Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-14T13:52:52Z No. of bitstreams: 1 Jussara Velenca de Alencar Ramos.pdf: 694867 bytes, checksum: 0d9a98d56adb54aed25a1ae519ddb841 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-14T13:52:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jussara Velenca de Alencar Ramos.pdf: 694867 bytes, checksum: 0d9a98d56adb54aed25a1ae519ddb841 (MD5) Previous issue date: 2011-03-01 / Brazil is the main responsible for the reported cases of leishmaniasis in Latin America, finding shwing a higher incidence in the Northeast. American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) has several ecoepidemiological characteristics, although with some intra-regional similarity in all regions of Pernambuco State, with more than 60% of cases from Zona da Mata Atlantica. The municipal government health institution have been concerned with the current situation in the District of Três Ladeiras, Igarassu towon – Pernambuco state which has registered a several increase of infected people with ACL. Therefore, this project aimed to analyze epidemiological aspects of American cutaneous leishmaniasis in District of Três Ladeiras for later deployment of effective control measures for this disease. Initially epidemiologically diagnosed human cases were characterized in a retrospective study. From the domestic dogs belonging to people affected by ACL, it was collected material for parasitological examination and Indirect Immunofluorescence Technique (IFT). Some parameters such as number of ACL infected peple by the intradermoreaction Montenegro test number of cases reported per month, type of lesion found in patients, sex, age, response to treatment, and identification of canine ACL cases, through serological survey of dogs were analyzed. Of the 80 human cases diagnosed as suspicious for ACL, 62 (77.5%) were confirmed by laboratory test. The occurrence of new cases of the disease was confirmed in 17 of the 24 months studied. All positive cases presented the cutaneous form of the disease, 58% (36/62) were men, and 100% (62/62) achieved cure after treatment. It was found 7.0% (3/43) IFT positive canine blod samples. The parasitological exam of the lesion performed in 43.1% (18/43) of simples from dogs. / O Brasil é o principal responsável pelos casos notificados das leishmanioses na América Latina, encontrando-se maior incidência na região Nordeste. A Leishmaniose Tegumentar Americana apresenta características ecoepidemiológicas diversas, embora com alguma similaridade intra-regional e incide em todas as regiões do Estado de Pernambuco, com mais de 60% dos casos na região correspondente à Zona da Mata Atlântica. As instituições governamentais de saúde vêm se preocupando com a situação corrente no distrito de Três Ladeiras, município de Igarassu - PE onde tem se registrado um aumento considerável no número de pessoas acometidas com este agravo. Portanto, neste projeto, teve-se como objetivo analisar aspectos epidemiológicos da Leishmaniose Tegumentar Americana no distrito de Três Ladeiras - Município de Igarassu – PE, visando, posteriormente, a implantação de medidas de controle eficazes a esta endemia. Inicialmente foi realizado estudo cães domésticos pertencentes às pessoas acometidas por LTA, foi coletado material para exame parasitológico e amostras de sangue para teste de Imunofluorescência indireta (IFI). Foram analisados alguns parâmetros como: quantidade de pessoas diagnosticadas laboratorialmente com LTA através dos testes de Intradermorreação de Montenegro e pesquisa direta; número de casos ocorridos por mês; tipo de lesão encontrada nos pacientes; sexo; idade; resposta ao tratamento e identificação de casos caninos de LTA, por meio de inquérito sorológico. Dos 80 casos humanos suspeitos para LTA, 62 (77,5%) foram confirmados pelo critério laboratorial. A ocorrência de casos novos da doença foi confirmada em 17 dos 24 meses estudados. Todos os pacientes positivos apresentaram a forma cutânea da doença. Não houve diferença significativa em relação ao sexo dos pacientes; quanto à idade houve predominância naqueles com idade entre 20 e 39 (33,9%) anos e todos obtiveram cura após tratamento finalizado. Dos cães, 7,0% (3/43) foram positivos para LTA ao teste de IFI e, as 43,1% (18/43) amostras submetidas à pesquisa direta de formas amastigotas do parasito em escarificação de bordo de lesão foram negativas.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-18T15:00:33Z No. of bitstreams: 1 Maira Santos Severo.pdf: 1331338 bytes, checksum: 2812cbd8bcd64b6d50c6a5db7306b5d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-18T15:00:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maira Santos Severo.pdf: 1331338 bytes, checksum: 2812cbd8bcd64b6d50c6a5db7306b5d2 (MD5) Previous issue date: 2012-02-13 / Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) is a severe systemic zoonosos caused by the obligate intracellular protozoan Leishmania infantum. The dogs are the major reservoir of the disease and may develop since asymptomatic infection to a variety of clinical signs, such as peripheral lymphadenopathy, weight loss, lethargy, ulcerative lesions of the skin and fever. Ocular, orthopedic and neurological disorders can also be seen associated with CVL, such as keratitis, seizures, behavioral changes, joint pain and lameness. This fact includes the disease in the differential diagnosis of ophthalmic disorders, osteoarticular and nervous system, especially in endemic areas to infection. The aim of this study was the diagnosis of canine visceral leishmaniasis using samples of conjunctiva, aqueous humor, synovial fluid, synovial membrane and cerebrospinal fluid (CSF). The ELISA test was applied to samples of CSF, synovial fluid and aqueous humor, and histological and immunohistochemical evaluations were performed in the conjunctiva and in the synovial membrane of these animals. The samples were collected from 20 dogs serologically positive for visceral leishmaniasis. Through the immunoenzymatic assay could detect anti-Leishmania IgG antibodies in a sample of CSF and aqueous humor, and six samples of synovial fluid. Immunohistochemistry showed positive staining of amastigotes of L. infantum five synovial membranes and connective five studied. From the results, we conclude that amastigotes of Leishmania sp. are found parasitizing the synovial membrane and the conjunctiva of dogs serologically positive for the disease, as well as specific IgG antibodies in aqueous humor, CSF and synovial fluid of these animals. / A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma zoonose sistêmica grave, causada pelo protozoário intracelular obrigatório Leishmania infantum. Os cães são considerados os principais reservatórios da doença e podem desenvolver desde a infecção assintomática, a uma variedade de sinais clínicos, tais como linfadenopatia periférica, perda de peso, letargia, lesões ulcerativas de pele e febre. Alterações oculares, ortopédicas e neurológicas também podem ser observadas associadas à LVC, tais como ceratoconjuntivite, uveíte, convulsões, alterações comportamentais, artralgia e claudicação. Tal fato inclui a doença no diagnóstico diferencial das afecções oftálmicas, osteoarticulares e neurológicas, principalmente em áreas consideradas endêmicas para a infecção. O objetivo deste trabalho foi realizar o diagnóstico da leishmaniose visceral canina utilizando amostras de conjuntiva, humor aquoso, líquido sinovial, membrana sinovial e líquido cefalorraquidiano (LCR). O teste ELISA foi aplicado em amostras de LCR, líquido sinovial e humor aquoso; e avaliações histológica e imunohistoquímica foram realizadas na conjuntiva e na membrana sinovial. As amostras foram coletadas de 20 cães sorologicamente positivos para leishmaniose visceral. Através do Ensaio Imunoenzimático foi possível detectar anticorpos IgG anti-Leishmania em uma das amostras de LCR e de humor aquoso, e em seis amostras de líquido sinovial. A imunohistoquímica apresentou marcação positiva de formas amastigotas de L. infantum em cinco membranas sinoviais e cinco conjuntivas estudadas. Diante dos resultados, conclui-se que formas amastigotas de Leishmania sp. são encontradas parasitando a membrana sinovial e a conjuntiva de cães sorologicamente positivos para a doença, bem como anticorpos IgG específicos no humor aquoso, no LCR e no líquido sinovial desses animais.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4928_1.pdf: 514496 bytes, checksum: 113e8b4d7690d23dca2d8643a8dbe353 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2001 / As leishmanioses em Pernambuco representam um grave problema de saúde pública, não apenas pelo aumento do número de casos novos, mas também pela urgência em implementar mecanismos de controle descentralizados, em resposta às diretrizes do Sistema Único de Saúde (SUS) e de acordo com as proposições emanadas das Conferências Nacionais de Saúde. O município de Glória do Goitá, situado na Zona da Mata Norte de Pernambuco, a 72 Km de Recife, com uma população de aproximadamente 27.000 habitantes, caracteriza-se como uma área em expansão para o calazar, atingindo tanto trabalhadores como crianças. Para o diagnóstico da leishmaniose canina, elemento fundamental para o controle da endemia, o teste sorológico a ser escolhido para a identificação dos animais sororeagentes deve ser de prática e rápida execução, além de ter boa especificidade e sensibilidade. Neste sentido a imunofluorescência (IFI) é a técnica recomendada pelo Ministério da Saúde desde 1978, com boa sensibilidade, mas baixa especificidade. Neste trabalho foi comparado este método utilizando um ELISA recombinante e um método de coleta de sangue melhorado para o trabalho no campo na investigação da leishmaniose canina. Um total de 1151 cães oriundos de 84 localidades daquele município foram examinados por IFI com amostras em papel de filtro, obtendo-se 92 reagentes, 28 reações inconclusivas e 1031 negativas. Quando da eliminação dos cães cujas amostras foram reagentes ou inconclusivas (em média 8 meses após a primeira coleta), 72 deles já haviam morrido e 7 desaparecido, o que representa uma perda de cerca de 65% da amostragem. A soropositividade encontrada aponta para a elevada endemicidade do calazar nas localidades estudadas e sugere fortemente que a elevada mortalidade observada entre os cães sororeagentes se deva de fato ao calazar. Dos 41 cães sobreviventes coletou-se 2 ml de sangue por punção venosa para a realização da IFI com diluição seriada e 20 μL de sangue por punção auricular, depositados em microtubo contendo 500 μL de uma solução de imunoadsorção para realização do ELISA recombinante. Os animais foram submetidos à eutanásia e em seguida necropsiados. O material colhido foi examinado por ELISA recombinante (empregando um sonicado de Escherichia coli expressando a fração carboxi-terminal da HSP70 de Leishmania chagasi) e por IFI com diluição seriada. Houve uma elevada concordância entre os testes, embora, com base nos resultados da necrópsia, o ELISA S7 tenha sido mais sensível e específico. Em conclusão, o sistema de coleta por punção auricular e aspiração de gota em micropipeta é efetivo e aplicável em campo sem problemas e o ELISA recombinante é um teste mais específico e sensível do que o teste atualmente empregado. A associação destas duas técnicas, de coleta e de diagnóstico, pode trazer grande avanço no controle do calazar

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-10-04T13:54:01Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1012064 bytes, checksum: 4afa27336f4b5af38cc608a70309aaf8 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-04T13:54:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1012064 bytes, checksum: 4afa27336f4b5af38cc608a70309aaf8 (MD5) Previous issue date: 2016-11-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As Leishmanioses são doenças parasitárias causadas por protozoários do gênero Leishmania e suas manifestações clínicas podem ser do tipo Leishmaniose Cutânea, Leishmaniose Mucocutânea e Leishmaniose Visceral. Constitui importante problema de saúde pública sendo endêmicas em 88 países com aproximadamente 12 milhões de infectados. Para o tratamento são utilizados os antimoniais pentavalentes e como medicação alternativa, a Anfotericina B e Pentamidina. O arsenal terapêutico é bastante limitado, vários medicamentos têm efeitos colaterais significativos e os parasitos muitas vezes são resistentes às drogas disponíveis. Baseado na necessidade do desenvolvimento de novas drogas para o tratamento das Leishmanioses, neste presente trabalho foi testado o potencial leishmanicida de trinta e um compostos derivados do ácido cinâmico contra Leishmania (Viannia) brasiliensis, agente etiológico da Leishmaniose Tegumentar Americana no Novo Mundo. Dentre esses compostos, vinte e um contém o núcleo 1,2,3- triazólico e quatro contém uma porção izobenzofuranona. A triagem inicial foi feita em macrófagos utilizando os compostos na concentração de 10 μM e nenhum deles apresentou efeito tóxico. No ensaio de citotoxicidade direta sobre formas promastigotas, após 48 horas, um deles, o (E)-3-(3,4,5- trimetoxifenil)-acrilato de 3-oxo-1,3-diidroisobenzofuran-5-ila, identificado como S2, apresentou taxa de 52,25% de inibição de crescimento dos parasitos, valor aproximado do efeito da droga controle Anfotericina B (46,62%). Em ensaios de infecção do parasito em macrófagos, após 72 horas, quatro compostos: Cinamato de (1-(2,5-diclorobenzil)-1H-1,2,3-triazol-4- il)metila (MP05), Cinamato de (1-(2,4,6-triclorobenzil)-1H-1,2,3-triazol-4- il)metila (MP06), Cinamato de (1-(4-metoxibenzil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metila (MP25) e novamente o (E)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-acrilato de 3-oxo-1,3- diidroisobenzofuran-5-ila (S2), inibiram a sobrevivência de amastigotas em 78,98%, 80,12%, 76% e 70,89% respectivamente. Conforme os resultados obtidos, tais compostos mostram-se potenciais para o tratamento da Leishmaniose Tegumentar Americana. / Leishmaniasis are parasitic diseases caused by protozoa of the genus Leishmania and its clinical manifestations may be of the Cutaneous Leishmaniasis type, Mucocutaneous Leishmaniasis and Visceral Leishmaniasis. It is an important public health problem and it has being endemic in 88 countries with approximately 12 million infected people. For the treatment, pentavalent antimonials are used and as an alternative medication, they use amphotericin B and pentamidine. The therapeutic arsenal is quite limited, several drugs have significant side effects and the parasites are often resistant to the available drugs. Based on the need for the development of new drugs for the treatment of Leishmaniasis, in this present work the leishmanicidal potential of thirty-one acid cinnamic derived compounds against Leishmania (Viannia) brasiliensis, etiological agent of American Cutaneous Leishmaniasis in the New World, was tested. Among these compounds, twenty-one contains the 1,2,3-triazole nucleus and four contains an izobenzofuranone portion. Initial screening was done on macrophages by using the compounds at the concentration of 10 μM and none of them showed a toxic effect. In the direct cytotoxicity assay on promastigote forms, after 48 hours, one of them, (E) -3- (3,4,5-trimethoxyphenyl) acrylate 3-oxo-1,3- dihydroisobenzofuran-5-yl, identified as S2, presented a 52.25% rate of inhibition of parasite growth, the approximate value of the control drug Amphotericin B (46.62%). In parasite infection trials on macrophages, after 72 hours, four compounds: (1- (2,5-Dichlorobenzyl) -1H-1,2,3-triazol-4-yl) methyl cinnamate (MP05), Cinnamate (1- (2,4,6-trichlorobenzyl) -1H-1,2,3-triazol-4- yl) methylamine (MP06), 1- (4-Methoxybenzyl) -1H-1,2,3- 4-yl) methylamine (MP25) and (E) -3- (3,4,5-trimethoxyphenyl) acrylate 3-oxo-1,3- dihydroisobenzofuran-5-yl (E2) refrained the survival of amastigotes in 78.98%, 80.12%, 76% and 70.89% respectively. According to the obtained results, such compounds are shown to be potential for the treatment of American Cutaneous Leishmaniasis.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-24T17:32:02Z No. of bitstreams: 1 TESE Larissa Melo do Nascimento.pdf: 4960362 bytes, checksum: 493832b0899c2f0c2bbe63199de0769e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-24T17:32:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Larissa Melo do Nascimento.pdf: 4960362 bytes, checksum: 493832b0899c2f0c2bbe63199de0769e (MD5) Previous issue date: 2016-09-06 / CAPES / As leishmanioses são um conjunto de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania da família Trypanosomatidae. Tais enfermidades atingem populações pobres de países subdesenvolvidos e sua incidência está associada, em parte, à ausência de quimioterápicos efetivos, o que enfatiza a importância de estudos focados na biologia desses patógenos. Nos tripanossomatídeos o controle da expressão gênica ocorre, predominantemente, a nível pós-transcricional, envolvendo a regulação da síntese proteica através dos fatores de iniciação da tradução eucarióticos (eIFs). Em mamíferos, a regulação global da tradução ocorre majoritariamente através do complexo heterotrimérico eIF2 (constituído de eIF2α, eIF2β e eIF2γ), o qual é responsável pela interação com o tRNA iniciador, GTP e a subunidade ribossomal 40S. No presente trabalho, objetivou-se contribuir na caracterização do complexo eIF2 em L infantum. Inicialmente, confirmou-se a expressão constitutiva da subunidade eIF2α durante o crescimento e diferenciação do parasito, bem como, sua associação funcional com a subunidade menor ribossomal. Mais ainda, demonstrou-se sua associação com as subunidades eIF2β e eIF2γ e com os parceiros diretos eIF2B e eIF5, nesse momento confirmando a identificação do complexo eIF2B em Leishmania. Nos tripanossomatídeos, a subunidade eIF2α apresenta uma extensão N-terminal característica, a qual se mostrou importante nas interações com eIF2B, eIF5 e ribonucleoproteínas. Interessantemente, identificou-se um novo parálogo da subunidade eIF2γ, sendo denominado aqui eIF2γ-2. Evolutivamente, o eIF2γ-2 surgiu após provável evento de duplicação exclusivo na família Trypanosomatidae e derivou acumulando características singulares em sua sequência gênica. O eIF2γ-2 é capaz de interagir com eIF2α, eIF2β, na formação de um segundo complexo eIF2 exclusivo de tripanossomatídeos, assim como, com o eIF2B e eIF5. Através de ensaios de deleção e complementação gênica, confirmou-se a essencialidade de eIF2γ e se demonstrou a incapacidade de substituição deste pelo seu parálogo eIF2γ-2. Estes resultados demonstram novos aspectos inéditos na identificação e função do eIF2 dos tripanossomatídeos, não observados em outros organismos. / Leishmaniasis is a group of diseases caused by protozoa from the genus Leishmania of the Trypanosomatidae family. These diseases affect poor people in developing countries and its incidence is associated, in part, to the absence of effective chemotherapy, which emphasizes the importance of studies focused on the biology of these pathogens. In trypanosomatids the control of gene expression occurs predominantly at post-transcriptional level involving the regulation of protein synthesis through the eukaryotic initiation factors (eIFs). In mammals, the global translation regulation is mostly controlled by the heterotrimeric complex eIF2 (formed by eIF2α, eIF2β and eIF2γ), which is responsible for the interaction with the initiator tRNA, GTP and 40S ribosomal subunit. In the present study, by characterizing the eIF2 complex in L infantum, we confirmed the constitutive expression of the eIF2α subunit during the growth and differentiation of the parasite, as well as, their functional association with the minor ribosomal subunit. Furthermore, while demonstrating the association of eIF2α with eIF2β and eIF2γ subunits and with the direct partners eIF2B and eIF5, we confirmed the identification of Leishmania eIF2B complex. Herein, we also showed that eIF2α subunit in trypanosomatids has a unique N-terminal extension that is important for interaction with eIF2B, eIF5 and ribonucleoproteins. Interestingly, a paralog of eIF2γ subunit, named here eIF2γ-2, was identified for the first time. Evolutionarily, the eIF2γ-2 gene arose most likely after a duplication event in the Trypanosomatidae family and further accumulated singular characteristics in its coding sequence. The eIF2γ-2 is able to interact with eIF2α and eIF2β, acting during the formation of a second eIF2 complex exclusive to trypanosomatids, as well as with eIF2B and eIF5. By gene deletion and complementation assays, we confirmed the essentiality of eIF2γ and demonstrated the inability to replace it by eIF2γ-2. Altogether, our data demonstrate novel features of eIF2 function of trypanosomes, not seen in other organisms.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-28T21:53:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Abigail Marcelino dos Santos Silva.pdf: 4737414 bytes, checksum: 6d5e7224ed503576d6f5980323a0d5e5 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-06T22:53:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Abigail Marcelino dos Santos Silva.pdf: 4737414 bytes, checksum: 6d5e7224ed503576d6f5980323a0d5e5 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-06T22:53:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Abigail Marcelino dos Santos Silva.pdf: 4737414 bytes, checksum: 6d5e7224ed503576d6f5980323a0d5e5 (MD5) Previous issue date: 2015-09-15 / A falta de padronizações sistemáticas deixa questões em aberto na identificação das espécies crípticas dos complexos Lutzomyia longipalpis e L. umbratilis, que incluem vetores dos agentes etiológicos das leishmanioses no Brasil. As metodologias de identificação taxonômica têm contribuído para um maior conhecimento da diversidade biológica. Porém o status taxonômico destes dois grupos de flebotomíneos ainda permanece incerto no Brasil. A filogenética molecular é uma ferramenta essencial para investigação de espécies crípticas. Para inferência filogenética com dados de sequências de nucleotídeos existem métodos estatísticos de inferência, inclusive métodos baseados em probabilidade. Estão disponíveis em duas abordagens: Máxima Verossimilhança (MV) e Bayesiana (BE). Neste trabalho foi avaliada a adequação destas abordagens na investigação das referidas espécies crípticas utilizando um marcador mitocondrial (citocromo oxidase I – COI) e um nuclear (gene period – per). Para o complexo L. umbratilis, o método BE apresentou árvores filogenéticas com maiores probabilidades, ou seja, com melhores resultados em relação às árvores inferidas por MV, principalmente com a utilização do marcador COI. Já para o complexo de espécies L. longipalpis, o método BE apresentou a melhor árvore filogenética em relação ao método MV e apenas utilizando o marcador nuclear period. Tendo alcançado melhores resultados com o marcador mitocondrial COI, para L. umbratilis, e period, para L. longipalpis, e com a abordagem BE, conclui-se que esta abordagem juntamente com os respectivos marcadores teve maior adequação do que a abordagem MV. / The lack of systematic standardization leaves open questions in the identification of cryptic species complex of Lutzomyia longipalpis and L. umbratilis, including vectors of etiological agents of leishmaniasis in Brazil. The taxonomic identification methodologies have contributed to a better understanding of biological diversity. But the taxonomic status of these two sandflies groups remains uncertain in Brazil. Molecular phylogenetics is an essential tool for research cryptic species. For phylogenetic inference nucleotide sequence data are statistical inference methods, including methods based on probability. two approaches are available: Maximum Likelihood (ML) and Bayesian (BE). This work evaluated the adequacy of these approaches in the investigation of these cryptic species using a mitochondrial marker (cytochrome oxidase I - COI) and nuclear (gene period - per). For the complex L. umbratilis the method presented phylogenetic trees BE with higher probability, that is, with better results in respect of trees inferred by MV, especially with the use of the COI marker. As for the species complex L. longipalpis, the BE method presented the best phylogenetic tree in relation to the MV method only using the nuclear period marker. Having achieved better results with the mitochondrial marker COI to L. umbratilis, and period to L. longipalpis, and with BE approach, it is concluded that this approach together with their markers had better match than the MV approach.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-29T21:32:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Paula Roberta da Silva.pdf: 1682858 bytes, checksum: 3ec9c6d9a8909de1be009f19663b2a08 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-10T22:58:14Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Paula Roberta da Silva.pdf: 1682858 bytes, checksum: 3ec9c6d9a8909de1be009f19663b2a08 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-10T22:58:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Paula Roberta da Silva.pdf: 1682858 bytes, checksum: 3ec9c6d9a8909de1be009f19663b2a08 (MD5) Previous issue date: 2017-02-13 / FACEPE / A Leishmanioses é uma doença considerada negligenciada, atingindo bilhões de pessoas por ano, causada pelo protozoário do gênero Leishmania ,é uma doença grave e sistêmica podendo ser letal na falta de um tratamento adequado. Os fármacos utilizados atualmente no tratamentosão antimoniato de meglumina e estibogluconato de sódio, anfotericina B, pentamidina e miltefosina. Porém o uso desses medicamentos é limitado devido ao grande números de efeitos adversos, alto custo e o aparecimento de resistência dos protozoários aos fármacos. Devido a esses fatores, surge a necessidade da busca de novos compostos leishmanicidas que sejam mais eficazes e específicos para o parasito, com redução dos efeitos colaterais, de baixo custo e que não induza a resistência. Nesse contexto, as tiossemicarbazonas são importantes compostos devido às suas propriedades químicas e biológicas, como a atividade antiprotozoária. Diante disso foram desenvolvidas novas tiossemicarbazonas substituídas com núcleo indol, obtidas através de uma rota sintética constituída por duas etapas utilizando reações clássicas de adição de Michael e condensação e avaliados quanto a seu potencial citotóxico e atividade leishmanicida in vitro frente as formas promastigotas de Leishmania infamtum. Os compostos foram caracterizados através de técnicas espectroscópicas convencionais e obtiveram rendimentos satisfatórios. A atividade leishmanicida mostrou-se promissora, todos os compostos foram capazes de inibir as formas promastigotas do parasito com IC50 que variaram entre 1,81 a 9,37 μM, onde os índices de seletividade das melhores moléculas foram de LQIT/PR-09 de 3,98 e LQIT/PR-09 de 4,91. A microscopia eletrônica de varredura mostraram que os compostos foram capazes de alterar a forma do corpo e o flagelo dos parasitos, mostrando que os compostos são potenciais candidatos a fármacos leishmanicidas. / Leishmaniasis is a disease considered neglected, reaching billions of people per year, caused by the protozoan of the genus Leishmania, is a serious and systemic disease and can be lethal in the absence of an adequate treatment. The drugs currently used in the antimoniate treatment of meglumine and sodium stibogluconate, amphotericin B, pentamidine and miltefosine. However, the use of these drugs is limited due to the large numbers of adverse effects, high cost and the appearance of resistance of the protozoa to the drugs. Due to these factors, the need arises for the search for new leishmanicidal compounds that are more effective and specific for the parasite, with a reduction of side effects, low cost and that does not induce resistance. In this context, thiosemicarbazones are important compounds due to their chemical and biological properties, such as antiprotozoal activity. In view of this, new thiosemicarbazones substituted with indole nuclei were obtained through a synthetic route consisting of two steps using classical Michael addition and condensation reactions and evaluated for their cytotoxic potential and leishmanicidal activity in vitro against the promastigote forms of Leishmania infamtum. The compounds were characterized by conventional spectroscopic techniques and yielded satisfactory yields. The leishmanicidal activity was promising, all compounds were able to inhibit promastigote forms of the parasite with IC50 ranging from 1.81 to 9.37 μM, where the selectivity indices of the best molecules were from LQIT / PR-09 3.98 and LQIT / PR-09 of 4.91. Scanning electron microscopy showed that the compounds were able to change the body shape and flagellum of the parasites, showing that the compounds are potential candidates for leishmanicidal drugs.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-09-13T12:33:13Z No. of bitstreams: 1 Giane Maria Cavalcante.pdf: 4033468 bytes, checksum: b397e9cf714302fdfed3a3f5f00361da (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-13T12:33:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Giane Maria Cavalcante.pdf: 4033468 bytes, checksum: b397e9cf714302fdfed3a3f5f00361da (MD5) Previous issue date: 2017-05-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Leishmaniasis is one of the most important neglected tropical diseases in terms of drug discovery and development. Furthermore, the chemotherapy used to treat this disease has been proved to be highly toxic. The aim of this work was to evaluate the leishmanicidal effect of propolis derivatives collected in the semi-arid region of Bahia and a series of natural and semisynthetic alkamides, as well to evaluate the action of these on the enzymatic activity of Leishmania and human DNA topoisomerase. The chemical study of propolis was carried by high resolution mass spectrometry analysis; and alkamides were obtained from the acid chloride preparation reactions, the preparation of the amides from the acid chloride and the amine reactions, and the aminolysis of the phenylethylamine with the methyl p-hydroxycinnamate reactions. The cytotoxic effects were assessed on macrophages J774 by MTT assays. The inhibitory effect, in vitro assays, on promastigote and amastigote forms of L. amazonensis and L. chagasi were evaluated by MTT assay and cell J774 infected with promastigotes forms of these species assay, respectively. The inhibitory effect on promastigote and amastigote forms of L. infantum iFRP70 was assessed by the capacity of infrared light emission by strains iFRP70. The inhibition of topoisomerase activity was assessed by DNA supercoiled relaxation assay. Cleavage complex formation was assessed by the capacity to maintain the cleavage in the DNA strand over 30 minutes. The ethanolic extract, the hexane, ethyl acetate and methanolic fractions of propolis, and flavonoids naringenin and isoramnetin, did not present deleterious effects on the J774 cells until to the maximum concentration tested (100 μM). These flavonoids affected the enzymatic activity of leishmania topoisomerase, interfering in the enzyme's capacity to relax the DNA supercoiled and did not affected the enzymatic activity of humana topoisomerase. The alkamides tested, RAC4, RAC9, RAC9, RAC12 and RAC16 showed a significant effect against promastigotes and amastigotes forms of L. amazonensis, L. chagasi and L. infantum iFRP70, with a 50% inhibitory concentration (IC50) below 10 μM and maximum effect above 60%. These alkamides tested at concentrations ranging from 100 to 3.15 μM, inhibited the capacity of leishmania topoisomerase to DNA supercoiled significantly interfering in the enzymatic activity, especially RAC8 that was able to inhibit activity from 6.25 μM, lower inhibitory concentration observed. These alkamides did not inhibit the enzymatic activity of human topoisomerase. When evaluated the formation of cleavage complex, the RAC4, RAC8, RAC9, RAC12 and RAC16 were able to maintain the stability of the cleavage complex. Thus, this work demonstrated that the natural and semi-synthetic substances had a leishmanicidal effect against L. amazonensis, L. chagasi and L. infantum iFRP70, as well as selectively inhibited the catalytic activity of the enzyme DNA topoisomerase of leishmania, to be used as a prototype for the development of new leishmanicidal drugs. / A leishmaniose é uma das mais importantes doenças tropicais negligenciadas em termo de escobertas e desenvolvimento de fármacos. Além disso, a quimioterapia usada para tratar esta doença provou ser altamente tóxica. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito leishmanicida de derivados da própolis coletada na região semiárida da Bahia e uma série de alcamidas naturais, sintéticas e modificadas, bem como, avaliar a ação destes sobre a atividade enzimática de topoisomerase de Leishmania e humana. O estudo químico da própolis foi realizado através da análise por espectrometria de massas de alta resolução; e as alcamidas foram obtidas a partir das reações de preparação de cloreto de ácidos, de preparação das amidas a partir de cloreto de ácido e amina e da aminólise da feniletilamina com o p-hidroxi-cinamato de metila. Os efeitos citotóxicos foram avaliados em macrófagos J774, através do ensaio de MTT. O efeito inibidor, a partir de ensaios in vitro, sobre formas promastigotas e amastigotas de L. amazonensis e L. chagasi foram avaliados através do ensaio de MTT e do ensaio de células J774 infectadas com formas promastigotas destas espécies, respectivamente. O efeito inibidor sobre formas promastigotas e amastigotas de L. infantum iFRP70 foi avaliado através da capacidade de emissão de luz infravermelha pelas cepas marcadas pela proteína iFRP70. A inibição da atividade da enzima topoisomerase foi avaliada através do relaxamento do DNA superenovelado, após análise de eletroforese em gel de agarose. A formação de complexo de clivagem foi avaliada através da capacidade de manutenção do corte na fita de DNA ao longo 30 minutos, após análise de eletroforese em gel de agarose. O extrato etanólico, as frações hexânica, acetato de etila e metanólica da própolis, bem como os flavonoides naringenina e isoramnetina, não apresentaram efeitos deletérios sobre as células J774 até a máxima concentração testada (100 μM). Das 16 alcamidas testadas, apenas três apresentaram efeitos deletérios sobre as células J774 a partir da concentração de 10 μM. A fração acetato afetou o crescimento de formas promastigotas de L. amazonensis e L. chagasi, com percentuais de efeito máximo, na concentração de 10 μM, iguais a 82,2% e 75,5%, respectivamente, valores significativos quando comparados ao fármaco pentamidina. Os flavonoides naringenina e isoramnetina também afetaram significativamente o crescimento de formas promastigotas e amastigotas de L. amazonensis e L. chagasi. Estes flavonoides afetaram a atividade enzimática da topoisomerase de leishmania, interferindo na capacidade da enzima em relaxar o DNA superenovelado, formado durante o processo de replicação de DNA. Os mesmos flavonoides não foram capazes de interferir na atividade enzimática da topoisomerase humana. Em relação as alcamidas testadas, àquelas denominadas RAC4, RAC8, RAC9, RAC12 e RAC16, apresentaram um efeito significativo contra formas promastigotas e amastigotas de L. amazonensis, L. chagasi e L. infantum iFRP70, com concentração inibitória de 50% (CI50) abaixo de 10 μM, efeito máximo acima de 60%. Estas alcamidas, quando testadas em concentrações variando de 100 a 3,15 μM μM, inibiram a capacidade da topoisomerase de leishmania em relaxar o DNA superenovelado, interferindo de forma significativa na atividade enzimática, com destaque para a RAC8 que foi capaz de inibir a atividade a partir de 6,25 μM, menor concentração inibitória observada. Estas alcamidas não inibiram a atividade enzimática da topoisomerase humana, em nenhuma das concentrações testadas, garantido a inibição seletiva da DNA topoisomerase de leishmania. Quando avaliada a capacidade de formação de complexo de clivagem, as alcamidas RAC4, RAC8, RAC9, RAC12 e RAC16, foram capazes de manter a estabilidade de formação do complexo de clivagem, mantendo o DNA cortado ao longo de 30 minutos. Dessa forma, esse trabalho demonstrou que as substâncias naturais e semissintéticas, apresentaram um efeito leishmanicida contra L. amazonensis, L. chagasi e L. infantum iFRP70, bem como inibiram, de forma seletiva a atividade catalítica da enzima DNA topoisomerase de leishmania, podendo vir a ser utilizado como protótipo para o desenvolvimento de novos fármacos leishmanicidas.

Orientador: Yuji Takahata / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-27T05:20:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_MariaCristinaAndreazza_D.pdf: 601049 bytes, checksum: 4817640b196edf3889c0ca07077e190b (MD5) Previous issue date: 1998 / Doutorado

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-31T13:23:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-31T13:23:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-31T13:23:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-31T13:23:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2017-03-30 / Leishmaniasis is a disease that affects around 12 million people worldwide, being prevalent in 5 continents and considered endemic in 98 countries. The cutaneous form is the most common and can be caused by approximately 20 species. In Brazil, the antimony drug is used as the first choice in the treatment of leishmaniasis. After intravenous administration, it is rapidly absorbed and almost 90% of the antimony is excreted within the first 48 hours by the kidneys. As a consequence, the administration of high doses is indispensable, which generates many side effects, including cardiorespiratory and renal alterations. In this sense, the general objective of this work was the development of pure maghemite nanoparticles and coated with glucuronic and fructose acid, shortwave, aiming to generate an innovative treatment protocol, via hyperthermia for the treatment of cutaneous leishmaniasis lesions. In addition to the synthesis of nanoparticles, characterization tests were performed, including field emission gun microscopy (FEG); X-ray diffraction; Fourier-transformed infrared spectroscopy (FTIR); Möusbauer spectroscopy and magnetic measurements (ZFC). Short-wave parameter definition tests and in vitro cell viability assays, with and without the use of short waves, were also performed. Results: The results of the FEG revealed a well ordered structure of nanoparticles, with an average diameter of 60nm. X-ray diffraction data, together with Möusbauer, indicated the oxidation state and crystalline phase of the iron oxide compatible with a pure sample of maghemite. The FTIR measurements indicated adsorption of the binders to the nanoparticles, especially when coated with glucuronic acid. The magnetization measurements by ZFC indicated, in all samples, magnetic properties compatible with ferromagnetic regime and saturation magnetization between 56 and 59 emu /g, indicating that these materials when exposed to an alternating electromagnetic field will allow hyperthermia. Finally, the in vitro assays indicated a real leishmanicidal effect when the pure or coated nanoparticles were exposed to the alternating magnetic field of the short waves for 30 minutes, which generated hyperthermia and consequent death of the pathogen. In view of the above, it is possible to conclude that the application of the proposed leishmanicide method indicated a high potential of use for the treatment of cutaneous leishmaniasis lesions / A leishmaniose é uma patologia que afeta cerca de 12 milhões de pessoas em todo mundo, sendo prevalente em 5 continentes e considerada endêmica em 98 países. A forma cutânea é a mais comum e pode ser causada por aproximadamente 20 espécies. No Brasil, o medicamento à base de antimônio é utilizado como primeira escolha na terapêutica da leishmaniose. Após administração endovenosa, ele é rapidamente absorvido e praticamente 90% do antimônio é excretado nas primeiras 48h pelos rins. Em conseqüência, faz-se indispensável a administração de doses elevadas, o que gera muitos efeitos colaterais, incluindo alterações cardiorrespiratórias e renais. Nesse sentido, o objetivo geral do presente trabalho constituiu-se como o desenvolvimento e caracterização de nanopartículas de maghemita puras e revestidas com ácido glicurônico e frutose, atrelado a aplicação de ondas curtas, visando a geração de um protocolo de tratamento inovador, via hipertermia, para o tratamento de lesões de leishmaniose cutânea. Para tanto, foram realizados, além da síntese das nanopartículas, ensaios de caracterização, que incluem, entre outros, microscopia de varredura, via FEG; difração de Raio-X; espectroscopia na região do infravermelho (FTIR); espectroscopia de Möusbauer e medidas magnéticas (ZFC). Ensaios de definição de parâmetro de ondas-curtas e ensaios de viabilidade celular in vitro, com e sem o uso de ondas curtas, também foram realizados. Os resultados do FEG revelaram uma estrutura bem ordenada de nanopartículas, com diâmetro médio na ordem de 60nm. Os dados de difração de raio-X, juntamente com Möusbauer, indicaram o estado de oxidação e fase cristalina do oxido de ferro compatível com uma amostra pura de maghemita. As medidas do FTIR indicaram adsorção dos ligantes às nanopartículas, sobretudo quando revestidas com ácido glicurônico. As medidas de magnetização por ZFC indicaram, em todas as amostras, propriedades magnéticas compatíveis com regime ferromagnético e magnetização de saturação entre 56 e 59 emu/g, indicando que esses materiais quando expostos à um campo eletromagnético alternado permitirão a hipertermia. Por fim, os ensaios in vitro indicaram um real efeito leishmanicida quando as nanopartículas puras ou revestidas foram expostas ao campo magnético alternado do ondas-curtas por 30 minutos, o que gerou hipertermia e consequente morte do patógeno. Diante do exposto, é possível concluir que a aplicação do método leishmanicida proposto indicou um alto potencial de utilização para o tratamento de lesões de leishmaniose cutânea via hipertermia por ondas-curtas com nanopartículas de maghemita.