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Leishmaniose visceral canina em cães atendidos em hospital veterinário particular do Distrito Federal, Brasil

Zimovski, Igor Melo 19 February 2016 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-06-22T16:37:38Z No. of bitstreams: 1 2016_IgorMeloZimovski.pdf: 2384759 bytes, checksum: 7028c9dbda127c85f0eb4f8cb61eadfb (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2016-07-30T12:25:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_IgorMeloZimovski.pdf: 2384759 bytes, checksum: 7028c9dbda127c85f0eb4f8cb61eadfb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-30T12:25:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_IgorMeloZimovski.pdf: 2384759 bytes, checksum: 7028c9dbda127c85f0eb4f8cb61eadfb (MD5) / A leishmaniose visceral é uma doença negligenciada que apresenta cerca de 0,2 a 0,4 milhões de novos casos por ano em todo o mundo, sendo o Brasil um dos seis países com maior número de casos. O cão domestico é considerado o principal reservatório urbano do agente Leishmania infantum que é transmitido principalmente pelo vetor flebotomíneo Lutzomya longipalpis. A leishmaniose visceral canina tem caráter crônico e cães infectados em área endêmica podem não apresentar sinais clínicos aparentes, dificultando detecção e o controle da doença. Os casos caninos podem estar associados aos casos humanos, pela proximidade entre homem e o cão doméstico. O Ministério da Saúde preconiza o uso de testes sorológicos para a detecção de cães positivos para a doença e eutanásia dos mesmos, porém estes apresentam limitações quanto à sensibilidade e a especificidade. Testes moleculares como a PCR-RFLP têm mostrado grandes vantagens em relação aos testes convencionais no diagnóstico e identificação da espécie do parasito. Assim, o presente estudo avaliou a detecção do DNA da região ITS1 do rDNA e da região 3’-UTR do gene HSP70 de Leishmania em amostras de medula óssea de cães de um hospital veterinário particular no DF, seguidas de PCR-RFLP para identificar a espécie do parasito. Além disso, estudamos a associação do diagnóstico molecular com exames parasitológicos e sorológicos, bem como com perfil clínico, hematológico e de alguns parâmetros bioquímicos dos animais estudados. As reações de PCR do ITS1 e 3’-UTR do gene HSP70 apresentaram 78,69% e 52,46% de positividade respectivamente. Os testes parasitológicos detectaram apenas 40,98% das amostras positivas, sendo a L. infantum a única espécie identificada pelo RFLP. Os sintomas incluíram perda de peso, alterações gastrointestinais, fraqueza, epistáxe e uveíte. Cães de orelhas caídas, pelagem curta e de grande porte estavam em maior proporção entre os positivos. Observou-se também anemia, trombocitopenia e alterações dos valores normais do número de leucócitos nesses animais. No perfil bioquímico, apenas a ALT (alanina amino transferase) foi significativamente mais alta nos cães com detecção molecular positiva. Assim conclui-se que as ferramentas moleculares são potentes para a detecção e identificação de Leishmania em amostras de cães nas áreas endêmicas, permitindo também o diagnóstico em cães assintomáticos. Assim, tornam-se essenciais para a conclusão do diagnóstico na clínica veterinária, permitindo a decisão correta das medidas para o controle da doença. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Visceral leishmaniasis is a neglected disease with about 0.2 to 0.4 million of new cases per year worldwide, and Brazil is one of the six countries with the highest number of cases. The domestic dog is considered the main urban reservoir of the agent Leishmania infantum which is mainly transmitted by the sand fly vector Lutzomya longipalpis. Canine visceral leishmaniasis has chronic character and infected dogs in endemic areas can not show overt clinical signs, hindering detection and control of the disease. The canine cases may be associated with human cases, because of the proximity between man and the domestic dog. The Ministry of Health recommends the use of serological tests for the detection of positive dogs for the disease and their euthanasia, but these tests have limitations in terms of sensitivity and specificity. Molecular tests such as PCR-RFLP have shown great advantages over conventional assays in diagnosis and species identification of the parasite. In this way, the present report evaluate Leishmania DNA detection of ITS1 ribosomal DNA or 3’-UTR of the HSP70 gene in bone marrow samples from dogs attended in a veterinary hospital in the Federal District (DF-Brazil). Parasite detection was followed by species identification through PCR-RFLP. Furthermore we compared the molecular testing with some parasitological, serological, clinical and biochemical characteristics of these animals. The ITS1 PCR reactions and 3'-UTR of HSP70 gene showed 78.69% and 52.46% of positivity respectively. Parasitological tests detected only 40.98% of the positive samples, and L. infantum was the only species identified by RFLP. Symptoms include weight loss, gastrointestinal disorders, weakness, epistaxis and uveitis. Dog-eared, short hair and large were in greater proportion of the positive dogs. It was also observed anemia, thrombocytopenia and alterations of the normal values of the number of leukocytes in these animals. In biochemical profile, only ALT (alanine transaminase) was significantly higher in dogs with positive molecular detection. It was concluded that the molecular tools are potent for the Leishmania detection and identification of positive dogs in endemic areas, and allow diagnosis in asymptomatic dogs. Thus the molecular test becomes essential for the completion of diagnosis in veterinary clinic, allowing the correct actions to control this disease.
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Relação entre as lesões histológicas e a carga parasitária da região ungueal de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum / Relationship between histological injuries and parasitic load of naturally infected dogs' claw with Leishmania infantum

Bertolo, Paulo Henrique Leal [UNESP] 20 February 2017 (has links)
Submitted by PAULO HENRIQUE LEAL BERTOLO null (henrique_medvet@yahoo.com.br) on 2017-04-13T18:33:10Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Paulo_Henrique_leal_Bertolo.pdf: 1792617 bytes, checksum: 2f57fae9d383e993afd0d14baabfbac8 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-17T13:09:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 bertolo_phl_me_jabo.pdf: 1792617 bytes, checksum: 2f57fae9d383e993afd0d14baabfbac8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-17T13:09:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bertolo_phl_me_jabo.pdf: 1792617 bytes, checksum: 2f57fae9d383e993afd0d14baabfbac8 (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A onicogrifose é um dos principais achados clínicos em cães com Leishmaniose Visceral (LV), porém são escassas as pesquisas com enfoque na região ungueal de cães infectados. O objetivo do presente estudo foi avaliar a região ungueal de cães com LV que apresentaram ou não onicogrifose, por meio das análises histopatológica e imuno-histoquímica. O terceiro dígito dos membros torácico e pélvico foi colhido de 16 cães naturalmente infectados com Leishmania infantum, sem predileção por sexo, raça ou idade. Os animais foram divididos em dois grupos, cães com onicogrifose (GO; n=7) e sem onicogrifose (GSO; n=9). Os dígitos foram avaliados em quatro regiões (epiderme/derme dorsal, epiderme/derme ventral, matriz ungueal dorsal e matriz ungueal ventral). Todas as lesões observadas (infiltrado inflamatório mononuclear, degeneração vacuolar dos queratinócitos basais, separação dermo-epidérmica e incontinência pigmentar) estavam presentes em ambos os grupos, porém em maior intensidade nos dígitos de cães com onicrogrifose. A imunomarcação das formas amastigotas de Leishmania infantum foi observada nas diferentes áreas do dígito. Observou-se diferença estatística entre as áreas de epiderme/derme dorsal com a matriz dorsal e com a matriz ventral nos dígitos do membro pélvico e, entre a epiderme/derme dorsal com a matriz dorsal no membro torácico do grupo GO. Conclui-se que a principal alteração histopatológica da região ungueal de cães com LV é o infiltrado inflamatório mononuclear independente da presença de onicogrifose. Estes animais apresentaram a presença do parasita na região responsável pelo crescimento da unha. Esta onicopatia parece estar associada à presença do parasita e ao microambiente inflamatório local. / Onychogryphosis is among the main clinical findings in dogs with Visceral Leishmaniasis (VL). However, there are few researches focusing on the claw region of infected dogs. This aim of this study was to evaluate claw region of dogs with symptomatic CanL with and without onychogryphosis, through histopathological and immunohistochemical analyzes. The third digit of the right thoracic and pelvic limbs was collected from 16 dogs with CanL, without for sex, breed or age predilection. The dogs were divided into two groups, dogs with (GO; n = 7) and without onychogryphosis (GSO; n = 9). The digits were evaluated in four regions (dorsal epidermis / dermis, dorsal matrix / dermis, ventral matrix / dermis, ventral epidermis / dermis). All the lesions observed (mononuclear inflammatory infiltrate, basal keratinocyte vacuolation, dermoepidermal clefting and pigmentary incontinence) were presente in both groups, but more strongly in the digits of dogs with onychogryphosis. Immunohistochemistry revealed numerous amastigotes in the different areas of the digit. Statistical difference was observed between dorsal epidermis / dermis areas with dorsal matrix / dermis and ventral matrix / dermis in the digits of the pelvic limb, and between dorsal epidermis / dermis áreas with dorsal matrix / dermis of the thoracic limb in dogs with onychogryphosis. In conclusion, main histopathological alteration of the claw region of dogs with CanL was mononuclear inflammatory infiltrate in the dorsal epidermis / dermis area independently of onychogryphosis. The dogs presented high parasitic load in the region responsible for the growth of the nail. This onycopathy does not appear to be associated only with presence of the parasite, but also with local inflammatory microenvironment, which possibly contributes to onychogryphosis by release of inflammatory mediators at the site.
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Expressão das quimiocinas MIP-1α e MCP-1 em relação à carga parasitária em cães com leishmaniose visceral /

Penha, Tatiane Aranha da. January 2011 (has links)
Orientador: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Coorientador: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: Ana Lúcia Abreu Silva / Banca: Hélio José Montassier / Resumo: A Leishmaniose Visceral (LV) é uma zoonose de distribuição mundial. No Brasil foi descrita em várias regiões, mas na região sudeste vem ocorrendo de forma significativa desde 1998, na região de Araçatuba, SP. O cão é o principal reservatório doméstico do protozoário Leishmania chagasi e a principal fonte de contaminação para o homem. A resposta imune do hospedeiro canino frente ao parasito é variável e por este fato, os cães apresentam sinais clínicos acentuados ou ausência destes. Os animais que apresentam maior carga parasitária e sinais clínicos mais severos são considerados susceptíveis à infecção pelo parasito. Este padrão está associado ao perfil de citocinas produzidas, ou seja, na predominância de citocinas Th1 são resistentes ou Th2 susceptíveis. No entanto existem muitas variações neste padrão de resposta, ou seja, muitos animais apresentam a produção de citocinas Th1 e Th2, sugerindo um desequilíbrio na proporção de citocinas pró e antiinflamatórias, que favorecem a multiplicação e sobrevivência dos parasitos. Este desequilíbrio tem influência direta sobre a ativação de macrófagos e sobre sua capacidade microbicida e de apresentação antigênica, levando a uma anergia de linfócitos T e a manutenção e cronicidade da infecção. As quimiocinas são citocinas com potente atividade quimiotática sobre leucócitos. Na LV existem estudos no homem e em modelos experimentais, mas no cão apenas um estudo avalia o seu papel no baço. Existe muita controvérsia sobre o seu verdadeiro papel na LV, pois descreve-se tanto a sua ação próinflamatória quanto a sua ação deletéria, que favorece o parasito. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel das quimiocinas MIP-1a e MCP-1 no baço e fígado de 30 cães... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Visceral Leishmaniasis (VL) is a zoonosis of worldwide distribution. In Brazil has been described in several regions, but has been occurring in the Southeast significantly since 1998 in Araçatuba, SP. The dog is the main domestic reservoir of Leishmania chagasi and the main source of contamination for humans. The canine host immune response against the parasite is variable. Dogs have severe intensity or absence of clinical symptoms. Animals that have a higher parasite load and clinical signs are considered more susceptible to infection by the parasite. This pattern is associated with the profile of cytokines produced, in the predominance of Th1 they are resistant or in the predominance of Th2 they are susceptible. However there are many variations on this response pattern, many animals have the production of Th1 and Th2 cytokines, suggesting an imbalance in the proportion of pro and anti-inflammatory cytokines, which favor the multiplication and survival of parasites. This imbalance has a direct influence on the activation of macrophages and their microbicidal activity and antigen presentation, leading to anergy of T lymphocytes and the maintenance and chronicity of infection. Chemokines are cytokines with potent chemotactic activity on leukocytes. In the VL are studies in humans and experimental models, but the dog only one study assessing its role in the spleen. There is much controversy over its true role in VL, because it describes both its pro-inflammatory action and its deleterious effects, which favors the parasite. Therefore, the aim of this study was to evaluate the role of chemokines MIP-1α and MCP-1 in the spleen and liver of 30 dogs naturally infected with Leishmania spp. and compare the findings with the parasite load of each organ. For this purpose, samples of liver and spleen were analyzed... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Resposta imune após à infecção por Leishmania chagasi em camundongos Balb/c imunossuprimidos /

Machado, Juliana Giantomassi. January 2008 (has links)
Resumo: A Leishmaniose Visceral é uma zoonose relevante que mais recentemente tem afetado pacientes imunossuprimidos, e tornou-se um sério problema para a saúde pública. O objetivo deste trabalho foi de avaliar a imunopatologia da infecção com Leishmania chagasi em camundongos BALB/c imunossuprimidos com dexametasona até o momento da infecção. Foram realizadas culturas de células esplênicas sem estímulo e com estímulo (Ag de L. chagasi e ConA) para dosagem das citocinas IFN-g, IL-2, IL-4 e IL-10, e determinação das cargas parasitárias do baço e do fígado. Os grupos imunossuprimidos apresentaram os pesos dos baços e porcentagem de CD4 estatisticamente inferiores aos grupos normais no momento da infecção e nos outros momentos de estudo revelaram a produção tanto de citocinas do tipo TH1(IFN-g e IL-2) quanto do tipo TH2 (IL-10). Os grupos infectados se comportaram de maneira semelhante, produzindo citocinas tipo TH1 e TH2, independentemente da imunossupressão. As cargas parasitárias do baço e do fígado destes grupos não apresentaram diferença estatisticamente significante em nenhum dos momentos. Sugere-se que a imunossupressão realizada com a dexametasona não interferiu na infecção com L. chagasi, provavelmente pelo seu efeito reversível. / Abstract: Visceral Leishmaniasis is a relevant zoonosis infecting immunosuppressed patients, becoming a serious problem to public health in the last years. The objective of this study was to evaluate the immunopathology of Leishmania chagasi infection in BALB/c mice immunosuppressed with dexamethasone until the day of infection. Spleen cells with and without specific stimulus (Ag of L. chagasi and ConA) were cultured for cytokine quantification (IFN-g, IL-2, IL-4 and IL-10) and spleen and liver parasite loads were determined. Immunosuppressed groups showed statistically lower spleen weight and CD4 percentage than normal groups on the day of infection and on the other days of the study, showing the production of TH1(IFN-g and IL-2) and TH2 (IL-10). cytokines. The other infected groups presented the same results, producing TH1 and TH2 cytokines, no matter if they were immunosuppressed and infected. Spleen and liver parasite loads in these groups did not show statistical differences. It was concluded that immunosuppression using dexamethasone did not interfere in L. chagasi infection, probably due its reversible effect. / Orientador: Helio Langoni / Coorientador: Simone Baldini Lucheis / Banca: Lisiane de Almeida Martins / Banca: Cáris Caroni Nunes / Banca: Jussara Marcondes Machado / Banca: Luciane Alarcão Dias Melicio / Doutor
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Diagnóstico molecular e identificação das espécies de Leishmania na leishmaniose viceral canina no Distrito Federal, Brasil

Monteiro, Aurilene Gomes 17 July 2014 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-19T16:36:59Z No. of bitstreams: 1 2014_ Aurilene Gomes Monteiro.pdf: 1120017 bytes, checksum: 1181ffcd849a4f54466fcf6b6659445b (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-20T14:19:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_ Aurilene Gomes Monteiro.pdf: 1120017 bytes, checksum: 1181ffcd849a4f54466fcf6b6659445b (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-20T14:19:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_ Aurilene Gomes Monteiro.pdf: 1120017 bytes, checksum: 1181ffcd849a4f54466fcf6b6659445b (MD5) / A leishmaniose é uma das doenças parasitárias mais relevantes, estando em expansão em áreas urbanas e periurbanas no Centro-Oeste do Brasil. Na verdade, o diagnóstico sorológico é empregado no Brasil para determinar a eutanásia de cães positivos. No presente estudo examinamos a relevância do diagnóstico molecular no controle da leishmaniose visceral canina. Por outro lado, a sorologia positiva não está diretamente relacionada a uma doença ativa. Desta forma, avaliamos cinquenta e oito (58) cães de diferentes regiões do Distrito Federal a partir de abril de 2012 a dezembro 2013 relativa à infecção por Leishmania. Para tanto, os animais foram fornecidos pelo Centro de Controle de Zoonoses, após investigação epidemiológica. Analisamos biópsias de fígado, baço, nódulos linfáticos e medula óssea através de exames parasitológicos (HE imprints e cultura dos parasitas isolados) e moleculares (PCR da região ITS1 do rDNA e da região 3’ UTR do gene da HSP70). A amostra teve mais de 62% dos cães machos e a maioria destes animais tinha pelos curtos e as orelhas caídas. Análise por PCR das biópsias apresentou resultados positivos em 47 (81%) dos animais. As amostras positivas foram de 35 cães sintomáticos (83%) e 12 (75%) de cães assintomáticos. A reação de PCR-RFLP revelou a espécie L. infantum em 47 (100%) das amostras positivas para a PCR. Deste modo, concluiu-se que o diagnóstico molecular é mais sensível e específico para identificar a leishmaniose visceral em cães. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniasis is one of the most relevant parasitic diseases, being in expansion on urban and periurban areas in Brazil´s Center East. Actually, serological diagnostic is employed in Brazil determining euthanasia of positive dogs. In this study we examined the relevance of the molecular diagnostic in the control of canine visceral leishmaniasis. On the other hand, a positive serology is not directly correlated to an active disease. In this way, we evaluated fifty-eight (58) dogs from different regions of the Federal District from April 2012 to December 2013 concerning Leishmania infection. For this purpose, animals were provided by the Center for Control of Zoonoses, after epidemiological investigation. We analyzed biopsies from liver, spleen, lymph nodes and bone marrow through parasitological (HE imprints and culture parasite isolation) and molecular tests (PCR of ITS1 region of the rDNA and 3’ UTR region of the HSP70 gene). Our sample had more than 62% of male dogs and most of these animals had short hair and dropping ears. PCR analysis of the biopsies showed positive results in 47 (81%) animals. Positive samples were from 35 (83%) symptomatic and 12 (75%) asymptomatic dogs. PCR-RFLP revealed L. infantum in 47 animals (100% of the PCR positive samples). In this way, we concluded that the molecular diagnosis is more sensible and specific to identify visceral leishmaniasis in dogs.
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Acurácia e reprodutibilidade de testes imunoenzimáticos com antígenos de Leishmania major e Leishmania infantum para o diagnóstico de leishmaniose visceral canina no Brasil

Arruda, Mauro Maciel de 03 April 2014 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-24T18:36:17Z No. of bitstreams: 1 2014_MauroMacieldeArruda.pdf: 5466854 bytes, checksum: d70b31aa614ceb8e0f6566c97c4cb41c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-25T13:03:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_MauroMacieldeArruda.pdf: 5466854 bytes, checksum: d70b31aa614ceb8e0f6566c97c4cb41c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-25T13:03:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_MauroMacieldeArruda.pdf: 5466854 bytes, checksum: d70b31aa614ceb8e0f6566c97c4cb41c (MD5) / Introdução: A leishmaniose visceral é uma enfermidade parasitária, provocada pelo protozoário Leishmania (Leishmania) infantum (sin. Leishmania (Leishmania) chagasi). A limitada acurácia dos testes empregados para o diagnóstico dos cães pode contribuir com o baixo impacto de uma das medidas de controle preconizadas pelo Ministério da Saúde brasileiro, a eutanásia de cães sororreagentes para leishmaniose. Os objetivos deste trabalho buscam estimar a acurácia e a confiabilidade de dois testes imunoenzimáticos que utilizam antígenos de L.(L.) major ou de L.(L.) infantum em laboratórios de diferentes níveis de complexidade e estimar a acurácia dos testes de ELISA e IFI aplicados em combinação sequencial ou de forma paralela, analisando os valores preditivos positivos e negativos destas abordagens em prevalências variáveis de infecção canina. Método e principais resultados: Foi utilizado um painel de 1.425 amostras de soros caninos, coletados em estudo multicêntrico. As amostras foram analisadas por meio de técnicas de visualização direta de parasitos, por estudo histopatológico corado com hematoxilina-eosina, pela técnica de imunohistoquímica e pelo isolamento do parasito em cultura. Estas técnicas constituíram o padrão de referência, sendo um caso positivo para a infecção por L. infantum o animal que apresentasse positividade em pelo menos um dos testes. Os resultados da acurácia do teste de ELISA com antígenos de L. major e L. infantum realizados em condições ideais no Laboratório de Referencia Nacional foi de 91,84% (IC95% 86,3 - 97,3) e 89,80% (IC95% 83,8 - 95,7) para sensibilidade e de 83,57% (IC95% 81,7 - 85,7) e 82,69% (IC95% 80,6 - 84,7) para especificidade, respectivamente. A AUC (área abaixo da curva ROC) foi de 0,920 para antígeno de L. major e de 0,898 para L. infantum. Os coeficientes de correlação intraclasse médios dos testes com antígenos de L. major, variaram entre 0,890 (0,876-0,902 IC95%) e 0,948 (0,942-0,953 IC95%) e com os antígenos de L. infantum entre 0,818 (0,792-0,841IC95%) e 0,879 (0,865-0,8910 IC95%). A sensibilidade e a especificidade do teste de imunofluorescência indireta (IFI) foi 90,8% (IC95% 84,2 - 97,5) e 53,4% (IC95% 51,6 - 55,1), respectivamente. Utilizados de forma combinada o teste de ELISA com antígeno de L. major e o teste de IFI mostraram que em paralelo o desempenho da sensibilidade global subiu para 99,2%, porém a especificidade diminuiu para 44,8%. Na utilização dos testes em série (ELISA seguido de IFI) observou-se uma diminuição na sensibilidade (83,3%) e melhora na especificidade (92,5%). Conclusões: A acurácia dos dois testes avaliados é semelhante, com um desempenho discretamente melhor do antígeno de L. major. A reprodutibilidade dos testes foi quase que perfeita (>0,81) com desempenho pouco melhor para o antígeno de L. major. Conclui-se, portanto, que não se justifica a mudança do antígeno no teste de ELISA atualmente constituído por L. major para diagnóstico de leishmaniose visceral canina no Brasil. Finalmente, a combinação dos testes de ELISA com antígeno de L. major seguido do teste de IFI melhorou a especificidade da abordagem diagnóstica, sem perda substancial da sensibilidade. A combinação em série destes testes pode satisfazer os anseios, tanto da saúde pública como dos proprietários de cães residentes em áreas endêmicas, por uma abordagem diagnóstica mais acurada da leishmaniose visceral canina. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Background Visceral leishmaniasis is a parasitic disease caused by the protozoan Leishmania (Leishmania) infantum (syn. Leishmania (Leishmania) chagasi). The limited accuracy of diagnostic tests for canine leishmaniasis may contribute to the lack of impact of the control measures recommended by the Brazilian Ministry of Health, i.e., euthanasia of seroreactive dogs. The objective of this study was to estimate the accuracy and reliability of two ELISA tests employing L. (L.) major or L.(L.) infantum antigen used by laboratories of different levels of complexity and estimate the accuracy of the ELISA tests and IFI applied in sequential or parallel combination , analyzing the positive and negative predictive values of these variables approaches prevalence of canine infection. Methods and principal findings A series of 1,425 serum samples collected from dogs in a multicenter study was used. The samples were analyzed by direct visualization of the parasite in hematoxylin/eosin-stained sections, immune histochemistry, and isolation of the parasite in culture. These techniques represented the reference standard and an animal that was positive in at least one of the tests was defined as infected with L. infantum. The results of the accuracy of the ELISA test with antigens of L. major and L. infantum played in ideal conditions at the National Reference Laboratory was 91.84% (CI 95% CI 86.3 - 97.3 ) and 89.80% ( CI95% 83.8 - 95.7 ) for sensitivity and 83.57% (CI95% 81.7 - 85.7 ) and 82.59 ( CI95% 80.6 - 84.7 ) specificity%, respectively. The AUC (area under the ROC curve) was 0.920 for the L. major and L. infantum 0.898 to. The mean intraclass correlation coefficients of the tests ranged from 0.890 (CI95% 0.876-0.902) to 0.948 (CI95% 0.942-0.953) when L. major was used as antigen, and from 0.818 (CI95% 0.792-0.841) to 0.879 (CI95% 0.865-0.8910) when L. infantum was used. The sensitivity and specificity of indirect immunofluorescence assay (IFA ) was 90.8 % ( 95% CI 84.2 to 97.5 ) and 53.4 % ( 95% CI 51.6 to 55.1 ) , respectively. Used in combination with the ELISA antigen of L. major and the IFA test showed that parallel the performance of the overall sensitivity increased to 99.2 % , but the specificity decreased to 44.8 % . The use of serial testing ( ELISA followed by IFI ) observed a 15 decrease in sensitivity ( 83.3 % ) and improved specificity ( 92.5 % ). Conclusions The accuracy of the two assays was similar with a slightly better performance of the L. major. Reliability of the test was almost perfect (> 0.81) with slightly better performance for the L. major. These results do not support a change in the antigen composition of ELISA tests (L. major) currently used for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis in Brazil. Finally, the combination of ELISA tests with L. major antigen followed by the IFA test improved the specificity of the diagnostic approach without substantial loss of sensitivity. Serial combination of these tests can satisfy the desires of both the public health and dog owners living in endemic areas for a more accurate diagnostic approach of canine visceral leishmaniasis.
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Avaliação de uma nova abordagem diagnóstica baseada em um nanocompósito para a Leishmaniose visceral

XAVIER, Edeneide Maria 15 December 2014 (has links)
Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2015-05-27T14:42:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_edeneidexavier_2015.pdf: 1276532 bytes, checksum: 0d5ea9ef9662713f64d8399456904db5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-27T14:42:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_edeneidexavier_2015.pdf: 1276532 bytes, checksum: 0d5ea9ef9662713f64d8399456904db5 (MD5) Previous issue date: 2014-12-15 / A leishmaniose visceral (LV) é na atualidade considerada um grave problema em saúde pública no mundo, e quando não tratada rapidamente pode levar a morte. A busca por diagnósticos rápidos e precisos vem sendo cada vez mais alvo de pesquisas. Existe uma variedade de testes para detecção da Leishmania, os quais envolvem os testes sorológicos, parasitológicos e moleculares. Todos apresentam certas limitações, busca por testes rápidos e sensíveis vem sendo cada vez mais estudadas. O teste ELINOR é baseado na utilização de nanopartículas magnéticas fluorescente híbridos, o qual produz um sinal de luminescência, que é facilmente visualizado em microscópio de fluorescência, em baixas concentrações de DNA ou de RNA, sem a necessidade de amplificação do material genético, antes de ser testado. O objetivo desse estudo foi avaliar o desempenho do teste ELINOR, assim como sua sensibilidade e especificidade, frente a alguns testes para o diagnóstico da LV. Foram analisadas um total de 100 amostras (humanos e cães) previamente diagnosticada com LV, e 63 amostras de (humanos e cães) como controle. As amostras de humanas foram submetidas a testes (cultura, IT-Leish, PCR, qPCR) as de cães apenas a PCR, qPCR e em seguida todas submetidas ao teste ELINOR com a utilização das sondas LINF 1b. Os resultados em humanos mostram uma acurácia de 90,2%, sensibilidade de 94,2% e especificidade de 88,3%. Em cães a sensibilidade foi de 79.4%, especificidade de 93.3%, e uma acurácia de 86.5%. Levando-se em consideração todas as amostras (cães + humanos), a sensibilidade foi de 87,3 %, a especificidade 89,8 %, e a acurácia de 88,9%. Comparando esses resultados com os encontrados na literatura, observa-se que tanto a sensibilidade quanto a especificidade do Teste ELINOR são equivalentes a resultados obtidos por outros testes usados para o diagnóstico da LV. Este estudo indica que possivelmente um sistema de diagnóstico rápido baseado na luminescência exacerbada de origem inorgânica/orgânica (“ELINOR”, do acrônimo em inglês) identificada nos compósitos PANI/AuNPs pode ser bastante promissora, tendo em vista que o teste ELINOR detectou de forma rápida e específica a presença de DNA do patógeno em material biológico, revelando-se assim uma boa plataforma para o desenvolvimento de testes moleculares simples e de baixo custo.
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Análise da expressão de MMP-2 e MMP-9 na pele de cães com Leishmaniose visceral /

Jacintho, Ana Paula Prudente. January 2012 (has links)
Orientador: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Coorientador: Gisele Fabrino Machado / Banca: Daniel Cortes Beretta / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Resumo: Os cães infectados pelo protozoário Leishmania (Leishmania) chagasi podem ou não apresentar sinais clínicos dessa zoonose e são a principal fonte de infecção para o homem. A pele é o primeiro órgão infectado pelo parasito na LVC. As enzimas metaloproteinases da matriz (MMPs) atuam na degradação da matriz extracelular (MEC) e na modulação da resposta inflamatória, frente a vários tipos de injúrias. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão de MMP-2 e MMP-9, por meio da técnica de imuno-histoquímica e zimografia na pele de cães naturalmente acometidos por LVC e comparar estes resultados com a imunodetecção das citocinas TNF- e TGF- e do protozoário Leishmania, com as possíveis alterações da matriz extracelular dermal. A alteração da composição de fibras colágenas da derme foi avaliada pela coloração PicroSirius. O método foi usado para diferenciar fibras colágenas dos tipos I e III, nas regiões do focinho, orelha e abdômen. A carga parasitária, intensidade de inflamação e a produção de MMP 2 e 9 foram maiores nas regiões cutâneas da orelha e focinho. Os macrófagos, linfócitos e plasmócitos predominaram no infiltrado inflamatório da derme superficial, formando granulomas, associados a degradação do colágeno maduro (tipo I) e a discreta deposição de colágeno jovem (tipo III), com maior intensidade nos cães com elevada carga parasitária cutânea. O TGF-β foi detectado nos três grupos de cães infectados (assintomático, oligossintomático e sintomático), sem diferenças significativas entre eles. O TNF-α não foi detectado na maioria dos animais infectados e no grupo controle. Conclui-se que quanto maior a carga parasitária e a intensidade de inflamação na pele, maior a degradação do colágeno maduro, produção de MMPs 2 e 9 e produção de TGF-β. A MMP-9 ativa poderia ser utilizada... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dogs infected by Leishmania (Leishmania) chagasi may or may not show clinical signs of the zoonosis and they are the main source of infection for man. The skin is the first organ infected by the parasite in the LVC. The enzyme matrix metalloproteinases (MMPs) act on the degradation of extracellular matrix (ECM) and in the inflammatory response modulation against many kinds of injuries. The aim of this study was to evaluate the expression of MMP-2 and MMP-9 by immuno-histochemistry and zymography in the skin of dogs naturally affected by LVC and the immunodetection of TNF- and TGF- and of Leishmania and compare these results with the possible alterations of dermal extracellular matrix. The method was used to differentiate collagen fibers in the dermis was evaluated by Picrosirius red staining to differentiate collagen types I and III, in regions of the nose, ear and abdomen. The parasite load, intensity of inflammation, increased production of MMP 2 and 9 were higher in regions of the ear and muzzle. Macrophages, lymphocytes and plasma cells predominated in the inflammatory infiltrate of the superficial dermis, forming granulomas, associated with degradation of mature collagen (type I) and the discrete deposition of the young collagen (type III), with greater intensity in dogs with high parasite load skin. The TGF-β was detected in all groups of infected dogs (asymptomatic, oligosymptomatic and symptomatic), no significant differences among them. The TNF-α was not detected in most infected animals and the control group. It follows that the greater is the intensity of parasitic load and inflammation of the skin, the greater is the degradation of mature collagen, the production of MMPs and 2 and 9, production of TGF-β. Active MMP-9 could be used as a marker of inflammation in infected dogs. This profile of the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Avaliação do gene Lc36 de Leishmania infantum e seu produto para diagnóstico sorológico e molecular de leishmaniose visceral /

Del Cistia, Mayara Lucia. January 2016 (has links)
Orientador: Márcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Pio Colepicolo Neto / Banca: Flávio Henrique da Silva / Resumo: As leishmanioses são um grupo de doenças causadas pelo gênero Leishmania e colocam em risco 350 milhões de pessoas no mundo. Após o sequenciamento do genoma de algumas espécies de Leishmania spp., estudos moleculares de suas formas celulares (amastigotas e promastigotas) trouxeram informações importantes sobre sua biologia e potencial aplicação no aperfeiçoamento ou desenvolvimento de técnicas diagnósticas e terapêuticas. Nesse contexto, este projeto visou avaliar o gene LinJ.36.419 de Leishmania infantum (syn. Leishmania chagasi) e seu produto quanto a potencial aplicação no dsenvolvimento de novas abordagens diagnósticas. Ensaios de PCR quantitativa mostraram que a expressão deste gene é maior em formas amastigotas, estágio responsável pela manifestação da doença, podendo corresponder a um potencial marcador diagnóstico. Um fragmento de 255 aminoácidos da proteína Lc36 foi caracterizado quanto ao seu potencial antigênico utilizando ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados mostraram especificidade de 74% e sensibilidade de 78% (99% de confiança), com acurácia de 76%, em uma população escolhida randomicamente. Análises adicionais mostraram reação cruzada pouco significativa para soro de cães infectados com Leptospira interrogans e Toxoplasma gondii, e revelaram reação cruzada contra soro de cães infectados por Babesia canis e Ehrlichia canis, todos organismos infecciosos comuns em cães. Análises de bioinformática mostraram que a proteína Lc36 possui um domínio denominado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leishmaniasis are diseases caused by Leishmania genus protozoan and endanger 350 million people worldwide. After genomic sequencing of Leishmania spp., molecular studies of their cycle forms (amastigotes and promastigotes) brought important information, which can contribute to the development of new diagnostic approaches and treatments. In this study we evaluated the potencial application of the Leishmania infantum (syn. Leishmania chagasi) gene Lc.36.4190 and its encoded protein for development of new diagnostic approaches. Quantitative PCR assays showed that the gene is more expressed in intracellular amastigotes, the stage related to the clinical manifestation of these diseases, thus presenting potential to be a diagnostical target. We evaluated antigenic features of a 255 aminoacids fragment of the Lc36 protein using immunoenzimatic assay (ELISA). The results showed specificity of 74% and sensibility of 78% (99% of confidence) and accuracy of 76%, in a randomically chosen population. Additional analysis showed low cross-reaction against Leptospira interrogans and Toxoplasma gondii, and showed cross-reaction against Babesia canis and Ehrlichia canis, all infective organisms common in dogs. Bioinformatics analysis showed that the protein Lc36 contains one DNA polymerase sigma domain (COG5260) found on several organisms, being related to nucleic acid replication, recombination and repair, and might be related to the crossreactions observed. Thus, another fragment (297 aminoa... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Ciclo enzootico de transmissao da Leishmania (Leishmania) chagasi (Cunha e Chagas, 1937) no ecotopo peridomestico em Barra de Guaratiba, Rio de Janeiro-RJ: estudo de possiveis variaveis preditoras

Cabrera, Maria Alice Airosa. January 1999 (has links)
Mestre -- Escola Nacional de Saude Publica, Rio de Janeiro, 1999.

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