Exprimé dans les macrophages et les cellules vasculaires musculaires lisses, le récepteur nucléaire hépatique X (LXR) a un rôle méconnu sur la survie ou la mort des cellules vasculaires musculaires lisses humaines, et ce, malgré une découverte récente de son implication dans la survie des macrophages de souris. L'objectif de mon étude est de comparer Peffet du ligand synthétique T0901317 des LXRs sur la viabilité cellulaire et la déstabilisation lysosomale des macrophages et des cellules vasculaires musculaires lisses humaines en présence de cholestérol ou de 27-hydroxycholestérol (27-OH) et de vérifier si la voie de survie Akt est impliquée. Les macrophages humains U937 et les cellules musculaires lisses aortiques humaines (HASMC) ont été incubés en présence ou non de cholestérol ou de 27-OH, suivie ou non d'un traitement avec le ligand T0901317. Nous avons également étudié les effets du ligand synthétique GW101516 du récepteur activé par les proliférateurs des péroxisomes-β/? (PPAR β/?) et du ligand synthétique T090 1317 des LXRs sur la viabilité cellulaire des macrophages seulement en présence ou non de différents oxystérols comme le 7β-hydroxycholestérol (7β-OH), le 7α-hydroxycholestérol (7α-OH), le 7-kétocholestérol (7KC) et le 5β-6β-époxycholestérol (β-Epox). La proportion relative des cellules viables ou mortes ainsi que des cellules présentant une déstabilisation de leurs membranes lysosomales ont été mesurées simultanément par cytométrie à flux. Les résultats nous montrent que dans les macrophages 0937, le cholestérol stimule la survie cellulaire tandis que le 27-OH induit soit la survie (faible concentration) soit une mort cellulaire sans présence de déstabilisation lysosomale (concentration élevée), suggérant une mort par apoptose. Comparativement à l'effet du T090 1317 seul, son effet sur la viabilité en présence de cholestérol ou de 27 -OH est négligeable. Dans les HASMC, le cholestérol induit une mort cellulaire par apoptose sans effet additionnel du T090 1317. Par contre, le 27-OH additionné de T0901317 permet de prévenir l'apoptose. L'induction de la voie de survie dans les macrophages par le cholestérol est associée à la phosphorylation d'Akt sur le résidu Thr308. Aussi, la survie cellulaire induite par LXR est altérée en présence de cholestérol ou en présence de concentration élevée de 27-0H dans les macrophages U937, ce qui n'est pas observé dans les HASMCs. Le 7KC démontre un effet plus fort que les 7β-OH, le 7α-OH ou le p-Epox sur l'induction de la mort cellulaire. L'induction de la survie par les ligands de LXR et de PPAR β/? ne semble pas être inhibée lorsque le macrophage est incubé en présence d' oxystérols autres que le 27-OH.

Plusieurs pathologies sont liées à un excès de cholestérol, notamment l'athérosclérose et les maladies neurodegeneratives, telles que l'Alzheimer et le Parkinson. Le cérébrostérol (24S-hydroxycholestérol) constitue la principale forme d'élimination du cholestérol du cerveau et excrété au niveau du foie. Dans le foie, environ 50% du cérébrostérol est métabolisé en un dérivé glucuronidé et sulfaté. Par ailleurs, le cérébrostérol a aussi une fonction biologique comme activateur naturel des récepteurs nucléaires LXRa et p. Nos travaux avaient pour but de clarifier le rôle de la glucuronidation dans l'homéostasie et le contrôle de l'activité biologique du 24S-hydroxycholestérol. Nous avons identifié le 24S-hydroxycholestérol et le 24S-hydroxycholestérol-3-sulfate-24-glucuronide comme étant les metabolites circulants les plus abondants chez l'humain. Également, nous avons identifié l'enzyme UDP-glucuronosyltransferase (UGT)1A4 comme étant l'enzyme responsable de la glucuronidation du 24S-hydroxycholestérol. Enfin, nous avons mis en évidence l'effet positif de l'activation de LXRa sur l'expression hépatique d'UGT1A4, suggérant ainsi que le 24S-hydroxycholestérol est capable de réguler son propre métabolisme. Ces résultats permettent de mieux comprendre les processus moléculaires régissant le métabolisme et l'inactivation du 24S-hydroxycholestérol, et méritent d'être approfondis, afin de déterminer l'intérêt thérapeutique de la glucuronidation du cérébrostérol dans le cadre de traitements visant à réduire l'excès de cholestérol au cerveau.

Le 24S-hydroxycholestérol (24S-OH) est un dérivé oxydé du cholestérol retrouvé dans le plasma chez l’humain. C’est un activateur endogène du Liver-X-Receptor (LXR) et un biomarqueur plasmatique potentiel pour diverses maladies neurodégénératives. Les concentrations de 24S-OH dans le plasma sont influencées par son métabolisme hépatique mais sa conjugaison dans le foie n’a pas été caractérisée à ce jour. Après analyse d’échantillons humains de plasma et d’urine par LC-MS/MS, le 24S-hydroxycholestérol-3 sulfate, 24S-hydroxycholestérol-24 glucuronide et 24S-hydroxycholestérol-3 sulfate, 24 glucuronide ont pu être identifiés. Les enzymes responsables de leurs formations au niveau du foie sont principalement UGT1A4 et SULT2A1. De plus, alors que le dérivé sulfaté montre une activité agoniste envers LXRα, les dérivés glucuronidés sont inactifs. Ces résultats indiquent que la glucuronidation et la sulfatation du 24S-OH affectent différemment son activité biologique pour LXRα. De plus, puisqu’UGT1A4 est régulé par LXRα, il est possible de dire que le 24S-OH est régulé par une boucle de rétrocontrôle. / 24S-hydroxycholesterol (24S-OH) is an oxidized derivative of cholesterol detected in the human plasma. It acts as a Liver-X-Receptor (LXR) agonist and its plasmatic levels have also proposed as potential biomarkers for several neurodegenerative diseases. Circulating 24S-OH levels are influenced by its hepatic elimination but the enzymatic processes involved in its conjugation in the liver have only received limited attention. After analysis of human plasma samples by LC-MS/MS, the 24S-hydroxycholesterol-3 sulfate, 24S-hydroxycholesterol-24 glucuronide and 24S-hydroxycholesterol-3 sulfate, 24-glucuronide were identified. The enzymes responsible for their formation in the liver are identified as UGT1A4 and SULT2A1. In addition, while the sulfated derivative shows a LXR agonist activity, glucuronidated derivatives are inactive. These results indicate that 24S-OH glucuronidation and sulfation affect differently its biological activity. Since UGT1A4 is regulated by LXRα, it can be envisioned that 24S-OH hepatic metabolism is controlled by a feedback loop.