Made available in DSpace on 2012-09-06T01:11:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 135.pdf: 690508 bytes, checksum: f77acdeb157804d265bc1b5bfc75813b (MD5) Previous issue date: 1999 / Barra de Guaratiba é uma regiäo litorânea do Município do Rio de Janeiro onde a Leishmaniose Visceral Americana é endêmica. É um local onde a soroprevalência canina é 25 por cento e, durante os três anos de estudo na área, foram notificados onze casos humanos. As atuais estratégias de controle näo conseguem erradicar a doença provavelmente porque existem na área, fatores que interferem na transmissäo da L.(L.) chagasi que näo estäo sendo considerados. A distância da residência do cäo à mata, a altitude da residência, o confinamento do cäo ao quintal da casa, a visita de gambás (Didelphis marsupialis) ao peridomicílio e o sexo dos cäes foram avaliadas através de análise uni e multivariada buscando identificar possíveis fatores de risco para a transmissäo em cäes da L.(L.) chagasi em Barra de Guaratiba. Considerou-se que as medidas de controle nao constituíram uma variável já que säo aplicadas de forma regular em toda a área. Trezentos e sessenta e cinco cäes (73 por cento da populaçäo canina estimada) foram examinados sorologicamente pela reaçäo de imunofluorescência indireta. Após o exame o proprietário respondeu algumas perguntas sobre o cäo e sobre a visita de marsupiais ao peridomicílio. Neste momento, altitude da residência foi medida através de um altímetro e distância à borda da mata foi estimada. Armadilhas luminosas foram colocadas, durante 1 ano, em 5 pontos da área onde comprovadamente ocorreu transmissäo natural. Vinte e nove por cento dos 31 gambás capturados na área apresentaram sorologia positiva para L.(L.) chagasi. Apesar da borrifaçäo semestral com inseticida, de todos os domicílios, 26 exemplares de Lu. longipalpis foram encontrados nos pontos de coleta. A distância da residência à mata, a visita do gambá ao peridomicílio e a altitude da residência foram consideradas variáveis preditoras da infecçäo em cäes pela L.(L.) chagasi em Barra de Guaratiba e os resultados demonstraram a existência de um ciclo enzoótico silvestre no local e, embora nos faltem dados para incriminar o gambá (D. marsupialis), como reservatório primário, as evidências nos levam a sugerir fortemente que ele represente um papel importante na manutençäo da L.(L.) chagasi no peridomicílio.

SILVA, José Nivon da. Estudo do teste rápido imunoenzimático através do antígeno recombinante rk39 para diagnóstico de leishmaniose visceral americana : correlação clínico-terapêutica . 2004. 112 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Fortaleza, Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-21T15:27:44Z No. of bitstreams: 1 2004_dis_jnsilva.pdf: 540512 bytes, checksum: 39b5c9becfaad01660c8ff86c8b41912 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-01T14:12:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_dis_jnsilva.pdf: 540512 bytes, checksum: 39b5c9becfaad01660c8ff86c8b41912 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-01T14:12:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_dis_jnsilva.pdf: 540512 bytes, checksum: 39b5c9becfaad01660c8ff86c8b41912 (MD5) Previous issue date: 2004 / ABSTRACT The visceral leishmaniasis diagnostic confirmation or Kala-azar is performed by detection of the parasite through direct methods of amastigotes within macrophages or monocytes, spleen aspirated, hepatic, bone marrow, lymph node histopathological and peripheral blood smear, with wide variation in sensitivity in accordance with the site searched, being the gold standard of Leishmaniasis sp . The specific antibodies for diagnostic of visceral leishmaniasis by ELISA, indirect immunofluorescence reaction and direct agglutination tests have high sensitivity and specificity cross reactions with limited by trypanosomatids and mycobacterium, including tuberculosis, leprosy, Chagas disease , leishmaniasis cutaneous and histoplasmosis. The Montenegro intradermal test is always negative during the active phase of the disease, and is based on immune memory bound on lymphocyte Th1. The purpose of this work was to highlight the importance of quick test for the detection of antibody anti-leishmania chagasi using recombinant rK39 antigen that presented sensitivity of 99.2%. There were serological by ELISA tests that presented sensitivity of 80%, and the indirect immunofluorescence reaction to Kala-azar with sensitivity of 82%. The gold-standard diagnosis made for all examinations was the direct microscopic search on parasite bone marrow aspirated and positivity was 71%, in a survey in tertiary hospitals in Fortaleza-CE. The immunoenzymatic reaction to quick test in tape containing rK39 Antigen has high sensitivity and specificity allowing immediate diagnosis and in the early beginning of treatment, in addition to confirm high-density epitopes exclusively for the Leishmaniasis genus, because there was no cross reactions among several diseases tested. We found evidence of IgG anti-leishmaniasis chagasi antibodies persistently -positive in patients treated appropriately for kala-azar, supporting with evidence that rK39 does not define disease activity and establishes criteria for cure, strengthening that other homogenizing are investigated by a positive result in individual from endemic area of Kala-azar, in disease carrier of febrile hepatosplenomegaly and pancytopenia . The quick test Rk39 must be read and interpreted immediately up to a maximum of 10 minutes driving clinical decision-making, and that its deployment as diagnostic helper method should be part of the laboratorial routine services, particularly in secondary and tertiary health endemic regions of visceral leshmaniasis . Keywords: American visceral leishmaniasis. Kala-azar. Recombinant K39 Antigen. Kala-azar through rK39 antigen diagnostic. / A confirmação diagnóstica de leishmaniose visceral ou calazar é realizada através da detecção do parasito por métodos diretos, através do encontro de formas amastigotas no interior de macrófagos ou monócitos, em aspirado esplênico, hepático, medula óssea, histopatológico de linfonodo e esfregaço do sangue periférico, com ampla variação de sensibilidade de acordo com o sítio pesquisado, constituindo-se o padrão-ouro a visualização de Leishmania sp. A pesquisa de anticorpos específicos para triagem diagnóstica da leismaniose visceral através do ELISA, reação de imunofluorescência indireta e os testes de aglutinação direta possuem sensibilidade alta e especificidade limitada pelas reações cruzadas com tripanosomatídeos e micobactérias, incluindo-se tuberculose, hanseníase, doença de Chagas, e ainda, leishmaniose tegumentar e histoplasmose. O teste intradérmico de Montenegro é sempre negativo durante a fase ativa da doença, e baseia-se na memória imunológica dependente de linfócitos Th1. O ojetivo deste trabalho foi evidenciar a relevância do teste rápido para detecção de anticorpo anti-leishmania chagasi utilizando o antígeno recombinante rK39 que apresentou sensibilidade de 99,2%. Foram realizados testes sorológicos pelo ELISA que apresentou sensibilidade de 80%, e a reação de imunofluorescência indireta para calazar com sensibilidade de 82%. O gold-standard diagnóstico empregado para todos exames foi a pesquisa microscópica direta do parasito no aspirado de medula óssea e a positividade foi de 71%, em uma pesquisa realizada em hospitais terciários de Fortaleza-CE. A reação imunoenzimática para teste rápido em fita contendo antígeno rK39 apresentou elevada sensibilidade e especificidade permitindo diagnóstico imediato e início precoce do tratamento, além de confirmar alta densidade de epítopos exclusivamente para o gênero Leishmania, pois não houve reações cruzadas dentre várias doenças testadas. Detectamos títulos de anticorpos IgG anti-leishmania chagasi persistentemente positivos em pacientes tratados adequadamente para calazar, corroborando com evidências de que o rK39 não define doença em atividade e nem estabelece critérios de cura, fortalecendo que outras possibilidades diagnósticas sejam investigadas mediante um resultado positivo em indivíduo procedente de zona endêmica para calazar, em paciente portador de hepatoesplenomegalia febril e pancitopenia. O teste rápido rk39 deverá ter sua leitura imediatamente relizada e interpretada em até no máximo 10 minutos, objetivando tomada de decisões clínicas, e que sua implantação como método auxiliar de diagnóstico deveria fazer parte da rotina laboratorial, particularmente de serviços secundários e terciários de saúde em regiões endêmicas para leshmaniose visceral.

SILVA, Júlio César Ferreira da. Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA), nos municípios de Crato, Juazeiro do Norte e Barbalha, estado do Ceará, Brasil, 2003-2005. 2009. 67 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-21T15:37:47Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_jcfsilva.pdf: 967602 bytes, checksum: e2b02970971a5ccf120a52b7d388d30b (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:11:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_jcfsilva.pdf: 967602 bytes, checksum: e2b02970971a5ccf120a52b7d388d30b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:11:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_jcfsilva.pdf: 967602 bytes, checksum: e2b02970971a5ccf120a52b7d388d30b (MD5) Previous issue date: 2009 / Leishmaniasis is a protozoal disease caused by different species of Leishmania ROSS 1903. In Brazil, American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is no longer predominantly a rural phenomenon, due to the proximity of man to nature, where the disease occurs naturally as a zoonosis, but is now spreading to periurban areas. ATl occurs frequently in the cutaneous form with mostly painless soresor may be asymptomatic or subclinical. The objective of the present study was to describe the main clinical and epidemiological aspects of ATL, in three municipalities in Northeastern Brazil on records of the SINAN disease reporting system covering the period 2003 – 2005. The records of 300 patients were included in the study ( Crato n=136; Juazeiro do Norte n=66; Barbalha n=98). On the average, 53,7% ( 137/300) of the cases Were from the rural zone, with only 12,2% (8/66) registered for Juazeiro do Norte. Autochthonous cases accounted for 99% (295/300). Fifty-one percent (153/300) of the patients were male. Overall, 23% (69/300) were students, 16% (48/300) were formers and 16% (48/300) were retirees. The most common clinical presentations was cutaneous (97%; 291/300), sixty-nine records registered the vector, 51 of wich collected in patients home. In conclusion, ATL is a important endemie pathology in the region. / As Leishmanioses são protozooses determinadas por protozoários de diferentes espécies do gênero Leishmania Ross 1903. A Leishmaniose Tegumentar Americana-LTA tem largo espectro de manifestações. A LTA no Brasil mostra-se com um padrão não mais predominantemente rural, resultado do contato íntimo do homem com o ambiente silvestre onde a doença existe naturalmente como zoonose. Atualmente a urbanização da LTA tem mostrado freqüentemente um aumento da distribuição periurbana. A forma cutânea é a mais comum dentre as manifestações da LTA, as lesões produzidas são em geral indolores, podendo apresentar-se de forma assintomática ou sub-clínica. Este estudo teve como objetivo geral descrever os principais aspectos clínicos e epidemiológicos da LTA nos municípios de Crato, Juazeiro do Norte e Barbalha a partir das fichas de investigação do Sistema Nacional de Agravos de Notificação (SINAN), geradas no período de 2003 a 2005. Desse período, selecionamos 300 fichas de pacientes segundo critérios de inclusão e exclusão definidos na metodologia, sendo 136 do município do Crato, 98 do município de Barbalha e 66 do município de Juazeiro do Norte. A maioria, 53,7 % (137/300) era procedente da zona Rural, porém quando analisados isoladamente o município de Juazeiro do Norte mostrou somente12,2 % ( 8/66 ) dos casos na zona rural. Nessa pesquisa os casos autóctones foram 99 % (295/300). Prevaleceu o sexo masculino, 51 % (153/300), novamente, de forma isolada o município de Juazeiro do Norte apresentou uma inversão dessa relação. A ocupação/ramo de atividade dominante em 23 % (69/300) foi de estudantes, seguido de aposentados e agricultores com 16 % (48/300) cada um. A forma clínica em destaque foi a cutânea com 97 % (291/300). Registramos 69 ocorrências do vetor, dessas, 51 foram no intradomicilio. Para diagnóstico foram utilizados os exames: parasitológico direto da lesão, a intradermorreação de Montenegro (IDR) e o histopatológico. O exame parasitológico direto apresentou-se positivo em 19 % (57/300), negativo em 2 % (6/300). A IDR foi reativa em 41 % (123/300), e não reativa em 2 % (6/300). O histopatológico 16 % (49/300) mostrou-se positivo, 3,3 %(10/300) dos casos eram compatíveis com LTA. Concluímos que a LTA é uma patologia importante no Cariri, comportando-se de forma endêmica e com características.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-10-17T03:25:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347964.pdf: 1384022 bytes, checksum: 5a7b3a86827997b06e6fffeaec266e62 (MD5) Previous issue date: 2017 / A espécie Jungia sellowii Less. (Asteraceae) apresenta a perezona como um de seus metabólitos secundários e tal substância mostrou anteriormente atividade in vitro contra L. amazonensis. A forma cutânea da leishmaniose causa úlceras comumente em áreas expostas da pele. As terapias atualmente existentes para leishmaniose apresentam efeitos colaterais graves, alta toxicidade e complexidade de administração, havendo assim a necessidade do surgimento de novos tratamentos. A via tópica seria uma via de administração adequada para casos de doenças que acometem a pele, pois tem vantagens como a ação direta no sítio alvo e maior facilidade de aplicação. Considerando-se o exposto, o objetivo do trabalho foi isolar e identificar a perezona a partir de raízes de Jungia sellowii, incorporá-la em géis de uso tópico e avaliar sua atividade leishmanicida. Realizou-se o isolamento da perezona através de métodos cromatográficos e sua identificação através de RMN 1H e 13C. Posteriormente a perezona foi incorporada em diferentes concentrações em geis de Natrosol® de uso tópico. Um método em CLUE foi desenvolvido e validado para quantificação da perezona, usado para o estudo da estabilidade química da perezona em gel ao longo de sessenta dias. Foi avaliada a atividade leishmanicida (L. amazonensis) in vivo dos geis em camundongos Balb/c modelo de dorso. Iniciou-se a avaliação da atividade leishmanicida através de um estudo piloto, posteriormente realizou-se um estudo com um maior número de animais, mas devido à leitura ter sido positiva para todos os poços no método de diluição limitante para a quantificação da carga parasitária, impossibilitando a análise dos dados, um novo experimento foi planejado substituindo-se o método da diluição limitante pelo método de PCR, que é um método mais sensível. Devido à morte de alguns animais em tal experimento, provavelmente devido a estresse de manipulação, um novo experimento foi realizado. Ao final do tratamento, realizou-se a quantificação da carga parasitário pelo método de qPCR. Com os resultados obtidos observou-se que a perezona apresenta atividade leishmanicida, mas devido ao controle positivo não ter apresentado o resultado esperado novos testes estão sendo realizados a fim de obter resultados mais conclusivos.<br> / Abstract : The species Jungia sellowii Less. (Asteraceae) presents perezone as one of its secondary metabolites and this substance previously showed in vitro activity against L. amazonensis. Leishmaniasis cutaneous form causes ulcers in exposed areas of the skin. Existing therapies for leishmaniasis presents serious side effects, high toxicity and complexity of administration, thus necessitating the emergence of new treatments. The topical treatment would be a suitable alternative of administration for diseases that affect the skin, as it has advantages such as direct action at the target site and greater ease of application. Considering the above the objective was to isolate and identify perezone from roots of Jungia sellowii, to incorporate it into topical gels and evaluate its leishmanicidal activity. Thus, the isolation of perezone was performed chromatographic methods and its identification by 1H and 13C NMR. Subsequently perezone was incorporated in different concentrations in natrosol topical gels. A UPLC method was developed and validated for perezone quantification. With the developed UPLC method the chemical stability of perezone was evaluated over sixty days. The in vivo leishmanicidal activity was evaluated in Balb/c mice. The leishmanicidal activity was first evaluated through a pilot study, later a study was carried out with a larger number of animals, but because the reading was positive for all wells in the limiting dilution method for quantification of parasite load, making it impossible to analyze the data, a new experiment was planned by replacing the limiting dilution method by PCR method, wich is a more sensitive method. Due to the death of some animals in such experiment, probably due to handling stress, a new experiment was planned. At the end of the treatment, the parasitic load was quantified by qPCR method. With the results obtained it was observed that perezone has leishmanicidal activity, but due to Glucatime (positive control) did not present the expected result, new tests are being performed in order to obtain more conclusive results.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-28Bitstream added on 2014-06-13T19:03:58Z : No. of bitstreams: 1 melo_agr_dr_jabo.pdf: 408916 bytes, checksum: 3c5ff18a2b660a408a03403500819531 (MD5) / A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma zoonose causada pelo agente Leishmania infantum. O cão se destaca por seu importante papel na cadeia epidemiológica da doença, porquanto é o principal reservatório urbano da infecção, cuja transmissão é dependente de populações de Lutzomyia longipalpis. A enfermidade é multissistêmica e de patogenia complexa, envolvendo diferentes mecanismos imunológicos. A despeito do grande número de estudos sobre a patogenia e lesões que ocorrem na leishmaniose visceral canina, a fisiopatologia da lesão ocular ainda permanece obscura. O objetivo deste estudo foi detectar a presença de células inflamatórias e de formas amastigotas de L. Infantum pela imuno-histoquímica em olhos de cães experimentalmente infectados via ocular tópica. Constituiu-se um grupo inoculado (GI) composto por sete cães, que receberam a instilação de cultura de Leishmania infantum por via conjuntival, e um grupo controle (GC) composto por três cães, nos quais a instilação tópica foi realizada com solução salina. Após 60 dias, os tecidos oculares foram analisados utilizando-se as técnicas de coloração em Hematoxilina e Eosina (HE) e a reação de imuno-histoquímica pela streptoavidina-peroxidase. A análise histopatológica revelou uma resposta inflamatória com predomínio de plasmócitos e linfócitos, perivasculite, congestão vascular e hiperplasia das células caliciformes em conjuntiva. As glândulas lacrimais da terceira pálpebra apresentaram infiltrado inflamatório com atrofia focal e desorganização do estroma. Formas amastigotas de L. infantum foram observadas através da detecção imuno-histoquímica em 100% das amostras do grupo infectado / Canine visceral leishmaniasis (CVL) is an infection caused by Leishmania infantum agent. The dog stands out for its important role in the epidemiology of the disease, since it is the main urban reservoir of infection, whose transmission is dependent on populations of Lutzomyia longipalpis. The disease is multisystemic and complex pathogenesis, involving different immunological mechanisms. Despite the large number of studies regarding the pathogenesis and lesions that occur in canine leishmaniasis, the pathophysiology of a ocular lesion still remains obscure. The goal of this study was to evaluate the inflammatory cells and immunohistochemical detection of L. infantum in eyes from dogs experimentally infected by topical ocular infection. Constituted an inoculated group (IG), composed of seven dogs that received instillation of culture of Leishmania infantum by conjunctival route, and a control group (CG) composed of three dogs, in which the topical instillation was performed with saline. After 60 days, the ocular tissues were analyzed using the techniques of staining in hematoxylin and eosin (HE) and immunohistochemical reaction for streptoavidin-peroxidase. Histopathological analysis revealed an inflammatory response characterized by the presence of plasma cells, lymphocytes, congestion, perivasculitis and hyperplasia of the goblet cells in conjuctiva. In the lachrymal gland of the third eyelid were observed inflammatory response with focal atrophy and stromal disorganization. Amastigotes forms of L. infantum were observed by immunohistochemical detection in 100% of samples from infected group

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2011. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-06-01T14:00:26Z No. of bitstreams: 1 2011_KillarneyAtaideSoares.pdf: 1289323 bytes, checksum: c8fcfa542e2f27916a54c894b7d6614c (MD5) / Approved for entry into archive by Elzi Bittencourt(elzi@bce.unb.br) on 2012-06-02T14:54:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_KillarneyAtaideSoares.pdf: 1289323 bytes, checksum: c8fcfa542e2f27916a54c894b7d6614c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-02T14:54:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_KillarneyAtaideSoares.pdf: 1289323 bytes, checksum: c8fcfa542e2f27916a54c894b7d6614c (MD5) / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é um problema de saúde pública, cujo diagnóstico depende dos diversos métodos empregados em conjunto, na busca de obter melhor sensibilidade e especificidade. O objetivo do presente estudo foi validar a técnica de ELISA empregando exoantígenos (ELISA exoAg) de Leishmania mexicana e a técnica de Imunofluorescência Direta (IFD) para o diagnóstico da LTA em amostras de pacientes atendidos no Ambulatório de Dermatologia do Hospital Universitário de Brasília. O projeto incluiu 106 pacientes portadores de leishmaniose tegumentar americana atendidos entre os anos de 2007 e 2010, cuja confirmação da infecção ocorreu por critérios clínicos, epidemiológicos e laboratoriais. Foi realizada a coleta de amostra sanguínea e de fragmento de lesão de tecido cutâneo na fase pré-tratamento. Os soros foram armazenados a -20ºC e o fragmento de lesão foi comprimido sobre uma lâmina de vidro em 6 pontos e a lâmina foi fixada com acetona em banho de gelo. O teste de ELISA com Exo-Ag foi realizado com soros prédiluídos proporção 1:100. Os resultados demonstraram que houve predomínio da forma cutânea (84,9%) e apenas 15,1% de casos na forma mucosa. Os casos de infecção pela primeira vez somaram maioria (83%) contra 11% de recidivas. O ELISA exo-Ag demonstrou sensibilidade de 90,8 5,7% (n = 98; IC 95%). Em grupo controle composto por pacientes aparentemente sadios a especificidade do ELISA exo-Ag foi de 91,3 6,2% (n = 80; IC 95%). Quanto à especificidade, em amostras de pacientes portadores de diversas doenças: doença de Chagas: 66,7 18,8% (n = 24; IC 95%); em amostras de portadores de doenças reumáticas: 42,4% 16,9% (n = 33; IC 95%); pênfigo foliáceo: 76,9 ± 22,9% (n = 13; IC 95%); hanseníase virchowiana: 85,7 ± 24,2% (n = 8; IC 95%); soros com reação VDRL positivas: 87,5 ± 15,7% (n = 16; IC 95%); e micoses profundas: 77,8 ± 27,4% (n = 9; IC 95%). O ELISA exo-Ag obteve valor preditivo positivo de 73,5 ± 8,8% (n = 96), negativo de 93,3 ± 5,4 (n = 81)% e acurácia de 87,6%. A IFD, por sua vez, apresentou sensibilidade de 72,2 ± 10,4% (n = 72; IC 95%) e em amostras de pacientes com lesão cutânea, mas não portadores de LTA, a especificidade foi de 96,3 ± 5,0% (n = 55; IC 95%), garantindo valor preditivo positivo de 96,3 ± 4,3 (n=79), negativo de 72,6 ± 10,1% (n=75) e acurácia de 82,7%. A PCR-RFLP verificou presença de subgênero Viannia na maior parte das amostras indicando tratar-se da espécie L. V. braziliensis. A avaliação dos custos verificou que os dois métodos propostos custam 40 % mais que o conjunto de técnicas de rotina, por paciente. Por outro lado, a análise dos resultados dos testes propostos, de forma concomitante, demonstrou aumento na sensibilidade e na especificidade, com a vantagem da rapidez do resultado. Os resultados demonstraram bom desempenho do ELISA exo-Ag e da IFD, e validaram as 2 técnicas propostas para o diagnóstico de LTA causada por L. braziliensis. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / American Cutaneous leishmaniasis (ACL) is a public health problem whose diagnosis depends on the various methods used together in the quest to get better sensitivity and specificity. The purpose of this study was to validate the ELISA technique employing exoantigens (ELISA exoAg) of Leishmania mexicana and direct immunofluorescence (DIF) for the diagnosis of ACL. in samples from patients at the Clinic of Dermatology, University Hospital of Brasília. The project included 106 patients with cutaneous leishmaniasis treated between the years 2007 and 2010, whose infection was confirmed by clinical, epidemiological and laboratory. We collected blood sample and a fragment of skin tissue injury in the pre-treatment. Sera were stored at -20º C and fragment of lesion was compressed on a glass slide in six points. The blade was fixed with acetone in ice bath. The ELISA with Exo-Ag was carried out with sera pre-diluted 1:100 ratio. The results showed a predominance of cutaneous form (84.9%) and only 15.1% of cases in the mucosal form. The new cases totaled majority (83%) against 11% of recurrences. The exo-Ag ELISA showed sensitivity of 90.8 6.2% (n = 98, CI 95%). In control group of apparently healthy patients, the specificity of exo-Ag-ELISA was 91.3 5,7% (n = 80; CI 95%). For specificity, we tested sera from patients with various diseases: patients with rheumatic diseases: 42.4 16.9% (n = 33; CI 95%); Chagas' disease: 66.7 18.8% (n = 24, CI 95%); pemphigus foliaceus: 76.9 ± 22.9% (n = 13, CI 95%), hanseniasis: 85.7 ± 24.2% (n = 8, CI 95%); patients with VDRL positive test: 87.5 ± 15.7% (n = 16, CI 95%) and deep mycoses: 77.8 ± 27.4% (n = 9, CI 95%). The exo-Ag ELISA obtained positive predictive value of 73.5 ± 8,8% (n = 96; CI 95%), negative predictive value of 93.3 ± 5,4% (n = 81; CI 95%) and 87.6% of accuracy. The DIF, showed sensitivity of 72.2 ± 10.4% (n = 72, CI 95%) and specificity was 96.3 ± 5.0% (n = 55, CI 95%) in samples from patients with skin lesions (but not patients with ACL), ensuring positive predictive value of 96.3 ± 4,3% (n = 79; CI 95%), negative predictive value of 72.6 ± 10,1 (n = 75; CI 95%) and accuracy of 82.7%. The PCR-RFLP found Viannia subgenus of most of the samples, that indicated the presence of the species L. V. braziliensis. The evaluation found that the two proposed methods cost 40% more than the set of routine, per patient. However, the analysis of the results of the proposed tests, concomitantly, showed an increase in sensitivity and specificity, with the advantage of less time to finish. The results showed good performance of the exo-Ag ELISA and DIF, and validated the two proposed techniques for the diagnosis of ACL caused by L. braziliensis.

Resumo: Lutzomyia (Nyssomyia) intermedia (Lutz & Neiva, 1912) é considerado como um dos vetores do protozoário Leishmania (Viannia) braziliensis, agente etiológico da Leishmaniose Tegumentar Americana no Paraná. Neste estado, uma das áreas de transmissão da doença é o Vale do Rio Ribeira, onde L. intermedia encontra-se de modo prevalente. Este flebotomíneo é entendido por alguns autores como sendo um complexo de espécies crípticas, onde a diferenciação entre os dois grupos (linhagens) que formam o complexo é feita morfologicamente. Assim, procurou-se determinar o nível de variabilidade fenotípica e genotípica desta comunidade de flebotomíneos no Vale do Ribeira paranaense, com ênfase no Complexo L. intermedia. Procurou-se também detectar o protozoário Leishmania nas fêmeas capturadas. Para ambos os objetivos, coletas foram realizadas, nos municípios de Cerro Azul e Adrianópolis, em diferentes ambientes (domicílio, peridomicílio e mata). Após as capturas, os insetos foram dissecados, identificados e separados por espécie. Utilizando armadilhas CDC, 432 espécimes foram coletados (304 machos e 128 fêmeas). As duas linhagens de L. intermedia foram encontradas nos dois municípios, e pelo menos mais três espécies (Lutzomyia fischeri, Lutzomyia pessoai e Lutzomyia migonei) compõem a fauna flebotomínica na região. Para avaliar a variabilidade genética, o DNA dos flebotomíneos do Complexo L. intermedia e das outras quatro espécies foi extraído e submetido ao RAPD (Amplificação Randômica de DNA), com o uso de quatro iniciadores (A2, A3, A9 e A10). Os dendrogramas gerados demonstraram variados graus de similaridade, com o “primer” A10 indicando existência de fluxo gênico entre as populações estudadas. O “primer” A2 foi útil em agregar os espécimes do Complexo L. intermedia de acordo com a sua origem bio-geográfica, e os “primers” A3 e A9 sinalizaram ser possíveis marcadores espécie-específico ou ecótopo-específicos. A análise através do RAPD também uniu num mesmo agrupamento as duas linhagens de L. intermedia, o que apóia a existência de uma única espécie neste grupo. A grande diversidade genotípica em L. intermedia, aliada à sua alta prevalência (93,28%) nas coletas realizadas, incluindo os domicílios, corrobora o caráter antropofílico desta espécie, e o provável status de vetor de Leishmania na região, apesar de até o presente não ter sido isolado o protozoário de nenhuma fêmea.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-10-08T20:25:11Z No. of bitstreams: 1 Dissert_MarciaHueb.pdf: 1107770 bytes, checksum: d9ee3e5cfb31d4e7b2bc12002f87fbef (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-10-13T12:44:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissert_MarciaHueb.pdf: 1107770 bytes, checksum: d9ee3e5cfb31d4e7b2bc12002f87fbef (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-13T12:44:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissert_MarciaHueb.pdf: 1107770 bytes, checksum: d9ee3e5cfb31d4e7b2bc12002f87fbef (MD5) Previous issue date: 2007 / O antimonial pentavalente, indicado como tratamento de escolha para a leishmaniose tegumentar americana (LTA), é um medicamento eficaz, mas de toxicidade elevada. A resposta imune estabelecida pelo homem diante de uma infecção por Leishmania é fator determinante para a evolução dessa infecção. Assim, pode ser considerada de interesse a avaliação de uma modalidade de tratamento capaz de induzir uma resposta imune associada à regressão de lesões e proteção, o que por hipótese poderia ocorrer com a estimulação antigênica resultante do uso de uma vacina antileishmaniose. Estudos relatados com uma vacina produzida no Brasil, inicialmente avaliada para a profilaxia da LTA e posteriormente para a terapia da doença, mostraram resultados satisfatórios. Nesses trabalhos, o uso do Leishvacin® associou-se a taxas de cura semelhantes às obtidas com os antimoniais, mas sempre se utilizando esquemas prolongados, nos quais as séries eram várias vezes repetidas. Com a proposta de se avaliar a eficácia do uso do Leishvacin® como imunoterapia na leishmaniose cutânea, conduziu-se um ensaio clínico controlado e randomizado, aberto em decorrência da diferença das vias de administração dos medicamentos em comparação. Considerou-se como essencial que o esquema terapêutico a ser utilizado fosse aplicável em situações habituais de assistência aos pacientes com LTA. A amostra inicialmente planejada foi modificada após uma análise intermediária que mostrou resultados conclusivos quanto ao desfecho, não havendo justificativa ética para a continuidade do estudo. Foram tratados 34 pacientes com Leishvacin® e 32 pacientes com Glucantime® em série única de 20 dias, com 133 administração diária supervisionada dos medicamentos. Eram na maioria do sexo masculino (92,4%), com idade variando de 20 a 50 anos (72,7%). Todos tiveram algum exame parasitológico positivo, 92,2% com identificação do parasito por PCR, todos pertencentes ao complexo Viannia. Os pacientes foram avaliados quanto ao desfecho principal cura ou falha terapêutica ao final da série e a cada 30 dias, com tempo máximo de 90 dias de observação após a medicação. Numa análise de intenção de tratar, apresentaram cura clínica 20,6% dos pacientes do grupo do Leishvacin® e 81,3% dos pacientes do grupo do Glucantime® (p<0,001). O risco relativo de apresentar falha foi 4,25 vezes maior no grupo do Leishvacin® e a média de tempo para a ocorrência de falha terapêutica foi de 12,3 semanas (11,4; 13.3) e de 14,5 (13,6; 15,1) nos grupos do Leishvacin® e do Glucantime®, respectivamente. O efeito do tratamento manteve-se como significante após ajuste numa análise de regressão logística. O uso do Leishvacin® esteve associado a uma freqüência baixa de eventos adversos sistêmicos. O uso do antimonial associou-se a freqüência elevada de artralgia e mialgia, sintomas digestivos e confirmou a já relatada tendência de elevação da amilase sérica e enzimas hepáticas. Não houve indicação de interrupção dos esquemas terapêuticos para pacientes do estudo. O Leishvacin® não se mostrou como uma alternativa de tratamento da leishmaniose cutânea localizada no esquema e dose utilizados no presente ensaio clínico. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Pentavalent antimonial is the first-choice drug for the treatment of American tegumentary leishmaniasis (ATL) but it causes relevant toxicity. The immune response established by the host constitutes a determinant factor for the evolution of this infection. Thus, it is an important goal to evaluate alternative treatments that could induce lesion healing, hypothetically, this situation would be achievable through the use of anti-leishmanial vaccination. Some reports on studies carried out with a vaccine produced in Brazil, used as a prophylactic or therapeutic against leishmaniasis, had shown good results. In those reports, cure rates with Leishvacin® were similar to the cure rates observed with pentavalent antimonial treatment, but the patient exposure to Leishvacin® was longer and repeated compared to the the exposure to antimonial. To evaluate the effectiveness of the use of the Leishvacin® as imunotherapy for cutaneous leishmaniasis, we conducted an open-label controlled randomized clinical trial, considering the difference in the administration route of Leishvacin® and Glucantime®. It was considered essential to evaluate a feasible schedule to be used in common health-care facilities which take care of the patients with ATL. An interim analysis supported the interruption of the study because of a clear inferiority observerd in the immunotherapy arm. Thirty-four and thirty-two patients were submitted to Leishvacin® and Glucantime® treatment, respectively, in only one series of 20 days, with supervised daily administration. The patients were mainly male (92.4%), with age range from 20 to 50 years (72.7%). All had had confirmation of the diagnosis based on parasitological tests, 92.2% with identification of the parasite by the PCR 135 assay. All identified parasites belong to the Viannia complex. Main outcomes were diagnosed by clinical criteria at the end of the treatment series and every 30 days thereafter. The total follow-up after treatment was three months. Intention-to-treat analysis showed cure rate of 20.6% in the Leishvacin® group and of 81.3% in the Glucantime® group (p<0.001). The relative risk of failure was 4.25 times higher in the Leishvacin® group and the mean time-to-failure were 12.3 weeks (11.4; 13.3) and 14.5 (13.6; 15.1) for Leishvacin® and Glucantime®, respectively. The effect of the treatment remained significant after adjusting by relevant co-variates in a logistic regression model. The use of Leishvacin® was associated with a low frequency of systemic adverse events. Glucantime® group showed higher frequency of arthralgia and myalgia, dyspeptic symptoms and abnormal serum amylase and hepatic enzymes levels without clinical symptoms. There was no need of Glucantime® interruption because of adverse events. Concluding, our results with Leishvacin® do not suggest that it could be an alternative against cutaneous leishmaniasis in the treatment schedule and dose used in the present trial.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by mariana castro (nanacastro0107@hotmail.com) on 2009-12-16T14:20:01Z No. of bitstreams: 1 YVONE MAIA BRUSTOLONI.pdf: 1628321 bytes, checksum: 5482ca541aca8986f18eba24f5bb5173 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2009-12-21T23:31:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 YVONE MAIA BRUSTOLONI.pdf: 1628321 bytes, checksum: 5482ca541aca8986f18eba24f5bb5173 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-21T23:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 YVONE MAIA BRUSTOLONI.pdf: 1628321 bytes, checksum: 5482ca541aca8986f18eba24f5bb5173 (MD5) Previous issue date: 2006-09-29 / A faixa etária pediátrica é especialmente atingida pela leishmaniose visceral (LV), uma doença atualmente em franca expansão no Mato Grosso do Sul e em outras localidades brasileiras. O diagnóstico e o tratamento da LV em crianças foram estudados retrospectivamente, através da análise dos dados de pacientes internados no Hospital Universitário da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, no período de janeiro de 1998 a fevereiro de 2005, o que resultou em cinco estudos. No primeiro estudo, identificou-se a forma de apresentação da patologia nas crianças do Estado. A LV vem se apresentando como uma doença de evolução rápida nessa região, evidenciando um padrão diferente do considerado típico para a patologia, habitualmente prolongada e de longa duração. O diagnóstico de pacientes em fase evolutiva não muito adiantada e o tratamento adequado dos casos resultaram em uma doença de baixa mortalidade (2,6%). Os métodos convencionalmente utilizados no diagnóstico da LV foram analisados. A combinação de dois testes tradicionais, como a microscopia direta do aspirado medular e a sorologia por Imunofluorescência, possibilitou a confirmação do diagnóstico na quase totalidade dos casos em que esses exames foram realizados (98,5%). Enfatiza-se a necessidade da obtenção da sorologia, frequentemente colocada em segundo plano, devido à preferência dos profissionais locais pela realização do mielograma como única forma de diagnóstico. Pela primeira vez no Estado, utilizou-se um método de biologia molecular no estudo de casos de LV. A utilização da PCR (reação em cadeia da polimerase) na detecção de DNA de Leishmania em lâminas de aspirado medular, coradas por Giemsa e estocadas, foi avaliada. O teste foi altamente sensível (92,3%) e específico (97,7%), mostrando-se útil na elucidação de casos difíceis. Os aspectos mais importantes relacionados ao tratamento da doença foram avaliados, descrevendo-se as drogas utilizadas, seus efeitos adversos, a resposta terapêutica, o tempo de tratamento e as dificuldades no manejo do mesmo. O antimoniato de meglumina mostrou-se eficaz e seguro na infância e, apesar da existência atual de novas opções para tratamento, sua indicação como primeira escolha terapêutica em crianças é ainda a mais adequada em nosso meio. O problema da recidiva após o tratamento também foi enfocado; são descritos 4 casos em crianças, com discussão de aspectos recentes sobre o assunto. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The pediatric age range is particularly affected by visceral leishmaniasis, a disease that is currently spreading steadily in the state of Mato Grosso do Sul and in other areas in Brazil. The diagnosis and treatment of the disease in childhood were investigated retrospectively by analyzing data of patients admitted to the Teaching Hospital of Universidade Federal de Mato Grosso do Sul from January 1998 to February 2005. The investigation was composed of five studies. The clinical presentation of the pathology in children in Mato Grosso do Sul was identified. Visceral leishmaniasis has been exhibiting fast evolution in the region, with a mode of presentation that differs from the pattern viewed as typical for the pathology, usually of long-lasting course. Diagnosis of patients in a not much advanced phase of the disease and the availability of suitable treatment have resulted in an illness of low mortality. The methods conventionally employed in the diagnosis of visceral leishmaniasis were analyzed. The combination of two traditional tests—direct microscopy of bone marrow aspirates (BMAs) and immunofluorescence serology—allowed diagnosis to be reached in nearly all the cases for which these tests were performed (98.5%). Emphasis is placed on the need for conducting serological testing, a procedure often assigned secondary importance, as local health professionals tend to favor the use of myelograms as the only diagnostic method. For the first time in Mato Grosso do Sul a molecular biology method has been applied to the study of cases of visceral leishmaniasis. The use of polymerase chain reaction (PCR) for detection of Leishmania DNA in archived Giemsa-stained BMA slides was evaluated. The technique was found to be useful in the diagnostic clarification of difficult cases, given its high sensitivity (92.3%) and specificity (97.7%). The most important aspects related to treatment of the disease were evaluated, along with a description of the drugs prescribed and their adverse effects, therapeutic response, length of treatment, and difficulties posed for the management of treatment. Meglumine antimoniate was found to be effective and safe in pediatric patients and, despite the current availability of new treatment options, its indication as first-line therapy in the treatment of childhood visceral leishmaniasis is still the most suitable in our setting. The issue of post-treatment relapse was also addressed in one the study; four cases of relapse in children are described, with a discussion on recently addressed aspects.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-04-22T13:53:33Z No. of bitstreams: 1 2009_RosanaRdeSaldanha.pdf: 1382455 bytes, checksum: 7809913a5fc7df0902c606c62a7594b8 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-06T19:11:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_RosanaRdeSaldanha.pdf: 1382455 bytes, checksum: 7809913a5fc7df0902c606c62a7594b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-06T19:11:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_RosanaRdeSaldanha.pdf: 1382455 bytes, checksum: 7809913a5fc7df0902c606c62a7594b8 (MD5) Previous issue date: 2009 / As leishmanioses são causadas por protozoários do gênero Leishmania e estima-se que 12 milhões de pessoas no mundo estejam infectadas. Os fagócitos são importantes para a defesa contra o parasito, por serem as células hospedeiras e responsáveis pela sua eliminação. A droga de escolha para o tratamento das leishmanioses no Brasil é o antimoniato de N-metil glucamina, e apesar da sua ampla utilização, ainda não possui seu mecanismo de ação elucidado. O presente estudo avaliou a influência do tratamento com o antimoniato de N-metil glucamina sobre a capacidade fagocitária, a produção de peróxido de hidrogênio, de FNT-a, IL-10 e de IFN-g por monócitos de 17 indivíduos portadores de leishmaniose cutânea durante o tratamento com esta droga; e também a sua influência sobre a capacidade fagocitária, a produção de peróxido de hidrogênio e a produção de óxido nítrico pelos macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c e C57BL/6 infectados pela Leishmania amazonensis. No estudo em humanos, o índice fagocitário dos indivíduos infectados se mostrou menor do que o dos indivíduos controles. Já no sétimo dia de tratamento dos indivíduos, observou-se aumento na capacidade fagocitária. Os indivíduos infectados apresentaram produção de peróxido de hidrogênio maior do que a dos controles, e o tratamento com o antimoniato de N-metil glucamina não modificou este perfil de produção. A produção de FNT-a dos indivíduos infectados foi menor que a dos controles, e o tratamento aumentou significantemente esta produção. A produção de IL-10 de indivíduos infectados foi muito baixa, detectada em poucos indivíduos, e na vigência do tratamento não foram observadas diferenças entre os grupos. A produção do IFN-g de indivíduos infectados apresentou um pequeno aumento em relação aos controles, mas não se sabe se isto possui significado biológico. O tratamento não influenciou na produção desta citocina. Nos estudos com camundongos, a capacidade fagocitária dos camundongos C57BL/6 controles se mostrou maior do que a dos animais BALB/c. Após a infecção, houve aumento da capacidade fagocitária dos camundongos BALB/c tanto pela infecção como pelo tratamento, enquanto não houve resposta para os animais C57BL6. A produção do peróxido de hidrogênio pelos animais controles foi maior para os camundongos C57BL/6. Entretanto, a produção de peróxido de hidrogênio foi maior para os camundongos BALB/c após o tratamento, enquanto não houve resposta dos animais C57BL/6. Embora a produção de óxido nítrico nas duas linhagens tenha se mostrado baixa, foi maior para os camundongos BALB/c. É possível que esta produção exacerbada de radicais livres pelos animais BALB/c contribua para a patogenia da infecção. O antimonial foi capaz de modificar as funções de fagócitos de seres humanos e de camundongos BALB/c infectados, influenciando a resposta do hospedeiro contra o parasito. A compreensão do modo de ação desta droga não esclarece apenas os mecanismos da relação-parasito hospedeiro, como também contribui para uma terapia mais adequada para as leishmanioses. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniases are caused by protozoans of Leishmania genus and there are an estimated 12 million people infected worldwide. Phagocytes are important in defense against parasite because they are host cells and may eliminate parasite. The meglumine antimonate is the drug of choice to treat leishmaniases in Brazil, and in spite of being widely used its mechanism of action remains unknown. This study evaluated the influence of meglumine antimonate treatment on phagocytic capacity, hydrogen peroxide production, and TNF-a, IL-10 and IFN-g production by monocytes and/or lymphocytes from 17 cutaneous leishmaniasis individuals during the treatment; and in addition, evaluated the influence of the drug on phagocytic capacity, hydrogen peroxide and nitric oxide production by peritoneal macrophages from BALB/c and C57BL/6 mice infected with Leishmania amazonensis. In the study with humans, the phagocytic capacity of leishmaniasis individuals was lower than that of control. The meglumine antimonate administration to leishmaniasis subjects caused a significant increase in phagocytosis already observed on the seventieth day of treatment. The leishmaniasis subjects showed higher hydrogen peroxide production than control and treatment with meglumine antimonate did not influence the production of this oxygen radical. Leishmaniasis individuals showed significant decrease of TNF-a production and treatment caused a significant increase of this cytokine production. The leishmaniasis subjects showed a very low production of IL-10, and this cytokine was detected in only a few individuals, and during the treatment there was no differences between the studied groups. The IFN-g production by Leishmania infected individuals showed a little increase compared with the controls, but the biological meaning of this phenomenon is unknown. In the study with mice, the phagocytic capacity of C57BL/6 healthy mice was higher than that from BALB/c animals. However, the Leishmania amzonensis infected-BALB/c animals showed higher phagocytic capacity than control animals and there was an increase on phagocytic capacity after meglumine antimonate treatment, while there was no influence of the drug or infection for C57BL6 mice. The hydrogen peroxide production was higher in control animals for C57BL6 mice. However, the hydrogen production was higher in BALB/c mice after treatment, but there was no response in C57BL/6 animals. In the same way, although nitric oxide production was low in both inbreed animals, this production was higher to the BALB/c animals. It is possible that this enhanced radical oxygen species production by the BALB/c animals may contribute to the severity of lesions observed. Our data showed that the meglumine antimonate could interfere in the phagocyte functions of humans and infected-BALB/c mice, showing that this drug may influence in the host-parasite response. These findings shed some light on the understanding of host-parasite relationship and it may improve the treatment of Leishmania infected-individuals.