Diante da busca por abordagens mais sustentáveis para o controle de insetos, os inibidores de peptidases de plantas surgem como uma ferramenta promissora para a proteção de culturas via obtenção de plantas transgênicas. Efeitos nocivos da ingestão de inibidores de peptidases de soja (IPS) sobre o desenvolvimento de Diatraea saccharalis já foram reportados em trabalhos anteriores, entretanto, esses efeitos não foram estudados em nível molecular para essa espécie. Esse trabalho teve como objetivos identificar e analisar a expressão gênica e a atividade de serino peptidases intestinais de D. saccharalis em resposta à ingestão de um concentrado ativo de inibidores de peptidases de soja, relacionando essas informações com a presença ou não de algum mecanismo adaptativo desse inseto em resposta à ingestão desses inibidores. Para isso, foi obtido o transcriptoma intestinal de lagartas de D. saccharalis no quinto ínstar do desenvolvimento, submetidas à ingestão crônica de IPS. Em seguida foram identificadas as sequências correspondentes a serino peptidases do tipo tripsinas e quimotripsinas nesse transcriptoma, as quais foram utilizadas para o estudo da expressão gênica relativa por RT-PCR quantitativo, em resposta à ingestão aguda (por 24 e 48 horas) e crônica e de 0,5% (m/v) de um concentrado ativo de IPS por lagartas de D. saccharalis no terceiro e no quinto ínstares do desenvolvimento larval. As mesmas sequências foram utilizadas para a proposição de filogenias, sendo comparadas inclusive com sequências de serino peptidases de Spodoptera frugiperda identificadas em outro estudo paralelo. Ensaios de atividade tríptica e quimotríptica foram realizados utilizando substratos específicos (BApNA e SApNA) para determinar o efeito da ingestão de IPS sobre a atividade enzimática e finalmente, a integridade e a atividade inibitória do IPS foram analisadas após sua passagem pelo trato digestório das lagartas. Os resultados obtidos permitiram concluir que, nas condições experimentais empregadas nesse estudo, as lagartas de D. saccharalis não foram capazes de modular a expressão gênica das serino peptidases em resposta à ingestão crônica ou aguda de IPS. Os resultados de atividade tríptica e quimotríptica em função da ingestão de IPS podem sugerir um sinergismo na ação dessas enzimas em lagartas do quinto instar. Não foram detectadas diferenças na atividade de tripsinas e quimotripsinas em lagartas do terceiro ínstar em função da ingestão de IPS. A separação eletroforética das proteínas das fezes de lagartas permitiu a visualização de uma banda com massa molecular em torno de 20 kDa possivelmente correspondente ao inibidor do tipo Kunitz presente em soja que, juntamente com os dados de atividade antitríptica das fezes, indicam que D. saccharalis não é capaz de hidrolisar esse inibidor como um mecanismo de adaptação à sua presença na dieta. / Given the importance of search for more sustainable approaches for pest control, plant peptidases inhibitors emerge as a promising tool for the protection of crops by obtaining transgenic plants. Harmful effects of soybean peptidases inhibitors (SPI) intake by Diatraea saccharalis on its development were already reported in previous studies, however, these effects have not been studied at the molecular level for this specie. This study aimed to identify and analyze the gene expression and the gut serine peptidases activity of D. saccharalis in response to the intake of an active extract of soybean peptidases inhibitors. These informations were related to the presence or absence of some adaptive mechanism of this insect in response to these inhibitors. The gut transcriptome of larvae of D. saccharalis in the fifth developmental instar was obtained, undergoing chronic intake of IPS. Then, sequences of serino peptidases like trypsin and chymotrypsin were identified and used for gene expression studies on a real-time PCR in response to acute (for 24 and 48 hours) and chronic intake of 0.5 % (w/v) of SPI active extract by larvae of D. saccharalis in the third and fifth instars of larval development. The same sequences were used to propose phylogenies, including comparisons with sequences of Spodoptera frugiperda serine peptidases identified in another parallel study. Tryptic and chymotryptic activity assays were performed using specific substrates (BApNA and SApNA) to determine the effect of the SPI intake on enzyme activity and finally, the integrity and the inhibitory activity of the SPI were analyzed after passing through the digestive tract of caterpillars. The results showed that under the experimental conditions employed in this study, the larvae of D. saccharalis were not able to modulate the gene expression of serine peptidases in response to acute or chronic SPI intake. The results of tryptic and chymotryptic activity due to the SPI intake can suggest a synergism in the action of these enzymes in larvae of the fifth developmental instar. SPI intake did not cause differences in enzymatic activity of third instar larvae. Electrophoretic separation of proteins from the feces of caterpillars enabled visualization of a band with a molecular mass around 20 kDa possibly corresponding to the Kunitz inhibitor present in soybean. The antitryptic activity of the feces indicates that D. saccharalis is not able to hydrolyze soybean peptidases inhibitor as a mechanism of adaptation to their presence in the diet.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniv., 2007. / Härtill 4 uppsatser.

Soybean [Glycine max (L.) Merrill] is the most important crop grown in Brazil and worldwide. Nevertheless, the yield is still limited by several issues in which the damages by caterpillars and stink bugs are main ones if not controlled efficiently. The pest control is usually achieved by insecticide application, which results in an increased production cost, disturb biological control, and causes contamination in harvest and environment, so it is necessary to develop news techniques aiming to reduce the amount of sprayed insecticides. The preset study was carried out in five soybean grown areas during 2010/11 and 2011/12. This experiment aimed to analyze the spatial and temporal distribution in order to perform site-specific control of caterpillars and stink bugs by using agriculture-precision tools for mapping and control of insects. In addition, the technical and economic effects of this approach were surveyed. The first chapter shows the site-specific control for caterpillars while the chapter two for stink bugs. The population of soybean caterpillars can be suppressed by site-specific approach where the population exceeds the economic threshold and therefore saving insecticide. The site-specific control for stink bugs in soybean allows save insecticide and decreases the bugs population, but causes outbreaks far beyond the economic threshold. Economically speaking, the site-specific control of caterpillars and stink bugs is possible, but requires further studies to optimize the sampling procedure. / A soja [Glycine max (L.) Merrill] é uma cultura de grande expressão no Brasil e no mundo, no entanto a sua produtividade ainda é limitada por diversos fatores, onde destacam-se os danos significativos causados pelas lagartas e percevejos quando não manejadas eficientemente. O controle destes insetos é geralmente feito com aplicações de inseticidas, o que ocasiona o aumento dos custos da lavoura, prejudica o controle biológico pela morte de inimigos naturais, e deixa resíduos tóxicos no produto colhido e no ambiente, por isso, se faz necessário desenvolver técnicas visando a sua utilização mais eficiente, que resulte em menores quantidades aplicadas. Este estudo foi realizado em cinco áreas de cultivo com soja nas safras 2010/11 e 2011/12 objetivando analisar a distribuição espacial e temporal e realizar o controle localizado de lagartas e percevejos em soja, utilizando técnicas de agricultura de precisão para o mapeamento e controle dos insetos. Também foi realizada a análise técnica e econômica deste sistema de manejo. O primeiro capítulo apresenta o estudo do controle localizado de lagartas e o segundo capítulo o estudo do controle localizado de percevejos em soja. A população de lagartas da soja pode ser controlada de forma localizada nos pontos onde a população ultrapassa o nível de controle, proporcionando economia de inseticida. O controle localizado de percevejos em soja permite economia de inseticida e reduz a população, mas não impede a reinfestação da área acima do nível de controle. Em termos econômicos, o controle localizado de lagartas e percevejos é viável, porém são necessários estudos para aperfeiçoar o sistema de amostragem.