Homocystein (Hcy) är en aminosyra som är starkt bunden till kroppens metabolism av metionin. När hcy tillbakabildas till metionin krävs närvaro av vitamin B12 och folat. Analys av hcy i plasma (P-hcy) används vid misstanke om brist av någon av dessa vitaminer. Analysen kan utföras med ett antal olika metoder. I denna studie analyseras P-hcy immunologiskt med analysinstrumentet Immulite 2000 XPi (Siemens Healthcare Diagnostics Inc, Erlangen, Germany) och enzymatiskt med analysinstrumentet Cobas 6000 (Roche Diagnostics Scandinavia AB, Bromma, Sweden) med syfte att jämföra analysresultaten från de båda metoderna. Immulite 2000 XPi användes som referensmetod då denna validerats för klinisk analys av P-hcy. Studien genomfördes på 51 st slumpvis utvalda plasmaprover (24 kvinnor och 27 män) mellan 25 och 95 år.Utöver metodjämförelse genomfördes precisionsstudie med Cobas 6000 (20 replikat i två nivåer). Den enzymatiska metoden visade en hög precision. Vid låg nivå beräknades variationskoefficienten (CV) till 1,71 % (medelvärde: 8,32 ❍mol/L) och vid hög nivå till 2,54 % (medelvärde: 29,45 ❍mol/L). Korrelationen mellan de båda metoderna var r = 0,994, (y=0,977x + 1,4 och R2 = 0,989). Ingen statistisk signifikant skillnad påvisades. Resultaten av P-hcy vid analys med Cobas 6000 låg dock 0,9 ❍mol/L (medelvärde) högre än resultat från Immulite 2000 XPi. Denna systematiska avvikelse bör inte vara av klinisk betydelse vid analys av P-hcy för utredning av eventuell sjukdom. Skillnaden kan dock vara relevant om analysen används för uppföljning av tidigare analysresultat. Resultat visar att båda metoderna kan användas för analys av P-hcy och att de kan användas som ett tillfredsställande diagnostiskt verktyg.

Definitionen av epilepsi är ofrivillig förändring av den neurologiska funktionen i hjärnan. Sjukdomen uppkommer när det blir obalans i kommunikationen mellan hjärnans nervceller. Det är en störning/aktivering av impulsfrisättningen i hjärnan där orsakerna inte är fastställda. Fenobarbital är ett lugnande och sömngivande preparat, som motverkar kramper och begränsar retningens spridning i hjärnan genom att förstärka effekten av den hämmande transmittorsubstansen gammaaminosmörsyra (GABA). Syftet med studien var en metodjämförelse av fenobarbitalnivåer i serum uppmätta på Immulite 2000 versus Catalyst Dx hos hundar med epilepsi. Catalyst dx är ett veterinärmedicinskt instrument som använder torrkemisk analys. Immulite 2000 använder en våtkemisk metod och är ett instrument som fungerar på liknande sätt som sandwich ELISA metoden. Resultatet av de 14 prover som analyserades under april-maj 2017 visar på högre värden för samtliga prover analyserade på instrumentet Catalyst dx jämfört med Immulite 2000. Med ett P-värde på <0,0001 betyder det att nollhypotesen förkastas, dvs det förekommer en signifikant skillnad mellan instrumenten. / The definition of epilepsi is unintended change of neurological function in the brain. The disease occurs when there is imbalance in communication between the brains nerve cells. It is disorder/activation of pulse release in the brain where the causes are not determined. Phenobarbital is an appeasement and soporific preparation. It´s a drug that inhibits cramps and limit the spread of the direction in the brain by enhancing the effect of the inhibitory transmittor substance gamma aminobutyric acid (GABA). The aim of this study examine method comparison of the phenobarbital level measured on Immulite 2000 versus Catalyst Dx in dogs with epilepsy. Catalyst dx (IDEXX) is a veterinary instrument which uses dry chemical analysis. Immulite 2000 (Siemens) uses a wet chemical method and it´s an instrument that works similar to the sandwich ELISA method. The results from the 14 samples analyzed in april-may 2017 shows higher values for all samples on the instrument Catalyst dx comparison to Immulite 2000. With a P-value of <0,0001 it means that the zero hypothesis is rejected. There is a significant difference between the instruments.

NT-proBNP is a biproduct derived from the synthesis of BNP, a synthesis stimulated when cardiomyocytes are stretched such as in heart failure. Heart failure is defined as the hearts inability to supply the blood volume the body acquires. It is advantageous to monitor changes for adequate treatment. NT-proBNP has proven to be an excellent marker for this purpose. The purpose of the study was to compare the two immunochemical methods for measuring NT-proBNP: Roche Elecsys proBNP II analyzed with Cobas e601 and Siemens IMMULITE 2000 NT-proBNP analyzed with IMMULITE 2000 XPi. For this comparison 60 lithium heparin plasma samples from 36 men (60 – 90 years old) and 24 women (65 – 94 years old) was used. IMMULITE 2000 XPi served as the reference method. Results from the assays were compared in a correlation diagram, which indicated good correlation (R: 0.98). Cobas e601 yielded results on average 17.4 % lower than the reference method. A paired t test was used to prove significant diference at 95 % confidence level between the methods on a 95 % confidence level. Precision regarding Roche Elecsys proBNP II, based on measurings of plasma with low and high analyte concentration, 25 replicates one day and 5 replicates 4 days gave imprecisions <3 % (CV%). Reference method imprecision (CV%) <5 % was calculated from control analysis. Good correlation between the two methods and lower imprecision when using proBNP II indicate that Cobas e601 can be used. / NT-proBNP är en restprodukt vid syntes av brain natriuretic peptide (BNP), vars syntes stimuleras av att hjärtats myocyter töjs ut såsom vid hjärtsvikt. Hjärtsvikt innebär att hjärtat inte orkar pumpa den volym blod som motsvarar systemkretsloppets behov. Det är fördelaktigt att kunna följa förändringar i hjärtmuskelns funktion för adekvat behandling. NT-proBNP har visat sig vara en bra markör i detta syfte. Studiens syfte var att jämföra två immunokemiska metoder: Roches Elecsys proBNP II i analysinstrumentet Cobas e601 med Siemens IMMULITE 2000 NT-proBNP i analysinstrumentet IMMULITE 2000 XPi. Studiematerialet kom att bestå av 60 patientprover av litiumheparinplasma från 36 män (60 – 90 år) samt 24 kvinnor (65 - 94 år). IMMULITE 2000 Xpi fungerade som referensmetod. Resultat av kalibrering överensstämde med erhållna masterkurvor och analys av kontroller gav resultat inom 1 SD. Analysresultaten från de båda metoderna jämfördes i ett korrelationsdiagram. Spridningsdiagrammen indikerade en korrelation om R: 0,98. Jämförd metod gav dock i genomsnitt 17,8 % lägre resultat. Signifikant skillnad metoderna emellan vid 95 % konfidensnivå påvisades genom ett parat t-test. Precision avseende Roches Elecsys proBNP II undersöktes genom analys av plasma med hög respektive låg analytkoncentration (25 replikat samma dag och 5 replikat om dagen i ytterligare 4 dagar) vilket totalt gav en imprecision om <3 % uttryckt i CV. Referensmetodens imprecision beräknades utifrån analyserade kontroller och gav en CV <5 %. God korrelation mellan de båda metoderna samt lägre imprecision vid användning av Elecys proBNP II talar för att den jämförda metoden kan tas i bruk.

Allergi förekommer hos cirka 20 % av befolkningen i Sverige. Av de 20 % bedöms 40 % vara allergiska mot pollen. Allergi uppstår då en individ upprepade gånger exponeras för ett allergiframkallande ämne sk allergen. IgE-antikroppar bildas och binder till basofila granulocyter och mastceller. Den allergiska reaktionen eller överkänslighetsreaktionen av typ I uppkommer när ett allergen exempelvis pollen, kommer i direkt kontakt med IgE-antikroppar på mastceller eller basofila granulocyter. Allergiska individer har högre koncentration av IgE-antikroppar i blodet än icke allergiska. Normal koncentration av IgE i serum hos icke allergiker är <0.35 kU/L. Syftet med studien var att genom analys av serumprover från 50 patienter jämföra två immunokemiska metoder på analysinstrumenten, Siemens immulite® 2000 XPi och Thermo Fisher Phadia® 250, för detektion av IgE-antikroppar riktade mot en inhalationspanel respektive björkpollen. Immulite® 2000 XPi användes som referensmetod. Jämförelsen gjordes för att bedöma om metoderna gav överensstämmande resultat och om Phadia® 250 skulle kunna användas som ett alternativ till rutinmetoden. Studiematerialet bestod av 50 patienter i åldrarna 18–80 år, 17  män (34 %) och 33 kvinnor (66 %). Resultatet visade att metoderna överlag gav överrensstämmande resultat med avseende på positiva och negativa IgE-värden, men att de uppmätta värdena för metoderna saknade överrensstämmelse. Analysresultaten från de båda metoderna gav överlag god korrelation vid analys av specifikt IgE mot björk (R=0,977) men en svagare korrelation vid analys av inhalationspanel (R=0,609). Med hjälp av Man-Whitney u-test sågs en signifikant skillnad vid IgE-analys mot björk (p= 0,0006) däremot sågs inte en signifikant skillnad mellan metodernas IgE-värden mot inhalationspanelerna (p=0,2398). För att kunna utvärdera om Phadia® 250 skulle kunna användas som ett alternativ till rutinmetoden, krävs en större population av prover samt fler analystillfällen. / Allergy is nowadays a public health problem that’s affecting 20 % of the Swedish population. A very common allergen that is related to 40% of all the allergic cases is pollen. Allergic reactions occur when an  individual is repeatedly exposed to an allergenic substance called allergene. IgE antibodies then form and bind to basophilic granulocytes and mast cells. The allergic reaction or type I hypersensitivity reaction, occurs when an allergen such as pollen comes into direct contact with IgE antibodies on mast cells or basophilic granulocytes. IgE is produced by plasma cells under the influence of CD4+ T lymphocytes. The IgE antibodies synthesized then sensitize the mast cells and basophilic granulocytes which are the most active cell types involved in allergic reactions. Allergic individuals have a higher concentration of IgE antibodies in the blood than non-allergic. Normal serum IgE concentration in non-allergic patients is <0.35 kU / L. The aim of the study was to compare two immunochemical instruments, Siemens Immulite® 2000 XPi and Thermo Fisher Phadia® 250, by analyzing 50 serum samples to detect possible presence of IgE antibodies directed against an inhalation panel and a single allergen (IgE against birch). The study material consisted of 50 patients between the ages of 18-80, 17 men (34%) and 33 women (66%). The results showed that overall the two methods yielded consistent results due to positive and negative IgE values, but the measured values of the methods lacked concordance. The analysis results from the two methods generally yielded good correlation in the analysis of specific IgE against birch (R = 0.977) but a weaker correlation in the inhalation panel analysis (R = 0.609). Man-Whitney u-test showed a significant difference in IgE analysis against birch (p = 0.0006). However, a significant difference between the IgE values of the methods against the inhalation panels (p = 0.22398) was not observed. To be able to evaluate whether Phadia® 250 could be used as an alternative to the routine method, a larger population of samples and more analytical occasions is required.

Tillväxthormon och insulinliknande tillväxtfaktor-1 är blodprover som tas vid misstanke om akromegali. Immulite 2000 XPi är ett instrument som använder chemiluminescent microparticle immunoassay metodik för att kvantitativt mäta koncentrationen av GH och IGF-1. Analys av biokemiska markörer påverkas av flera olika faktorer. En viktig sådan faktor är hemolys. Hemolys innebär att de röda blodkropparna går sönder, vilket leder till frisättning av dess innehåll såsom hemoglobin i serum/plasma. Syftet med detta projekt var att undersöka hur hemolys påverkar resultatet av GH- och IGF-1-prover på immulite 2000 XPi. Utifrån erhållna resultat kommer klinisk kemi vid Universitetssjukhuset Örebros laboratorie rutiner vid hemolytiska prover på GH eller IGF-1 att uppdateras . Hemolys tillverkades och tillsattes till olika serumprover med låg och hög nivå av GH respektive IGF-1 för att erhålla prover med varierande grad av hemolys. Resultatet visade att ökande hemolysindex korrelerar med GH- respektive IGF-1-koncentrationer, med undantag för den låga GH koncentrationen som inte uppvisade någon korrelation till hemolysindex. En 10%:ig skillnad av GH och IGF-1- koncentrationer uppnåddes vid en ökning av hemolysindex med 555,40 mg/dL för GH respektive 333,3 mg/dL för IGF-1.Utifrån resultaten var hemolysgränsen likvärdig med tillverkarens gränser. Därför kan klinisk kemi på Universitetssjukhuset Örebro fortsätta med nuvarande hemolysgränser. / Growth hormone and insulin-like growth factor-1 are blood samples taken upon suspicion of acromegaly and for follow-up of acromegaly treatment. Immulite 2000 XPi is an instrument that uses chemiluminescent microparticle immunoassay method to quantitatively measure the concentration of GH and IGF-1. Analysis of biochemical markers is affected by several different factors. An important such factor is hemolysis. Hemolysis means that the red blood cells break, whose contents leak into the serum/plasma. The study aimed to investigate how hemolysis affects the results of GH and IGF-1 samples on the Immulite 2000 XPi. The results will determine the routines for hemolytic samples for GH or IGF-1 at Örebro University Hospital. Hemolysis was produced and added to various serum samples with low and high levels of GH and IGF-1 to obtain samples with varying degrees of hemolysis. The results showed that increasing hemolysis index correlates with GH and IGF-1 concentrations, with the exception of low GH concentration, which did not show any correlation to hemolysis index. A 10% difference in GH and IGF-1 concentrations was achieved with an increase in hemolysis index of 555.40 mg/dL for GH and 333.3 mg/dL for IGF-1. Based on the results, the hemolysis limit was equivalent to the manufacturer's limits. Therefore, clinical chemistry at Örebro University Hospital can continue with current hemolysis limits.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006Bitstream added on 2014-06-13T18:54:35Z : No. of bitstreams: 1 kanegae_mpp_me_arafcf.pdf: 328350 bytes, checksum: ee1587bd6ab853b184cea70a4d71dac0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Em hematologia, a principal aplicação da determinação da atividade da fosfatase alcalina (FA) neutrofílica é no auxílio ao diagnóstico diferencial entre leucemia mielóide crônica (LMC) e reações leucemóides neutrofílicas (RL) decorrentes de doenças mieloproliferativas, como a mielofibrose, policitemia vera ou de inflamações/ infecções. Tradicionalmente esta determinação é realizada por um ensaio citoquímico subjetivo, no qual se atribui uma pontuação (SCORE) para o nível de FA. Neste trabalho apresentamos um método quimiluminescente, objetivo, quantitativo, sensível e barato para a determinação de FA neutrofílica baseado no reagente comercial Immulite®. Leucócitos íntegros obtidos de amostras de sangue periférico de trinta e dois indivíduos saudáveis, nove portadores de LMC e nove portadores de RL foram submetidos ao protocolo otimizado. Através da determinação da emissão de luz por quatro concentrações de neutrófilos, foi possível detectar a atividade de FA por célula (inclinação - SLOPE - da curva obtida por regressão linear). Uma alta correlação foi obtida quando o método quimiluminescente (SLOPE), aqui desenvolvido, foi comparado ao citoquímico (SCORE). Obtivemos uma variação do SLOPE entre 0,61-8,49 (10-5 mV.s/célula) para amostras do grupo controle (indivíduos saudáveis), sendo que o valor da mediana foi 2,04 (10-5 mV.s/célula). Estes resultados foram estatisticamente diferentes das amostras do grupo LMC (variação: 0,07 - 1,75; mediana: 0,79) e do grupo RL (variação: 3,84 - 47,24; mediana: 9,58) (p<0,05). / In haematology the main application of the leukocyte alkaline phosphatase (LAP) assay is in distinguishing chronic myeloid leukaemia (CML) from other myeloproliferative diseases, particularly from myelofibrosis, polycythaemia or other inflammatory/infectious diseases (LR). Traditionally, this is performed by subjective cytochemical assays where a SCORE is attributed to the level of LAP. Here we present a non-subjective, quantitative, sensitive and inexpensive chemiluminescent technique for LAP determination, based on the commercial reagent Immulite®. Intact leukocytes obtained from thirty-two healthy subjects, nine CML and nine LR patients were submitted to the optimized protocol. By measuring the light emission elicited by four concentrations of neutrophils, it was possible to estimate the activity of LAP per cell (the SLOPE of the curve obtained by linear regression). A high linear correlation was found between the chemiluminescent result (SLOPE) and the cytochemical SCORE. The SLOPE for healthy individuals ranged between 0.61 and 8.49 (10-5 mV.s/cell), with a median of 2.04 (10-5 mV.s/cell). These results were statistically different from CML patients (range 0.07 - 1.75, median 0.79) and LR patients (range 3.84 - 47.24, median 9.58) (p<0.05).

Orientador: Luiz Marcos da Fonseca / Banca: Amauri Antiquera Leite / Banca: Eduardo Magalhães Rego / Resumo: Em hematologia, a principal aplicação da determinação da atividade da fosfatase alcalina (FA) neutrofílica é no auxílio ao diagnóstico diferencial entre leucemia mielóide crônica (LMC) e reações leucemóides neutrofílicas (RL) decorrentes de doenças mieloproliferativas, como a mielofibrose, policitemia vera ou de inflamações/ infecções. Tradicionalmente esta determinação é realizada por um ensaio citoquímico subjetivo, no qual se atribui uma pontuação (SCORE) para o nível de FA. Neste trabalho apresentamos um método quimiluminescente, objetivo, quantitativo, sensível e barato para a determinação de FA neutrofílica baseado no reagente comercial Immulite®. Leucócitos íntegros obtidos de amostras de sangue periférico de trinta e dois indivíduos saudáveis, nove portadores de LMC e nove portadores de RL foram submetidos ao protocolo otimizado. Através da determinação da emissão de luz por quatro concentrações de neutrófilos, foi possível detectar a atividade de FA por célula (inclinação - SLOPE - da curva obtida por regressão linear). Uma alta correlação foi obtida quando o método quimiluminescente (SLOPE), aqui desenvolvido, foi comparado ao citoquímico (SCORE). Obtivemos uma variação do SLOPE entre 0,61-8,49 (10-5 mV.s/célula) para amostras do grupo controle (indivíduos saudáveis), sendo que o valor da mediana foi 2,04 (10-5 mV.s/célula). Estes resultados foram estatisticamente diferentes das amostras do grupo LMC (variação: 0,07 - 1,75; mediana: 0,79) e do grupo RL (variação: 3,84 - 47,24; mediana: 9,58) (p<0,05). / Abstract: In haematology the main application of the leukocyte alkaline phosphatase (LAP) assay is in distinguishing chronic myeloid leukaemia (CML) from other myeloproliferative diseases, particularly from myelofibrosis, polycythaemia or other inflammatory/infectious diseases (LR). Traditionally, this is performed by subjective cytochemical assays where a SCORE is attributed to the level of LAP. Here we present a non-subjective, quantitative, sensitive and inexpensive chemiluminescent technique for LAP determination, based on the commercial reagent Immulite®. Intact leukocytes obtained from thirty-two healthy subjects, nine CML and nine LR patients were submitted to the optimized protocol. By measuring the light emission elicited by four concentrations of neutrophils, it was possible to estimate the activity of LAP per cell (the SLOPE of the curve obtained by linear regression). A high linear correlation was found between the chemiluminescent result (SLOPE) and the cytochemical SCORE. The SLOPE for healthy individuals ranged between 0.61 and 8.49 (10-5 mV.s/cell), with a median of 2.04 (10-5 mV.s/cell). These results were statistically different from CML patients (range 0.07 - 1.75, median 0.79) and LR patients (range 3.84 - 47.24, median 9.58) (p<0.05). / Mestre

The thesis discusses the methods of determination of tumor markers and their clinical importance in medical diagnostics. The theoretical part describes clinically important tumor markers and also the chemiluminescent immunoassay methods used for their determination. The practical part of the thesis describes the introduction of new chemiluminescent methods for the determination of tumor markers in routine operation, evaluates its basic analytical parameters and compares it with the existing immunoturbidimetric method. The practical part also presents results of monitoring of cancer patients with various tumors, which is performed by evaluation of the values of tumor markers. Comparison of our method with other methods within the context of System of external quality control is also documented.