Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-10T19:36:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Gustavo Miranda.pdf: 1853807 bytes, checksum: f9a1c2b796442124414bba8e163ac719 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-10T19:36:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Gustavo Miranda.pdf: 1853807 bytes, checksum: f9a1c2b796442124414bba8e163ac719 (MD5) / Doenças como a leishmaniose é uma importante causa de morbidade e mortalidade no Brasil e seus diagnósticos devem ser melhoradas. A produção de anticorpos monoclonbais anti-L. infantum e acoplamento ao sensor piezoelétrico, para formar um dispositivo bioeletrônicos capaz de detectar rapidamente antígenos de Leishmania sp, tanto qualitativa como quantitativamente, é uma alternativa promissora para o diagnóstico da leishmaniose, devido à sua alta especificidade e sensibilidade, portabilidade e baixo custo, em comparação aos métodos convencionais. Objetivo: Desenvolver um imunossensor capaz de detectar antígenos de L. infantum em tecidos de animais infectados. Material e Método: Quatro hibridomas produtores de anticorpos monoclonais anti-amastigota de L. infantum teve sua especificidade confirmada por ELISA. Esses anticorpos foram imobilizados sobre um cristal piesoelétrico de quartzo através de uma fina camada de 2-aminoetanotiol (cisteamina) e glutaraldeído, e submetidos a injeções de extratos de baço de hamster infectados e não-infectados com L. infantum. Resultados: Quatro anticorpos (5A9H8, 2B7B8, 4B6F7 e 5AB3A10B4), todos da classe IgG, foram acoplados à superfície do transdutor e foram capazes de reagir contra extrato de baço de hamster infectado com L. infantum. A metodologia desenvolvida foi capaz de detectar 3,5x10 4 amastigotas por grama de tecido infectado com os anticorpos 5A9H8, 4B6F7 e 5AB3A10B4, e 1,75x10 4 com o anticorpo 2B7B8. Conclusões: Os resultados demonstraram que este teste pode ser útil para quantificar amastigotas de L. infantum em órgãos de animais experimentais para estudos sobre a patogênese da leishmaniose visceral americana e é uma ferramenta promissora para desenvolver um diagnóstico de leismanioses humana e canina. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-17T17:22:34Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Maria das Graças de Oliveira Brito.pdf: 956170 bytes, checksum: e5dfa4d2a845741fe78f494dc079422b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T17:22:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Maria das Graças de Oliveira Brito.pdf: 956170 bytes, checksum: e5dfa4d2a845741fe78f494dc079422b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq;) Bolsa de Estudo da Capes; Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Doenças Tropicais (CNPq/MCT). / Introdução: A leishmaniose cutânea (LC) é uma endemia em expansão. Tem-se mostrado que a resposta imune inflamatória é fundamental na gênese das ulcerações: (1) Intenso infiltrado inflamatório na lesão, com poucos parasitas, (2) produção elevada de IFN- e TNF- in situ, (3) correlação direta entre quantidade de linfócitos ativados e tamanho da úlcera, (4) tratamento com antimonial na fase pré-ulcerativa não impede o aparecimento da úlcera. Estes dados sustentam a necessidade de se associar ao tratamento específico, medicamentos que modulem a resposta imune. A pentoxifilina surge como potencial terapêutico por inibir a produção de TNF- , citocina pró-inflamatória. Objetivo: Avaliar em um ensaio clínico controlado de fase III a influência da pentoxifilina associada ao antimonial na resposta imune em pacientes com leishmaniose cutânea. Metodologia: Ensaio clínico randomizado, duplo-cego, placebo controlado de 17 pacientes com LC atendidos no posto de saúde de Corte de Pedra (BA). Todos confirmados por PCR ou cultura. Incluídos pacientes apresentado de 1 a 3 lesões ulceradas com 1 a 3 meses de evolução, entre 18 e 65 anos. Todos foram tratados com antimonial pentavalente (Sbv) (20mg/Kg/dia por via intravenosa) associado com placebo ou pentoxifilina (400mg - 3 vezes ao dia) por 20 dias. A cura foi definida por critério clínico: cicatrização total das lesões 60 dias após término do tratamento. As concentrações de TNF- , CCL-3, CXCL-9 e CXCL-10 foram determinadas em sobrenadantes de culturas de células mononucleares estimulada com antígeno de Leishmania pela técnica de Elisa. Resultados: Falha terapêutica foi observada em 14% dos pacientes tratados com a associação e em 45% do grupo controle (p = 0,05) . Os valores de TNF- ,CCL-3, CXCL-9 e CXCL-10 foram mensurados antes e quinze dias (D15) após início de tratamento. Em ambos os grupos houve diminuição de CCL- 3 e TNF- e aumento dos níveis de CXCL-9 e CXCL-10 no D15. No entanto, a queda dos níveis de TNF- foi maior no grupo da pentoxifilina (p = 0,004). Conclusão: Associação com a pentoxifilina aumentou a taxa de cura da LC, associado a inibição na produção de TNF- a. / Salvador

Made available in DSpace on 2014-05-29T12:01:39Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 0000038.pdf: 2738587 bytes, checksum: 7dd6564c63323c9353ec15e4c463c4a5 (MD5) 0000038.pdf.txt: 326814 bytes, checksum: 1acd256ee177408fef6eab95a8608842 (MD5) 0000038.pdf.jpg: 1316 bytes, checksum: 9be572866ac5936e7312385f6a8bde28 (MD5) Previous issue date: 2013 / A Leishmaniose Visceral Americana (LVA) no Brasil é um importante problema de Saúde Pública, cuja expansão geográfica tem possibilitado o seu eselecimento em áreas urbanas das médias e grandes cidades. Desta forma, ressalta-se a importância da produção de conhecimentos sobre os fatores determinantes associados ao novo perfil epidemiológico. Este estudo procurou identificar fatores da expansão e urbanização dovetor, Lutzomyia (L.) longipalpis, numa abordagem ampla no contexto epidemiológico da LVA, considerando múltiplas interações: ambiente, parasita e reservatórios. Os objetivos foram: discutir os estudos sobre hábitos alimentares de insetos vetores de patógenos humanos, com ênfase na subfamília Phlebotominae; analisar os fatores associados ao processo de expansão e urbanização da LVA; discutir a expansão da LVA no Estado do Tocantins correlacionando incremento de desflorestamento, estratificação da doença, classes do uso do solo e presença do vetor L. (L.) longipalpis; diagnosticar a infecção natural por Leishmania (L.) infantumchagasi em associação com a fonte alimentar, através de métodos moleculares, em exemplares de L. (L.) longipalpis procedentes dos municípios de Araguaína (TO), Fortaleza (CE), Sobral (CE), e Rio de Janeiro (RJ). No atual cenário das mudanças ambientais, é fundamental a condução de estudos voltados para as doenças relacionadas ao ambiente, como a LVA. Nesta perspectiva, pesquisas sobre o vetor L. (L.) longipalpis devem produzir conhecimentos que permitam entender a epidemiologia da doença, além de subsidiar o planejamento de estratégias de controle. A análise ecoepidemiológica da LVA em Tocantins revelou que, dos 139 municípios, 120 apresentaram registros de casos humanos. / As áreas de incremento do desmatamento se mantiveram frequentes, principalmente na região norte,onde se observa elevado número de casos humanos. Em relação ao perfil de estratificação, 40% dos municípios apresentaram expansão da LVA. Lutzomyia (L.) longipalpis se mostrou presente em todas as classes do uso do solo, com correlação negativa apenas para pastagem cultivada. Em relação ao registro anual de casos humanos de LVA, dentre as áreas que apresentaram correlação positiva com maior frequência destacam-se áreas de influência urbana e ambiente urbanizado. A avaliaçãodos hábitos alimentares em flebotomíneos é capaz de responder questões importantes sobre o comportamento, ecologia e adaptação dos vetores. Dentre as técnicas já descritas, as mais utilizadas ainda são as técnicas imunológicas, embora as técnicas moleculares vem sendo empregadas com maior frequência, pois permitem de forma mais sensível a identificação da fonte alimentar e da infecção natural. Tais informações são importantes, não apenas para um melhor conhecimento acerca dos vetores, mas também sobre potenciais reservatórios de Leishmania. Em relação à preferência alimentar, L. (L.) longipalpis apresentou índice de positividade de 29,3% relacionado com fonte alimentar humana, seguido de cão e ave, não sendo encontradas fêmeas alimentadas em gambá. O índice geral de infecção natural por L. (L.) infantum chagasi foi de 4,51%, sendo 4,9% em Araguaína e 9,75% em Sobral. Das fêmeas infectadas de Araguaína, uma estava alimentada com sangue de cão e outra em sangue humano. Em Sobral, das quatro fêmeas infectadas, três estavam alimentadas em sangue humano.

FONSECA, F. R. M. Influência da carga parasitária e do sítio de inoculação na imunopatogênese da leishmaniose cutânea causada por Leishmania braziliensis em hamster. 2016. 90 f. Dissertação (mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T13:12:30Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmfonseca.pdf: 2138163 bytes, checksum: 3e062bb4c798155f09a76054e3bb8348 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T13:12:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmfonseca.pdf: 2138163 bytes, checksum: 3e062bb4c798155f09a76054e3bb8348 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-18T13:12:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmfonseca.pdf: 2138163 bytes, checksum: 3e062bb4c798155f09a76054e3bb8348 (MD5) Previous issue date: 2016-02-22 / Leishmania braziliensis is the main causative agent of cutaneous leishmaniasis in Brazil and despite its importance for public health, there is a lack of an experimental model that can be used for testing new therapies and vaccines. The aim of this study was to investigate the influence of parasite burden and the inoculation site in the immunopathogenesis of cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis in hamsters using ear dermis infection model. Groups of animals (n = 48) were infected intradermally in the ear (n = 24) or paw (n = 24) with 105 promastigotes of L. braziliensis. Afterwards, other groups of animals (n=32) were infected intradermally in the ear with 105 (n=16) or 106 (n=16) promastigotes. The lesions were measured every 5 days for 60 days. The animals were euthanized at 30, 45 and 60 d.p.i., and had their infected ears and paws, as well as lymph nodes (retromaxilar or popliteal), livers and spleens collected for evaluation of parasite burden and expression of inflammatory mediators, and analysis of histopathological changes. The lesions arose at 20 d.p.i. both paw and ear. The ear lesions ulcerated and were bigger (p< 0.0001) in contrast to paw lesions that presented themselves as small nodules without ulcers. It was observed significant parasitic burden in the ear after 30, 40 and 60 d.p.i. at the lesion and in the lymph node, with parasite burden being always bigger at the lesion. Regardless of the route of inoculation, neither liver and spleen were enlarged nor had lumps or parasites. In the retromaxillary lymph node, it was observed a greater expression of inflammatory cytokines IFN- ɣ, TNF- α and IL -6 and the enzyme arginase, 30 and 60 d.p.i., and it was corroborated by histological changes observed in the ear, intenser inflammatory process and chronicity of the disease. On the contrary, the popliteal lymph node (paw) presented a combination of pro and anti-inflammatory cytokines indicating a precocious regulation of immune and inflammatory response. It was also observed that the bigger the inoculum, the more intense the inflammatory response and bigger the lesions, however, without parasite dissemination to the liver and spleen, indicating lesser systemic commitment and increased survival time of the animal. In short, the data indicates that the inoculum of 105 parasites through the ear dermis infection model could make easier the visualization of a possible protective effect of new drugs or vaccine candidates. / Leishmania braziliensis é o principal agente causador de leishmaniose cutânea no Brasil, e apesar de sua importância para a Saúde Pública, há carência de um modelo experimental que possa ser usado para testar novas terapias e vacinas. O objetivo deste estudo foi investigar a influência da carga parasitária e do sítio de inoculação na imunopatogênese da leishmaniose cutânea causada por Leishmania braziliensis em hamster no modelo de infecção na derme da orelha. Grupos de animais (n=48) foram infectados por via intradérmica, na orelha (n=24) ou na pata (n=24), com 105 promastigotas de L. braziliensis. Em seguida, outros grupos de animais (n=32) foram infectados por via intradérmica na orelha, com 105 (n=16) ou 106 (n=16) promastigotas. As lesões foram medidas a cada 5 dias por 60 dias. Os animais foram eutanasiados com 30, 45 e 60d.p.i, e coletados a orelha e pata infectada, linfonodos (retromaxilar ou poplíteo), fígado e baço, para a avaliação da carga parasitária, expressão de mediadores inflamatórios e análise das alterações histopatológicas. As lesões surgiram com 20d.p.i., tanto na pata como na orelha. As lesões na orelha ulceraram e foram maiores (p<0,0001) ao contrário das lesões da pata, que se apresentaram como pequenos nódulos, sem úlceras. Na orelha foi observada significante carga parasitária após 30, 40 e 60d.p.i., tanto na lesão como no linfonodo, sendo a carga parasitária sempre maior na lesão. Independente da via de inoculação, o fígado e baço não estavam aumentados, não apresentavam nódulos e nem parasitos. No linfonodo retromaxilar, observou-se uma maior expressão das citocinas inflamatórias IFN-ɣ, TNF-α e IL-6 e da enzima arginase, com 30 e 60d.p.i., e isso foi corroborado com as alterações histológicas observadas na orelha, processo inflamatório mais intenso e cronicidade da doença. Ao contrário, no linfonodo poplíteo (pata), apresentou um misto de citocinas inflamatórias e anti-inflamatórias, sugerindo uma regulação bem precoce da resposta imunológica e inflamatória. Observou-se também que quanto maior o inóculo, mais intensa a resposta inflamatória e maiores as lesões, entretanto, sem disseminação do parasito para fígado e baço, sugerindo menor comprometimento sistêmico e maior tempo de sobrevida para o animal. Em suma, os dados indicam que o inóculo de 105 parasitos no modelo de infecção na orelha poderia facilitar a visualização de um possível efeito protetor de novos fármacos ou candidatos vacinais.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-07T10:17:56Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6010143 bytes, checksum: 17ea0355849d60b92bc6d90854eac3ef (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-07T10:17:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6010143 bytes, checksum: 17ea0355849d60b92bc6d90854eac3ef (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As leishmanioses compreendem um amplo espectro de doenças parasitárias causadas por protozoários do gênero Leishmania. No hospedeiro vertebrado estes parasitos infectam principalmente os macrófagos, onde conseguem escapar dos mecanismos de defesa e se proliferam. Muitos trabalhos relatam que a sinalização purinérgica é modulada durante o desenvolvimento e ativação das células do sistema imune. Para obterem sucesso na infecção, vários patógenos conseguem subverter a resposta imune através da modulação da sinalização purinérgica, promovendo uma diminuição dos níveis de ATP (molécula pró-inflamatória) e levando a um aumento dos níveis de adenosina (molécula imunossupressora). Este desfecho resulta da atividade conjunta de algumas ecto- nucleotidases, das E-NTPDases e da 5’-ecto-nucleotidase, tema que é abordado no segundo capítulo desta tese. Em Leishmania, as E-NTPDases são consideradas importantes porque participam da via de salvação de purinas, além de serem citadas em diversos artigos como responsáveis por aumento de virulência e infectividade em diferentes espécies. Em trabalhos desenvolvidos por nosso grupo de pesquisa, as E- NTPDases 1 e 2 de L. infantum foram caracterizadas em sistema bacteriano, demonstrando resultados promissores. A possibilidade de expressar essas proteínas em sistema de expressão Leishmania (Leishmania Expression System – LEXSY – Jena Bioscience) nos impulsionou a desenvolver o presente projeto, com o intuito de caracterizar essas enzimas em um organismo bem mais próximo ao original e avaliar o seu potencial uso como vacina viva. Portanto, a clonagem das Lic-E-NTPDases sistema LEXSY é o tema abordado no primeiro capítulo desta tese. / Leishmaniasis comprises a broad spectrum of parasitic diseases caused by protozoa of the genus Leishmania. In vertebrate host, these parasites mainly infect macrophages, where they can escape of defense mechanisms and proliferate. Several works have reported that the purinergic signaling is modulated during development and activation of immune cells. To achieve successful infection, many pathogens can subvert the immune response through modulation of purinergic signaling by promoting a reduction in ATP levels (pro- inflammatory molecule) and leading to increased adenosine levels (immunosuppressive molecule). This outcome results from the joint activity of some ecto-nucleotidases, the E- NTPDase and 5'-ecto-nucleotidase, a topic that is discussed in the second chapter of this thesis. In Leishmania, the E-NTPDases are considered important because they participate in purine salvage pathway, and are cited in various articles to be responsible for increased infectivity and virulence in different species. In work carried out by our research group, the E-NTPDase 1 and 2 of L. infantum were characterized in bacterial system, demonstrating promising results. The ability to express these proteins in Leishmania expression system (Leishmania Expression System - LEXSY - Jena Bioscience) prompted us to develop this project, in order to characterize these enzymes in an organism similar to the original and evaluate its potential use as a live vaccine. Therefore, the cloning of Lic-E-NTPDases in LEXSY system is the subject discussed in the first chapter of this thesis.

FRUTUOSO, Mércia Sindeaux. Efeito adjuvante da lectina de Canavalia brasiliensis no tratamento de Leishmaniose cutânea experimental. 2016. 117 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-09-19T19:05:19Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_msfrutuoso.pdf: 247932 bytes, checksum: dab45373eaaf1211d8520597a25ac2da (MD5) / Rejected by Jairo Viana (jairo@ufc.br), reason: Está faltando título em inglês on 2017-09-19T19:06:36Z (GMT) / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-09-19T19:07:21Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_msfrutuoso.pdf: 247932 bytes, checksum: dab45373eaaf1211d8520597a25ac2da (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-09-19T19:08:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_msfrutuoso.pdf: 247932 bytes, checksum: dab45373eaaf1211d8520597a25ac2da (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-19T19:08:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_msfrutuoso.pdf: 247932 bytes, checksum: dab45373eaaf1211d8520597a25ac2da (MD5) Previous issue date: 2017 / The leishmaniases are importante public health problem, comprising a very wide spectrum of clinical presentations. The host protection and cure, depend on his or her capacity to mount an imune response type Th1, and IFN-γ is a key molecule on this protective response. The drugs of first choice for the treatment are the pentavalent antimonials, which cause several side effects and the most concerning side effect is the cardiotoxic ones. On the search for alternative treatment, fluconazole has shown promising results, however it has to be given for a longer time and in higher doses to achieve a better response. The Canavalia brasiliensis lectin (ConBr) has been described as a potent immune modulator, as it induces lymphocytic proliferation, with the production of IFN-γ. Based on these data we studied, if ConBr would potentiate the effect of fluconazole on the treatment of experimental cutaneous leishmaniasis, caused by L. braziliensis. To evaluate this, BALB/c mices (n=40) were infected with L. braziliensis and were divide randomly 10 days post-infection, in 5 groups, with the following treatments: 1- fluconazole (30mg/Kg/day/10days, per os); 2- Glucantime® (60mg/Kg/day/10days, intramuscular); 3- ConBr (10μg/50μl/day/5days, intramuscular); 4- Fluconazole (30mg/Kg/day/10days, per os) plus ConBr (10μg/50μl/day/5days, intramuscular); 5- Saline solution per os. The parameters evaluated on the 200 day post infection were: the thickness of the lesion every third day; parasite load on the draining lymph node; production of IFN-γ, IL-10, and TGF-β in cell culture of the draining lymph node supernatant, stimulated in vitro with promastigotes of L. braziliensis; relative liver and spleen weight and histopathological analysis of the lesions. Animals that were treated with the association of fluconazole and ConBr, when compared with those treated with saline solution, presented a significant reduction on the parasite load on the draining lymph nodes (p=0,006), reduction in lesion size (p=0,03) and higher production of IFN-γ on the supernatant of cell culture of regional lymph nodes (p=0,03). Similar data were observed on the group treated with Glucantime®, and all together, demonstrate that the association of fluconazole and ConBr was capable of inducing a therapeutic response similar to the one seen in the group treated with Glucantime®, which is considered the gold standard in the treatment for leishmaniasis. / As leishmanioses constituem grande problema de saúde pública, compreendendo um amplo espectro de síndromes clínicas que pode ter manifestações diversas. Proteção e cura do hospedeiro se correlacionam com o desenvolvimento de resposta imune tipo Th1, e IFN-γ é considerada uma molécula chave nesta resposta protetora. A droga de primeira escolha para o tratamento das leishmanioses é o antimonial pentavalente, que possui vários efeitos colaterais, especialmente seu efeito cardiotóxico. Na busca de novas alternativas de tratamento, o fluconazol vem apresentando dados promissores, porém necessita de um maior tempo de tratamento ou de doses mais elevadas para apresentar uma melhor resposta. A lectina de Canavalia brasilienses (ConBr) tem sido descrita como potente imunomodulador, pois induz proliferação linfocitária com produção de IFN-γ. Com base nesses dados, buscou-se avaliar se ConBr potencializaria o efeito do Fluconazol no tratamento da leishmaniose cutânea experimental por Leishmania (Viannia) braziliensis. Para isso, camundongos BALB/c (n=40) foram infectados com L. braziliensis e divididos aleatoriamente, após 10 dias de infecção, em cinco grupos, com os seguintes tratamentos: 1- Fluconazol (30mg/Kg/dia/10dias, por via oral); 2- Glucantime® (60mg/Kg/dia/10dias, por via intramuscular); 3- ConBr (10µg/50µl/dia/5dias, por via intramuscular); 4- Fluconazol (30mg/Kg/dia/10dias, por via oral) associado com ConBr (10µg/50µl/dia/5dias, intramuscular); 5- solução salina por via oral. Os parâmetros avaliados no 20o dia pós-infecção foram: a espessura das lesões a cada três dias; a carga parasitária no linfonodo de drenagem; secreção de IFN-γ, IL-10, TGF-β no sobrenadante de culturas de células do linfonodo de drenagem reestimulados in vitro com promastigotas de L. braziliensis; peso relativo do fígado e do baço e análise histopatológica das lesões. Os animais que foram tratados com a associação Fluconazol-ConBr, quando comparados com o grupo tratado com salina, apresentaram uma redução significativa da carga parasitária do linfonodo de drenagem (p=0,006), redução no tamanho da lesão (p=0,03) e maior síntese de IFN-γ no sobrenadante das culturas de células do linfonodo regional (p=0,03). Dados semelhantes foram observados no grupo tratado com Glucantime®, o que em conjunto, demonstra que a associação Fluconazol-ConBr foi capaz de induzir uma resposta terapêutica semelhante ao tratamento com Glucantime®, considerado padrão ouro.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A Leishmania (Viannia) braziliensis é o agente etiológico de mais de 90% dos casos de leishmanioses cutânea e mucocutânea no Brasil. Apesar da alta freqüência no Brasil, poucos estudos de vacinação estão descritos utilizando esta espécie de Leishmania. Com intuito de iniciar os estudos de vacinação experimental contra as leishmanioses cutânea e mucocutânea causada por L. (V.) braziliensis, isolamos os genes que codificam os antígenos LACK, TSA, LeIF e LbSTI1 desta espécie. Os genes foram caracterizados segundo sua seqüência de DNA e transcrição de mRNA nas diferentes formas do parasita. Observamos alta conservação na seqüência predita de aminoácidos quando comparamos as espécies L. (V.) braziliensis e L. (L.) major com identidades de 83% a 96%. Observamos também a presença de mRNA tanto nas formas promastigotas como amastigotas de L. (V.) braziliensis. Em seguida, inserimos estes genes em vetores para expressão em células eucarióticas e procarióticas. As proteínas recombinantes bacterianas foram inicialmente utilizadas para imunização de camundongos. Os anticorpos específicos foram utilizados para confirmar a expressão destes antígenos nas formas promastigotas e amastigotas de L. (V.) braziliensis. Posteriormente, observamos que a imunização de camundongos com plasmídios e proteínas recombinantes dos respectivos antígenos, induziu a produção de anticorpos específicos, com diferenças na magnitude e tipos de subclasse de anticorpo, assim como linfócitos produtores de IFN-γ. Por fim, analisamos a imunidade protetora após o desafio com formas promastigotas de L. (V.) braziliensis. Observamos que a resposta imune desencadeada pela imunização não foi suficiente para reduzir a lesão primária da infecção experimental. Desta parte de nossos estudos concluímos que: i) os quatro antígenos por nós clonados de L. (V.) braziliensis possuem potencial para utilização em estratégias de imunização contra infecção experimental por parasitas do gênero Leishmania; ii) as diferentes estratégias de imunização utilizadas não foram capazes de induzir significativa imunidade contra a infecção experimental com L. (V.) braziliensis. Em paralelo, estudamos o papel da molécula “glucocorticoid-induced tumor necrosis factor family-related receptor” (GITR) durante a infecção experimental com L. (L.) major. Inicialmente, observamos que camundongos geneticamente deficientes que não expressam a molécula GITR foram mais resistentes à infecção, quando comparados ao grupo de animais selvagens. Este aumento na resistência correlacionou com o aumento no número de células T CD4+ produtoras de IFN-γ presente no sítio de infecção. Complementamos estes experimentos, estudando o efeito do tratamento com anticorpos anti-GITR nesta infecção. Observamos que o tratamento com este anticorpo levou a diminuição do número de parasitas no sítio da lesão quando comparado ao grupo controle de animais. Este fenômeno foi correlacionado com a quantidade de IFN-γ produzida por células do linfonodo de drenagem. Destes experimentos pudemos concluir que a molécula GITR tem um papel crítico durante a leishmaniose cutânea causada por L. (L.) major, e que anticorpos anti-GITR tem um potencial para serem utilizados em estratégias de vacinação contra a leishmaniose cutânea potencializando a resposta imune específica. / Leishmania (Viannia) braziliensis is responsible for more than 90% of the cases of cutaneous and mucocutaneous leishmaniasis in Brazil. In spite of the high frequency of this parasite in Brazil, few studies of vaccination using this species of Leishmania are described. Aiming at initiating these studies of experimental vaccination against cutaneous and mucocutaneous leishmaniasis caused by L. (V.) braziliensis, we isolated the genes encoding the antigens LACK, TSA, LeIF e LbSTI1. The genes were characterized according to their DNA sequence and mRNA transcription in the different forms of the parasite. We observed a high conservation in the predicted amino acid sequences when we compared the species L. (V.) braziliensis and L. (L.) major. The identities varied from 83% to 96%. We also observed the presence of mRNA in both forms of L. (V.) braziliensis (promastigotes and amastigotes). Subsequently, we cloned these genes into vectors which allowed their expression into eukaryotic or prokaryotic cells. The bacterial recombinant proteins were initially used to immunize mice. Specific antibodies were used to confirm the expression of these antigens in promastigotes and amastigotes of L. (V.) braziliensis. Subsequently, we observed that the immunization of mice with recombinant plasmids and recombinant proteins representing the distinct antigens induced specific antibodies and IFN-γ producing T cells. Finally, we evaluated the degree of protective immunity after a challenge with promastigotes forms of L. (V.) braziliensis. We observed that the immune response induced by immunization was not sufficient to reduce the primary lesion caused by infection. From these results we concluded that: i) all four antigens isolated from L. (V.) braziliensis have the potential to be used for immunization against experimental infection by different species of Leishmania; ii) the different strategies of immunization used were not capable of inducing significant immunity to experimental infection with L. (V.) braziliensis. In parallel, we studied the role of the glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor family-related protein (GITR) during infection with L. (L.) major. Initially, we observed that genetically deficient mice which do not express GITR were more resistant to infection when compared to wild type animals. The resistance correlated with the increased number of IFN-γ producing CD4+ T cells in the infection site. We complemented these experiments, studying the effect of the treatment with antibodies to GITR during infection. We observed that treatment with these antibodies led to reduction in the number of parasites in the lesion site when compared to control animals. The reduction was correlated with the amount of IFN-γ produced by lymph node cells. From these experiments we concluded that GITR has a critical role during cutaneous leishmaniasis caused by L. (L.) major and that antibodies to GITR may have a potential to be used for vaccination against cutaneous leishmaniasis improving the specific immune response. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-04-29T21:05:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 330536.pdf: 3500374 bytes, checksum: 15992ed423b9beb5fa061d0b05f86e13 (MD5) Previous issue date: 2014 / As Leishmanioses afetam cerca de 15 milhões de pessoas e constiuem um importante problema de saúde pública mundial. O controle da parasitose baseia-se principalmente na quimioterapia, usando como medicamento de primeira escolha o antimonial pentavalente SbV (Glucantime®). O surgimento de resistência aos fármacos de uso clínico, a ausência de vacinas eficazes, a propagação de vetores resistentes aos inseticidas tornam o controle das Leishmanioses difícil e complexo. Para entender melhor o papel dos macrófagos na Leishmaniose humana e estabelecer estratégias para prevenir os efeitos nocivos da Leishmania, dados sobre os padrões de expressão de genes e proteínas, em Macrófagos Derivados de Monócitos de Humanos (MDM) infectados com Leishmania sob condições de tratamento, são essenciais. Neste estudo, foram analisadas as alterações nos níveis de expressão de genes e proteínas de macrófagos humanos, durante a infecção in vitro por Leishmania braziliensis e tratamento com Glucantime usando qPCR-arrays, ensaios de Western blot, microscopia confocal e ensaios de inibição usando siRNA. Os resultados indicam que a infecção com L. braziliensis e o tratamento SbV conjuntamente, modulam a expressão de genes em macrófagos, em particular aqueles envolvidos na via de biossíntese da glutationa. Análises de correlação permitiram determinar superexpressão dos marcadores GSTP1, GCLM, GSR, GSS, TRX e ABCB5 tanto nos níveis do mRNA quanto das proteínas, em MDM de humanos infectados e tratados quando comparados ao grupo controle. O estudo da localização subcelular mostrou que o transportador ABCB5 apresenta uma localização predominantemente fagolisossomal, indicando que essa proteína poderia estar envolvida no transporte de Glucantime. Nos ensaios de inibição selectiva o silenciamento dos genes gstp1, gss e abcb5 aumentaram o efeito leishmanicida in vitro do SbV induzindo uma redução da sobrevivência intracelular de L. brazilienisis em macrófagos THP-1. Essa resposta foi igualmente confirmada para o gene gstp1 onde os resultados de tempo e concentração dependente mostraram que a redução da sobrevivência intracelular era observada 24h após exposição ao SbV e a uma dose menor. Nossos resultados sugerem que há uma ativação de genes envolvidos na defesa antioxidante em macrófagos humanos como resposta a infecção com L. braziliensis e o tratamento com Glucantime, potencializando a detoxificação do fármaco. Conclui-se que as proteínas GSTP1, GSS e ABCB5 seriam potenciais alvos candidatos para intervenção terapêutica mediante a inibição seletiva destes marcadores. <br> / Abstract: Leishmaniasis affects millions of people worldwide and represents a major public health problem. Leishmaniasis control relies primarily on chemotherapy, with the mainstay being pentavalent antimony (SbV) complexed to carbohydrates in the form of sodium stibogluconate (Pentostam®) or meglumine antimoniate (Glucantime®). Due to the emergence of drug resistance, the absence of effective vaccines and the spread of insecticide-resistant vectors, Leishmaniasis control is becoming extremely difficult and complex. To better understand the role of macrophages in human Leishmaniasis and to advance in new strategies to prevent the harmful effects of Leishmania parasites, information about the protein expression patterns in the context of Leishmania-infected human monocyte-derived macrophages (MDM) under drug treatment conditions are essential. In this study, we analyzed the changes in the expression levels of human MDM proteins during in vitro infection by Leishmania braziliensis and treatment with Glucantime using qPCR arrays, Western blot, confocal microscopy and siRNA inhibition assays. The results indicate that L. braziliensis infection/SbV treatment modulated the host gene expression, particularly in the glutathione biosynthesis pathway. Comparing results from gene transcription and protein expression analysis, allowed to determine that GSTP1, GCLM, GSR, GSS, TXN, and ABCB5 were strongly up-regulated at both mRNA and protein levels when compared to the control group. Subcellular localization studies showed mostly fagolissosomal location of the ABCB5 transportes, indicating that this protein may be involved in the transport of Glucantime. Selective inhibition assays by gene silencing siRNA assays of gstp1, gss and abcb5 showed an increased in vitro leishmanicidal effect to Sb exposure inducing a decrease in intracellular survival of L. brazilienisis in THP-1 macrophages. This response was also confirmed for gstp1 gene in which the results showed a time and dose-dependent effect in the reduction of intracellular survival where even at 24 hours of exposure to SbV and a lower dose of 8 mg/mL significant intracellular leishmanicidal effects were found. These analyses suggest that, modulations of human MDM by L. braziliensis infection and Glucantime treatment raise the activation of genes participating in antioxidant defense enhancing the drug detoxification. Therefore we concluded that GSTP1, GSS and ABCB5 proteins could be potential targets for therapeutic interventions by selective inhibition of these markers.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Filosofia e Ciências Humanas, Programa de Pós-Graduação em Sociologia Política, Florianópolis, 2015 / Made available in DSpace on 2015-05-19T04:08:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 333316.pdf: 1306752 bytes, checksum: 032d44a1d630f411e6ed041e0ea1390c (MD5) Previous issue date: 2015 / Estima-se a exposição de cerca de 350 milhões de pessoas ao risco de contágio de leishmaniose, com registro aproximado de dois milhões de novos casos das variadas formas clínicas ao ano, sendo reconhecidas como um imenso problema de saúde pública. O cão, muitas vezes, é apontado como responsável pela perpetuação do ciclo das leishmanioses no ambiente urbano e, por tal motivo, o Ministério da Saúde dentre outras diretrizes preconiza a eutanásia de animais sororreativos como medida de controle dessa enfermidade. Sabe-se que atualmente os animais de estimação vêm desempenhando papeis importantes na sociedade contemporânea, sendo até considerados membros da família. Em algumas ocasiões, entretanto, esse animal pode ser considerado um risco à saúde de seus donos, sua família e comunidade. O presente estudou objetivou analisar os saberes e as experiências vivenciadas pelos proprietários de cães em relação ao antagonismo entre risco à saúde e estima pelo animal. Foi realizada uma pesquisa de cunho qualitativo, cujo instrumento de pesquisa foi a entrevista semi-estruturada e os participantes do estudo foram os proprietários de cães diagnosticados com leishmaniose e os profissionais do Centro de Controle de Zoonoses de Montes Claros-MG. Evidenciou-se na população estudada a importância conferida aos cães, sendo "fazer companhia" o benefício mais mencionado. Houve uma preponderância do risco à saúde em detrimento da estima pelo animal, pois 60,71% dos entrevistados preferiram entregar seu animal para a eutanásia, mesmo sofrendo com isso. A proibição do tratamento canino foi pouco mencionada, uma vez que a não realização do mesmo por alguns entrevistados deveu-se mais ao elevado preço do tratamento. Verificou-se, ainda, a carência de informações sobre o mecanismo de transmissão das leishmanioses, bem como as maneiras de prevenção,sendo que os profissionais do Zoonoses Control Center indicaram esse aspecto como um desafio ao controle dessas doenças.<br> / Abstract : It is estimated an exposure of about 350 million people at risk ofleishmaniasis infection, with approximate record of two million newcases of various clinical forms per year, and it's recognized as a hugepublic health problem. The dog often is identified as the responsible forthe perpetuation of the cycle of leishmaniasis in the urban environmentand, therefore, the Ministry of Health among other guidelines recommends euthanasia of animals seroreactive as this disease control measure. It is known that the pets have important roles in contemporary society, and sometimes they are even considered a family member. Sometimes, however, this animal can be considered a risk to their owners' health, their family and community. This studied aimed toanalyze the knowledge and experiences of the dog owners over the antagonism between the health risk and the esteem for the animal. One qualitative study, the research instrument was a semi-structured interview, and the study participants were the owners of dogs diagnosed with leishmaniasis, and professionals of the Zoonoses Control Center of Montes Claros-MG. It was evident in the population studied the importance given to the dogs, and "accompany" was the most mentioned benefit. There was a predominance of the health risk regarding the esteem for the animal, because 60,71% of respondents chose to give your pet euthanasia, even suffering from it. The prohibition of the canine treatment was little mentioned, since the nonperformance of it, by some respondentes, was due more to the high cost of treatment. There was also a lack of information about the transmission mechanism of leishmaniasis, as well as the ways of prevention, and professionals in the Zoonoses Control Center indicated that aspect as a challenge to control these diseases.

Made available in DSpace on 2012-05-07T15:26:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000001.pdf: 2146845 bytes, checksum: be41c6f640ad1e8648af9fc24c2b3ad0 (MD5) Previous issue date: 2006 / A busca de marcadores de doença ativa e a validação de critérios de cura pós-terapêutica têm sido amplamente investigados na LV. Entretanto, o estabelecimento de um critério de cura sorológico ainda permanece inconclusivo. Os critérios adotados atualmente para estabelecer uma eficácia terapêutica dependem da avaliação clínica 12 meses pós-tratamento. O objetivo desse trabalho, foi avaliar a aplicabilidade da citometria de fluxo na pesquisa de anticorpos anti-promastigotas fixadas de L. (L.) chagasi (AAPF) na avaliação 12 meses após o tratamento e encontrar um indicador laboratorial de cura 2 meses e 6 meses pós-tratamento. Foi estabelecida uma relação entre os níveis de anticorpos anti L. (L.) chagasi e a eficácia do tratamento na LV, através da AAPF. Neste estudo foram avaliados soros de 21 pacientes com diagnóstico parasitológico positivo para LV, coletados antes e após o tratamento. As amostras de soro diluídas (1:1.000 a 1:128.000) foram incubadas com promastigotas fixadas, posteriormente incubadas com anti-IgG humana marcadas com FITC e IgG subclasses marcadas com SAPE na diluição de 1.000 a 128.000 para a pesquisa de IgG1 e 1:40 a 1:5.120 na pesquisa de IgG2, IgG3 e IgG4 e analisadas no citômetro de fluxo. Os resultados foram expressos como o percentual de parasitas fluorescentes positivos (PPFP) para cada amostra individual, estabelecendo 50 porcento como ponto de pacientes avaliados 12 meses após o tratamento (71,4 porcento). Entretanto, 2 meses após o tratamento foi encontrado valores de PPFP < 50 porcento em menos de 50 porcento dos pacientes. Em relação a subclasses de IgG foi encontrado valores reagentes em IgG1 e IgG3. Na pesquisa da AAPF para IgG1 pacientes apresentou melhor desempenho na monitoração terapêutica. Observamos 90,5 porcento de queda nos níveis de PPFP 6 meses e 71,4 porcento 2 meses pós-tratamento. Nossos resultados mostraram a aplicabilidade da citometria de fluxo para detecção de anticorpos anti-L. (L.) chagasi e na monitoração de cura na LV