The retention curve of an incompletely learned avoidance response was investigated, employing rats in a shuttlebox situation. Subjects were given a 15 trial re-learning session 0, 1/2, 1 or 24 hours after original acquisition. Three treatment groups were tested at these intervals: a not-handled group which remained in the shuttlebox during the intersession interval, a handled group which remained in the shuttlebox during the intersession interval, and a group which was returned to a living cage. All treatment groups produced a monotonically decreasing curve as a function of intersession interval. Handling produced a decrement on performance at 0-hour intersession interval; location showed no effect. Results were interpreted in terms of the warm-up decrement and the effects of handling on the arousal of fear. / Thesis / Master of Arts (MA)

Máquinas de Estados Finitos, além de suas inúmeras aplicações, são amplamente utilizadas na Engenharia de Software para modelar especificações de sistemas. Nesses modelos, projetistas podem inserir, inadvertidamente, estados redundantes, ou seja, que exibem o mesmo comportamento. A eliminação desses estados traz diversos benefícios para as atividades que utilizam o modelo, como menor complexidade e menos recursos físicos para implementação. O processo de eliminação desses estados é denominado minimização, e pode ser realizado em tempo polinomial para máquinas completamente especificadas. Por outro lado, a minimização de máquinas parciais, cuja especificação não cobre todo o domínio de entrada, somente pode ser obtida em tempo polinomial com o uso de abordagens não determinísticas, ou seja, trata-se de um problema NP-Completo. Este trabalho apresenta uma estratégia para a minimização de máquinas de estados finitos parciais que faz o uso de heurísticas e otimizações para tornar o processo mais eficiente. Visando mensurar tal ganho de eficiência, foram realizados experimentos, nos quais os tempos de execução de uma implementação do método proposto foram medidos, juntamente com os tempos de implementações de dois outros métodos conhecidos. Os resultados mostraram vantagens significativas de performance para o novo método em relação aos métodos anteriores / Finite State Machines are largely used on Software Engineering to model systems specifications. In these models, designers may inadvertently include redundant states, i.e., states which exhibit the same input/output behavior. The absence of such states brings benefits to the modeling activities, reducing the complexity and taking less physical resources on implementations. The process of eliminating redundant states is known as minimization, and can be accomplished in polynomial time for completely specified machines. On the other hand, the minimization of partially specified machines, i.e., machines which have undefined behavior for some inputs, can only be done in polynomial time when non-deterministic approaches are applied. It is a known NP-Complete problem. This work presents a deterministic approach to minimize incompletely specified Finite State Machines, using heuristics and optimizations to accomplish the task more efficiently. In order to measure the performance improvements, experiments were done, observing the running time of an implementation of the proposed method, along with running times of implementations of two other known methods. The results revealed a significant performance advantage when using the proposed approach

Máquinas de Estados Finitos, além de suas inúmeras aplicações, são amplamente utilizadas na Engenharia de Software para modelar especificações de sistemas. Nesses modelos, projetistas podem inserir, inadvertidamente, estados redundantes, ou seja, que exibem o mesmo comportamento. A eliminação desses estados traz diversos benefícios para as atividades que utilizam o modelo, como menor complexidade e menos recursos físicos para implementação. O processo de eliminação desses estados é denominado minimização, e pode ser realizado em tempo polinomial para máquinas completamente especificadas. Por outro lado, a minimização de máquinas parciais, cuja especificação não cobre todo o domínio de entrada, somente pode ser obtida em tempo polinomial com o uso de abordagens não determinísticas, ou seja, trata-se de um problema NP-Completo. Este trabalho apresenta uma estratégia para a minimização de máquinas de estados finitos parciais que faz o uso de heurísticas e otimizações para tornar o processo mais eficiente. Visando mensurar tal ganho de eficiência, foram realizados experimentos, nos quais os tempos de execução de uma implementação do método proposto foram medidos, juntamente com os tempos de implementações de dois outros métodos conhecidos. Os resultados mostraram vantagens significativas de performance para o novo método em relação aos métodos anteriores / Finite State Machines are largely used on Software Engineering to model systems specifications. In these models, designers may inadvertently include redundant states, i.e., states which exhibit the same input/output behavior. The absence of such states brings benefits to the modeling activities, reducing the complexity and taking less physical resources on implementations. The process of eliminating redundant states is known as minimization, and can be accomplished in polynomial time for completely specified machines. On the other hand, the minimization of partially specified machines, i.e., machines which have undefined behavior for some inputs, can only be done in polynomial time when non-deterministic approaches are applied. It is a known NP-Complete problem. This work presents a deterministic approach to minimize incompletely specified Finite State Machines, using heuristics and optimizations to accomplish the task more efficiently. In order to measure the performance improvements, experiments were done, observing the running time of an implementation of the proposed method, along with running times of implementations of two other known methods. The results revealed a significant performance advantage when using the proposed approach

Algoritmos exatos para fatoração estão limitados a funções Booleanas read-once, onde cada variável aparece uma vez na equação final. No entanto, estes algoritmos apresentam duas restrições principais: (1) eles não consideram funções Booleanas incompletamente especificadas, e (2) eles não são adequados para as funções binate. Para superar o primeiro inconveniente, é proposto um algoritmo que encontra equações read-once para funções Booleanas incompletamente especificadas, sempre que possível, é proposto. Com respeito à segunda limitação, é apresentada uma transformação de domínio que divide variáveis binate existentes em duas variáveis unate independentes. Tal transformação de domínio conduz a funções Booleanas incompletamente especificadas, que podem ser eficientemente fatoradas mediante a aplicação do algoritmo proposto. A combinação das duas contribuições dá resultados ótimos para uma nova classe de funções Booleanas chamada read-polarity-once, onde cada polaridade (positiva ou negativa) de uma variável aparece no máximo uma vez na forma fatorada da expressão Booleana. Resultados experimentais sobre circuitos ISCAS'85 mostrou que funções read-polarity-once são significativamente mais frequentes em circuitos reais quando comparado com a classe de funções read-once, a qual muitos trabalhos já foram dedicados na literatura. / Efficient exact factoring algorithms are limited to read-once functions, in which each variable appears once in the final Boolean equation. However, those algorithms present two main constraints: (1) they do not consider incompletely specified Boolean functions; and (2) they are not suitable for binate functions. To overcome the first drawback, it is proposed an algorithm that finds read-once formulas for incompletely specified Boolean functions, whenever possible. With respect to the second limitation, a domain transformation that splits existing binate variables into two independent unate variables is presented. Such domain transformation leads to incompletely specified Boolean functions, which can be efficiently factored by applying the proposed algorithm. The combination of both contributions gives optimal results for a novel broader class of Boolean functions named as read-polarity-once functions, where each polarity (positive or negative) of a variable appears at most once in the factored form. Experimental results over ISCAS'85 benchmark circuits have shown that read-polarityonce functions are significantly more frequent than read-once functions, for which many works have already been devoted in the literature.

Algoritmos exatos para fatoração estão limitados a funções Booleanas read-once, onde cada variável aparece uma vez na equação final. No entanto, estes algoritmos apresentam duas restrições principais: (1) eles não consideram funções Booleanas incompletamente especificadas, e (2) eles não são adequados para as funções binate. Para superar o primeiro inconveniente, é proposto um algoritmo que encontra equações read-once para funções Booleanas incompletamente especificadas, sempre que possível, é proposto. Com respeito à segunda limitação, é apresentada uma transformação de domínio que divide variáveis binate existentes em duas variáveis unate independentes. Tal transformação de domínio conduz a funções Booleanas incompletamente especificadas, que podem ser eficientemente fatoradas mediante a aplicação do algoritmo proposto. A combinação das duas contribuições dá resultados ótimos para uma nova classe de funções Booleanas chamada read-polarity-once, onde cada polaridade (positiva ou negativa) de uma variável aparece no máximo uma vez na forma fatorada da expressão Booleana. Resultados experimentais sobre circuitos ISCAS'85 mostrou que funções read-polarity-once são significativamente mais frequentes em circuitos reais quando comparado com a classe de funções read-once, a qual muitos trabalhos já foram dedicados na literatura. / Efficient exact factoring algorithms are limited to read-once functions, in which each variable appears once in the final Boolean equation. However, those algorithms present two main constraints: (1) they do not consider incompletely specified Boolean functions; and (2) they are not suitable for binate functions. To overcome the first drawback, it is proposed an algorithm that finds read-once formulas for incompletely specified Boolean functions, whenever possible. With respect to the second limitation, a domain transformation that splits existing binate variables into two independent unate variables is presented. Such domain transformation leads to incompletely specified Boolean functions, which can be efficiently factored by applying the proposed algorithm. The combination of both contributions gives optimal results for a novel broader class of Boolean functions named as read-polarity-once functions, where each polarity (positive or negative) of a variable appears at most once in the factored form. Experimental results over ISCAS'85 benchmark circuits have shown that read-polarityonce functions are significantly more frequent than read-once functions, for which many works have already been devoted in the literature.

Algoritmos exatos para fatoração estão limitados a funções Booleanas read-once, onde cada variável aparece uma vez na equação final. No entanto, estes algoritmos apresentam duas restrições principais: (1) eles não consideram funções Booleanas incompletamente especificadas, e (2) eles não são adequados para as funções binate. Para superar o primeiro inconveniente, é proposto um algoritmo que encontra equações read-once para funções Booleanas incompletamente especificadas, sempre que possível, é proposto. Com respeito à segunda limitação, é apresentada uma transformação de domínio que divide variáveis binate existentes em duas variáveis unate independentes. Tal transformação de domínio conduz a funções Booleanas incompletamente especificadas, que podem ser eficientemente fatoradas mediante a aplicação do algoritmo proposto. A combinação das duas contribuições dá resultados ótimos para uma nova classe de funções Booleanas chamada read-polarity-once, onde cada polaridade (positiva ou negativa) de uma variável aparece no máximo uma vez na forma fatorada da expressão Booleana. Resultados experimentais sobre circuitos ISCAS'85 mostrou que funções read-polarity-once são significativamente mais frequentes em circuitos reais quando comparado com a classe de funções read-once, a qual muitos trabalhos já foram dedicados na literatura. / Efficient exact factoring algorithms are limited to read-once functions, in which each variable appears once in the final Boolean equation. However, those algorithms present two main constraints: (1) they do not consider incompletely specified Boolean functions; and (2) they are not suitable for binate functions. To overcome the first drawback, it is proposed an algorithm that finds read-once formulas for incompletely specified Boolean functions, whenever possible. With respect to the second limitation, a domain transformation that splits existing binate variables into two independent unate variables is presented. Such domain transformation leads to incompletely specified Boolean functions, which can be efficiently factored by applying the proposed algorithm. The combination of both contributions gives optimal results for a novel broader class of Boolean functions named as read-polarity-once functions, where each polarity (positive or negative) of a variable appears at most once in the factored form. Experimental results over ISCAS'85 benchmark circuits have shown that read-polarityonce functions are significantly more frequent than read-once functions, for which many works have already been devoted in the literature.

International cooperation on export controls for technology is based on three assumptions, that it is possible: to know against whom controls should be directed; to control the international transfer of technology; and to define the items to be controlled. These assumptions paint a very hierarchical framing of one of the central problems in export controls: dual-use technology. This hierarchical framing has been in continual contention with a competitive framing that views the problem as the marketability of technology. This thesis analyses historical and contemporary debates between these two framings of the problem of dual-use technology, focusing on the multilateral Wassenaar Arrangement on Export Controls for Conventional Arms and Dual-Use Goods and Technologies. Using a framework of concepts from Science & Technology Studies and the theory of sociocultural viability, I analyse the Arrangement as a classification system, where political, economic, and social debates are codified in the lists of controlled items, which then structure future debates. How a technology is (not) defined, I argue, depends as much on the particular set of social relations in which the technology is enacted as on any tangible aspects the technology may have. The hierarchical framing is currently hegemonic within Wassenaar, and I show how actors that express this framing use several strategies in resolving anomalies that arise concerning the classification of dual-use technology. These strategies have had mixed success, and I show how they have adequately resolved some cases (e.g. quantum cryptography), while other areas have proved much more difficult (e.g. focal plane arrays and computers). With the development of controls on intangible technology transfers, a third, egalitarian framing is arising, and I argue that initial steps have already been taken to incorporate this framing with the discourse on dual-use technology. However, the rise of this framing also calls into question the fundamental assumption of export controls that technology is excludable, and therefore definable.

O Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) é o agente etiológico da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). A AIDS é uma doença de distribuição mundial, e estima-se que existam atualmente pelo menos 36,9 milhões de pessoas infectadas com o vírus. Durante o seu ciclo replicativo, o HIV promove diversas alterações na fisiologia da célula hospedeira a fim de promover sua sobrevivência e potencializar a replicação. A rápida progressão da infecção pelo HIV-1 em humanos e em modelos animais está intimamente ligada à função da proteína acessória Nef. Dentre as diversas ações de Nef está a regulação negativa de proteínas importantes na resposta imunológica, como o receptor CD4. Sabe-se que esta ação resulta da indução da degradação de CD4 em lisossomos, mas os mecanismos moleculares envolvidos ainda são totalmente elucidados. Nef forma um complexo tripartite com a cauda citosólica de CD4 e a proteína adaptadora 2 (AP-2), em vesículas revestidas por clatrina nascentes, induzindo a internalização e degradação lisossomal de CD4. Pesquisas anteriores demonstraram que o direcionamento de CD4 aos lisossomos por Nef envolve a entrada do receptor na via dos corpos multivesiculares (MVBs), por um mecanismo atípico, pois, embora não necessite da ubiquitinação de carga, depende da ação de proteínas que compõem os ESCRTs (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport) e da ação de Alix, uma proteína acessória da maquinaria ESCRT. Já foi reportado que Nef interage com subunidades dos complexos AP-1, AP-2, AP-3 e Nef não parece interagir com subunidades de AP-4 e AP-5. Entretanto, o papel da interação de Nef com AP-1 e AP-3 na regulação negativa de CD4 ainda não está totalmente elucidado. Ademais, AP-1, AP-2 e AP-3 são potencialmente heterogêneos devido à existência de isoformas múltiplas das subunidades codificadas por diferentes genes. Todavia, existem poucos estudos para demonstrar se as diferentes combinações de isoformas dos APs são formadas e se possuem propriedades funcionais distintas. O presente trabalho procurou identificar e caracterizar fatores celulares envolvidos na regulação do tráfego intracelular de proteínas no processo de regulação negativa de CD4 induzido por Nef. Mais especificamente, este estudo buscou caracterizar a participação do complexo AP-1 na modulação negativa de CD4 por Nef de HIV-1, através do estudo funcional das duas isoformas de ?-adaptina, subunidades de AP-1. Utilizando a técnica de Pull-down demonstramos que Nef é capaz de interagir com ?2. Além disso, nossos dados de Imunoblot indicaram que a proteína ?2-adaptina, e não ?1-adaptina, é necessária no processo de degradação lisossomal de CD4 por Nef e que esta participação é conservada para degradação de CD4 por Nef de diferentes cepas virais. Ademais, por citometria de fluxo, o silenciamento de ?2, e não de ?1, compromete a diminuição dos níveis de CD4 por Nef da membrana plasmática. A análise por imunofluorêsncia indireta também revelou que a diminuição dos níveis de ?2 impede a redistribuição de CD4 por Nef para regiões perinucleares, acarretando no acúmulo de CD4, retirados por Nef da membrana plasmática, em endossomos primários. A depleção de ?1A, outra subunidade de AP-1, acarretou na diminuição dos níveis celulares de ?2 e ?1, bem como, no comprometimento da eficiente degradação de CD4 por Nef. Além disso, foi possível observar que, ao perturbar a maquinaria ESCRT via super-expressão de HRS (uma subunidade do complexo ESCRT-0), ocorreu um acumulo de ?2 em endossomos dilatados contendo HRS-GFP, nos quais também detectou-se CD4 que foi internalizado por Nef. Em conjunto, os resultados indicam que ?2-adaptina é uma importante molécula para o direcionamento de CD4 por Nef para a via ESCRT/MVB, mostrando ser uma proteína relevante no sistema endo-lisossomal. Ademais, os resultados indicaram que as isoformas ?-adaptinas não só possuem funções distintas, mas também parecem compor complexos AP-1 com diferentes funções celulares, já que apenas a variante AP-1 contendo ?2, mas não ?1, participa da regulação negativa de CD4 por Nef. Estes estudos contribuem para o melhor entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos na atividade de Nef, que poderão também ajudar na melhor compreensão da patogênese do HIV e da síndrome relacionada. Em adição, este trabalho contribui para o entendimento de processos fundamentais da regulação do tráfego de proteínas transmembrana no sistema endo-lisossomal. / The Human Immunodeficiency Virus (HIV) is the etiologic agent of Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). AIDS is a disease which has a global distribution, and it is estimated that there are currently at least 36.9 million people infected with the virus. During the replication cycle, HIV promotes several changes in the physiology of the host cell to promote their survival and enhance replication. The fast progression of HIV-1 in humans and animal models is closely linked to the function of an accessory protein Nef. Among several actions of Nef, one is the most important is the down-regulation of proteins from the immune response, such as the CD4 receptor. It is known that this action causes CD4 degradation in lysosome, but the molecular mechanisms are still incompletely understood. Nef forms a tripartite complex with the cytosolic tail of the CD4 and adapter protein 2 (AP-2) in clathrin-coated vesicles, inducing CD4 internalization and lysosome degradation. Previous research has demonstrated that CD4 target to lysosomes by Nef involves targeting of this receptor to multivesicular bodies (MVBs) pathway by an atypical mechanism because, although not need charging ubiquitination, depends on the proteins from ESCRTs (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport) machinery and the action of Alix, an accessory protein ESCRT machinery. It has been reported that Nef interacts with subunits of AP- 1, AP-2, AP-3 complexes and Nef does not appear to interact with AP-4 and AP-5 subunits. However, the role of Nef interaction with AP-1 or AP-3 in CD4 down-regulation is poorly understood. Furthermore, AP-1, AP-2 and AP-3 are potentially heterogeneous due to the existence of multiple subunits isoforms encoded by different genes. However, there are few studies to demonstrate if the different combinations of APs isoforms are form and if they have distinct functional properties. This study aim to identify and characterize cellular factors involved on CD4 down-modulation induced by Nef from HIV-1. More specifically, this study aimed to characterize the involvement of AP-1 complex in the down-regulation of CD4 by Nef HIV-1 through the functional study of the two isoforms of ?-adaptins, AP-1 subunits. By pull-down technique, we showed that Nef is able to interact with ?2. In addition, our data from immunoblots indicated that ?2- adaptin, not ?1-adaptin, is required in Nef-mediated targeting of CD4 to lysosomes and the ?2 participation in this process is conserved by Nef from different viral strains. Furthermore, by flow cytometry assay, ?2 depletion, but not ?1 depletion, compromises the reduction of surface CD4 levels induced by Nef. Immunofluorescence microscopy analysis also revealed that ?2 depletion impairs the redistribution of CD4 by Nef to juxtanuclear region, resulting in CD4 accumulation in primary endosomes. Knockdown of ?1A, another subunit of AP-1, resulted in decreased cellular levels of ?1 and ?2 and, compromising the efficient CD4 degradation by Nef. Moreover, upon artificially stabilizing ESCRT-I in early endosomes, via overexpression of HRS, internalized CD4 accumulates in enlarged HRS-GFP positive endosomes, where co-localize with ?2. Together, the results indicate that ?2-adaptin is a molecule that is essential for CD4 targeting by Nef to ESCRT/MVB pathway, being an important protein in the endo-lysosomal system. Furthermore, the results indicate that ?-adaptins isoforms not only have different functions, but also seem to compose AP-1 complex with distinct cell functions, and only the AP-1 variant comprising ?2, but not ?1, acts in the CD4 down-regulation induced by Nef. These studies contribute to a better understanding on the molecular mechanisms involved in Nef activities, which may also help to improve the understanding of the HIV pathogenesis and the related syndrome. In addition, this work contributes with the understanding of primordial process regulation on intracellular trafficking of transmembrane proteins.

O Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) é o agente etiológico da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). A AIDS é uma doença de distribuição mundial, e estima-se que existam atualmente pelo menos 36,9 milhões de pessoas infectadas com o vírus. Durante o seu ciclo replicativo, o HIV promove diversas alterações na fisiologia da célula hospedeira a fim de promover sua sobrevivência e potencializar a replicação. A rápida progressão da infecção pelo HIV-1 em humanos e em modelos animais está intimamente ligada à função da proteína acessória Nef. Dentre as diversas ações de Nef está a regulação negativa de proteínas importantes na resposta imunológica, como o receptor CD4. Sabe-se que esta ação resulta da indução da degradação de CD4 em lisossomos, mas os mecanismos moleculares envolvidos ainda são totalmente elucidados. Nef forma um complexo tripartite com a cauda citosólica de CD4 e a proteína adaptadora 2 (AP-2), em vesículas revestidas por clatrina nascentes, induzindo a internalização e degradação lisossomal de CD4. Pesquisas anteriores demonstraram que o direcionamento de CD4 aos lisossomos por Nef envolve a entrada do receptor na via dos corpos multivesiculares (MVBs), por um mecanismo atípico, pois, embora não necessite da ubiquitinação de carga, depende da ação de proteínas que compõem os ESCRTs (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport) e da ação de Alix, uma proteína acessória da maquinaria ESCRT. Já foi reportado que Nef interage com subunidades dos complexos AP-1, AP-2, AP-3 e Nef não parece interagir com subunidades de AP-4 e AP-5. Entretanto, o papel da interação de Nef com AP-1 e AP-3 na regulação negativa de CD4 ainda não está totalmente elucidado. Ademais, AP-1, AP-2 e AP-3 são potencialmente heterogêneos devido à existência de isoformas múltiplas das subunidades codificadas por diferentes genes. Todavia, existem poucos estudos para demonstrar se as diferentes combinações de isoformas dos APs são formadas e se possuem propriedades funcionais distintas. O presente trabalho procurou identificar e caracterizar fatores celulares envolvidos na regulação do tráfego intracelular de proteínas no processo de regulação negativa de CD4 induzido por Nef. Mais especificamente, este estudo buscou caracterizar a participação do complexo AP-1 na modulação negativa de CD4 por Nef de HIV-1, através do estudo funcional das duas isoformas de ?-adaptina, subunidades de AP-1. Utilizando a técnica de Pull-down demonstramos que Nef é capaz de interagir com ?2. Além disso, nossos dados de Imunoblot indicaram que a proteína ?2-adaptina, e não ?1-adaptina, é necessária no processo de degradação lisossomal de CD4 por Nef e que esta participação é conservada para degradação de CD4 por Nef de diferentes cepas virais. Ademais, por citometria de fluxo, o silenciamento de ?2, e não de ?1, compromete a diminuição dos níveis de CD4 por Nef da membrana plasmática. A análise por imunofluorêsncia indireta também revelou que a diminuição dos níveis de ?2 impede a redistribuição de CD4 por Nef para regiões perinucleares, acarretando no acúmulo de CD4, retirados por Nef da membrana plasmática, em endossomos primários. A depleção de ?1A, outra subunidade de AP-1, acarretou na diminuição dos níveis celulares de ?2 e ?1, bem como, no comprometimento da eficiente degradação de CD4 por Nef. Além disso, foi possível observar que, ao perturbar a maquinaria ESCRT via super-expressão de HRS (uma subunidade do complexo ESCRT-0), ocorreu um acumulo de ?2 em endossomos dilatados contendo HRS-GFP, nos quais também detectou-se CD4 que foi internalizado por Nef. Em conjunto, os resultados indicam que ?2-adaptina é uma importante molécula para o direcionamento de CD4 por Nef para a via ESCRT/MVB, mostrando ser uma proteína relevante no sistema endo-lisossomal. Ademais, os resultados indicaram que as isoformas ?-adaptinas não só possuem funções distintas, mas também parecem compor complexos AP-1 com diferentes funções celulares, já que apenas a variante AP-1 contendo ?2, mas não ?1, participa da regulação negativa de CD4 por Nef. Estes estudos contribuem para o melhor entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos na atividade de Nef, que poderão também ajudar na melhor compreensão da patogênese do HIV e da síndrome relacionada. Em adição, este trabalho contribui para o entendimento de processos fundamentais da regulação do tráfego de proteínas transmembrana no sistema endo-lisossomal. / The Human Immunodeficiency Virus (HIV) is the etiologic agent of Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). AIDS is a disease which has a global distribution, and it is estimated that there are currently at least 36.9 million people infected with the virus. During the replication cycle, HIV promotes several changes in the physiology of the host cell to promote their survival and enhance replication. The fast progression of HIV-1 in humans and animal models is closely linked to the function of an accessory protein Nef. Among several actions of Nef, one is the most important is the down-regulation of proteins from the immune response, such as the CD4 receptor. It is known that this action causes CD4 degradation in lysosome, but the molecular mechanisms are still incompletely understood. Nef forms a tripartite complex with the cytosolic tail of the CD4 and adapter protein 2 (AP-2) in clathrin-coated vesicles, inducing CD4 internalization and lysosome degradation. Previous research has demonstrated that CD4 target to lysosomes by Nef involves targeting of this receptor to multivesicular bodies (MVBs) pathway by an atypical mechanism because, although not need charging ubiquitination, depends on the proteins from ESCRTs (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport) machinery and the action of Alix, an accessory protein ESCRT machinery. It has been reported that Nef interacts with subunits of AP- 1, AP-2, AP-3 complexes and Nef does not appear to interact with AP-4 and AP-5 subunits. However, the role of Nef interaction with AP-1 or AP-3 in CD4 down-regulation is poorly understood. Furthermore, AP-1, AP-2 and AP-3 are potentially heterogeneous due to the existence of multiple subunits isoforms encoded by different genes. However, there are few studies to demonstrate if the different combinations of APs isoforms are form and if they have distinct functional properties. This study aim to identify and characterize cellular factors involved on CD4 down-modulation induced by Nef from HIV-1. More specifically, this study aimed to characterize the involvement of AP-1 complex in the down-regulation of CD4 by Nef HIV-1 through the functional study of the two isoforms of ?-adaptins, AP-1 subunits. By pull-down technique, we showed that Nef is able to interact with ?2. In addition, our data from immunoblots indicated that ?2- adaptin, not ?1-adaptin, is required in Nef-mediated targeting of CD4 to lysosomes and the ?2 participation in this process is conserved by Nef from different viral strains. Furthermore, by flow cytometry assay, ?2 depletion, but not ?1 depletion, compromises the reduction of surface CD4 levels induced by Nef. Immunofluorescence microscopy analysis also revealed that ?2 depletion impairs the redistribution of CD4 by Nef to juxtanuclear region, resulting in CD4 accumulation in primary endosomes. Knockdown of ?1A, another subunit of AP-1, resulted in decreased cellular levels of ?1 and ?2 and, compromising the efficient CD4 degradation by Nef. Moreover, upon artificially stabilizing ESCRT-I in early endosomes, via overexpression of HRS, internalized CD4 accumulates in enlarged HRS-GFP positive endosomes, where co-localize with ?2. Together, the results indicate that ?2-adaptin is a molecule that is essential for CD4 targeting by Nef to ESCRT/MVB pathway, being an important protein in the endo-lysosomal system. Furthermore, the results indicate that ?-adaptins isoforms not only have different functions, but also seem to compose AP-1 complex with distinct cell functions, and only the AP-1 variant comprising ?2, but not ?1, acts in the CD4 down-regulation induced by Nef. These studies contribute to a better understanding on the molecular mechanisms involved in Nef activities, which may also help to improve the understanding of the HIV pathogenesis and the related syndrome. In addition, this work contributes with the understanding of primordial process regulation on intracellular trafficking of transmembrane proteins.