatment was associated with virological response at tw24.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-18Bitstream added on 2014-06-13T20:34:30Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_ct_me_arafcf.pdf: 255888 bytes, checksum: d417d37d80e882645bd66ae985054789 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os perfis metabólicos correlacionam-se com a infecção pelo VHC e são prognósticos da resposta viral em pacientes crônicos. Porém, pouco se sabe a respeito da associação entre perfis lipídicos e carga viral do VHC entre infecções dos genótipos 1, 2 ou 3. Portanto, o objetivo deste trabalho foi estudar a influência da viremia e dos genótipos do VHC sobre o metabolismo lipídico através das variações de lipoproteínas séricas (colesterol total, LDL, HDL, VLDL, triglicérides) e apolipoproteína B (Apo B) em hepatopatas crônicos, avaliando se o VHC predispõe os indivíduos ao aparecimento de complicações vasculares. O grupo amostral constituiu-se de um total de 150 pacientes crônicos do VHC com genótipos 1, 2 ou 3, e de um grupo controle de 20 indivíduos saudáveis (10 homens e 10 mulheres) em idade adulta (20 à 50 anos). Os níveis séricos de HDL (28%), VLDL (26%) e triglicérides (26%) nos portadores crônicos do VHC se mostraram diminuídos em relação ao grupo controle, enquanto os níveis de LDL (25%) e Apo B (29%) se mostraram elevados, resultados que foram mais importantes nos portadores do genótipo 3a. Observou-se correlação positiva entre a viremia e alterações nos níveis de apo B (r = 0,5763) nos portadores do genótipo 1b. Assim, foi pressuposto que o risco de pacientes portadores do VHC desenvolverem complicações vasculares é elevado, pois 1% de redução nos níveis de LDL está associado com uma redução de 2-3% no risco de desenvolvimento de doenças cardíacas, e como cerca de 90% da proteína na LDL se constitui de apo B, sua concentração plasmática indica o número total de partículas potencialmente aterogênicas. Desta forma, o perfil lipídico auxilia no diagnóstico da severidade da infecção hepática causada pelo VHC e ainda atua como um bom sinal prognóstico. / The metabolic profiles correlate with the hepatitis C virus infection and are prognostics for the viral reply in chronic patients. However, little is known regarding the distinguishing association between lipid profiles and hepatitis C viral load in patients carrying genotypes 1, 2 or 3. Therefore, the objective of this work was to study viremia and genotypes on the lipid metabolism through the serum lipoprotein variations (total cholesterol, LDL, HDL, VLDL, triglycerides) and apolipoprotein B (Apo B) in chronic carriers of this infection, evaluating if the HCV premakes the individual to the lipidic disequilibrium and favors the appearance of vascular complications. The amostral group consisted of 150 HCV chronic patients with genotypes 1, 2 or 3, and a control group consisted of 20 healthful individuals (10 men and 10 women) in adult age (20 to 50 years). The levels of HDL (28%), VLDL (26%) and triglycerides (26%) of the HCV chronic patients were lower than the control group, while the LDL levels (25%) and the Apo B levels (29%) were higher. These findings were more significant in the genotype 3a carrying patients. Positive correlation occurred between the viremia and the alterations in the Apo B levels (r = 0.5763) in the genotype 1b carrying patients. Consequently it was inferred that the risk of HCV patients to develop vascular complication is elevated. In general, 1% of reduction in the LDL levels is associated with a reduction of 2-3% in the risk of development of cardiac illnesses, and, as about 90% of the protein in the LDL is constituted of apo B, its plasmatic concentration indicates the total potentially atherogenics particles number. The lipid profile aids in the diagnosis of the severity of the hepatic infection and equally acts as a good signal prognostic, therefore its analysis must be carried through in all the cases of advanced hepatic infection.

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-06Bitstream added on 2014-11-10T11:57:26Z : No. of bitstreams: 1 000773465_20150110.pdf: 677474 bytes, checksum: 3ab409c79c33f6f910c52214a6fc684c (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-16T10:37:56Z: 000773465_20150110.pdf,Bitstream added on 2015-01-16T10:38:38Z : No. of bitstreams: 1 000773465.pdf: 1856915 bytes, checksum: 31cff2133ada813ddd49b0c93615b201 (MD5) / Neste trabalho foram investigados a fibroína da seda (silk fibroin, SF) com o peptídeo antigênico da proteína NS5A-1 derivado do vírus da hepatite C (HCV) e nanopartículas de vanadato de ítrio dopadas com európio em filmes nanoestruturados. Dois foram os tópicos abordados: i) interação e organização estrutural do peptídeo com a fibroína. ii) imobilização do peptídeo, da fibroína e nanopartículas em filmes automontados (Layer-by-Layer, LbL), visando estudar a interação específica peptídeo antigênico-anticorpo e a produção de protótipos de imunossensores. As interações fibroína-peptídeo foram estudadas em solução e em filmes LbL pelas técnicas espectroscópicas de dicroísmo circular e luminescência. Os resultados indicaram que há uma mudança conformacional da fibroína em solução para a fibroína em filmes, de aleatória para folha-β, respectivamente, e que o filme de fibroína induz a estrutura secundária do peptídeo que não possui uma conformação bioativa em solução. O crescimento dos filmes LbL foi monitorado por espectroscopia UV-visível, e pôde-se observar um crescimento linear a cada deposição realizada. Além do estudo fundamental das interações a nível molecular, os sistemas foram utilizados para o desenvolvimento de protótipos de imunossensores. A interação peptídeo antigênico-anticorpo foi estudada por medidas de detecção eletroquímica, elétrica e óptica. Para a detecção eletroquímica realizou-se medidas de voltametria cíclica, indicando uma diminuição na corrente quando em presença dos anticorpos anti-HCV e testes em amostras reais soropositivas para o vírus, que indicaram uma maior densidade de elétrons nos voltamogramas referentes às amostras infectadas. A detecção elétrica foi analisada por espectroscopia de impedância elétrica, e observou-se que há um aumento no sinal da capacitância e das perdas dielétricas de acordo com o aumento da concentração... / The present study investigated the silk fibroin (SF) with the antigenic peptide of the NS5A-1 protein of the hepatitis C virus (HCV) and nanoparticles of yttrium vanadate doped with europium immobilized on nanostructured films. Two main topics were explored: i) interaction and structural organization of the peptide with fibroin. ii) immobilization of the peptide together with fibroin and nanoparticles in LbL films (Layer- by- Layer), in order to study the specific interaction peptide antigen-antibody and production of prototype immunosensors. The fibroin-peptide interactions were studied in solution and in LbL films by spectroscopic techniques of circular dichroism and luminescence. The results indicate that there is a conformational change of fibroin in the fibroin solution in film, sheet to random coil-B, respectively, and that the fibroin film induces the secondary structure of the peptide does not possess a bioactive conformation in solution. The growth of the LbL films was monitored by UV-visible spectroscopy, and could observe a linear growth every deposit made. Besides the fundamental study of interactions at the molecular level, the systems were used for the development of prototype immunosensors. The peptide antigen-antibody interaction was studied by electrochemical, electrical and optical detection measures. For electrochemical detection, were made cyclic voltammetry measurements indicating a decrease in current when in the presence of anti-HCV antibodies, and were made tests on real samples seropositive for the virus, which indicated a higher density of electrons in voltammograms respect to infected samples. The electrical detection was analyzed by electrical impedance spectroscopy, and it was observed that there is an increase in the signal of capacitance and the dielectric losses in accordance with the increase in antibody concentration. This increase in signal is higher for films containing smaller number of bilayers and...

Base Teórica: Alguns estudos têm sugerido que a infecção crônica pelo HCV tem efeitos diretos e indiretos no tecido pulmonar, incluindo um declínio acelerado do VEF1. É necessário conhecer o quão prevalente é esta infecção nos pacientes com DPOC, o que pode justificar o rastreamento do HCV nesta população. Objetivos: Determinar a prevalência de infecção pelo HCV em uma amostra de pacientes com DPOC e comparar as características clínicas e funcionais entre os pacientes HCVpositivos e HCV-negativos. Métodos: Foi realizado um estudo transversal. Foram incluídos no estudo 187 pacientes ambulatoriais com diagnóstico de DPOC. A positividade ao exame anti-HCV era determinada e confirmada pelo HCV-RNA. Resultados: A prevalência de infecção pelo HCV foi de 7,5%. Os pacientes HCV-positivos tinham um VEF1 pós-broncodilatador (% do previsto) menor (34,7 ± 8,6%) que os pacientes HCV-negativos (42,7 ± 16,5%) (p = 0,011). Todos os pacientes HCV-positivos foram classificados nos estádios III e IV, de acordo com os critérios do GOLD. O escore de dispnéia na escala MMRC foi maior nos pacientes HCV-positivos (mediana = 4) do que nos pacientes HCV-negativos (mediana = 2) (p = 0,023). O índice BODE foi maior nos pacientes HCV-positivos (mediana = 6) do que nos pacientes HCV-negativos (mediana = 4) (p = 0,027). Conclusões: Nossos resultados sugerem uma alta prevalência de infecção crônica pelo HCV em pacientes com DPOC. Os pacientes HCV-positivos tinham achados sugestivos de uma doença mais grave. / Background: A number of studies have suggested that chronic HCV infection have direct and indirect effects on pulmonary tissue, including an accelerated decline of FEV1. It is necessary to know how prevalent this infection is in patients with COPD, what could justify the screening of HCV in this population. Objectives: To determine the prevalence of HCV infection in a sample of COPD patients, and to compare the clinical and functional characteristics between HCV-positive and HCVnegative patients. Methods: We performed a cross-sectional study. One hundred eighty seven COPD outpatients were included in the study. Anti-HCV antibody positivity was determined and confirmed by HCV-RNA. Results: The prevalence of HCV infection was 7.5%. The HCV-positive patients had a postbronchodilator FEV1 (% predicted) lower (34.7 ±8.6%) than HCV-negative patients (42.7 ± 16.5%) (p = 0.011). All HCV-positive patients were classified in stages III or IV (GOLD). The MMRC dyspnea scale score was higher in HCV-positive patients (median = 4) than in HCVnegative patients (median = 2) (p = 0.023). BODE index was higher in HCV-positive (median = 6) than in HCV-negative patients (median = 4) (p = 0.027). Conclusions: Our results suggest a high prevalence of chronic HCV infection in patients with COPD. The HCV-positive patients had findings suggestive of a more severe disease.

Introdução: Mais do que 50% dos pacientes infectados pelo vírus da hepatite crônica C (HCV) não respondem ao tratamento com interferon convencional (IFN) associado a ribavirina (RBV). O objetivo do nosso estudo foi avaliar a efetividade do retratamento com alfapeginterferona 2a ou 2b (PEG-IFN 2a ou 2b) concomitantemente com RBV, em pacientes com HCV, genótipo 2 e 3, que foram não-respondedores ou recidivantes ao primeiro tratamento convencional com IFN/RBV e identificar possíveis fatores preditivos de resposta virológica sustentada (RVS). Métodos: No período de setembro de 2003 a março de 2009 uma coorte de 216 pacientes portadores de hepatite C foram acompanhados em um serviço especializado, implementado no Sistema Único de Saúde-Rio Grande do Sul/Brasil. Todos os pacientes foram retratados com PEG-IFN 2a ou 2b, na dose de 180 mcg ou 1,5 mcg/Kg de peso corporal por semana, respectivamente, associado a RBV na dose de 1.000-1.250mg/dia por 48 semanas. O HCV-RNA foi testado por Polymerase Chain Reaction (PCR) nas semanas 12 (por PCR quantitativo), 48 e 72 (por PCR qualitativo). A resposta virológica (RV) nas 48 semanas e a RVS nas 72 semanas foram considerados para avaliação de eficácia do tratamento. As análises foram realizadas nos pacientes que receberam pelo menos 1 dose de PEG-IFN 2a ou 2b. Resultados: A taxa de RVS para os não-respondedores ao primeiro tratamento foi de 34,4% e para os recidivantes foi de 50% (P=0,031) através do teste exato de Fisher. Foram identificados como fatores preditivos que contribuem na melhora da RVS, a idade (P=0,005), ser recidivante ao tratamento anterior (P=0,023) e apresentar exame de biópsia hepática Metavir F0-F2 (P=0,004), os demais fatores avaliados não demonstraram diferença estatística significativa. Na avaliação do perfil de segurança 51 pacientes (23,6%) interromperam precocemente o tratamento. Destes, 18,5% por eventos adversos onde os mais freqüentes foram anormalidades laboratoriais (40%), óbito (20%) e cirrose descompensada (17,5%). Conclusões: Este é o primeiro estudo pragmático realizado no cenário da realidade do SUS brasileiro que avalia a efetividade do retratamento com PEG-IFN 2a ou 2b e RBV. Esta alternativa de retratamento para pacientes que falharam à terapias prévias anti-HCV, tem demonstrado uma promissora taxa de RVS, desde que seja feita uma seleção cuidadosa dos pacientes com fatores preditivos de resposta e monitorizados os eventos adversos.

Resumo: O presente trabalho refere-se ao desenvolvimento de duas metodologias: imobilização da proteína do core do vírus da Hepatite C (VHC) em matriz híbrida siloxano-poli (propileno óxido) como suporte sólido para ELISA e um imunossensor amperométrico para detecção de anticorpos anti-VHC. Para atingir este objetivo, o RNA-VHC extraído de amostras de soro (genótipo 1b) foi submetido à técnica de RT-PCR e posterior amplificação da seqüência de 408pb do core do VHC. Este produto foi clonado em vetor pET42a. O vetor recombinante foi introduzido em bactérias da linhagem BL21 (DES). Após o cultivo das colônias, a indução foi realizada em concentração final de 0,4mM de IPTG. As bactérias foram lisadas e as frações solúvel e insolúvel, analisadas em gel de poliacrilamida 15%, mostrando uma banda aparente de 44kDa, tamanho esperado da proteína recombinante fusionada a GST. A proteína recombinante do core foi purificada e confirmada por imunodetecção utilizando soro positivo para VHC e apresentou ausência de reatividade cruzada com amostras positivas para outras doenças infecciosas. Na primeira metodologia, a proteína do core foi imobilizada em matriz híbrida siloxano-poli (propileno óxido) preparada por sol-gel como suporte sólido em teste de ELISA para a detecção de anticorpos anti-VHC. As condições adequadas para o estabelecimento desta técnica envolveram 1,25ng da proteína/disco, conjugado com peroxidase na diluição 1:10000 e diluição do soro de 1:40. Este procedimento foi comparado ao ELISA convencional. O desenvolvimento desta matriz híbrida para imunodetecção mostrou bom desempenho, reprodutibilidade e simplicidade durante a síntese, sendo vantajoso para aplicação comercial. / Abstract: The present work reports the development of two methodologies: hepatitis C vírus core protein immobilization into hybrid matrix siloxane-polypropyleneglycol prepared by sol-gel process used as solid phase in ELISA and an amperometric immunosensor for detection of antibodies anti-VHC. Toward to achieve this aim, the HCV RNA from serum (genotype 1b) was submitted to RT-PCR techniqueand subsequent amplification of the HCV core 408pb. This product was cloned into pET42a vector. The recombinant plasmid was transformed into BL21 (DES) cell line strain. Cell cultures were grown and induced with final concentration of 0,4mM of IPTG. After induction, the cell were harvest and the soluble and insoluble fractions were analyzed by polyacrilamide gel 15% showing a band with an approximate molecular weight of 44kDa, expected size for this GST-fused recombinant protein. The recombinant protein was purified and confirmed by immunological detection using HCV positive serum and showed absence of cross reactivity with positive samples for others infectious diseases. In the first methodology, the core protein immobilization into hybrid matrix siloxane-polypropyleneglycol prepared by sol-gel process was used as solid phase in ELISA for detection of antibodies anti-VHC antibody. 1,25ng protein per disc, a peroxidase conjugate diluition of 1:10000 and a serum dilution of 1:40 were adequate for the establishment of the procedure. This procedure performance of the siloxane-polypropyleneglycol discs as a matrix for immnunodetection, showed easy synthesis, good performance and reproducibility for commercial application. The second consisted on the immobilization of core protein into hybrid matrix siloxane-polypropyleneglycol prepared by sol-gel process and deposited on the pencil graphite electrode surface by dip-coating process for development of an amperometric immunosensor. / Orientador: Paulo Inácio da Costa / Coorientador: Hideko Yamanaka / Banca: Beatriz Maria Machado de Medeiros / Banca: Maria Valnice Boldrin / Banca: Flávio Henrique da Silva / Banca: Marília Almeida Antunes Rossini / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-07Bitstream added on 2014-06-13T20:51:48Z : No. of bitstreams: 1 gryninger_g_me_botfm.pdf: 272447 bytes, checksum: 5ed6892f68f886811597fca3fd900973 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O vírus da hepatite C é uma das principais causas de doença hepática no mundo inteiro. O estudo histopatológico é de grande importância no prognóstico e indicação de tratamento. A coinfecção com o vírus da hepatite B oculta pode agravar a lesão hepática e diminuir a resposta ao tratamento. As citocinas IL-2, INF, TNF- induzem lesão hepática e fibrose. A IL-10 apresenta atividade antiinflamatória e o TGF- induz o desenvolvimento e depósito de matriz extracelular causando fibrose. Este estudo avaliou, em pacientes com HCC, a presença da hepatite B oculta, a dosagem das citocinas IL-2, INF, TNF , TGF e IL-10, correlacionando com o estágio de fibrose em pacientes tratados e não tratados com interferon, comparando também com indivíduos saudáveis. Foram estudados 55 pacientes com HCC crônica, atendidos na Faculdade de Medicina de Botucatu, excluindo-se pacientes imunossuprimidos e gestantes. O grupo controle foi constituído de 20 indivíduos doadores de sangue. O vírus da hepatite B oculto foi pesquisado por de PCR in house, segundo técnica de Kaneno, com limite de detecção menor que 100 cópias/ml. A dosagem de citocinas foi determinada por método de Elisa. A avaliação da fibrose hepática seguiu aquela proposta pela Sociedade Brasileira de Patologia. Os resultados mostraram predominância do gênero masculino, adulto jovem, 36,4% foram usuários de drogas endovenosas e 41,8% haviam sido hemotransfundidos. Nenhum paciente apresentou coinfecção pelo vírus da hepatite B oculto. Na biópsia hepática predominou fibrose leve ou ausência de fibrose (47,2%). As citocinas analisadas não discriminaram o grau de fibrose nos indivíduos com HCC crônica, mesmo quando separados em pacientes que foram submetidos ao tratamento e pacientes que não receberam o tratamento. Não houve também discriminação das citocinas... / The Hepatitis C virus is one of the major causes of hepatic diseases worldwide. Histopathological analyses play a leading role in determining disease outcome and treatment. Co-infection with occult Hepatitis B can aggravate liver injury and diminish treatment response. Cytokines such as IL-2, INF and TNF- induce liver injury and fibrosis. IL-10 has an antiinflamatory action and TGF- induces extracellular matrix development and deposition causing fibrosis. In this study, the presence of occult Hepatitis B and the expression of IL-2, INF, TNF , TGF and IL-10 were assessed in HCC patients and correlated with fibrosis stage in patients treated and non-treated with interferon, as well as healthy individuals. A total of 55 patients with chronic HCC seen at Botucatu Medical School were included. Immunosuppressed or pregnant patients were excluded. The control group consisted of 20 blood donors. The occult Hepatitis B virus was detected by in-house PCR according to the technique of Kaneno with a detection limit < 100 clones/ml. Cytokine levels were determined by the Elisa method. Hepatic fibrosis was assessed as proposed by the Brazilian Society of Pathology. The results showed a predominance of male young adults of whom 36.4% had used endovenous drugs and 41.8% had been hemotransfused. No patient showed occult Hepatitis B co-infection. Hepatic biopsy revealed that fibrosis was either absent or mild in most cases (47.2%). The cytokines under study did not correlate with fibrosis stage in individuals with chronic HCC no matter whether they had or not received treatment. In addition, no correlations with cytokine levels were observed when VHC patients were separated into groups of individuals treated and non-treated with interferon . However, cytokine expressions were significantly increased in all cases in comparison with the control group.

Orientador : Prof. Dr. Roberto Pontarolo / Coorientadora : Profª. Drª. Astrid Wiens Souza / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 04/08/2017 / Inclui referências : f. 120-140 / Resumo: A hepatite C crônica é um relevante problema de saúde pública, sendo alvo de inúmeras investigações em ensaios clínicos, especialmente em relação aos novos tratamentos medicamentosos. Contudo, a população brasileira tem sido pouco representada nos estudos. A primeira geração dos antivirais de ação direta (DAAs) para o tratamento da hepatite C crônica genótipo 1 (boceprevir e telaprevir) foi incorporada pelo sistema público de saúde do Brasil em 2012. Dada a recente inclusão dessas terapias, o Ministério da Saúde recomendou a realização de estudo observacional para avaliar resultados de segurança e efetividade do telaprevir e boceprevir no Brasil. Portanto, com este trabalho, o objetivo foi avaliar a efetividade, a segurança e a relação custo-efetividade destas terapias sob a perspectiva do sistema público de saúde brasileiro. Para tanto, foi realizado um estudo prospectivo longitudinal em cinco centros de referência em atendimento a pacientes com hepatite C do Estado do Paraná, entre 2014 e 2016. Os dados relativos à efetividade e à segurança foram coletados dos prontuários de pacientes tratados com boceprevir ou telaprevir. Os desfechos de eficácia incluíram a resposta virológica rápida (RVR) e a resposta virológica sustentada (RVS), e os resultados de segurança incluíram os eventos adversos relatados nos prontuários. Cento e vinte e um pacientes foram incluídos no estudo observacional (19 no grupo boceprevir e 102 no grupo telaprevir), dos quais 67 completaram o tratamento (oito no grupo boceprevir e 59 no grupo telaprevir). Dos 121 pacientes incluídos na análise por intenção de tratar 26,3% atingiram a RVR no grupo boceprevir e 84,3% no grupo telaprevir (p<0,001). A RVS foi atingida por 47,4% e 61,8% nos grupos boceprevir e telaprevir, respectivamente (p=0,424). Náusea foi o evento adverso mais prevalente no grupo boceprevir e prurido no grupo telaprevir. Em relação à tolerabilidade, 57,9% dos pacientes descontinuaram o tratamento com boceprevir e 42,2% com telaprevir. Para avaliar a relação custo-efetividade dos regimes com boceprevir, telaprevir e terapia dupla padrão (interferon peguilado associado à ribavirina) no tratamento da hepatite C crônica foi desenvolvido um modelo de Markov simulando a progressão da doença em pacientes infectados com o genótipo 1 do vírus. Os desfechos de longo prazo contemplaram anos de vida ganhos (AVG), anos de vida ajustados pela qualidade (QALYs) e razão custo-efetividade incremental (ICER). Para todos os desfechos analisados a terapia tripla com boceprevir foi dominada pela terapia tripla com telaprevir, que foi a mais efetiva entre os tratamentos analisados, a um custo de R$ 63.642,00. As ICERs corresponderam a R$ 120.693/RVS, R$ 47.718/AVG e R$ 33.464/QALY para a terapia tripla com telaprevir versus a terapia dupla. Dados do estudo de prevalência, realizado na cidade de Curitiba com pacientes atendidos entre 2013 e 2016 (n=452), revelaram a maior prevalência da infecção pelos genótipos 1 e 3 do vírus. Além disso, foi observada maior prevalência do estágio de fibrose F4 entre os pacientes avaliados. Comparando indiretamente os DAAs de primeira e segunda geração por meio de revisão sistemática com meta-análise em rede, verificou-se a superioridade do daclatasvir sobre as demais terapias analisadas. Palavras-chave: Agentes antivirais. Hepatite C. Hepatite C - Tratamento farmacológico. / Abstract: Chronic hepatitis C is a relevant public health issue, and has been under investigation through several clinical trials, especially regarding new therapies. However, the Brazilian population has been poorly represented in the studies. The first-generation direct-acting antiviral agents (DAAs) for chronic hepatitis C genotype 1 treatment (boceprevir and telaprevir) was approved by the public health system in Brazil in 2012. Due to the recent inclusion of these therapies, the Brazilian Ministry of Health recommended the conduction of an observational study to evaluate the safety and effectiveness of telaprevir and boceprevir in Brazil. Therefore, the aim of the present study was to evaluate the effectiveness, safety and cost-effectiveness of the new therapies from the perspective of the Brazilian public health system. Hence, a prospective longitudinal study was conducted in five reference centers in the State of Paraná between 2014 and 2016. Data regarding effectiveness and safety were collected from patients' medical records receiving boceprevir or telaprevir. Effectiveness outcomes included rapid virological response (RVR) and sustained virological response (SVR), and safety results included the adverse events reported on the medical records. One hundred and twenty one patients were included in the observational study (19 in the boceprevir group and 102 the in telaprevir group), of which 67 completed the treatment (eight in the boceprevir group and 59 in the telaprevir group). Of the 121 patients included in the intention-to-treat analysis, 26.3% achieved RVR in the boceprevir group and 84.3% in the telaprevir group (p <0.001). SVR was achieved by 47.4% and by 61.8% in the boceprevir and telaprevir groups, respectively (p = 0.424). Nausea was the most frequent adverse event with boceprevir and pruritus with telaprevir. Regarding tolerability, 57.9% of the patients discontinued the treatment with boceprevir and 42.2% with telaprevir. To evaluate the cost-effectiveness of regimens with boceprevir, with telaprevir and standard dual therapy (peguilated interferon with ribavirin) for chronic hepatitis C treatment, a Markov model was developed simulating the natural course of the disease in patients infected with the genotype 1 of the virus. Long-term outcomes included remaining life expectancy in life years (LYs), quality-adjusted life years (QALYs) and incremental cost-effectiveness ratio (ICER). For all evaluated outcomes the regimen with boceprevir was dominated by the regimen with telaprevir, which was the most effective among the evaluated treatments, with a cost of R$ 63.642,00. ICERs were R$ 120.693/SVR, R$ 47.718/LY and R$ 33.464/QALY for triple therapy with telaprevir versus standard dual therapy. Data from the cross-sectional study, which was conducted in Curitiba with patients attended between 2013 and 2016 (n=452), revealed a higher frequency of infection by the genotypes 1 and 3. Moreover, a higher prevalence of the F4 fibrosis stage was observed in the evaluated patients. Indirect comparison of first and second-generation DAAs through network meta-analysis exhibited the superiority of daclatasvir over the other evaluated therapies. Keywords: Antiviral agents. Hepatitis C. Hepatitis C - Pharmacological treatment.

Orientador : Prof. Dr. Roberto Pontarolo / Coorientadora : Drª. Inajara Rotta / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 22/09/2017 / Inclui referências : f. 83-93 / Resumo: A hepatite viral C crônica é causada pelo vírus da hepatite C (VHC) e os indivíduos são considerados curados após atingir a resposta virológica sustentada (RVS). Porém, os elevados custos dificultam o acesso às terapias disponíveis. Dados os recursos limitados, a inserção de novas terapias deve ter sua viabilidade farmacoeconômica avaliada, para que a alocação de recursos seja eficiente. Portanto, o objetivo deste trabalho foi realizar análise de custo-efetividade das terapias preconizadas pelo Protocolo Clínico e Diretrizes Terapêuticas de 2015 no tratamento precoce de pacientes com hepatite C crônica sob a perspectiva do SUS. Esta análise utilizou um modelo de Markov para comparar o momento de inserção da terapia, comparando-se o tratamento a partir de F0, F1 ou F2 com o preconizado pelo PCDT de 2015, apenas F3 e F4. Como há diferentes genótipos (GT) do vírus e para alguns deles mais de uma terapia descrita, foram realizadas análises de subgrupos. O horizonte temporal foi a expectativa de vida do paciente, e a taxa de desconto foi determinada em 5%. A perspectiva do trabalho foi a do SUS, assim, foram mensurados apenas os custos diretos médicos. Como medida finalística foram utilizados os anos de vida ajustados por qualidade (AVAQ), estimados com base nas melhores evidências disponíveis. Os dados de eficácia foram empregados como probabilidade de transição entre os estágios de fibrose e a RVS e as demais probabilidades também foram estimadas com base na literatura. Foi assumido que apenas pacientes monoinfectados pelo VHC fariam parte do modelo, apenas os que atingissem a RVS a partir de F3 ou F4 poderiam continuar progredindo no modelo e após atingida a RVS eles não poderiam ser reinfectados. A análise demonstrou que a inserção precoce do tratamento é custo-efetiva, considerando limiar implícito sugerido para o Brasil para todas as terapias: sofosbuvir e daclatasvir para os genótipos 1, 3 e 4; sosfosbuvir e ribavirina para GT2; e sosfosbuvir, peguinterferona e ribavirina (PR) para GT3. E não é custo-efetiva para o tratamento a partir de F0, mas sim a partir de F1 ou F2 para as terapias sofosbuvir e simeprevir para GT1 e daclatasvir e PR para GT4. Porém com diferenças significativas entre as razões custo-efetividade incrementais (RCEI), variando de R$ 8.583/AVAQ a R$ 30.185/AVAQ. Para avaliar a robustez do modelo foram realizadas análises de sensibilidade. A análise determinística univariada demonstrou que as variáveis que mais afetam o modelo estão relacionadas à taxa de desconto dos resultados, ao custo dos medicamentos e aos dados de utilidade. A probabilística (PSA) permitiu quantificar as incertezas, fornecendo melhor evidência para o gestor. As 5000 iterações de cada subgrupo mantiveram-se no quadrante custo-efetivo do plano de custo-efetividade. Assim, pode-se afirmar que o tratamento precoce da hepatite C crônica é custo-efetivo, mas a alteração dos protocolos futuros depende de outras avaliações por parte dos gestores. Palavras-chave: hepatite C crônica, custo-efetividade, tratamento precoce, sofosbuvir, daclatasvir, simeprevir. / Abstratc: Chronic viral hepatitis C is caused by the hepatitis C virus (HCV) and is considered a curable disease, since individuals can achieve sustained virological response (SVR). However, access to the available therapies isn't universal, mainly due to high costs. As much as health resources are limited, pharmacoeconomic assessments that allow better allocation of resources are necessary. Therefore, the objective of this study is to perform a cost-effectiveness analysis of the therapies advocated by the Clinical Protocol and Therapeutic Guidelines of 2015 on early treatment of patients with chronic hepatitis C from the SUS perspective. This cost-effectiveness analysis used a Markov model to compare the moment of insertion of the therapy, comparing the treatment starts at F0, F1 or F2 with treatment according to the protocol, only F3 e F4. As there are different genotypes (GT) of the virus and for some of them more than one described therapy, subgroup analyses were performed. The model has a lifetime horizon, and the discount rate was defined in 5%. Considering the perspective of the work as the public health system, only direct medical costs were measured. As a final measure, quality adjusted life years (QALY) were estimated, based on the best available evidence. Efficacy data were used as a transition probability between the stages of fibrosis and SVR and the other probabilities were also estimated based on the literature. It was assumed that only HCV patients would be part of the model, just those who reached SVR from F3 or F4 could continue to progress in the model after reaching SVR and none of them could be reinfected. The analysis showed that the early insertion of the treatment is cost-effective, considering implicit limit suggested for Brazil for the therapies: sofosbuvir and daclatasvir for genotypes 1, 3 and 4; sosfosbuvir and ribavirina for GT2; sosfosbuvir; and peginterferon and ribavirin (PR) for GT3. And it isn't for treatment starting on F0, but it is when starting on F1 or F2 for the therapies sofosbuvir and simeprevir for GT1 and daclatasvir and PR for GT4. However, there were significant differences between the incremental cost-effectiveness ratios (ICER), ranging from R$ 8.583/AVAQ to R$ 30.185/AVAQ. To assess the robustness of the model, sensitivity analyses were performed. The univariate deterministic analyses showed that the variables that most affect the model are related to the discount rate of the results, the cost of medications and the utility data. The probabilistic (PSA) allowed to quantify the uncertainties, providing better evidence for the manager. The 5000 iterations of each subgroup remained in the cost-effective quadrant of the cost-effectiveness plan. Thus, it can be affirmed that the early treatment of chronic hepatitis C is cost-effective, but the change of future guidelines depends on other evaluations by the managers. Key-words: chronic hepatitis C, cost-effectiveness, early treatment, sofosbuvir, daclatasvir, simeprevir.

Orientador: Jussara Marcondes Machado / Banca: Sueli Aparecida Calvi / Banca: Maria Cassia Jacintho Mendes Correa / Resumo: O vírus da hepatite C é uma das principais causas de doença hepática no mundo inteiro. O estudo histopatológico é de grande importância no prognóstico e indicação de tratamento. A coinfecção com o vírus da hepatite B oculta pode agravar a lesão hepática e diminuir a resposta ao tratamento. As citocinas IL-2, INF, TNF- induzem lesão hepática e fibrose. A IL-10 apresenta atividade antiinflamatória e o TGF- induz o desenvolvimento e depósito de matriz extracelular causando fibrose. Este estudo avaliou, em pacientes com HCC, a presença da hepatite B oculta, a dosagem das citocinas IL-2, INF, TNF , TGF e IL-10, correlacionando com o estágio de fibrose em pacientes tratados e não tratados com interferon, comparando também com indivíduos saudáveis. Foram estudados 55 pacientes com HCC crônica, atendidos na Faculdade de Medicina de Botucatu, excluindo-se pacientes imunossuprimidos e gestantes. O grupo controle foi constituído de 20 indivíduos doadores de sangue. O vírus da hepatite B oculto foi pesquisado por de PCR in house, segundo técnica de Kaneno, com limite de detecção menor que 100 cópias/ml. A dosagem de citocinas foi determinada por método de Elisa. A avaliação da fibrose hepática seguiu aquela proposta pela Sociedade Brasileira de Patologia. Os resultados mostraram predominância do gênero masculino, adulto jovem, 36,4% foram usuários de drogas endovenosas e 41,8% haviam sido hemotransfundidos. Nenhum paciente apresentou coinfecção pelo vírus da hepatite B oculto. Na biópsia hepática predominou fibrose leve ou ausência de fibrose (47,2%). As citocinas analisadas não discriminaram o grau de fibrose nos indivíduos com HCC crônica, mesmo quando separados em pacientes que foram submetidos ao tratamento e pacientes que não receberam o tratamento. Não houve também discriminação das citocinas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Hepatitis C virus is one of the major causes of hepatic diseases worldwide. Histopathological analyses play a leading role in determining disease outcome and treatment. Co-infection with occult Hepatitis B can aggravate liver injury and diminish treatment response. Cytokines such as IL-2, INF and TNF- induce liver injury and fibrosis. IL-10 has an antiinflamatory action and TGF- induces extracellular matrix development and deposition causing fibrosis. In this study, the presence of occult Hepatitis B and the expression of IL-2, INF, TNF , TGF and IL-10 were assessed in HCC patients and correlated with fibrosis stage in patients treated and non-treated with interferon, as well as healthy individuals. A total of 55 patients with chronic HCC seen at Botucatu Medical School were included. Immunosuppressed or pregnant patients were excluded. The control group consisted of 20 blood donors. The occult Hepatitis B virus was detected by in-house PCR according to the technique of Kaneno with a detection limit < 100 clones/ml. Cytokine levels were determined by the Elisa method. Hepatic fibrosis was assessed as proposed by the Brazilian Society of Pathology. The results showed a predominance of male young adults of whom 36.4% had used endovenous drugs and 41.8% had been hemotransfused. No patient showed occult Hepatitis B co-infection. Hepatic biopsy revealed that fibrosis was either absent or mild in most cases (47.2%). The cytokines under study did not correlate with fibrosis stage in individuals with chronic HCC no matter whether they had or not received treatment. In addition, no correlations with cytokine levels were observed when VHC patients were separated into groups of individuals treated and non-treated with interferon . However, cytokine expressions were significantly increased in all cases in comparison with the control group. / Mestre