Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-20T18:19:01Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO José Dayvid Ferreira da Silva.pdf: 839784 bytes, checksum: 287d11363cf24c40e3b1c3570966448e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T18:19:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO José Dayvid Ferreira da Silva.pdf: 839784 bytes, checksum: 287d11363cf24c40e3b1c3570966448e (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / CAPES / Plantas contêm lectinas, ligantes de carboidratos e proteínas hemaglutininantes, capazes de induzir respostas biológicas em células de plantas e animais. Portulaca elatior é uma planta tóxica para o gado e cabras. Este estudo identificou um tecido de P. elatior com atividade hemaglutinante (AH), isolado a lectina a partir dele e determinada às características da lectina isolada. Extratos de folhas, caule e raiz foram investigados e o extrato de raiz foi o único a apresentar HA, com isso foi selecionado para isolamento da lectina por cromatografia em coluna de quitina. A lectina de raiz de P. elatior (PeRoL) eluída da coluna de quitina apresentou peptídeos com 32 e 15 kDa na SDS-PAGE sob condições não redutoras e redutoras, respectivamente. A AH de PeRoL se manteve a 120ºC e numa faixa de pH de 4.0 a 8.0 e os íons Ca2+ e Mn2+ não estimularam a lectina. O dissacarídeo trealose foi o melhor carboidrato inibidor da AH. Ensaios revelaram que o extrato da raiz de P. elatior contêm trealose e apresentou uma AH de 4-1 e pós-purificado de 4096-1 enquanto o extrato tratado com trealase apresentou AH de 256-1. Estes resultados revelam que trealose é o inibidor endógeno da AH de PeRoL. PeRoL apresentou atividade bacteriostática contra Pseudomonas aeruginosa (CMI 32,5 µg/mL), Enterococcus faecalis (CMI 8,1 µg/mL) e Staphylococcus aureus (CMI 4,06 µg/mL) e atividade fungicida contra Candida albicans (CMI e CMF 16,5 µg/mL), Candida parapsilosis, Candida krusei e Candida tropicalis (CMI e CMF 15 µg/mL). O estudo demonstrou que a raiz de P. elatior contem PeRoL, um ligante de quitina e lectina antimicrobiana, bem como a trealose, o carboidrato inibidor de PeRoL. / Plants contain lectins, carbohydrate binding and hemagglutinin proteins, capable of induce biological responses in cells of plants and animals. Portulaca elatior is a plant toxic to cattle and goats. This study identified the P. elatior tissue with the best specific hemagglutinating activity (SHA), isolated the lectin from it and determined characteristics of isolated lectin. Leaf, stem and root extracts were investigated and the root extract, which was the one that presented HA, was selected to isolate lectin by chitin column chromatography. P. elatior root lectin (PeRoL) eluted from chitin column showed polypeptide bands with 32 and 15 kDa on SDS-PAGE under non-reducing and reducing conditions, respectively. The PeRoL HA was active at 120ºC and pH range from 4.0 to 8.0 and Ca2+ and Mn2+ did not affect its HA. The disaccharide threalose was the best carbohydrate inhibitor of HA. Assays revealed that the root extract containing threalose and showed HA 4-1 and post-purification 4096-1 while the root extract treated with threalase showed HA 256-1. These data revealed that trehalose is an endogenous inhibitor of PeRoL HA. PeRoL showed bacteriostatic activity against Pseudomonas aeruginosa (MIC 32.5 µg/mL), Enterococcus faecalis (MIC 8.1 µg/mL) and Staphylococcus aureus (MIC 4.06 µg/mL) and fungicide activity against Candida albicans (MIC and MFC 16.5 µg/mL), Candida parapsilosis, Candida krusei and Candida tropicalis (MIC and MFC 15 µg/mL). The study demonstrated that root of P. elatior contain PeRoL, a chitin-binding and antimicrobial lectin as well as threalose, a carbohydrate inhibitor of PeRoL.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-06-01T17:12:10Z No. of bitstreams: 1 TESE Maiara Celine de Moura.pdf: 6960708 bytes, checksum: a479e09581b7b68198b588dd6ecb0e5d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-01T17:12:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Maiara Celine de Moura.pdf: 6960708 bytes, checksum: a479e09581b7b68198b588dd6ecb0e5d (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / FACEPE / Bactérias são organismos procariontes capazes de se adaptar aos mais variados tipos de habitat; podem crescer e aderir a várias superfícies, formando comunidades complexas conhecidas como biofilmes. O desenvolvimento de biofilme, na maioria dos casos, resulta em riscos para a saúde em ambientes clínicos, devido a elevada patogênese, e causa perdas econômicas em diferentes setores da indústria, sendo a principal causa da biocorrosão. Estratégias de controle dos biofilmes envolve o uso de antibióticos e biocidas; entretanto, bactérias dentro de biofilmes são mais resistentes a vários tipos de tratamentos. Diversos mecanismos de resistência bacteriana aos antimicrobianos sintéticos são descritos. Pesquisas têm sido desenvolvidas com o objetivo de identificar compostos naturais capazes de agir frente a microrganismos planctônicos e em biofilmes visando aplicações médicas e industriais. As lectinas são proteínas que se ligam especificamente a carboidratos e podem ter atividades biológicas importantes, podendo atuar como agentes antibacterianos e antibiofilme. Este trabalho avaliou a atividade antibacteriana da lectina solúvel em água de sementes de Moringa oleifera (WSMoL) contra bactérias que podem estar envolvidas na biocorrosão e infecções humanas (Bacillus sp., Bacillus cereus, Bacillus pumillus, Bacillus megaterium, Micrococcus sp., Pseudomonas sp., Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas stutzeri e Serratia marcescens) investigando seu efeito no crescimento, sobrevivência e permeabilidade celular. Em adição, também estudamos a formação de biofilme por S. marcescens e Bacillus sp. (ambas bactérias sensíveis a WSMoL) e avaliamos o efeito de WSMoL na formação de biofilme e sobre biofilmes pré-estabelecidos para ambas as espécies. Um protótipo de revestimento de superfícies com WSMoL por técnica de imersão (dipping coating) e a viabilidade das células dentro de biofilmes desenvolvidos sob a superfície revestida com a lectina também foram determinados. WSMoL inibiu o crescimento bacteriano, induziu a aglutinação e promoveu o extravasamento de proteínas de todas as espécies bacterianas avaliadas. Efeito bactericida foi detectado contra Bacillus sp., B. pumillus, B. megaterium, P. fluorescens e S. marcescens. Microscopia de fluorescência de células de S. marcescens mostrou que WSMoL causou danos a sua estrutura. A lectina foi capaz de impedir a formação de biofilmes de S. marcescens e Bacillus sp., principalmente para Bacillus sp. a 41,6 e 20,8 μg/mL; o mecanismo de antiformação pode estar associado com a perda da viabilidade celular. WSMoL não destruiu a matriz de biofilmes pré-estabelecidos de S. marcescens, entretanto, as células aderidas apresentaram-se presas e danificadas em estruturas envolvidas pela lectina. Sobre biofilmes de Bacillus sp., a lectina a 208 μg/mL drasticamente reduziu o número de células aderidas a superfície. WSMoL espontaneamente aderiu a superfície de vidro produzindo uma superfície revestida com a área de 116 μg/cm2, sendo capaz de alterar a viabilidade de células de S. marcescens que aderiram a essa superfície e prevenir a adesão de células de Bacillus sp., impedindo a formação de biofilme, sem interferir na viabilidade. Esse trabalho demonstra o potencial de WSMoL como uma ferramenta no controle de biofilmes formados por bactérias corrosivas e patogênicas, que representam um desafio em ambientes clínicos e industriais. / Bacteria are prokaryotic organisms able to adapting to the most varied types of habitat; can grow and adhere to many surfaces, forming complex communities known as biofilms. Biofilm development, in most cases, results in health risks in clinical environments and causes economic losses in different industries sectors, being the main cause of biocorrosion. Control strategies of biofilms involves the use of antibiotics and biocides; however, bacteria whitin biofilms are more resistant to various treatments. Various mechanisms of bacterial resistance to antimicrobial synthetic compounds are described. Researches have been developed in order to identify natural compounds able to act against planktonic microorganisms and inside biofilms for medical and industrial applications. Lectins are proteins that bind specifically to carbohydrates and may have important biological activities, acting as antibacterial and antibiofilm agents. This work evaluated the antibacterial activity of a water-soluble Moringa oleifera seed lectin (WSMoL) against bacteria that could be involved in biocorrosion and human infections (Bacillus sp., Bacillus cereus, Bacillus pumillus, Bacillus megaterium, Micrococcus sp., Pseudomonas sp., Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas stutzeri and Serratia marcescens) by evaluating its effect on growth, survival and cell permeability. In addition, we also studied the formation of biofilm by S. marcescens and Bacillus sp. (both bacteria sensitive to WSMoL) and evaluated the effect of WSMoL on biofilm formation and under established biofilms for both strains. A prototype of WSMoL-coated surfaces by dipping coating and the viability of cells within biofilm developed under the coated-surface were also determinated. WSMoL inhibited the bacterial growth, induced agglutination and promoted the leakage of proteins from cells of all strains. Bactericidal effect was detected against Bacillus sp., B. pumillus, B. megaterium, P. fluorescens and S. marcescens. Fluorescence microscopy of S. marcescens cells showed that WSMoL caused damage to its structure. The lectin was able to impair biofilms formation of S. marcescens and Bacillus sp., mainly for Bacillus sp. at 41.6 and 20.8 μg/mL; the antibiofilm mechanism can be associated with the lost of cell viability. WSMoL did not destroy preformed S. marcescens biofilms; despite the fact that attached cells presented trapped and damaged in hollow structures made by lectin. On Bacillus sp. biofilm, the lectin at 208 μg/mL drastically reduced the number of attached cells on surface. WSMoL spontaneously adhere on glass surface producing a lectin-coated area at 116 μg/cm2 that was able to alter the viability of S. marcescens cells, which adhered to the surface and preventing Bacillus sp. attachment, impairing biofilm development, without interfering in cell viability. This work propose the use of WSMoL as a potential tool to control biofilms formed by corrosive and pathogenic bacteria, which pose a challenge in clinical and industrial settings.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-12T20:37:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Arthur Tenório Ribeiro Clark.pdf: 4721510 bytes, checksum: 77c32bc787cef13bf2d3a0fa3ee2312c (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-13T22:34:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Arthur Tenório Ribeiro Clark.pdf: 4721510 bytes, checksum: 77c32bc787cef13bf2d3a0fa3ee2312c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:34:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Arthur Tenório Ribeiro Clark.pdf: 4721510 bytes, checksum: 77c32bc787cef13bf2d3a0fa3ee2312c (MD5) Previous issue date: 2016-12-16 / Considerado um problema de saúde pública, o câncer tem tido um grande impacto em toda a comunidade, seja em países desenvolvidos ou em países em desenvolvimento. Em mulheres, destacam-se os cânceres de mama e útero, sendo o primeiro o de maior incidência entre as mulheres. Uma detecção precoce desses dois tipos de câncer pode significar um aumento da sobrevida do paciente e de sua cura. Uma das áreas de pesquisa voltada para o estudo do câncer é a busca por biomarcadores que possam ser úteis em sua detecção e/ou tratamento. É de notório conhecimento que uma expressão alterada de glicoconjugados de superfície celular podem contribuir para o fenótipo maligno em eventos oncogênicos. Entre os glicanos desses glicoconjugados, a polilactosamina (poliLacNAc) tem sido alvo de diversos estudos devido ao seu potencial papel em diversas eventos oncogênicos, em especial um envolvimento com o potencial metastático. Assim, a expressão de poliLacNAc e outros carboidratos (GlcNAc) foram avaliados, através de histoquímica com lectinas, em amostras normais e transformadas de colo uterino e mama em diferentes estágios de transformação. Também foram verificados a expressão, utilizando imunohistoquímica, de glicosiltransferases (MGAT5, β3GnT2 e β3GnT3) que podem alterar a expressão das poliLacNAc e galectina-3 (Gal-3), uma proteína que tem afinidade por polilactosaminas que também tem sido associada a eventos oncogênicos, incluído a metástase. Nas amostras de tumores de colo uterino foi observado a presença de cadeias de poliLacNAc foi observada mais expressas nas amostras com maior grau de transformação (carcinomas) quando comparado com as outras amostras normais e pré-malignas, além de que uma expressão nuclear também foi observada significantemente nesse tipo de amostra. Nas amostras de tecidos de mama as poliLacNAc foram pouco expressas em todos as amostras. No entanto, uma expressão de MGAT5, uma enzima que pode regular a expressão de poliLacNAc e que também associada à metástase foi mais observada nas amostras com grau de transformação mais elevado. Essas observações reforçam o potencial envolvimento das cadeias de poliLacNAc e de enzimas chaves que regulam sua expressão, como a MGAT5, durante os eventos de transformação oncogênica. / A public health problem, cancer has a major impact n the entire community, in developed countries or in developing countries. In women, breast and uterine cancers are the most prevalent, being breast cancer the first. An early detection of both cancer can allow an increasing of patient survival and rate of health. One of the goals of cancer science is the biomarker research to use them at detection and/or treatment. It is known that an altered expression of glycoconjugates of cell surface can contribute to the malignant phenotype at oncogenic events. Among these glycans, polylactosamine (polyLacNAc) has been target of many studies for its potential role in many oncogenic events, in especial at the metastatic potential. Thus, the expression of polyLacNAc and others carbohydrates (GlcNAc) was evaluated, using lectin histochemistry, in normal and transformed samples of uterine and breast tissue at different stages. It was also evaluated the expression, by immunohistochemistry, of glycosyltrasnferases (MGAT5, β3GnT2 e β3GnT3) which could regulate polyLacNAc chains and of galectin-3 (Gal-3), a binding protein for polyLacNAc which has been correlated to oncogenic events, including metastasis. At uterine samples, was observed the presence of polyLacNAc chains at high levels in samples which higher degree of transformation (carcinoma) when compared to the normal and pre-malignant samples, and was observed a significant nuclear expression at these samples. In breast samples, polyLacNAc was observed at lower levels at all samples. Besides, MGAT5 expression was observed at higher levels in samples which higher transformation degree. These findings reinforces the potential involvement of polyLacNAc chains and the enzymes involved in its expression, like MGAT5, at oncogenic events.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-12T21:08:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Ana Patricia Silva de Oliveira.pdf: 5111129 bytes, checksum: af79056aff11b9b98d1feb7c14777b44 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-17T20:07:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Ana Patricia Silva de Oliveira.pdf: 5111129 bytes, checksum: af79056aff11b9b98d1feb7c14777b44 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-17T20:07:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Ana Patricia Silva de Oliveira.pdf: 5111129 bytes, checksum: af79056aff11b9b98d1feb7c14777b44 (MD5) Previous issue date: 2016-07-27 / FACEPE / Sementes de Moringa oleifera contêm lectina solúvel em água (WSMoL) que possui atividades larvicida, ovicida e estimulante de oviposição sobre Aedes aegypti e atividade termiticida contra Nasutitermes corniger. Esta tese descreve a purificação e caracterização da lectina WSMoLᴄ a partir de extrato aquoso de torta de moringa, co-produto obtido após extração do óleo, seus efeitos na sobrevivência de larvas, ovos e na oviposição de A. aegypti, a atividade inseticida sobre N. corniger e os efeitos de extratos, WSMoL e WSMoLC na sobrevivência e nutrição de insetos Sitophilus zeamais. WSMoLᴄ foi extraída em água destilada, fracionamento com sulfato de amônio e cromatografia em coluna de quitina. A lectina foi avaliada quanto à especificidade a carboidratos, por SDS-PAGE seguida de espectrometria de massas e estabilidade estrutural. Atividade larvicida contra A. aegypti foi determinada incubando larvas L4 por 24 h com o extrato ou WSMoLᴄ. A resistência da lectina à degradação por proteases digestivas foi determinada. Atividade ovicida de WSMoLᴄ foi avaliada incubando ovos com a lectina por 72 h e o efeito na oviposição foi realizado com fêmeas grávidas postas por 14 h em gaiolas contendo recipientes com água destilada e outro com lectina. Atividade termiticida foi avaliada em placas de Petri contendo discos de papel de filtro impregnados com WSMoLᴄ. Para avaliar a atividade inseticida contra S. zeamais, os insetos foram incubados por 7 dias em placas de Petri contendo dieta suplementada com extrato de sementes íntegras, extrato da torta, WSMoL ou WSMoLᴄ. A sobrevivência e parâmetros nutricionais foram avaliados. A interação de WSMoLᴄ com enzimas digestivas dos insetos também foi avaliada. WSMoLᴄ é uma proteína formada por α-hélices e apresentou duas bandas polipeptídicas (15 e 20 kDa) em SDS-PAGE. Análise por espectrometria de massas revelou similaridades com outras proteínas de sementes de moringa. A atividade hemaglutinante de WSMoLᴄ foi inibida por frutose, glicose, manose, N-acetilglucosamina e galactose. A lectina manteve sua estrutura secundária e terciária quando incubada em até 4 M de uréia, aquecida até 65ºC ou submetida a pressões menores que 2,7 kbar. Com relação aos efeitos sobre A. aegypti, a lectina apresentou atividades larvicida (CL₅₀ de 0,89 mg/mL) e ovicida (CE₅₀ de 0,13 mg/mL) e efeito estimulante de oviposição (0,1 mg/mL). WSMoLC mostrou-se resistente à degradação por proteases larvais e teve efeito estimulatório nas atividades de α-amilase e proteases totais e inibitório na atividade de tripsina. A lectina apresentou atividade termiticida para soldados (CL₅₀ de 0,629 mg/mL, 7 dias) e operários (CL₅₀ de 0,361 mg/mL, 6 dias) de N. corniger, e inibiu a atividade de endoglucanase, exoglucanase e α-amilase em extratos de intestino dos cupins. O extrato da torta não causou mortalidade significativa de S. zeamais, diferentemente do extrato obtido a partir das sementes íntegras (CL₅₀ de 214,6 mg/g) que apresentou ação deterrente moderada a forte. WSMoL e WSMoLᴄ causaram mortalidade significativa de S. zeamais, porém apenas WSMoLᴄ foi deterrente. Ambas lectinas apresentaram efeito estimulatório sobre a atividade de tripsina. Como conclusão, lectina com valor biotecnológico como agente inseticida pode ser recuperada a partir da torta de moringa. / Moringa oleifera seeds contain a water-soluble lectin (WSMoL) which showed larvicidal, ovicidal and oviposition-stimulant activities on Aedes aegypti and termiticidal activity against Nasutitermes corniger. This thesis describes the purification and characterization of lectin WSMoLᴄ from aqueous extract of moringa seed cake, by-product resulting after oil extraction, your effects on the survival of larvae, eggs and on the oviposition of A. aegypti, the insecticidal activity on N. corniger and the effects of extracts, WSMoL and WSMoLᴄ on survival and nutrition of Sitophilus zeamais adults. WSMoLᴄ was extracted in distilled water, fractionation with ammonium sulphate and chitin chromatography column. The lectin was evaluated for carbohydrate specificity, by SDS-PAGE followed by mass spectrometry, and structural stability. Larvicidal activity against A. aegypti was determined incubating L4 larvae for 24 h with extract or WSMoLᴄ. The resistance of the lectin to degradation by digestive proteases was determined. WSMoLᴄ ovicidal activity was evaluated incubating eggs with lectin for 72 h and the effect on oviposition was performed with females were put in cages for 14 h with a vessel containing distilled water and other with lectin. Termiticidal activity was evaluated in Petri plates containing filter paper discs impregnated with WSMoLᴄ. To assess insecticidal activity against S. zeamais, the insects were incubated for 7 days in Petri dishes containing diet supplemented with extract from whole seeds, cake extract, WSMoL or WSMoLᴄ. Survival rates and nutritional parameters were evaluated. The interaction of WSMoLC with digestive enzymes of the insects was also evaluated. WSMoLᴄ is a protein formed by α-helices and showed two polypeptide bands (15 and 20kDa) on SDS-PAGE. Analysis by mass spectrometry revealed similarities with other proteins from moringa seeds. The hemagglutinating activity of WSMoLᴄ was inhibited by fructose, glucose, mannose, N-acetylglucosamine and galactose. The lectin maintained its secondary and tertiary structures when incubated up to 4 M of urea, heated to 65°C or subjected to pressures lower than 2.7 kbar. With respect to effects on A. aegypti, the lectin presented larvicidal (LC₅₀ of 0.89 mg/mL) and ovicidal (EC₅₀ of 0.13 mg/mL) activities and oviposition-stimulant effect (0.1 mg/mL). WSMoLᴄ was resistant to degradation by larval proteases and had a stimulatory effect on α-amylase and total protease activities larvae and inhibitory on trypsin activity. The lectin presented termiticidal activity on soldiers (LC₅₀ of 0.629 mg/mL, 7 days) and workers (LC₅₀ of 0.361 mg/mL, 6 days) of N. corniger and inhibited endoglucanase, exoglucanase and α-amylase activities from termite gut extracts. The extract from seed cake did not cause significant mortality of S. zeamais, unlike the extract obtained from the whole seeds (LC₅₀ 214.6 mg/g) that showed moderate to strong deterrent action. WSMoL and WSMoLᴄ caused significant mortality of S. zeamais, only WSMoLᴄ exerted deterrent action. Both lectins showed stimulatory effect on trypsin activity. In conclusion, a lectin with biotechnological value as an insecticide agent can be recovered from the moringa seed cake.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-25T17:29:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Benny Ferreira de Oliveira.pdf: 471392 bytes, checksum: 7bdaf58f58009fe8226515f70cba5175 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-27T21:43:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Benny Ferreira de Oliveira.pdf: 471392 bytes, checksum: 7bdaf58f58009fe8226515f70cba5175 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-27T21:43:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Benny Ferreira de Oliveira.pdf: 471392 bytes, checksum: 7bdaf58f58009fe8226515f70cba5175 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / FACEPE / Lectinas são proteínas capazes de formar ligação com carboidratos de forma reversível. Os anticorpos ou imunoglobulinas (Ig) também de origem proteica, são gerados pelo sistema imune, e possuem elevado padrão de especificidade aos antígenos. Quando purificados e imobilizados servem como reagentes em diagnósticos de contaminantes químicos e biológicos, além disso quando desenvolvidos contra lectinas são capazes de reconhecer proteínas homólogas. Este trabalho teve como objetivo empregar um protocolo simplificado para a purificação da lectina coagulante de sementes de Moringa oleifera (cMoL), avaliar seu potencial antimicrobiano bem como desenvolver anticorpo contra a lectina. A caracterização parcial foi efetuada através de eletroforeses para proteínas nativas, bem como eletroforese contendo sulfato sódico de dodecila (SDS-PAGE) na presença de agente redutor. A purificação de cMoL com gel de guar produzido pelo protocolo desenvolvido neste trabalho foi eficiente; a atividade hemaglutinante específica (AHE) da lectina foi de 2.500. De acordo com a eletroforese a proteína purificada é básica e possui o mesmo padrão de massa molecular da cMoL anteriormente obtida por gel de guar utilizando protocolo previamente descrito. Também foram realizados os seguintes testes de atividade biológica: ensaio hemolítico com o extrato, fração e a lectina purificada da M. oleifera, preparações que não apresentaram hemólise das hemácias em todas as concentrações testadas; um ensaio de atividade antibacteriana, com a lectina purificada no qual em concentração de 10 mg/mL, houve inibição do crescimento das espécies Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Serratia sp. e Bacillus subtilis, não houve resultado com a espécie Proteus mirabilis; e efeito bactericida não foi observado para nenhuma linhagem. cMoL inibiu as espécies leveduriformes Candida albicans, C. krusei, C. tropicales e C. glabrata; efeito fungicida foi detectado nas espécies C. albicans e C. tropicales. Um anticorpo policlonal contra a lectina foi desenvolvido e poderá após purificação ser caracterizado e aplicado a imunoensaios. Conclusivamente, a metodologia utilizada poderá servir como base para futuras aplicações de cMoL purificada à homogeneidade. A lectina não promove efeito hemolítico em eritrócitos humanos do sangue tipo O. Os ensaios antimicrobianos revelaram maior toxicidade para os fungos comparados às bactérias. Os resultados da imunodifusão foram positivos na segunda inoculação ocorrendo precipitação entre IgG, extrato e lectina demonstrando que cMoL é imunogênica. / Lectins are proteins that can form carbohydrate binding reversibly. Antibodies or immunoglobulins (Ig) also of protein origin, are generated by the immune system, and have a high specificity to the antigens. When purified and immobilized they serve as reagents in diagnostics of chemical and biological contaminants, furthermore when developed against lectins they are able to recognize homologous proteins. The objective of this work was to employ a simplified protocol for the purification of Moringa oleifera seed coagulant lectin (cMoL), to evaluate its antimicrobial potential as well as to develop antibody against the lectin. Partial characterization was performed by electrophoresis for native proteins, as wel as sodium dodecyl sulphate electrophoresis (SDS-PAGE) in the presence of reducing agent. The purification of cMoL with guar gel produced by the protocol developed in this work was efficient; The specific hemagglutinating activity (AHE) of the lectin was 2,500. According to the electrophoresis the purified protein is basic and has the same molecular mass standard of cMoL previously obtained by guar gel using protocol previously described. The following biological activity tests were also performed: hemolytic assay with extract, fraction and purified lectin of M. oleifera, in which all preparations did not show red cell hemolysis at all concentrations tested, an antibacterial activity assay with Purified lectin in which at a concentration of 10 mg / mL, inhibition of the growth of the species Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Serratia sp. And Bacillus subtilis, there was no result with the species Proteus mirabilis; A bactericidal effect was not observed for any one lineage. CMoL inhibited yeast species Candida albicans, C. krusei, C. tropicales and C. glabrata; Fungicidal effect was detected in C. albicans and C. tropicales species. A polyclonal antibody against the lectin has been developed and may after purification be characterized and applied to immunoassays. Conclusion, the methodology used may serve as a basis for future applications of purified cMoL to homogeneity. The lectin does not promote hemolytic effect in human erythrocytes of type O blood. The antimicrobial assays revealed greater toxicity to fungi compared to bacteria. The immunodiffusion results were positive for second inoculation with precipitation occurring between IgG, extract and lectin demonstrating that cMoL is immunogenic.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-25T20:00:56Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Larissa Chaves Costa Franca.pdf: 3895385 bytes, checksum: 85214a18492f2479f37dac3c583e539d (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-27T22:20:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Larissa Chaves Costa Franca.pdf: 3895385 bytes, checksum: 85214a18492f2479f37dac3c583e539d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-27T22:20:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Larissa Chaves Costa Franca.pdf: 3895385 bytes, checksum: 85214a18492f2479f37dac3c583e539d (MD5) Previous issue date: 2017-03-30 / FACEPE / Novas e eficazes estratégias para o tratamento do câncer são um grande desafio atualmente. Entre as moléculas anticancerígenas disponíveis no mercado, a β-lapachona (β-lap) tem atraído a atenção por sua potente atividade antitumoral. A encapsulação da β-lap em lipossomas sítio-específicos é uma alternativa na melhoria da eficácia terapêutica, direcionando às células cancerígenas, promovendo assim uma redução dos efeitos adversos. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi encapsular a β-lap em lipossomas sítio-específicos utilizando a Concanavalina A (ConA) como molécula de vetorização às células do câncer. Os lipossomas com concentração lipídica total de 60 mM foram preparados pelo método de hidratação do filme lipídico seguido de sonicação. Utilizando o mesmo método, lipossomas contendo β-lap (0,5 mg/mL) foram produzidos. Diâmetro médio das vesículas, potencial zeta, conjugação da ConA e a eficiência de encapsulação (EE%) da β-lap nos lipossomas foram avaliados. Calorimetria de titulação isotérmica (ITC) foi usada para medir a energia de ligação entre as biomoléculas que compõem o lipossoma. A atividade da ConA foi avaliada antes e depois da conjugação na superfície dos lipossomas pelo ensaio de hemaglutinação. Finalmente, a captura dos lipossomas contendo ConA pelas células de câncer de mama (MCF-7) foi realizada por microscopia de fluorescência. Os lipossomas não revestidos e revestidos com ConA apresentaram tamanho e potencial zeta variando de 97,46 ± 2,01 nm a 152,23 ± 2,73 nm e de -6,83 ± 0,28 mV a -17,23 ± 0,64 mV, respectivamente. A conjugação da ConA e a EE% da β-lap foram aproximadamente 100%. A conjugação da ConA às biomoléculas foi avaliada por parâmetros termodinâmicos (ΔH, ΔS e ΔG) demostrando processos favoráveis e espontâneos. O ensaio de hemaglutinação confirmou que a ConA permaneceu ativa nos lipossomas, uma vez que o Lipo-ConA e o Lipo-PEG-ConA foram capazes de hemaglutinar as hemácias em 128⁻¹ e 256⁻¹, respectivamente, fato não observado com os lipossomas sem ConA. Finalmente, imagens obtidas a partir da microscopia de fluorescência indicaram uma maior captura dos lipossomas revestidos com ConA pelas células MCF-7 após 15 minutos e 24 horas de incubação. Portanto, a captura dos lipossomas pelas células MCF-7 foi influenciada pela presença da ConA na superfície dos mesmo, sugerindo a sua aplicação como um promissor sistema sítio-específico para direcionar a β-lap às células cancerígenas. / New and effective strategies for the treatment of cancer are currently a big challenge. Among the available anticancer molecules in the market, β-lapachone (β-lap) has attracted attention for its potent antitumor activity. The encapsulation of β-lap in site-specific liposomes is an alternative to improving therapeutic efficacy by targeting to the cancer cells, promoting a reduction of adverse effects. The aim of this work was to encapsulate β-lap in site-specific liposomes using Concanavalin A (ConA) as a targeting molecule to cancer cells. Liposomes with total lipid concentration of 60 mM were prepared by the lipid film hydration method followed by sonication. Using same method, liposomes containing β-lap (0.5 mg / mL) were produced. Mean vesicle diameter, zeta potential, ConA conjugation and encapsulation efficiency (EE%) of β-lap in liposomes were evaluated. Isothermal titration calorimetry (ITC) was used to measure the binding energy between the biomolecules, which compose the liposomes. ConA activity was evaluated before and after the surface conjugation of the liposomes by the hemagglutination assay. Finally, the uptake of ConA-coated liposomes by human breast cancer cells (MCF-7) was performed by fluorescence microscopy. Uncoated and ConA-coated liposomes showed size and zeta potential ranging from 97.46 ± 2.01 nm to 152.23 ± 2.73 nm and -6.83 ± 0.28 mV at -17.23 ± 0 , 64 mV, respectively. The conjugation of ConA and EE% of β-lap were approximately 100%. The confirmation of lipid and ConA conjugation by thermodynamic parameters (ΔH, ΔS and ΔG) was determined by favorable and spontaneous process. Hemagglutination assay confirmed that ConA remained active in the liposomes, once Lipo-ConA and Lipo-PEG-ConA were able to hemagglutinate red blood cells at 128⁻¹ and 256⁻¹, respectively, this fact was not observed with liposomes without ConA. Finally, images obtained from fluorescence microscopy indicated a greater capture of the ConA coated liposomes by MCF-7 cells after 15 minutes and 24 hours of incubation. Therefore, the capture of liposomes by MCF-7 cells was influenced by the presence of ConA on the surface of them, suggesting its application as a promising site-specific system to direct β-lap to the cancer cells.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-07T19:15:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE José Helton de Vasconcelos Arcoverde.pdf: 4248506 bytes, checksum: c96e909d615ef1e32fb6844d2f3bf682 (MD5) / Rejected by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br), reason: on 2018-08-13T21:22:05Z (GMT) / Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-13T21:29:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE José Helton de Vasconcelos Arcoverde.pdf: 4248506 bytes, checksum: c96e909d615ef1e32fb6844d2f3bf682 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-15T20:03:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE José Helton de Vasconcelos Arcoverde.pdf: 4248506 bytes, checksum: c96e909d615ef1e32fb6844d2f3bf682 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-15T20:03:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE José Helton de Vasconcelos Arcoverde.pdf: 4248506 bytes, checksum: c96e909d615ef1e32fb6844d2f3bf682 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / FACEPE / Este trabalho teve como objetivos realizar um screening com diversas espécies da Caatinga, isolar, caracterizar e testar quimicamente moléculas bioativas presentes nas folhas de Manilkararufula (Maçaranduba), visando agregar valor biotecnológico às plantas desse bioma. Foram avaliadas 28 espécies vegetais quanto à presença de lectinas, a partir do teste de atividade hemaglutinante (AH), e inibição de tripsina. Utilizando aparelho soxhlet deferentes extratos orgânicos foram preparados, em ordem eluotropica, com folhas de M. rufula, utilizando os solventes clorofórmio, acetato de etila e metanol, e o perfil fitoquímico dos extratos obtidos traçado por cromatografia em camada delgada (CCD). Testes de atividade antioxidante,invitro, com os extratos foram realizados pelos métodos de DPPH e Fosfomolibidênio, e os mesmos tiveram ainda seus conteúdos de flavonoides determinados. A ação protetora de DNA também foi avaliada para os extratos e a lectina obtida.A atividade antimicrobiana foi realizada por diluição seriada em microplaca contra seis espécies de bactérias.Neste estudo foi avaliada ainda a atividade termiticida para cada um dos extratos obtidos.Uma lectina foi obtida a partir do extrato salino das folhas de M.rufula, aprengando-se métodos tradicionais de purificação, como fracionamento salino e cromatografia de afinidade. Dentre as espécies analisadas, 20 apresentaram AH, onde as concentrações proteicas nos extratos salinos variaram de 0,95 a 20,88 mg/mL, e 21 foram capazes de inibir, em seus extratos, a atividade de tripsina em algum nível. O ensaio em CCD revelou pouca diversidade de compostos secundários nas folhas de M. rufula, sendo encontrados heterosídeos cianogênicos, flavonoides, triterpenos, esteroides e taninos. Os melhores resultados de atividade antioxidante foram obtidos com os extratos preparados com metanol e acetato de etila, os quais apresentaram excelente sequestro de radicais livres a uma concentração de 200 μg/mL. Nestes extratos também foram encontradas uma alta concentração de compostos fenólicos e flavonódies, os mesmos também apresentaram atividade protetora de DNA e mostraram-se eficazes como agentes antimicrobianos, atuando contra algumas cepas de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Os três extratos obtidos apresentaram atividade termiticida com eliminação de 100% dos insetos em até 48 horas. A lectina foi obtida por cromatografia em suporte de quitina e mostrou-se altamente termoestável, mantendo sua AH mesmo quando submetida a estresses de calor e resistente a variações de pH. A lectina não teve sua AH alterada pela presença de íons, e em SDS-PAGE observou-se a presença de duas bandas com 42,3 e 36,2 kDa. Esta proteína também apresentou atividade protetora de DNA e antibacteriana contra M. luteus. Este é o primeiro relato que apresenta M. rufula como uma espécie vegetal com potencial biotecnológico, tornando-a uma promissora fonte de novos compostos bioativos. / This work had as objectives to perform a screening with several species from Caatinga, isolate, characterize and test chemically bioactive molecules present in the leaves of Manilkara rufula (maçaranduba), aiming to add value to this biome plant biotechnology. Twenty eight plant species were evaluated for the presence of lectins, from the hemagglutinating activity (AH) and inhibition of trypsin. Using soxhlet apparatus different organic extracts were prepared, in order eluotropic, with leaves of M. rufula, using solvents chloroform, ethyl acetate and methanol. The phytochemical profile of extracts obtained charted by thin-layer chromatography (TLC). Testing of antioxidant activity in vitro with extracts were carried out by methods of DPPH and phosphomolybdeno and they even had their content of flavonoids determined. The protective action of DNA has also been evaluated for lectin and extracts. The antimicrobial activity was performed by serial dilution in microplate against six species of bacteria. In this study was to evaluate the termiticide activity for each of the extracts obtained. A lectin was obtained from the saline extract of leaves of M. rufula, utility traditional methods of purification, as salt fractionation and affinity chromatography. Among the species analyzed, 20 presented AH, where protein concentrations in saline extracts ranged from 0.95 to 20.88 mg/mL, 21 were able to inhibit, in their statements, the activity of trypsin on some level. The test in TLC revealed little diversity of secondary compounds in this tissue, and found cyanogenic glycosides, flavonoids, triterpenes, steroids and tannins. The best results were obtained with antioxidant activity of the extracts prepared from methanol and ethyl acetate, which showed excellent scavenging free radicals at a concentration of 200/mL. In these extracts were also found a high concentration of phenolic compounds and flavonods, the same also presented protective activity of DNA and proved effective as antimicrobial agents, acting against a few strains of Gram-positive and Gram-negative bacteria. The three extracts obtained showed termiticide activity with 100% elimination of insects within 48 hours. The lectin was obtain by chromatography on chitin support and was highly thermostable, maintaining its HA even when subjected to heat and resistant to pH changes. The lectin did not have its HA amended by presence of ions, and SDS-PAGE showed the presence of two bands with 42.3 and 36.2 kDa. This protein also presented DNA and antibacterial protective activity against m. luteus. This is the first report that presents M. rufula as a species with biotechnological potential, making it a promising source of new bioactive compounds.

Orientador : Antonio Roberto Martins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-28T10:36:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teixeira_SilviaAparecida_M.pdf: 26239293 bytes, checksum: 7ea908b86edaba1ac80dbcf01653696f (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Lectinas são proteínas ligantes de carboidratos de origem não Imune, que aglutinam células e/ou precipitam glicoconjugados. Sua abundância na natureza e a facilidade de serem obtidas fez com que passassem a ser utilizadas como ferramentas valiosas para detecção, isolamento e caracterização de glicoproteínas solúveis ou de membrana. Seu uso tem permitido detectar glicoproteínas envolvidas nas diferentes etapas do desenvolvimento. Na neurogênese cerebelar, por exemplo, lectinas têm sido usadas para detectar e diferenciar componentes moleculares envolvidos nos processos de proliferação, diferenciação, migração celular e formação sináptica. Poderíamos citar, como exemplo típico dessas ferramentas, a lectina KM+, extraída da semente de jaca (Artocarpus integrifolia), recentemente purificada que apresenta especificidade para D(+)mannose e propriedade de induzir a migração de neutrófilo por mecanismos haptotático. Seus ligantes têm sido identificados na superficie e no citoplasma de células endoteliais, na superficie de células epiteliais alveolares, na membrana basal e no tecido conjuntivo intersticial de pulmão de rato. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Lectins are non-immune, non-enzymatic proteins that bind carbohydrates. They can aglutinate cells and precipitate glyconconjugates. Since they are abundant in plants and can be easily purified, they are commonly used as probes to detect, isolate and characterize soluble or membrane-bound glycoproteins. They have been employed to detect glycoproteins involved in different stages of neural development. In the cerebellar neurogenesis, for example, lectins have been used to detect and differentiate molecular components involved in the processes of cellular proliferation, differentiation and migration, as well as in synapse formation. ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Sergio Marangoni / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T11:16:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pando_LuziaAparecida_D.pdf: 10632318 bytes, checksum: 45612dfee93908b50ef1254a32637591 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: As leguminosas contêm quantidades relativamente grandes de proteínas e dentre essas proteínas destacam-se os inibidores de proteinases e lectinas. O objetivo do presente trabalho foi estudar o efeito de inibidores de proteinases sobre o desenvolvimento da Diatraea saccharalis e sobre microrganismos fitopatogênicos, assim como caracterizar físico-quimicamente uma lectina de Crota/aria paulina e estudar suas propriedades biológicas. A lectina das sementes de Crota/aria paulina foi purificada por cromatografia de troca iônica em coluna de DEAE Sepharose Fast Flow e em cromatografia de fase reversa-HPLC. A massa molecular determinada por eletroforese em gel de poliacrilamida em condições redutoras e não redutoras foi calculada em aproximadamente 30 kDa. A hemaglutinação induzida por CrpL sobre eritrócitos humanos e bovinos é inibida por N-acetil-D-galactosamina, D-galactose e pela glicoproteína asialofetuína. A lectina não requer íons divalentes para sua atividade, pois não é inibida por EDT A. A análise do conteúdo de carboidrato para CrpL indicou que esta lectina contém aproximadamente 6,2% de carboidratos, utilizando galactose e manose como padrões, o que comprova que esta lectina é uma glicoproteína. A composição global de aminoácido mostrou que a lectina é rica em resíduos de aminoácidos prolina, glicina, serina e alanina, e não apresenta resíduos de histidina, arginina, metionina e fenilalanina. A seqüência N-terminal apresentou-se bloqueada e os poucos resíduos obtidos não mostraram qualquer homologia com outras lectinas da família leguminosa. Estudos de agregação plaquetária induzida por ADP com plasma humano até a concentração de 100ug/ml de CrpL, demonstraram não haver modulação significativa sobre plaquetas. O estudo envolvendo CrpL sobre bactérias Xanthomonas campestris pv. phaseoli e Xanthomonas campestris pv. passiflorae, demonstrou que esta lectina afetou o crescimento dessas bactérias. As propriedades antimetabólicas dos inibidores de proteinases (IPs) de soja e feijão, foram determinadas "in vivo" após a incorporação em dieta artificial, com avaliação do potencial de crescimento de populações da broca-da-cana Diatraea saccharalis (Lepidoptera: Pyralidae). Os inibidores foram incorporados em dieta artificial à base de farelo de soja e levedura de canade-açúcar. O efeito dos inibidores sobre o desenvolvimento das lagartas de D. saccharalis foi avaliado aos 16 dias de idade para os diferentes tratamentos (T1, T2 e T3), através da viabilidade larval; % de eficiência de lagartas aptas; peso das lagartas e peso de pupas com 24 horas. Os inibidores de tripsina de soja e de feijão atrasaram o desenvolvimento das lagartas, além de interferir no peso. Foram analisados também, os inibidores de CpTI, CjTI, CsTI, SBTI e PvTI sobre o crescimento micelial de fungos do gênero Fusarium e Colletotrichum. Os experimentos foram conduzidos sobre placas de Petri, usando meio de BDA para Fusarium sp e meio de aveia para o Coletotrichum, com 10 repetições. Como controle foi usada água esterilizada. As placas foram deixadas á 28°C no escuro. Quando o controle alcançou o diâmetro total da placa, o experimento foi interrompido. Os inibidores mostraram diferentes efeitos sobre o crescimento de Fusarium s p "in vitro". O CpTI não mostrou qualquer efeito em relação ao controle, e o PvTI não teve efeito fungicida mas reduziu a concentração de hifas. Inibidor de CjTI foi capaz de ocasionar mudanças na morfologia do fungo. CjTI and PvTI mostrou efeito fungistático sobre o crescimento de Colletotrichum graminicola, sendo que o inibidor PvTI mostrou-se mais eficaz no controle do crescimento micelial. O SBTI não foi efetivo contra quaisquer espécies de fungos estudados. Estudos envolvendo CpTI e PvTI sobre a germinação de esporos de fungos da espécie Ustilago scitaminia, demonstrou que esses inibidores não têm efeitos sobre esses fungos. Inibidores de CpTI foram capazes de inibir o crescimento de duas espécies de bactérias, assim como BvcTI foi capaz de inibir o crescimento de Xanthomonas sp da cana de açúcar. PvTI não mostrou efeito sobre essas bactérias. Os resultados obtidos sugerem que CrpL, assim como os inibidores de proteinases estudados de várias sementes de leguminosas, podem estar envolvidos no mecanismo de defesa contra microrganismos fitopatogênicos. Os resultados com inibidores de serinoproteinases, de feijão e soja, sugerem, também, a possibilidade desses inibidores serem utilizados como ferramentas no estudo de plantas transgênicas de cana-de-açúcar no controle da broca (Diatraea saccharalis) / Abstract: A naturaly occuring lectin activity was detected in the extract of Crota/aria paulina seeds. The crude lectin extract was prepared by grounding the seeds followed by acid extraction with glycine 0.1 M I NaCI 0.15 buffer, pH 2.6. The lectin from C. paulina was purified by ion-exchange and reverse fase chromatography. The lectin purified was assayed with human (A, S, AS, O) and animal (Cow) erythrocytes and it was nonspecific for any human blood group. This lectin agglutinated native and trypsintreated erythrocytes and it requires no Ca++ or Mg++ for hemagglutination activity. Hemagglutinating inhibitory assay was performed with mono and disaccharides solution (100mM) and it was inhibited by N-acetyl-D-galactosamine, D-galactose and byasialofetuin. Studies performed in SDS-PAGE (12,5%) of purified lectin under non-reducing and reducing conditions showed a single band of 30 kDa. The data obtained for the lectin of Crota/aria paulina, when compared to the one obtained from Crota/aria juncea and Crota/aria striata showed that in spite of belonging to the same genus they possess different agglutination properties and specificity for carbohydrate. On ADPinduced platelet aggregation assay with human plasma up to 100ug/ml of the lectin showed no significant modulation on platelets. Studies of CrpL on Xanthomonas campestris pv. phaseoli and Xanthomonas campestris pv. passiflorae, showed that the lectin was able to inhibit the growth and development these bacteria. The evaluation of proteinaceous inhibitors of proteolytic enzymes as candidates to provide resistance to economically important crops against insect pests is currently attracting much research interest. The antimetabolic properties of the SPI after incorporation into artificial diet, in vivo, and its interference on population increase potential of the pest have been evaluated. The incorporation of SPI into an artificial diet of larvae significantly reduced the growth and development of the insect, reflecting an increase of the instar number and duration, and a significantly lower average weight. It was also observed that the diet nutrition value affects the insect susceptibility to the inhibitor. The effect on growth rates observed in this study resulted in significant differences in mean weights of larvae at the conclusion of the experiment (day 16). Here, the mean weight of larvae fed on control diet was significantly greater than the mean weight of larvae fed diet containing proteinase inhibitors CpTI and SSTI. The study of the effects from CpTI, CsTI, CjTI, SBTI and PVTI on the mycelial growth of the genus Fusarium and Colletotrichum were carried out on Petri slabs, using medium of BOA for Fusarium sp and medium of oat for Colletotrichum graminicola, with 10 repetitions. Sterilized water was used as control. Plates were kept at 28°C in the dark. When the control reached the whole diameter of plate, the experiment was interrupted. Inhibitors showed different effects on the growth of Fusarium sp in vitro. CpTI did not show any effects in relation to the control, and PvTI did not have effects but reduced the concentration of hyphas. CpTI had effect and occasioned a change in the colony morphology. CjTi and PvTI showed antifungal effect on the growth of Colletotrichum graminicola, being that PvTI showed itself quite efficient in the growth control of the colony. CpTI were able to inhibit the bacterial development and growth of the two pathogenic bacteria species of Xanthomonas, Xanthomonas campestris pv. Phaseoli and Xanthomonas campestris pv. passiflorae. BvcTI was also able to inhibit the bacterial growth of Xanthomonas sp. On the other hand, PvTI it was not effective against these bacteria. The results presented here suggest that CrpL and proteinase inhibitors may be involved in the defense mechanism against pathogenic microorganisms. These results suggest also a potential value of SPI for protecting sugarcane plants against damage by Diatraea saccharalis / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Aureo Tatsumi Yamada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T06:06:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_ElianeAparecidadeAndrade_M.pdf: 3877752 bytes, checksum: 8e8fdcf07bdeab337b2c3cf008f23e49 (MD5) Previous issue date: 2002 / Mestrado