Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, 2014. / Submitted by Larissa Stefane Vieira Rodrigues (larissarodrigues@bce.unb.br) on 2014-11-12T17:32:39Z No. of bitstreams: 1 2014_DanielaSant’AnaDeAquino.pdf: 6175557 bytes, checksum: 26a02e952ac55ed41bf830fd604fe0c9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-11-14T13:15:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_DanielaSant’AnaDeAquino.pdf: 6175557 bytes, checksum: 26a02e952ac55ed41bf830fd604fe0c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-14T13:15:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_DanielaSant’AnaDeAquino.pdf: 6175557 bytes, checksum: 26a02e952ac55ed41bf830fd604fe0c9 (MD5) / Doenças infecciosas são as principais causas de morte no mundo. Dentre essas doenças, a leishmaniose destaca-se no Brasil e no mundo pelo seu caráter endêmico e grande incidência, além disso, as manifestações clínicas, que variam das formas cutâneas à forma visceral, dependem da espécie do parasito bem como do sistema imunitário do indivíduo. O tratamento da doença baseia-se nos compostos antimoniais pentavalentes, que apesar de eficazes apresentam grande toxicidade para o hospedeiro e induzem mecanismos de resistência dos parasitos. Esses aspectos estimulam os estudos para identificar novos compostos voltados ao tratamento da leishmaniose. Os peptídeos antimicrobianos são promissores agentes leishmanicida, pois suas características estruturais e eletrostáticas lhes permitem interagir com as membranas celulares dos parasitos causando seu rompimento. Considerando o efeito microbicida da filosseptina-1 (PSN-1) nas formas promastigotas de Leishmania amazonensis e considerando que os macrófagos são as principais células envolvidas na patogênese da leishmaniose, o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito microbicida da PSN-1 nas formas amastigotas de L. amazonensis e determinar se esse efeito relaciona-se com a produção das espécies reativas de oxigênio ou com a formação dos corpúsculos lipídicos. Formas amastigotas axênicas foram obtidas pela incubação de cultivos promastigotas de L. amazonensis por 96 horas a 37°C, seguindo-se a infecção dos macrófagos por 8 horas. Cultivos infectados foram tratados com diferentes concentrações da PSN-1 (0, 2, 16 e 64 μg/mL) por 2 h para avaliar o efeito microbicida pela determinação do índice de infecção, para determinar no sobrenadante das culturas, a produção de óxido nítrico após 24 h de incubação pelo método de Griess e de peróxido de hidrogênio após 1 h de incubação pelo método de Pick e Keisari; para a quantificação dos corpúsculos lipídicos utilizou-se o método da coloração com óleo vermelho. Os resultados mostraram que, quando comparado ao controle basal, o efeito microbicida da filosseptina-1 ocorreu nas três concentrações reduzindo o índice de infecção de macrófagos em 52%, 81% ou 96% com 2, 16 ou 64 μg/mL, respectivamente (p<0,05); a produção de óxido nítrico aumentou com as três concentrações de PSN-1 (p<0,05); a produção de peróxido de hidrogênio não foi afetada pelo tratamento com as menores concentrações do peptídeo, no entanto a maior delas (64 μg/mL) causou redução desse radical, na presença ou não da infecção. O índice corpuscular aumentou com a menor concentração do peptídeo (2 μg/mL) devido ao aumento no percentual de macrófagos que expressavam corpúsculos lipídicos; o tratamento com 16 μg/mL também aumentou o percentual de macrófagos que exibiam corpúsculos lipídicos. Os resultados mostraram que o efeito microbicida ocorreu em um padrão dose-dependente, em que, a concentração máxima (64 μg/mL) foi capaz de reduzir em 96% o índice de infecção dos macrófagos, após 2 horas de incubação com o peptídeo. Em conjunto, o efeito das diferentes concentrações da PSN-1 nas formas amastigotas de L. amazonensis indicou o potencial desse peptídeo no tratamento da leishmaniose. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Infectious diseases are the leading causes of death worldwide. Among these diseases, leishmaniasis stands out in Brazil and in the world for its endemic nature and its widespread prevalence; furthermore its clinical manifestations, range from cutaneous forms to visceral forms, depending upon the species of the parasite and on the immune system of the individual. Disease control is based on treatment with pentavalent antimonial compounds, which, while effective, have high toxicity to the host, and induce the generation of parasitic resistance mechanisms. These aspects encourage studies to identify novel compounds aimed at treating leishmaniasis. Antimicrobial peptides are promising leishmanicidal agents because their structural and electrostatic characteristics allow them to interact with the cell membranes of parasites causing their breakup. Considering the microbicidal effect of phyloseptin-1 (PSN-1) on promastigotes of Leishmania amazonensis and considering that macrophages are the main cells involved in the pathogenesis of leishmaniasis, the objective of this study was to evaluate the microbicidal effect of PSN-1 in amastigotes of L. amazonensis and to determine whether this effect is related to the production of oxygen reactive species or the formation of lipid bodies. Axenic amastigotes were obtained by incubation of promastigote cultures of L. amazonensis for 96 hours at 37 ° C, followed by infection of macrophages for 8 hours. Infected cultures were treated with different concentrations of phyloseptin-1 (0, 2, 16 and 64 μg /mL) for 2 h to evaluate the microbicidal effect by determining the infection rate and also to determine the supernatant of cultures producing nitric oxide after a 24 hour incubation by the Griess method of hydrogen peroxide after a 1 hour incubation by the Pick and Keisari method. For the quantification of lipid bodies we used the method of staining with Red Oil. The results showed that compared to the basal control, the microbicidal effect of PSN-1 was present in all three doses reducing the infection rate of macrophages, after treatment with the peptide or not, by 52%, 81% or 96% with 2, 16 or 64 μg/mL, respectively (p<0.05); The production of nitric oxide increased with the three concentrations of PSN-1 (p<0.05); production of hydrogen peroxide was not affected by treatment with lower concentrations of the peptide, however, most of them (64 μg/mL) caused a reduction of this radical in the presence or absence of infection. The corpuscular index increased with the lowest concentration of the peptide (2 mg/mL) due to the increase in the percentage of macrophages expressing lipid bodies; treatment with 16 μg/mL also increased the percentage of macrophages that exhibited lipid droplets. The results show that the microbicidal effect occurred in a dose-dependent pattern, wherein the maximum concentration (64 μg/mL) was able to reduce in 96% the rate of infection of macrophages after 2 hours incubation with the peptide. Altogether, the effect of different concentrations of PSN-1 in amastigotes of L. amazonensis indicate the potential of this peptide in the treatment of leishmaniasis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-12-05T15:38:29Z No. of bitstreams: 1 2014_NubiaMariaPereiradeSousa.pdf: 3986507 bytes, checksum: d1332dbd839a8cf7865da5a7049cc1ae (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-12-08T11:51:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_NubiaMariaPereiradeSousa.pdf: 3986507 bytes, checksum: d1332dbd839a8cf7865da5a7049cc1ae (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-08T11:51:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_NubiaMariaPereiradeSousa.pdf: 3986507 bytes, checksum: d1332dbd839a8cf7865da5a7049cc1ae (MD5) / As leishmanioses são doenças infecto-parasitárias que acometem o ser humano e são causadas por várias espécies de protozoários pertencentes ao gênero Leishmania. A quimioterapia é o único tratamento efetivo para a doença. No entanto, efeitos adversos, administração parenteral, tratamentos não responsivos, regimes de tratamento com altas doses por longos períodos e custos elevados dos esquemas de tratamento são fatores limitantes do uso destas drogas. Neste contexto, a prospecção de novos fármacos contra as leishmanioses possui uma grande importância para a saúde pública em muitos países em desenvolvimento, incluindo o Brasil. No presente estudo foi avaliado a atividade leishmanicida da 5-Etoxicarbonil-4-(2-hidroxifenil)-6-metil-3,4-diidropirimidin-2(1H)-tiona (codificado como 4p) sobre formas promastigotas e amastigotas de L.(L.) amazonensis. Este composto pertence a classe de heterocíclicos conhecidos como DHPMs (3,4dihidropirimidin-2(1H)-ona ou -tiona). O composto 4p apresentou efeito citotóxico contra as formas promastigotas, sendo a concentração inibitória (50%) dos parasitos é de 50 μM. O efeito antiproliferativo de 4p foi observado pela modificação dos índices celulares presentes nas diferentes fases da curva de crescimento das formas promastigotas tratadas. O tratamento com 4p induziu alterações morfológicas importantes em formas promastigotas e amastigotas avaliadas por microscopia eletrônica de varredura e microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados sugerem que o composto 4p na concentração de 50 μM interfere com os microtúbulos destes protozoários, produzindo várias alterações na membrana celular. E ainda promoveu alterações estruturais nas mitocôndrias. Ensaios de infecção experimental in vitro demonstraram que este composto é eficiente na eliminação dos parasitos intracelulares quando aplicados em regime de pré-tratamento, sendo também eficiente quando aplicados com a infecção já em curso. Assim, a classe das DHPMs pode representar uma arquitetura molecular promissora para o desenvolvimento de novos agentes leishmanicidas alvo dirigido. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The leishmaniasis is an infectious and parasitic diseases that affects humans and is caused by several species of protozoa belonging to the Leishmania genus. Chemotherapy is the only effective treatment for this disease. Adverse effects, parenteral administration route, unresponsive treatments, treatment regimens with high doses for long periods and high costs of treatment are however limiting factors for a wide use of these drugs. In this context, the search for new drugs against leishmaniasis has a huge importance for the public health policy on many developing countries, including Brazil. In this present study it was evaluated the antileishmanial activity of 5-ethoxycarbonyl-4-(2-hydroxyphenyl)-6-methyl-3,4-diidropirimidin-2(1H)-thione (codified as 4p) against promastigotes and amastigotes forms of L. (L.) amazonensis. This compound belongs to a class of heterocyclic known as DHPMs (3,4dihidropirimidin-2 (1H)-one and thione). Compound 4p showed cytotoxic effects against the promastigote forms of L. (L.) amazonensis, with a half minimal (50%) inhibitory concentration (IC50) of 50 μM. Compound 4p caused an antiproliferative effect against this parasite significantly reducing the parasite cells number throughout all stages of the growth curve. Treatment with 4p also produced several ultrastructural changes on the promastigotes and amastigotes forms as depicted from scanning electron microscopy and transmission electron microscopy analyses. Our results suggest that compound 4p concentration of 50 μM appears to interfere with the protozoan microtubules affording several cellular membrane alterations. It was also showed ultrastructural disruption of the mitochondria. Experimental in vitro infection showed that this compound is effective to eliminate intracellular parasites when applied under pre-treatment schedule, as well, when applied during the ongoing infection. In this context, the class of DHPMs may represent a promising molecular architecture for the development of new antileishmanial target-directed agents.

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2011. / Submitted by claudia teixeira (claudiadtx@gmail.com) on 2011-06-22T01:12:53Z No. of bitstreams: 1 2011_BrunaCândidoGuido.pdf: 2583425 bytes, checksum: 6da0d341ca671f7a9832a6e4581fc86b (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-06-22T15:03:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_BrunaCândidoGuido.pdf: 2583425 bytes, checksum: 6da0d341ca671f7a9832a6e4581fc86b (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-22T15:03:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_BrunaCândidoGuido.pdf: 2583425 bytes, checksum: 6da0d341ca671f7a9832a6e4581fc86b (MD5) / As leishmanioses, doenças infecciosas causadas por protozoários intracelulares do gênero Leishmania, apresentam manifestações clínicas diversas e tratamento de difícil administração com efeitos colaterais severos. Estas doenças ainda representam um relevante problema de saúde pública que somado a questão do tratamento, refletem a necessidade de se avançar na pesquisa e na busca por novos fármacos. As proteases, enzimas que catalisam a hidrólise de ligações peptídicas de proteínas e cadeias polipeptídicas, desempenham alguns papéis chaves nos parasitos protozoários como na transição do ciclo de vida, invasão do hospedeiro, evasão imune do parasito e na patogênese de doenças parasitárias. Neste contexto, este trabalho se focaliza no estudo da otubaína de Leishmania chagasi, uma cisteíno protease pertencente às enzimas deubiquitinantes (DUBs). Algumas DUBs são essenciais na imunomodulação e regulação da resposta inflamatória. A otubaína 1 de humanos, por exemplo, possui como substrato a proteína E3 GRAIL associada à anergia dos linfócitos. Este trabalho teve como objetivo a clonagem e expressão da otubaína recombinante de L. chagasi (rOtuLc) bem como sua citolocalização, caracterização de sua atividade e proposição da sua estrutura por modelagem e dinâmica molecular. O gene da OtucLc foi amplificado e seu produto clonado no vetor de expressão, pET-19b, expresso em E. coli BL21 (DE3). A rOtuLc foi induzida com 0,1 mM IPTG, a 16 ºC por 16 h. A proteína recombinante solúvel foi purificada em coluna de agarose-níquel. Anticorpos anti-OtuLc foram produzidos em camundongos e sua especificidade foi confirmada por immunoblot. A imunocitolocalização da OtuLc em promastigotas de L. chagasi revelou sua localização em vesículas e uma marcação pontual de forte intensidade na região anterior, próximo ao cinetoplasto. Testes de atividade da rOtuLc contra os substratos Ub-AMC e Z-LRGG-AMC foram realizados e a rOtuLc mostrou-se inativa. Finalmente, a modelagem molecular por homologia e os ensaios de dinâmica molecular de equilíbrio indicaram que a OtuLc é composta por 10 hélices ? e 1 folha ?, de 4 fitas, e mantém conservado o posicionamento dos resíduos da tríade catalítica, estando o resíduo Cys81 no início de uma hélice ? direita próxima à fita ? onde se encontram os resíduos His261 e Asn263. Estes resultados iniciais poderão servir como ferramentas de grande valia para uma avaliação futura do potencial quimioterápico da OtuLc. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniasis are infectious diseases caused by intracellular protozoa of the genus Leishmania which have different clinical manifestations and treatment difficult to administer with serious secondary effects. These diseases still represent a significant public health problem and together with the difficulties encountered in the current treatment reflect the need to advance the search for new drugs. Proteases, enzymes that catalyze the hydrolysis of peptide bonds of proteins and polypeptide chains, play key roles in some protozoan parasites such as life cycle transition, host invasion, parasite immune evasion and parasitic diseases pathogenesis. In this context, this work focuses on studing Leishmania chagasi otubain, a cysteine protease belonging to deubiquitinating enzyme (DUBS). Some DUBs are essential in immunomodulation and regulation of the inflammatory response. The human otubain 1, for example, has the GRAIL E3 protein as substrate, associated with anergy in lymphocytes. The aim of this work was the cloning and expression of recombinant L. chagasi otubain (rOtuLc), the verification of its cytolocalization, the activity characterization and the structure proposition by molecular modeling and dynamics. The OtuLc gene was amplified and the product cloned into the expression vector pET-19b expressed in E. coli BL21 (DE3). Expression of recombinant protein condition was 0,1 mM IPTG, 16 °C for 16 h. The soluble recombinant protein was purified by nickel-agarose column. Anti-OtuLc antibodies were produced in mice and its specificity was confirmed by immunoblot. Cytolocalization of OtuLc in L. chagasi promastigotes revealed vesicular pattern localization and a high-intensity point labeled in the anterior region near the kinetoplast. rOtuLc activity tests against Ub-AMC and Z-LRGG-AMC substracts were performed and the recombinant protein was found to be inactive. Finally, homology molecular modeling and molecular dynamics assay indicated that OtuLc is composed of 10 α helices and 1 β sheet and retains the conserved residues of catalytic triad positioning with Cys81 residue at the beginning of a right handed α helix near to His261 and Asn263 at the β sheet. These initial results may serve as valuable tools for future assessement of the chemotherapeutic potential of OtuLc.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós Graduação em Ciências e Tecnologias em Saúde, Laboratório de Interação Parasito-Hospedeiro, 2014. / Submitted by Larissa Stefane Vieira Rodrigues (larissarodrigues@bce.unb.br) on 2014-11-04T12:28:41Z No. of bitstreams: 1 2014_CamilaLasseSilva.pdf: 1435079 bytes, checksum: 0449d2829c5a9fa86a65062e5bbb9333 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-11-04T14:36:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_CamilaLasseSilva.pdf: 1435079 bytes, checksum: 0449d2829c5a9fa86a65062e5bbb9333 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-04T14:36:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_CamilaLasseSilva.pdf: 1435079 bytes, checksum: 0449d2829c5a9fa86a65062e5bbb9333 (MD5) / As leishmanioses representam um grupo de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania e é endêmica em 98 países atingindo mais de 12 milhões de pessoas no mundo. O tratamento disponível para esta doença pode levar a sérios efeitos colaterais e, por se tratar de uma doença negligenciada, os incentivos para o desenvolvimento de novos medicamentos são insuficientes. Este cenário revela a necessidade de estudar a biologia do parasito focalizando na busca de fatores de virulência como alvos potenciais para novos fármacos. As proteases são enzimas que catalisam a hidrólise de ligações peptídicas e estão envolvidas em diversos processos fisiológicos, bem como na patogenia de doenças infecciosas e crônicas. Neste contexto, este trabalho de mestrado se concentrou nos estudos iniciais da prolil oligopeptidase de Leishmania chagasi, uma serino protease, por meio da sua caracterização bioquímica. Primeiramente, para expressar a proteína recombinante, o gene POPLc foi clonado no vetor pET15b e a proteína foi expressa em E. coli BL21-AI sob indução com 0,5 mM de IPTG e 0,2% de L-arabinose a 20 °C por 4 h. A rPOPLc foi expressa de forma solúvel e foi purificada por afinidade da sua cauda de 6 x His em coluna de Ni- Agarose. A partir da enzima purificada foram realizados testes cinéticos, onde a melhor atividade foi encontrada em tampão HEPES 25 mM, DTT 5 mM e NaCl 150 mM, pH 7,5, sendo estabelecido como o tampão ótimo para a atividade enzimática. A enzima apresentou Km de 58,56744 e Vmáx de 4.651,16 mFU/min a partir da hidrólise de Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC, substrato que apresentou maior atividade dentre todos testados neste estudo. A rPOPLc foi inibida por TLCK e TPCK, mas não por ABESF, um inibidor de serino protease. Além do mais, a rPOPLc foi inibida por Z-Pro-Prolinal, um inibidor específico de POPs, com IC50 de 5,2 nM. De acordo com a imunocitolocalização, foi observado que a rPOPLc está presente na região citoplasmática do parasito. Este trabalho permitiu realizar uma primeira caracterização da POP de Leishmania chagasi e o entendimento do seu papel na biologia do parasito poderá contribuir para a busca de novos medicamentos alternativos para as leishmanioses. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniasis represents a group of diseases caused by protozoa of the genus Leishmania and is endemic in 98 countries reaching more than 12 million people worldwide. The available treatment for this disease can lead to serious side effects and, since it is a neglected disease, the incentives for the development of new drugs are insufficient. This scenario shows the need to study the biology of the parasite focusing on the search for virulence factors as potential targets for new drugs. Proteases are enzymes that catalyze the hydrolysis of peptide bonds and are involved in many physiological processes, as well as in the pathogenesis of infectious and chronic diseases. In this context, this work focused on the initial studies of Leishmania chagasi prolyl oligopeptidase a serine protease, through its biochemical characterization. First, to express the recombinant protein, POPLc gene was cloned into pET15b vector and the protein was expressed in Escherichia coli BL21 -AI upon induction with 0.5 mM IPTG and 0.2 % L- arabinose at 20 ° C for 4 h. The rPOPLc was expressed soluble and purified by affinity chromatography in Ni - Agarose column. The kinetic tests show thatPOPLc the best activity was found in HEPES 25 mM, DTT 5 mM and NaCl 150 mM, pH 7.5, buffer set as the optimum one for all enzyme activity test. N-Suc - Gly - Pro - Leu - Gly - Pro - AMC substrate showed the highest activity among all tested in this study and rPOPLc presented a Km and Vmx values of 58,56744 and 4.651,16 mFU/min, respectively, using this substrate. The rPOPLc was inhibited by TPCK and TLCK, although it was insensible to AEBSF. Furthermore, the rPOPLc was inhibited by Z- Pro- prolinal, a specific inhibitor of POPs with IC50 of 5.2 nM. According to immunocitolocalization, it was observed that rPOPLc is present in the cytoplasmic region of the parasite. This work allowed for an initial characterization of Leishmania chagasi POP and the understanding of POPLc role in the biology of the parasite may contribute to the search of new alternative drugs for leishmaniasis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2014. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2015-02-03T12:19:16Z No. of bitstreams: 1 2014_JeffersonBrunoPereiraRibeiro.pdf: 1823020 bytes, checksum: 49ac554d7e44d30b39885986770a3523 (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2015-02-10T16:21:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_JeffersonBrunoPereiraRibeiro.pdf: 1823020 bytes, checksum: 49ac554d7e44d30b39885986770a3523 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-10T16:21:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_JeffersonBrunoPereiraRibeiro.pdf: 1823020 bytes, checksum: 49ac554d7e44d30b39885986770a3523 (MD5) / A escassez de fármacos é uma preocupação e objeto de estudo para a descoberta de alternativas eficazes para o tratamento da leishmaniose tegumentar (LT). A formulação tópica tem sido almejada devido sua baixa toxicidade. O desenvolvimento de terapias alternativas, como a multimodal, é importante no enfrentamento da resistência às drogas. O objetivo deste estudo foi comparar a eficácia in vivo da terapia fotodinâmica (TFD) tópica com ftalocianina cloro-alumínio lipossomal para o tratamento da LT, isoladamente e em associação com a terapia sistêmica com miltefosina. Foram formados 5 grupos, cada um com 6 camundongos isogênicos, adultos, fêmeas, da espécie Mus musculus, cepa C57BL/6: (1) Controle negativo, sem infecção e sem tratamento; (2) Controle positivo, infectado e não tratado; (3) Miltefosina 200 mg, diariamente, e TFD com ftalocianina cloro-alumínio lipossomal (FCL), em dias alternados; (4) Apenas Miltefosina; e (5) Apenas TFD com FCL. Os esquemas terapêuticos duraram 20 dias. Confirmou-se a infecção dos animais, realizando cultura em meio NNN da linfa colhida da pata dos animais. Vias de administração adotadas foram miltefosina oral e FCL tópica. Para a aplicação da TFD, os animais foram anestesiados com a associação de xilazina e quetamina. Os animais foram avaliados por: (i) medição das patas e (ii) critérios parasitológicos. As análises estatísticas foram realizadas com software SPSS®. O número de parasitas viáveis por pata foi determinado pelo programa Elida®. Observou-se maior eficácia para o grupo que utilizou a associação de TFD com FCL e miltefosina (p<0,05), no qual houve uma redução maior de parasitas quando comparada aos outros dois grupos, cujos resultados do tratamento foram semelhantes ao grupo controle negativo (p<0,05). A TFD com FCL, quando usada isolada, demonstrou baixa eficácia quando comparada ao grupo controle negativo e grupo padrão ouro (miltefosina) (p<0,05). ________________________________________________________________________ ABSTRACT / Shortage of drugs is a concern and object of studies for the discovery of effective alternative for Cutaneous Leishmaniasis (CL) treatment. Topic formulation has been aimed due its low toxicity. Development of alternative therapies, as multimodal, is important to confront the drug resistance. This study aims to compare the in vivo effectiveness of topic photodynamic therapy (PDT) with liposomal chloro-aluminuim phthalocyanine (LCP) in treatment of CL, isolated and associated with systemic therapy with miltefosine. 5 groups were adopted each one with 6 isogenic adult female mice, Mus musculus species, C57BL/6: (i) Negative Control, without infection and without treatment; (ii) Positive Control, infected but not treated; (iii) Miltefosine 200mg, daily, and PDT with LCP on alternating days; (iv) only Miltefosine; and (v) only PDT with LCP. Therapeutic schemes lasted 20 days. Animal infection has been confirmed, performing culture in NNN of the collected lymph paw of animals. The adopted routes of administration were oral miltefosine and topic LCP. For PDT implementation, animals were anaesthetized with the association of xylazine and ketamine. Animals were evaluated by: (i) paw measuring; and (ii) parasitological criteria. Statistics analysis were performed by specific statistics software [SPSS™]. The number of feasible parasites by paw was determined by a software for parasite data counting [Elida™]. It was observed greater effectiveness for the group that used the association of PDT with LCP and miltefosine (p<0.05), which had a greater reduction in parasites when compared to the other two groups, wherein the result of treatment was similar to the Negative Control group (p<0.05). PDT with LCP, when isolated, demonstrated low effectiveness when compared to the Negative Control and gold standard group (miltefosine) (p<0.05). Association of miltefosine and PDT with LCP represents hopes for CL, an increasing dermatological disease among several countries.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2010. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2011-07-20T21:52:39Z No. of bitstreams: 1 2010_EllenTanusRangel.pdf: 3622586 bytes, checksum: 8e2733577dffffbac6e9629426417f6b (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-07-25T11:25:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_EllenTanusRangel.pdf: 3622586 bytes, checksum: 8e2733577dffffbac6e9629426417f6b (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-25T11:25:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_EllenTanusRangel.pdf: 3622586 bytes, checksum: 8e2733577dffffbac6e9629426417f6b (MD5) / Um total de 120 extratos oriundos de 26 espécies pertencentes a 16 famílias de plantas do bioma Cerrado foi avaliado in vitro em formas promastigotas de Leishmania ssp. e epimastigotas de Trypanosoma cruzi. Através dessa triagem foram selecionados 14 extratos ativos, que foram testados em formas amastigotas de Leishmania ssp. e em leveduras Candida ssp. e Cryptococcus ssp. A toxicidade em células NIH-3T3 de fibroblastos de mamífero permitiu verificar a especificidade de ação desses extratos. Os resultados obtidos neste estudo permitiram selecionar o extrato hexânico da folha de Siparuna cujabana (Siparunaceae), com valor de IC50 de 8,75 μg/mL para amastigotas L. (L.) amazonensis, não demonstrando ser tóxico às células de mamífero com valor de IC50 de 378,55 μg/mL para NIH-3T3, apresentando assim índice de seletividade (IS) de 43,2. Esse extrato também foi ativo em Candida albicans ATCC 10231, com valor de concentração inibitória mínina (CIM) de 31,25 μg/mL, Candida krusei LMGO 174, com CIM de 62,5 μg/mL e em Cryptococcus neoformans var. gattii e Cryptococcus neoformans var. neoformans, ambos com CIM de 31,25 μg/mL. Assim, o extrato hexânico da folha de S. cujabana foi avaliado in vivo em camundongos Balb-c infectados com L. (L.) chagasi, na dose de 100 e 250 mg/Kg. Observou-se o percentual de inibição dose-dependente de 52,5% para a menor dose e de 71,2% para a maior. A miltefosina, medicamento referência na dose de 40 mg/Kg, apresentou 81,6% de inibição. A espécie Renealmia alpinia (Zingiberaceae) também destacou-se pela sua importante atividade. Para as formas amastigotas de L. (L.) chagasi e L. (L.) amazonensis, o extrato diclorometânico do rizoma desta planta apresentou IC50 de 6,03 e 11,58 μg/mL. Para as células de mamíferos, esse extrato apresentou IC50 de 235,38 μg/mL, com índice de seletividade de 39 para L. (L.) chagasi. Este extrato apresentou ainda atividade para as formas epimastigotas de T. cruzi (IC50 = 50 μg/mL), atividade próxima ao Benznidazol (IC50 = 46 μg/mL), medicamento referência do teste, e utilizado para o tratamento da doença de Chagas. O extrato diclorometânico do rizoma de R. alpinia foi ativo em leveduras: Candida krusei LMGO 174 (CIM de 31,5 μg/mL), C. parapsilosis ATCC 22019 e C. glabrata LMGO 44 (ambos com CIM de 125 μg/mL) e em Cryptococcus neoformans var. gattii (CIM de 31,5 μg/mL) e Cryptococcus neoformans var. neoformans (CIM de 7,81 μg/mL). O fracionamento cromatográfico biomonitorado do extrato hexânico da folha de S. cujabana e do extrato diclorometânico do rizoma de R. alpinia está sendo feito, com a perspectiva de identificação e desenvolvimento de compostos líderes para o tratamento da leishmaniose. / A hundred twenty extracts from 26 species belonging to 16 families of Brazilian Cerrado plants were evaluated in vitro against promastigotes of Leishmania (Leishmania) chagasi and L. (L.) amazonensis, and epimastigotes of Trypanosoma cruzi. Through this screening, we selected 14 active extracts, which were tested against amastigotes of Leishmania ssp, yeast Candida ssp. and Cryptococcus ssp. Toxicity tests against mammalian fibroblasts NIH-3T3 cells showed the specificity of action of these extracts. The results of this study showed that the hexane extract of Siparuna cujabana (Siparunaceae) leaf, with IC50 value of 8.75 μg/mL against amastigotes of L. (L.) amazonensis, was not proven to be toxic to mammalian cells with IC50 of 378.55 μg/mL against NIH-3T3, thus presenting a selectivity index (SI) of 43.2. The extract was also active against Candida albicans ATCC 10231, with the minimum inhibitory concentration (MIC) value of 31.25 μg/mL; against Candida krusei LMGO 174, with MIC of 62.5 μg/mL; and Cryptococcus neoformans var. gattii and Cryptococcus neoformans var. neoformans, both with MIC of 31.25 μg/mL. The hexane extract of the S. cujabana leaf was evaluated in vivo against Balb-c mice infected with L. (L.) chagasi, at a dose of 100 and 250 mg/kg. It was observed that the percentage of dose-dependent inhibition of 52.5% for the lower dose and 71.2% for the higher. The miltefosine, reference drug at a dose of 40 mg/kg, showed 81.6% inhibition. The species Renealmia alpinia (Zingiberaceae) also stood out for its important activity. For the amastigotes of L. (L.) chagasi and L. (L.) amazonensis the dichloromethane extract of the rhizome of this plant showed IC50 of 6.03 and 11.58 μg/mL. For mammalian cells, this extract showed IC50 of 235.38 μg/mL, with a selectivity index of 39 for L. (L.) chagasi. This extract also showed activity against the epimastigotes of T. cruzi (IC50 = 50 μg/mL), activity near the benznidazole (IC50 = 46 μg/mL), the reference drug test, and used for the treatment of Chagas disease. The dichloromethane extract of the rhizome of R. alpinia was active against the yeast: Candida krusei LMGO 174 (MIC of 31.5 μg/mL), C. parapsilosis ATCC 22019 and C. glabrata LMGO 44 (both with MIC of 125 μg/mL) and Cryptococcus neoformans var. gattii (MIC of 31.5 μg/mL) and Cryptococcus neoformans var. neoformans (MIC of 7.81 μg/mL). The bioassay-guided fractionation of hexane extract of the leaf of S. cujabana and dichloromethane extract of the rhizome of R. alpinia is being done, with the prospect of identifying and developing leading compounds for the treatment of leishmaniasis.

With more than 12 million people affected worldwide, 2 million new cases occurring per year, and the rapid emergence of drug resistance and treatment failure, leishmaniasis is an infectious disease for which research on drug and vaccine development, hostpathogen, and vector-parasite interactions are current international priorities. Polyamines are important regulators of growth and differentiation in a variety of cells, including parasitic protozoa. The inhibition of parasitic biosynthesis by polyamines has been an interesting chemotherapeutic approach in the design of novel antiparasitic drugs against mainly leishmaniasis. In this work we evaluate the in vitro effect of N-dodecyl- 1,2-ethanediamine (GUT) on morphology and replication of Leishmania. A concentration of 0.31 &#956;g/ml of this compound was highly effective against Leishmania amazonensis, Leishmania braziliensis and Leishmania chagasi and no toxicity against mammalian cell lines as well HFF, THP-1, J774.G8 or murine peritoneal cells was observed. So, there was inhibition of multiplication of the L. amazonensis, L. braziliensis and L. chagasi amastigotes into inflammatory peritoneal cells in presence of 1 &#956;g/ml and 0.5 &#956;g/ml of this compound. Promastigotes form of L. amazoneneis it was with intracellular disorganization by transmission electron microscope observation following 1 to 24 h of treatment with GUT. Thus, N-dodecyl-1,2-ethanediamine shown be a promising drug against Leishmania. / Leishmaniose é uma doença infecciosa que afeta mais de 12 milhões de pessoas em todo mundo. Com mais de 2 milhões de novos casos por ano e falhas no tratamento há o surgimento de resistência às drogas. Como prioridades são realizadas pesquisas relacionadas ao ciclo de vida do parasito, interação com o hospedeiro, desenvolvimento de vacinas e novas drogas. A inibição da biossíntese do parasito por poliaminas tem sido uma importante abordagem quimioterápica no desenvolvimento de novas drogas contra leishmaniose. As poliaminas são importantes reguladores do crescimento e diferenciação em vários tipos celulares incluindo protozoários. Nesse trabalho avaliamos in vitro o efeito do composto N-dodecil-1,2- etanodiamina (GUT) na susceptibilidade de diferentes espécies de Leishmania sp. A concentração de 0,31 &#956;g/ml foi altamente eficiente contra Leishmania amazonensis, Leishmania braziliensis e Leishmania chagasi, entretanto em diferentes células de mamíferos (THP-1, HFF, macrófagos murinos J774.G8 e macrófagos peritoneais de camundongos) a mesma citoxicidade não foi observada. A inibição nos índices de multiplicação e infecção de amastigotas de L. amazonensis, L. braziliensis e L. chagasi em macrófagos peritoneais foi observada na presença das concentrações de 1Ug/ml e 0,5Ug/ml de (GUT). Formas promastigotas de L. amazonensis mostraram diversas alterações ultraestruturais por microscopia eletrônica de transmissão causada pelo tratamento com o composto Ndodecil- 1,2- etanodiamina. O composto N-dodecil-1,2- etanodiamina mostrou ser um novo composto promissor contra a leishmaniose. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-06-28T12:26:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Termo BDTD em Branco.pdf: 17911 bytes, checksum: 5cfad2a827d93f56f8ded17199d4dea5 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-06-28T12:26:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Termo BDTD em Branco.pdf: 17911 bytes, checksum: 5cfad2a827d93f56f8ded17199d4dea5 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-28T12:26:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Termo BDTD em Branco.pdf: 17911 bytes, checksum: 5cfad2a827d93f56f8ded17199d4dea5 (MD5) Previous issue date: 2012-07-12 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Leishmaniasis is a zoonotic infectious disease caused by protozoa of the Leishmania genus, widely distributed in tropical and subtropical regions. Constitutes a growing public health problem, and is considered one of the endemic diseases of priority interest. Due to dificults to application and toxicity found in the treatment with commercial drugs, a great number of botanic species is investigated as alternative sources of antileishmanial substances. In this context the Annonaceae family possesses highlighted several species are potentially bioactive molecules. Then, the species Annona mucosa, Annona sericea and Ephedranthus amazonicus were evaluated in vitro in cultures of promastigotes of Leishmania spp. The organic extracts of A. mucosa showed activity against L. amazonensis, with inhibitory concentration of 50% (IC50) between 9.32 - 46.54 μg.mL-1; against L. braziliensis, with IC50 between 27.42 - 170.15 μg.mL-1 and against L. guyanensis with IC50 of 16.23 - 165.02 μg.mL-1. The organic extracts of A. sericea were tested against L. amazonensis and L. braziliensis showing, IC50 between 0.40 - 55.86 μg.mL-1 against L. amazonensis and IC50 between 86.21 - 151.82 μg.mL-1 against L. braziliensis. The organic extracts of E. amazonicus were tested against L. amazonensis and L. braziliensis presenting, IC50 between 2.47 - 2.57 μg.mL-1 against L. amazonensis and IC50 of 265.45 μg.mL-1 against L. braziliensis. From do dichlorometane leaves extract was isolated two alkaloids identified as liriodenine (1) and atherospermidine (2). The alkaloid liriodenine, major alkaloid isolated from this extract, showed activity against L. amazonensis, L. braziliensis and L. guyanensis, being observed, respectively, IC50 of 1.43, 55.92 and 0.84 μg.mL-1. On the basis of the results obtained and due to better perspective to cultivate, the species A. mucosa was selected for evaluation in vitro against amastigotes of L. amazonensis. The alkaloid liriodenine and organic extracts of A. mucosa were active against intracellular amastigotes of L. amazonensis observed reduction of 80% of infected macrophages and elimination of 70% of intracellular amastigote. Dichloromethane and hexane extract of leaves of A. mucosa were selected for evaluation in vivo the treatment of experimental cutaneous leishmaniasis in BALB/c mice caused by L. amazonensis. The bases of ointments formulated extracts were effective in treating skin injury in both topical application and in intraperitoneally. Results are very promising and stimulate the continuation of the studies on A. mucosa to aim for the elaboration of a potential leishmanicidal product. / A leishmaniose é uma doença infecciosa zoonótica, causada por protozoários do gênero Leishmania, amplamente distribuída em regiões tropicais e subtropicais. Constitui um crescente problema de saúde pública e é considerada uma das endemias de interesse prioritário. Tendo em vista dificuldades de aplicação e toxicidade encontradas em tratamentos com as drogas disponíveis no mercado, um grande número de espécies botânicas é investigado como fontes alternativas de substâncias antileishmania. Neste contexto a família Annonaceae possui destaque, várias espécies apresentam moléculas potencialmente bioativas. Assim, as espécies Annona mucosa, Annona sericea e Ephedranthus amazonicus foram avaliadas em culturas de promastigotas de Leishmania spp in vitro. Os extratos orgânicos de A. mucosa apresentaram atividade frente a L. amazonensis, com concentração inibitória de 50% (CI50) entre 9,32 - 46,54 μg/mL; frente a L. braziliensis, com CI50 entre 27,42 - 170,15 μg/mL e frente a L. guyanensis com CI50 entre 16,23 - 165,02 μg/mL. Os extratos orgânicos de A. sericea foram avaliados frente a L. amazonensis e L. braziliensis sendo observado, CI50 entre 0,40 - 55,86 μg/mL frente a L. amazonensis e CI50 entre 86,21 - 151,82 μg/mL frente a L. braziliensis. Os extratos orgânicos de E. amazonicus foram avaliados frente a L. amazonensis e L. braziliensis sendo observado, CI50 entre 2,47 - 2,57 μg/mL frente a L. amazonensis e CI50 de 265,45 μg/mL frente a L. braziliensis. A partir do extrato em diclorometano das folhas foram isolados e identificados os alcalóides liriodenina (1) e atheroespermidina (2). O alcalóide liriodenina, principal alcalóide isolado deste extrato, apresentou atividade frente a L. amazonensis, L. braziliensis e L. guyanensis, sendo observado respectivamente, CI50 de 1,43; 55,92 e 0,84 μg/mL. Com base nos resultados apresentados e a perspectiva de maior disponibilidade de cultivo, a espécie A. mucosa foi selecionada para avaliação in vitro frente a formas amastigotas de L. amazonensis. O alcalóide liriodenina e os extratos orgânicos de A. mucosa foram ativos frente a formas amastigotas intracelulares de L. amazonensis, sendo observada redução de 80% de macrófagos infectados e eliminação de 70% de amastigotas intracelulares. O extrato diclorometano e hexânico das folhas de A. mucosa foram selecionados para avaliação in vivo no tratamento de leishmaniose cutânea experimental em camundongos BALB/c causada por L. amazonensis. As pomadas formuladas a base dos extratos foram eficazes no tratamento da lesão cutânea tanto na aplicação tópica quanto na aplicação intraperitoneal. Os resultados são promissores e estimulam a continuação dos estudos de A. mucosa visando à elaboração de um potencial produto leishmanicida.

Submitted by Izabel Monteiro (izabel_22@hotmail.com) on 2016-08-03T14:05:25Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Ana Flávia Chagas.pdf: 2651636 bytes, checksum: 31f422b87baf13b0e63decdbaeb0d66e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-17T15:30:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Ana Flávia Chagas.pdf: 2651636 bytes, checksum: 31f422b87baf13b0e63decdbaeb0d66e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-17T15:34:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Ana Flávia Chagas.pdf: 2651636 bytes, checksum: 31f422b87baf13b0e63decdbaeb0d66e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-17T15:34:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Ana Flávia Chagas.pdf: 2651636 bytes, checksum: 31f422b87baf13b0e63decdbaeb0d66e (MD5) Previous issue date: 2015-09-10 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The American Cutaneous Leishmaniasis is characterized as an infectious parasitic disease, not contagious, caused by parasites of the genus Leishmania, which has a heteroxenic life cycle, alternating between hosts invertebrates and vertebrates. Leishmaniasis is a neglected disease, affecting 98 countries, estimated 1.3 million new cases each year. Patients with American cutaneous leishmaniasis may present different clinical picture, namely: the cutaneous and mucocutaneous. The cutaneous form is the most frequent and widely distributed characterized by localized skin lesions, and can display a spontaneous healing above, depending on the host immune response and Leishmania species. The mucocutaneous form manifests as lesions in the mucosa, usually ulcerative and can produce disfiguring lesions. In Brazil leishmaniasis has become endemic, with notifications of cases of leishmaniasis in all states. The first-line drug used in Brazil is the pentavalent antimoniate N- methylglucamine ( Glucantime® ) and its management is done through daily injections. As second choice drugs are sodium stibogluconate (Pentostan®), pentamidine isethionate, amphotericin B, liposomal amphotericin B, miltefosine, among others. Although efficacy of these drugs usually present, some problems may be cited as the high toxicity which induces an array of side effects which often preclude treatment continuity and resistance of some species of Leishmania. In this context it is necessary to search for new compositions which have anti- Leishmania activity and low toxicity to the patient. Based on studies on the activity of metal complexes, especially with antitumor activity, we have seen the possibility of using such complexes for the treatment of cutaneous leishmaniasis. Studies have demonstrated the potential to cover the treatment of disorders showing promising activity antimicrobial, antitumor and anti- inflammatory. This study aimed to evaluate the leishmanicidal activity six copper complexes against promastigote forms and amastigote Leishmania (Leishmania) amazonensis and Leishmania ( Viannia) guyanensis , and the complexes [Cu(thp)4]PF6 and [Cu(PCN)(HBPz3] showed higher leishmanicidal activity, respectively. / A Leishmaniose Tegumentar Americana caracteriza-se como uma doença infecto-parasitária, não contagiosa, causada por parasitos do gênero Leishmania, que possui um ciclo de vida heteroxênico, alternando entre hospedeiros invertebrados e vertebrados. A leishmaniose é uma doença negligenciada e acomete 98 países, estimando 1,3 milhões de novos casos a cada ano. Os pacientes com Leishmaniose Tegumentar Americana podem apresentar quadro clínico diferenciado, sendo eles: a forma cutânea e mucocutânea. A forma cutânea é a mais frequente e mais amplamente distribuída, caracterizando-se por lesões localizadas na pele, podendo apresentar um quadro de cura espontânea, dependendo da resposta imune do hospedeiro e da espécie de Leishmania. A forma mucocutânea manifesta-se como lesões na mucosa, normalmente ulcerativas, podendo produzir lesões desfigurantes. No Brasil a leishmaniose apresenta-se endêmica, apresentando notificações de casos de leishmaniose em todos os estados. O medicamento de primeira escolha utilizado no Brasil é o antimoniato pentavalente de N-metilglucamina (Glucantime®) e sua administração é feita por meio de injeções diárias. Como drogas de segunda escolha estão estibogluconato de sódio (Pentostan®), isetionato de pentamidina, anfotericina B, anfotericina B lipossomal, miltefosina, entre outras. Apesar desses fármacos normalmente apresentarem eficácia, alguns problemas podem ser citados como a alta toxicidade que induz a uma gama de efeitos colaterais que muitas vezes impossibilitam a continuidade do tratamento e a resistência de algumas espécies de Leishmania. Nesse contexto faz-se necessário a busca por novas composições que apresentem atividade anti-Leishmania e com baixa toxicidade ao paciente. Com base em estudos sobre a atividade de complexos metálicos, principalmente com atividade antitumoral, tem-se visto a possibilidade de utilizar esses complexos para o tratamento de leishmaniose cutânea. Estudos tem demonstrado o potencial do cobre para o tratamento de patologias apresentando atividade promissora com ação antimicrobiana, antitumoral e anti-inflamatória. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade leishmanicida de seis complexos de cobre contra as formas promastigota e amastigota de Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) guyanensis, tendo os complexos [Cu(thp)4]PF6 e [Cu(PCN)(HBPz3] apresentado maior atividade leishmanicida, respectivamente.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leishmaniasis is a complex of parasitic diseases caused by protozoa of the genus Leishmania and transmitted to humans and other vertebrate hosts through the bite of an infected phlebotomine insect. Currently, all drugs used in the treatment of this disease have low efficacy, high toxicity and are associated with parasitic resistance. In this sense, scientific research that indicates a new compounds with leishmanicidal activity are quite promising. The objective of this study was to evaluate in vitro the leishmanicidal activity of the crude ethanol extract of C. blanchetianus on L. amazonensis and L. infantum as well as their toxic and immunomodulator effect on murine macrophages. Promastigotes in the logarithmic growth phase were subjected to treatment with different concentrations of the extract for 24 and 72 hours at 26ºC, and the viability was measured by the method of Alamar Blue . A greater inhibition was observed in L. amazonensis with an IC50 of 73.6 μg/ml in 24 hours of incubation and 42.6 μg/ml at 72 hours. In L. infantum extract showed an IC50 of 208.7 μg/ml in 24 hours and 108.9 μg/ml at 72 hours. Regarding the reduction of viability, L. amazonensis showed a death percentage of 68.8% with 100 μg/ml of the extract after 24 hours of treatment and approximately 100% after 72 hours, whereas for L. infantum this level of inhibition was not seen with 250 μg/ml of the extract. For the analysis of antiamastigota activity, infected macrophages were treated with different concentrations of the extract and incubated for 72h at 37° C, and the rate of infection was determined by staining method with hematologic pigment and counts in optical microscopy. It was found a higher dose-dependent inhibition in L. amazonensis with an IC50 of 3.10 μg/ml. In L. infantum there was a lower activity of the extract which present an IC50 of 8.83 μg/ml. At lower concentration tested (3 μg/ml) there was a reduction in the viability of L. amazonensis around 44%, while in L. infantum, this level of inhibition was only observed with 7 μg/ml of extract. The cytotoxicity was performed on murine macrophages incubated with different concentrations of the extract for 72 hours at 37°C and the viability was measured by Alamar Blue method. The LD50 observed was 83.79 μg/ml and the selectivity index calculated was 27 to L. amazonensis and 9.5 for L. Infantum, revealing a higher toxicity of the extract in the parasites than in macrophages.Treatment with the extract not modulated the macrophage for nitric oxide synthesis, as verified by Griess reaction. However, interfered in the morphology of promastigote forms, being observed parasites with a rounded body and/or double scourge. Therefore, the data presented in this study indicate that the ethanol extract of C. blanchetianus presents leishmanicidal activity on promastigote and amastigote forms of L. amazonensis and L. infantum, being more effective against the species L. amazonensis, especially on the amastigote form, without causing, however, toxicity to the host cell. / A leishmaniose é um complexo de doenças parasitárias causadas por protozoários do gênero Leishmania e transmitidas ao ser humano e outros hospedeiros vertebrados por meio da picada de um inseto flebotomíneo infectado. Atualmente, todos os medicamentos utilizados no tratamento dessa doença apresentam baixa eficácia, alta toxicidade e estão associados à resistência parasitária. Nesse sentido, pesquisas científicas que indiquem novos compostos com atividade leishmanicida são bastante promissoras. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro a atividade leishmanicida do extrato etanólico bruto de C. blanchetianus sobre L. amazonensis e L. infantum, bem como o seu efeito tóxico e imunomodulador sobre macrófagos murinos. Promastigotas na fase logarítmica de crescimento foram submetidos ao tratamento com diferentes concentrações do extrato por 24 e 72 horas a 26ºC, e a viabilidade foi mensurada por meio do método de Alamar Blue . Uma maior inibição foi vista em L. amazonensis com um IC50 de 73,6 μg/ml em 24 horas de incubação e de 42,6 μg/ml em 72 horas. Em L. infantum o extrato apresentou um IC50 de 208,7 μg/ml em 24 horas e de 108,9 μg/ml em 72 horas. Em relação à redução da viabilidade, L. amazonensis apresentou um percentual de morte de 68,8%, com 100 μg/ml do extrato, em 24 horas de tratamento e aproximadamente 100% em 72 horas, enquanto que em L. infantum este nível de inibição só foi visto com 250 μg/ml do extrato. Para a análise da atividade antiamastigota, macrófagos infectados foram tratados com diferentes concentrações do extrato e incubados por 72h a 37ºC, e o índice de infecção foi determinado por coloração com corante hematológico e contagem em microscopia óptica. Verificou-se uma inibição dose-dependente maior em L. amazonensis com um IC50 de 3,10 μg/ml. Em L. infantum houve uma menor atividade do extrato que apresentou um IC50 de 8,83 μg/ml. Na menor concentração testada (3 μg/ml) houve uma redução na viabilidade de L. amazonensis por volta de 44%, enquanto que em L. infantum, este nível de inibição só foi observado com 7 μg/ml do extrato. A avaliação da citotoxicidade foi realizada em macrófagos murinos, incubados com diferentes concentrações do extrato por 72h a 37ºC e a viabilidade foi mensurada pelo método de Alamar Blue . O LD50 observado foi de 83,79 μg/ml e o Índice de Seletividade calculado foi de 27 para L. amazonensis e 9,5 para L. Infantum, revelando uma maior toxicidade do extrato nos parasitos do que nos macrófagos. O tratamento com o extrato não modulou o macrófago para a síntese de óxido nítrico, como verificado pela Reação de Griess. Contudo, interferiu na morfologia das formas promastigotas, sendo observados parasitos com corpo arredondado e/ou flagelo duplo. Portanto, os dados apresentados nesse estudo indicam que o extrato etanólico de C. blanchetianus apresenta atividade leishmanicida sobre as formas promastigota e amastigota de L. amazonensis e L. infantum, sendo mais efetivo frente à espécie L. amazonensis, principalmente sobre a forma amastigota, sem causar, no entanto, toxicidade à célula hospedeira.