La principal contribución de este estudio es la caracterización del estado de salud de un colectivo de espina bífida, de edades comprendidas entre los 1 a los 12 años. Objetivos: Se planteó caracterizar la composición de la dieta, mediante la descripción de la ingesta de macro y micronutrientes, para posteriormente comparar la dieta de la población infanto-juvenil espina bífida con las recomendaciones dadas para la población infanto-juvenil española; y finalmente conocer la percepción y experiencias de padres y madres sobre la discapacidad de niños con espina bífida en la Región de Murcia. Metodología: Este estudio transversal descriptivo tuvo dos periodos de muestreo: Mayo-Julio de 2009, Mayo-Julio de 2011. El número de participantes fue de 19 en el 1er muestreo, pertenecientes a AMUPHEB; y de 12 en el 2º, pertenecientes a asociaciones de espina bífida de toda España. En ambos casos se les pasó a padres y madres, historia dietética de 15 días, test Kreceplus para los hábitos alimentarios, test Kreceplus para el ejercicio físico y cuestionario de características sociodemográficas, hecho ad-hoc por el personal investigador. Se determinaron ingestas de macro y micronutrientes y el porcentaje de individuos según edad que cumplían dichas recomendaciones de ingesta diaria. Para la actividad física se calcularon las proporciones mayores, por edad, de número de horas diarias de ejercicio físico y tiempo diario invertido en televisión y videoconsola/s. Para determinar hábitos alimentarios, se asignaron 7 ítems para el consumo de alimentos, además de 4 para el desayuno y 4 para preferencias; calculando el número de sujetos según edad que cumplían la condición. A partir de estos resultados se diagnosticó la proporción de individuos para cada grupo de edad que se encontraba en cada nivel nutricional (bajo, medio, alto). Por último en el test de características socioculturales se determinó el porcentaje y las proporciones de individuos que vivían en el mismo hogar y el lugar de residencia. Finalmente se realizó un estudio de diseño cualitativo (Mayo 2014) para explorar las percepciones, expectativas y experiencias sobre la alimentación, el ejercicio físico, la estigmatización y la percepción del peso, mediante la entrevista en profundidad. Participaron 14 niños espina bífida de la Región de Murcia (edades de 8-18 años); acotándose dicha muestra por saturación de la información. La recogida de datos la realizó una entrevistadora previamente entrenada, estableciéndose una serie de preguntas abiertas por medio de una entrevista semiestructurada; estas se registraron y trascribieron literalmente. Se caracterizaron en consideración con las categorías subyacentes establecidas y se llevó a cabo la sistematización del análisis en varias etapas. Conclusiones: Se concluye que la población infanto-juvenil espina bífida de 1 a 12 años objeto de estudio, no cumple el patrón nutricional de Dieta Mediterránea. Presenta bajos consumos de frutas frescas, verduras frescas, hortalizas frescas, cereales y legumbres; elevados de bollería industrial, dulces y golosinas. El consumo diario de energía, hidratos de carbono y fibra fue inferior a las recomendaciones; elevado de proteínas. Las ingestas diarias de ácido fólico y yodo fueron anormalmente bajas, siendo anormalmente altas las de sodio. Prácticamente la totalidad de la población presenta sobrepeso y/o obesidad en algún grado. En cuanto a las características sociodemográficas, la mayoría de la población vivía en municipios rurales y el modelo familiar predominante fue de familia nuclear no extendida. La totalidad de la población exhibió un patrón sedentario, dedicando gran parte de su tiempo libre al ocio sedentario y realizando menos de 2 horas diarias de actividad física. La característica fundamental de nuestra muestra es que sufren continuas hospitalizaciones y visitas médicas a los distintos especialistas, para tratar las distintas complicaciones funcionales que les son inherentes a su condición. Como consecuencia presentan altas tasas de absentismo escolar, participando menos de actividades escolares y extraescolares, sintiéndose rechazados y excluidos. Presentaron problemas y dificultades en la socialización, conductas solitarias y aislamiento social. La vivencia de los padres y madres es que los entornos físicos escolar y urbano no están suficientemente adaptados a las necesidades de los niños con esta discapacidad física y que hay escasa concienciación social. Requieren una sensibilización social de su condición (espina bífida) y de la inclusión plena y sin condicionamientos en la sociedad. Palabras Clave: espina bífida, población infanto-juvenil, test Kreceplus, ingestas diarias, frecuencia de consumo de alimentos, patrón nutricional dieta mediterránea, ocio pasivo, sedentarismo, rural, familia nuclear no extendida, problemas de socialización, soledad, aislamiento social, absentismo escolar, sensibilización social, espacios adaptados. / ABSTRACT The main contribution of this study is the characterization of the state of health of a collective with spina bifida, with an age range between 1 and 12 years. Objectives: It was considered the typification of the diet, by the description of the macro and micronutrients intake, to compare subsequently the diet of the infant-juvenile population affected by spina bifida with the recommendations given for the Spanish infant-juvenile population; and finally to know the perception and personal experiences of fathers and mothers about the disability of children with spina bifida in the Region of Murcia. Methodology: This descriptive transversal study had two sampling periods: May-July 2009, May-July 2011. The number of participants was 19 in the 1st sampling, belonging to AMUPHEB; and 12 in the 2nd, belonging to associations of spina bifida all over Spain. In both cases the parents were given the dietary history of 15 days, Kreceplus test for food habits, Kreceplus test for physical exercise and questionnaire of sociodemographic characteristics, made ad-hoc by the research staff. The intake of macro and micronutrients were determined and the percentage of individuals according to their ages that fulfilled such daily intake recommendations. Regarding the physical activity, the largest proportions were calculated, by age, of number of hours of physical exercise per day as well as the time spent daily with the television and video game console/s. In order to determine the food habits, 7 items were assigned for the food consumption, as well as 4 for the breakfast and 4 for the preferences; calculating the number of subjects according to their age who fulfil the condition. From these results it was diagnosed the proportion of individuals for each group which was in each nutritional level (low, medium, high). Finally, in the test of sociocultural characteristics, it was determined the percentage and the proportions of individuals who lived in the same home and place of residence. Lastly a study of qualitative design was carried out (May 2014) in order to explore the perceptions, expectations and experiences about the feeding, the physical exercise, stigmatization and perception of weight, by an interview in depth. 14 children with spina bifida from the Region of Murcia took part (ages 8-18); delimiting such sampling by information saturation. The collection of data was done by an interviewer previously trained, establishing a series of open questions by means of a semi-structured interview; they were registered and transcribed literally. They were characterized according to the subjacent categories stablished and the systematization on the analysis was carried out in several stages. Conclusions: It is concluded that the infant-juvenile population with spina bifida from 1 to 12 years, object of this study, does not comply with the nutritional parameter of the Mediterranean Diet. It presents low consumption of fresh fruit, fresh vegetables as well as cereals and legumes; high consumption of processed baked goods, candies and sweets. The daily consumption of energy, carbohydrates and fibre was lower than the recommended amount; high on proteins. The dairy intake of folic acid and iodine were anomalously low, being anomalously high the sodium one. Practically, the totality of the population presents overweight and/or obesity to a greater or lesser degree. Regarding the sociodemographic characteristics, most of the population lived in rural municipalities and the predominant family model was non-extended nuclear family. The totality of the population exhibited a sedentary pattern, devoting a great amount of their free time to sedentary leisure and doing less than 2 daily hours to physical activities. The fundamental characteristic of our sample is that they suffer continuous hospitalizations and medical visits to different specialists, to treat the diverse functional complications that are inherent to their condition. As a consequence they present high rates of school absenteeism, taking part in less school and out-of-school activities, feeling rejected and excluded. They presented problems and difficulties in socialization, solitary conducts and social isolation. The experience of the parents is that the school and urban physical environment are not sufficiently adapted to the needs of children with this physical disability and there is scarce social awareness. They require social sensitivity of their condition (spina bifida) and full inclusion in society without any restriction. Key words: spina bifida, split spine, infant-juvenile, test Kreceplus, daily intake, food consumption frequency, nutritional pattern, Mediterranean diet, passive leisure, sedentarism, rural, non-extended nuclear family, socialization problems, solitude, social isolation, school absenteeism, social awareness, adapted spaces.

La depleción de las células B en enfermos con artritis reumatoide debe comportar un serie de cambios en el resto del sistema inmunológico. Estos cambios podrían ser distintos en diferentes subtipos de enfermos. La respuesta, evolución y comportamiento de los enfermos tras el tratamiento con rituximab nos permitirá entender mejor la patogenia de la artritis reumatoide. Objetivos: Valorar el comportamiento de los linfocitos T ante la depleción de células B producida por rituximab. Se analizará el comportamiento del número total de células T y de sus subclases (memoria, naïve y reguladoras) y su relación con la clínica. Analizar la evolución y relación de IL-15 (tanto en suero como transmembrana) y de IL-17 con las distintas clases de células T y la actividad de la enfermedad tras el tratamiento con rituximab. Valorar a la vez si los enfermos con y sin IL-15 en suero presentan respuestas biológicas distintas. Estudiar los niveles de rituximab en sangre tras la primera infusión y su relación con la actividad de la enfermedad y con la depleción y reaparición de los linfocitos B en sangre.. Resultados: Se estudiaron 33 enfermos con artritis reumatoide tratados con rituximab según práctica clínica habitual a lo largo de tres ciclos de tratamiento. Rituximab fue un fármaco efectivo tanto a nivel de respuesta clínica como de depleción de células B periféricas. Se observó además una disminución de inmunoglobulinas, factor reumatoide y anticuerpos anticitrulinados. No hubo una disminución del número total de linfocitos T, ni de CD4+ ni de CD8+, pero se observó una disminución del número de linfocitos T de memoria, con un aumento de los naïve. La ratio de células T de memoria/naïve se correlacionó con la respuesta clínica. Dos terceras partes de los enfermos presentaron IL-15 en suero. Los enfermos con artritis reumatoide tenían niveles de IL-15 mayores que los controles sanos. Todos los enfermos presentaron IL-15 transmembrana. Los niveles de IL-15 en suero y transmembrana disminuyeron progresivamente tras cada ciclo del tratamiento. La IL-17 también disminuyó progresivamente con el tratamiento con rituximab. Al contrario, el número de células T reguladoras aumentó. Los enfermos con y sin IL-15 inicial en suero se comportaron de manera similar. La disminución de IL-15 se asoció a la disminución de la ratio de los linfocitos CD45RO+/CD45RA. Los niveles de rituximab encontrados fueron muy variables entre los enfermos, con un máximo a los 30 días y un descenso muy importante a los 90 días. Esta variabilidad permitió clasificar a los enfermos en dos grupos, niveles altos y bajos de rituximab. Los enfermos con niveles altos de rituximab consiguieron una mayor depleción periférica de linfocitos B, pero la reaparición de células B fue anterior. Tras el primer ciclo de tratamiento no se encontraron diferencias clínicas entre los dos grupos. Conclusiones: El tratamiento con rituximab induce una disminución de la IL-15. Esta disminución de la IL-15 podría provocar una serie de cambios en el sistema inmune. Estos cambios pasarían por una disminución de la IL-17 y de la ratio de células CD45RO+/CD45RA+, con un aumento de las células T reguladoras, y a partir de aquí la mejoría clínica. Los pacientes con niveles elevados de rituximab en sangre a los 30 días presentan una mejor depleción periférica de células B inicial, pero una reaparición de las mismas más temprana. / B cell depletion in rheumatoid arthritis patients should cause a series of changes in the rest of the immune system. These changes may be different in different subtypes of patients. The evolution of these patients after rituximab treatment can be useful to better understand rheumatoid arthritis pathogenesis. Objectives: To assess the behavior of T lymphocytes to B cell depletion produced by rituximab. Total number of T cells and its subclasses (memory, naïve and regulators) and its relationship to the clinic will be analyzed. To analyze the evolution and relation of IL-15 (both serum and transmembrane) and IL-17 with the different kinds of T cells and the disease activity following rituximab treatment. To study if patients with and without serum IL-15 have different biological responses. To asses rituximab levels after the first infusion and its relation with disease activity and B cell depletion and repletion. To look for new biomakers of response to rituximab treatment in rheumatoid arthritis patients. Results: We studied 33 rheumatoid arthritis patients treated with rituximab following usual clinical practice during three treatment cycles. Rituximab was effective both in clinical response and in B-cell depletion. A decrease of immunoglobulins, rheumatoid factor and anti-citrullinated antibodies was observed. No decrease in the total number of T cells, nor CD4 + or CD8 + was observed, but memory T cells decreased and naïve T cells increased. The ratio of memory/naïve T cells correlated with clinical response. About two thirds of the patients had IL-15 in serum. Rheumatoid arthritis patients had levels of IL-15 higher than healthy controls. All patients had transmembrane IL-15. Serum and transmembrane IL-15 decreased progressively after each treatment cycle. The IL-17 also decreased progressively with rituximab treatment. On the contrary, the number of regulatory T cells increased. Patients with and without initial serum IL-15 behaved similarly. IL-15 decrease was associated with the ratio of CD45RO+/ CD45RA+ lymphocytes. Rituximab levels were highly variable among patients, with a maximum at day 30 and an important decrease at day 90. This variability let us classify patients into two groups, with high or low levels of rituximab. Patients with high levels of rituximab achieved a greater depletion of peripheral B cells, but there was an earlier B cell repletion. After the first cycle of treatment there was no clinical difference between the two groups.. Conclusions: Rituximab treatment induces an IL-15 decrease. This decrease may induce a series of changes in the immune system. These changes would go through a decrease of IL-17 and the CD45RO+/CD45RA+ cells ratio and an increase of regulatory T cells, and from all these to the clinical improvement. Patients with higher levels of rituximab at day 30 had a better peripheral B cell depletion and an earlier repletion.

El turmell és una articulació que registra un alt percentatge de lesions. Els individus afectats per lesions al turmell acostumen a mostrar alteracions de l’equilibri postural i de la capacitat de percebre l’articulació estable, cosa que fa augmentar el risc de patir de nou un esquinç al turmell, així com també s’han descrit alteracions en els patrons d’activació muscular de diferents grups musculars de la cama. Per aquest motiu s’han desenvolupat diferents protocols d’entrenament neuromotor orientats a disminuir el risc de patir una lesió al turmell, però malauradament fins avui, aquests han mostrat baixos nivells d’evidència i efectivitat. Aquesta tesi va tenir dos objectius principals: analitzar l’efectivitat d’un protocol d’entrenament neuromotor com a eina de prevenció sobre la millora de l’estabilitat dinàmica del turmell, i determinar la relació existent entre els nivells d’activació de la musculatura pèlvica i els de la musculatura estabilitzadora del turmell. Els resultats obtinguts en la realització dels estudis realitzats per aquesta tesi, indiquen que la realització d’un entrenament neuromotor tradicional orientat a la millora de l’estabilitat del turmell no va suposar un estímul suficient per obtenir millores en la capacitat d’equilibri de la mostra estudiada, i que la influència observada entre l’activació de la musculatura proximal de la cama i la pròpia del turmell, sembla indicar que la introducció d’exercicis d’entrenament específic de la musculatura estabilitzadora de la pelvis podria representar una eina interessant per la millora dels nivells d’estabilitat del turmell. / El tobillo es una articulación que sufre un alto porcentaje de lesiones. Los individuos afectados por alguna lesión en esta región suelen mostrar alteraciones del equilibrio postural y de la capacidad de percibir la articulación estable, lo que aumenta el riesgo de sufrir de nuevo un esguince en el tobillo, así como se han descrito alteraciones en los patrones de activación muscular de distintos grupos musculares de la pierna. Por este motivo se han desarrollado diferentes protocolos de entrenamiento neuromotor orientados a disminuir el riesgo de sufrir una lesión en el tobillo, pero desafortunadamente hasta nuestro tiempo, han mostrado bajos niveles de evidencia y efectividad. Por estos motivos esta tesis tuvo dos objetivos principales: analizar la efectividad de un protocolo de entrenamiento neuromotor como herramienta de prevención sobre la mejora de la estabilidad dinámica del tobillo, y determinar la relación existente entre los niveles de activación de la musculatura pélvica y los de la musculatura propia del tobillo. Los resultados obtenidos en la realización de los estudios realizados para esta tesis, podemos concluir que la realización de un entrenamiento neuromotor tradicional orientado a la mejora de la estabilidad del tobillo no supuso un estímulo suficiente para obtener mejoras en la capacidad de equilibrio de la muestra estudiada, y que la influencia observada entre la activación de la musculatura proximal de la pierna y la propia del tobillo, parece indicar que la introducción de ejercicios de entrenamiento específico de la musculatura estabilizadora de la pelvis podría representar una herramienta interesante para la mejora de los niveles de estabilidad del tobillo. / The ankle is a joint that undergoes a high percentage of injuries. People who have suffered from an injury can show some kind of imbalance according to postural balance and related to the ability to perceive joint stability, which increases the risk of suffering an injurie again. In addition, changes have been described in muscle activation patterns for those who have suffered an injury in this joint. All this data has led physiotherapists to design different neuromotor training programs to reduce the risk of injuring the ankle again. Unfortunately until now, there is very little scientific evidence about their effectiveness. For these reasons, this thesis had two main objectives: first, to analyse the effectiveness of a neuromotor training program as a prevention mechanism for improving the dynamic stability of the ankle, and second, to determine the relationship between the electromyographic activity of the hip muscles and the ankle muscles. Based on the results obtained in this thesis, we can conclude that the performance of a traditional neuromotor training program, with the aim of improving ankle stability, does not represent a sufficient stimulus to generate balance improvements in the sample studied. The influence observed between the proximal muscle activity and the ankle muscle activity, seems to show that it is necessary to introduce specific training based on the hip muscles, and this could represent an interesting tool for improving ankle stability.

Les lesions dels nervis perifèrics provoquen paràlisis, anestèsia i pèrdua del control autonòmic de la zona afectada. Després de lesió, la part distal dels axons queda desconectat del soma i degenera, provocant la denervació dels òrgans diana. La degeneració walleriana crea un microambient favorable per al creixement axonal, alhora que la neurona canvia a un fenotip proregeneratiu. Malauradament, la manca d’especificitat de la regeneració, en termes de creixement motor i sensorial i reinnervació, és un dels grans limitats de la recuperació. Els mecanismes moleculars mplicats en la regeneració axonal i després de lesió són complexes i les interaccions entre els axons i la glia, els factors tròfics, la matriu extracel.lular i els seus receptors són fonamentals. Per aquestes raons, hem caracteritzat un model qeu ens permet comparar sota les mateixes condicions, creixement neurític motor i sensorial. Hem posat a punt un model in vitro, basat en cultius organotípics de medul.la espinal i explants de ganglis de les arrels dorsals de rates postnatals de 7 dies, embeguts en una matriu de col.lagen. Afegitn difernets factors tròfics a la matriu, hem avaluat la fiabilitat de les preparacions de gangli i de medul.la espinal. A més a més, també hem posat a punt un co-cultiu amb cèl.lules de Schwann dissociades que mimetizen millor l’ambient permissiu del nervi perifèric. Amb aquest model, hem analitzat els efectes de diferents factors tròfics que potencialment podien afavorir la especificitat de la regeneració, i com aquests factors podien ser sobre-regulats de manera diferencial per branques de nervis motors i sensorials després de la lesió. Hem observat que l’FGF-2 (18 kDa) és el factor tròfic que exerceix un efecte més selectiu en el creixement de les motoneurones espinals, tant a nivell d’elongació com d’arborització de neurites. El mecanisme que provocaia aquest efecte sembla estar relacionat amb la capacitat de l’FGF-2 d’incrementar la interacció entre l’FGFR-1 i el PSA-NCAM. Les interaccions dels dos receptors són importants durant els estadis més primerencs de la neuritogènesis, mentres que la subunitat alfa7B de les integrines estaria més relacionada amb l’estabilització de les neurites. Amb l’objectiu d’explorar amb més detall la potencial habilitat de l’FGF-2 de promoure de manera selectiva la regeneració in vivo, hem produit un vector lentiviral (LV) que sobreexpressa FGF-2 i l’hem caracteritzat in vitro i in vivo. L’addició de cèl.lules de Schwann infectades amb el LV-FGF2 en la matriu de col.lagen que cobreix els explants de gangli o les medul.les espinals, incrementa el creixement de les neurites motores però no de les sensorials en comparació als co-cultius amb LV-GFP. Per tant, la sobreexpressió de l’FGF2 mitjançant el LV és tan eficaç com l’addició directe del factor en la matriu en la promoció selective de la regeneració motora. Quan el LV-FGF2 es va injectar directament al nervi ciàtic in vivo, vam corroborar que l’FGF2 se secretava a nivell de la lamina basal de les cèl.lules de Schwann. Els nivells de FGF-2 en els homogentats de nervi ciàtic una setmana després d’injectar 1μl LVFGF- 2 eren més alts que els dels nervis injectats amb vehicle o LV-GFP. Per tant, el vector LV pot ser utilitzat in vivo per tal de verificar les troballes in vitro i per investigar amb més detall la capacitate de l’FGF2 de promoure regeneració motora. En aquest treball també hem comparat la capacitat de la glia embolcalladora olfactiva i les cèl.lules de Schwann, en donar suport a la regeneració in vitro de neurites motores i sensorials. En els co-cultius de cèl.lules de Schwann i els explants de gangli i medul.les espinals, s’observava un increment de la regeneració motora, menters que la glia embolcalladora incrementava signifiativament el creixement neurític de les neurones sensorials. Per contra, quan la glia embolcalladora s’afegia al cultiu motor, s’observava una agregació d’aquestes cèl.lules. El comportament de la glia embolcalladora podria estar determinat pel manteniment de la citoarquitectura de les medul.les espinals, on trobem astròcits i cèl.lules Schwann endògenes. Les interaccions entre la cèl.lula de Schwnn, la glia olafctòria i els astròcits, a través del complexe FGFR1-FGF2-HSPG, poden provocar agregació cel.lular. De fet, els nivells elevats d’HSPG van detectar-se al costat de la barrera, i això pot explicar el paper complex d’aquestes neurones. Els nivells elevats d HSPG és van detecar a la zona de lesió , i això pot explicar el paper quimio-repelent dels agregats cel.lulars. / Peripheral nerves injuries result in paralysis, anesthesia and lack of autonomic control of the affected body areas. After injury, axons distal to the lesion are disconnected from the neuronal body and degenerate, leading to denervation of the peripheral organs. Wallerian degeneration creates a microenvironment distal to the injury site that supports axonal regrowth, while the neuron body changes in phenotype to promote axonal regeneration. However, the lack of specificity of nerve regeneration, in terms of motor and sensory axons regrowth, pathfinding and target reinnervation, is one the main shortcomings for recovery. The molecular mechanisms implicated in axonal regeneration and pathfinding after injury are complex, and take into account the cross-talk between axons and glial cells, neurotrophic factors, extracellular matrix molecules and their receptors. For these reasons, we characterized a model that allows us to compare under the same conditions motor and sensory neuron regeneration. We set up an in vitro model, based on organotypic cultures of spinal cord slices and dorsal root ganglia explants from P7 rats, embedded in a collagen matrix. By adding different neurotrophic factors in the collagen matrix, we evaluated the reliability of DRG and spinal cord preparations. Moreover, we also set up a co-culture with dissociated Schwann cells to further mimic the permissive environment of the peripheral nerve. Later, we screened in vitro the different capabilities of trophic factors with promising effect on specific reinnervation of target organs after peripheral nerve regeneration. Trophic factors which promoted in vitro neuritogenesis of sensory and motor neurons were up-regulated in Schwann cells obtained from axotomized sensory and motor branches respectively. We found that FGF-2 (18 kDa) was the trophic factor that exerted the most selective effect in promoting neurite outgrowth of spinal motoneurons both in terms of elongation and arborization. The mechanism underling this effect in neuritogenesis seems related to FGF-2 enhancing the interaction between FGFR-1 and PSA-NCAM. The interaction of these two receptors is important during early stages of neuritogenesis and pathfinding, while integrin alpha7B subunit seems to play a role during neurite stabilization. With the aim to further explore the potential capacity of FGF-2 to selectiveley promote motor regeneration in vivo, we produced a lentiviral (LV) vector to overexpress FGF-2 and we characterized it in vitro and in vivo. Addition of cultured Schwann cells infected with FGF-2 into a collagen matrix embedding spinal cords or DRG significantly increased motor neurite growth but not sensory outgrowth when compared to co-cultures with LV-GFP, thus demonstrating that the LV construct was as effective as direct addition of the trophic factor to selectively promote motor neuron growth. By injecting the LV construct direclty into the sciatic nerve in vivo, we corroborated the localization of the secreted FGF-2 in the basal lamina of Schwann cells. Levels of FGF-2 from homogenated sciatic nerves one week after injection of 1μl LV-FGF-2 were higher than from nerves injected with vehicle or LV-GFP. Therefore, the LV vector can be used in vivo to verify our in vitro results and further study the capacity of FGF-2 to enhance motor nerve regeneration. In the last part of our work, we compare the abilities of Olfactory Enshealting cells and Schwann cells in sustaining in vitro motor and sensory neuritogenesis. Co-culture of cells with DRG explants and spinal cord organotypic slices was set up. SCs were promoting motoneuron growth, whereas OEC were significantly increasing neurite outgrowth in DRGs. In contrast, when OEC were added into motoneuron culture, we saw cell clusters and motoneuron outgrowth inhibition. This behaviour of OEC could be due to the maintained cytoarchitecture of the spinal cord in vitro where astrocytes and endogenous Schwann cells were also present. Interactions of SC, OEC and astrocytes through FGFR1-FGF2-HSPG complex can cause cell clustering. In fact, high levels of HSPG were found into the boundary formations, and this can explain the chemorepellent role of the cluster on neurite outgrowth.

Introducción y Objetivos. En la evaluación de los resultados obtenidos en la asistencia sanitaria es esencial su medición mediante herramientas objetivas y subjetivas. La aplicación de las medidas de evaluación apropiadas es importante porque permite la evaluación de la eficacia de una intervención, seleccionar tratamientos efectivos y también ayuda en la monitorización de la mejoría o empeoramiento de los pacientes. El objetivo de este estudio es analizar la correlación entre las expectativas del paciente antes y después de la cirugía de hombro con el grado de satisfacción , el SF- 36, Simple Shoulder Test (SST) y la escala funcional de Constant. Material y Métodos. Estudio retrospectivo que incluyó 93 pacientes intervenidos del hombro por patología diversa. Se realizó un análisis demográfico de la muestra, y se completó antes y después de la cirugía la escala funcional de Constant, el SST, el cuestionario SF-36. Antes de la intervención quirúrgica se evaluaron las expectativas del paciente mediante el Hospital for Special Surgery Shoulder Surgery Expectations Survey (HSSSSES). Después de la cirugía se analizó el cumplimiento de las expectativas y el grado de satisfacción. La estadítisca se realizó una correlación no paramétrica mediante la rho de Spearman, y la significación estadística fue de p<0.05. Resultados. Existe una correlación entre un mayor grado de expectativas preoperatorias en los pacientes de edad más jóven, del género masculino, con un nivel de estudios universitario y que se encuentran activos laboralmente. No se aprecian diferencias estadísticamente significativas en relación al diagnóstico. Existe una correlación moderada entre el grado de satisfacción con el cumplimiento de la expectativas en mejoría del dolor, función, fuerza y actividades de la vida diaria (0.450, 0.488, 0.372, 0.539). Se aprecia una mayor correlación entre el grado de satisfacción con la mejoría en las escalas funcionales ( Constant 0.448, SST 0.516) en comparación con los resultados con el SF- 36 donde la correlación es débil. Conclusión. El cumplimiento de las expectativas del paciente tiene una influencia significativa en el grado de satisfacción obtenido tras la cirugía de hombro. Existe una mayor correlación entre el grado de satisfacción del paciente con la mejoría en escalas funcionales como la escala de Constant, y el SST. No así con la percepción de la calidad de vida evaluada con el SF-36. Por tanto, el desarrollo de expectativas antes de la cirugía más realistas pueden mejorar el grado de satisfacción tras la cirugía de hombro. / Introduction and Objectives. In the evaluation of the results of health care is essential its measurement by objective and subjective tools.The application of appropriate evaluation measures is important because it allows the evaluation of the effectiveness of an intervention, selecting effective treatments and also helps in monitoring the improvement or worsening of patients. The aim of this study is to analyze the correlation between patients' expectations before and after shoulder surgery with patient´s satisfaction, the SF-36, Simple Shoulder Test (SST) and the Constant score. Material and Methods. Retrospective study including 93 patients who underwent shoulder surgery by diverse pathology. An analysis of the sample population was realized, and before and after surgery the Constant functional scale, the SST and the SF-36 were completed. Before surgery, patient´s expectations were evaluated by the Hospital for Special Surgery Shoulder Surgery Expectations Survey (HSSSSES). After surgery it was analyzed the fulfillment of patient´s expectations and the level of satisfaction. Statiscal analysis was performed by nonparametric correlation rho Spearman, and statistical significance was p <0.05. Results. Younger patients, males, with university studies and who are actively working have higher expectations before surgery. No statistically significant differences in relation to the diagnosis was observed. There is a moderate correlation between the degree of satisfaction with the fulfillment of the expectations for pain, function, strength and activities of daily living (0450, 0488, 0372, 0539). It was found a high correlation between the degree of satisfaction with the improvement in the functional scales (Constant 0.448, SST 0.516) compared with the SF-36 where the correlation is weak. Conclusion. Meeting patient´s expectations has a significant influence on the level of satisfaction after shoulder surgery. There is a greater correlation between the degree of patient satisfaction with the improvement in functional scales (Constant score and SST). No correlation was found with the perceived quality of life assessed with the SF-36. Therefore, the development of realistic expectations prior to surgery can improve a higher level of satisfaction after shoulder surgery.

Les disferlinopaties són un grup de distròfies musculars causades per mutacions al gen DYSF. El gen DYSF codifica per la proteïna disferlina, la qual s’expressa en diversos teixits però és especialment important en el múscul esquelètic i en els monòcits/macròfags. En aquesta tesi doctoral els objectius principals eren l’estudi de les funcions de la disferlina mitjançant l’estudi de les seves interaccions amb altres proteïnes, el desenvolupament de tests per evaluar les funcions de la disferlina i l’estudi del trasplantament de moll d’os com a possible teràpia cel·lular per les disferlinopaties. Es varen estudiar les interaccions de la disferlina mitjançant una combinació de tècniques de forma novedosa. Primer es va estudiar el complex de la disferlina mitjançant l’electroforesi no desnaturalitzant o tècnica del Blue Native. També es varen determinar interaccions amb la disferlina mitjançant assaigs d’immunoprecipitació. Combinant aquestes dues metodologies, hem pogut identificar membres ja coneguts del complex de la disferlina com ara la proteïna Trim72/MG53 i la caveolina-3 i hem pogut identificar nous membres del complex, com ara la proteïna motora dineina citoplasmàtica, la calseqüestrina-1 o la miomesina-2. Per últim, es va estudiar si les proteïnes identificades com a membres del complex de la disferlina interaccionaven directe o indirectament amb aquesta mitjançant la tècnica de FLIM-FRET (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy- Fluorescence Resonance Energy Transfer). Gràcies al FLIM-FRET hem descrit el tipus d’interacció entre diverses proteïnes del complex i la disferlina, determinant que aquesta interacciona directament amb la calseqüestrina-1, la miomesina-2 la dineina i el trim72/MG53, i hem descrit com a indirecte la interacció entre la disferlina i la caveolina-3. Això ens a dut a relacionar la disferlina amb funcions en la regulació del calci per part del reticle sarcoplàsmic, l’estabilitat de les miofibretes i el tràfic de vesícules. Per altra banda em desenvolupat diferents metodologies per tal d’avaluar el correcte funcionament de la disferlina in vitro tant en miotubs com en macròfags. Per avaluar la correcta funció de la disferlina en miotubs hem posat a punt un assaig de lesió de membrana basat en l’ús de SDS, després del qual hem pogut observar, que en absència de disferlina s’acumula el marcador lisosomal Lamp-1 a la membrana, i les cèl·lules deficients en disferlina presenten una major permeabilitat al iodur de propidi. A l’estudiar l’efecte de la falta de disferlina en el macròfags varem observar que la falta d’aquesta proteïna causa que aquest tipus cel·lular es mogui mes ràpidament in vitro. Per últim, hem comprovat que el trasplantament de moll d’os en un model murí de disferlinopatia amb cèl·lules d’un donant amb expressió de disferlina normal restaura l’expressió de disferlina en els monòcits/macròfags però no en el teixit muscular. També hem comprovat que això comporta una millora funcional en aquest model murí, tot i que també varem observar certa millora en els animals autotrasplantats. Per tant, en aquest estudi concluïm amb noves interpretacions de les funcions de la disferlina basant-nos en els nous membres del complex de la disferlina identificats en els nostres estudis. Per altra banda, descrivim l’efecte beneficial per se del trasplantament de moll d’os en un model murí de disferlinopatia així com la major milloria en aquells animals en els quals s’ha restaurat l’expressió de disferlina en sang perifèrica. / Dysferlinopathies are a group of muscular dystrophies caused by mutations in the DYSF gene. The DYSF gene encodes the protein dysferlin, which is expressed in several tissues but is essential in skeletal muscle and monocytes / macrophages. The main objectives in this study were to determine the functions of dysferlin by studying its interactions with other proteins, developing tests to evaluate the functions of dysferlin, and studying bone marrow transplantation as a possible cell therapy for dysferlinopathies. We studied the interactions of dysferlin using a combination of techniques in a novel way. First, we studied the dysferlin complex by Blue Native electrophoresis. We also determined dysferlin interactions with immunoprecipitation assays. Combining these two methods, we identified already known members of the dysferlin complex such as the proteins Trim72/MG53 and caveolin-3, and we identified new members of the complex, such as motor protein cytoplasmic dynein, calseqüestrin-1 and myomesin-2. Finally, we studied whether the proteins identified as members of the dysferlin complex interacted directly or indirectly by means of Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy, Fluorescence Resonance Energy Transfer (FLIM-FRET) analysis. Using the FLIMFRET technique, we described the type of interaction between the proteins constituting the dysferlin complex, determining that dysferlin interacts directly with calseqüestrin-1, myomesin-2, dynein and trim72/MG53 and we described the interaction between dysferlin and caveolin-3 as an indirect interaction. This led us to hypothesize about the functions of dysferlin in the regulation of calcium from the sarcoplasmic reticulum, in the stability of myofibres, in and vesicle trafficking. In addition, we developed methodologies to determine the function of dysferlin in myotubes and macrophages in vitro. We developed a membrane injury test based on the use of SDS in myotubes. We observed that in the absence of dysferlin the lysosomal marker Lamp-1 accumulates in the subsarcolemma region, and that dysferlin-deficient cells show a higher permeability to propidium iodide. When we studied the effect of the absence of dysferlin in macrophages we observed that the lack of this protein causes these cells to move faster in vitro. Finally, we found that bone marrow transplantation in a mouse model of dysferlinopathies with dysferlin positive cells restores the expression of dysferlin in monocytes / macrophages, but not in skeletal muscle. We have noted that this implies a functional improvement in this mouse model, although we also observed some improvement in animals transplanted autologously. This study concludes by providing new insights into dysferlin function following our identification of new members of the dysferlin complex and by describing a beneficial effect of bone marrow transplantation in a mouse model for dysferlinopathy.

OBJETIVOS Demostrar la mejoría en la supervivencia al año y a los 4 años de haber padecido una fractura de fémur de origen osteoporótico, en pacientes a los que se realiza una intervención farmacológica con dosis altas de calcidiol y terapia física durante el primer año. Evaluar la mejoría en la deambulación, la densidad mineral ósea, análisis corporal total y la calidad de vida, al final de la intervención. Paralelamente, analizar la supervivencia a los 4 años, de todos los pacientes con fracturas de fémur osteoporóticas ingresados en nuestro centro, durante el período de estudio. MATERIAL Y MÉTODOS. El estudio de intervención es un ensayo clínico prospectivo, aleatorizado, simple ciego con grupo control. La población a estudio fueron todos los pacientes ingresados en el Hospital de la Santa Creu i Sant Pau (Barcelona), durante el período que duró el reclutamiento de la muestra (diciembre 2004 a enero 2007). El número de pacientes ingresados por fractura de fémur durante este periodo fueron 675. Durante el ingreso, se realizó una visita de selección donde se registraron los criterios de inclusión/exclusión para participar en el estudio de intervención. A aquellos que cumplieron dichos criterios se les realizó una visita basal y se les aleatorizó en el grupo intervención (calcidiol trimestral 180000 UI a tomar en la visita de control cada tres meses y ejercicios diarios a realizar en casa por el paciente) o no intervención (placebo de calcidiol y educación sanitaria básica). La intervención se inició los tres meses de la fractura y se realizó de forma trimestral durante el primer año. A los 4 años, se realizó una nueva visita con un registro de mortalidad. RESULTADOS De los 675 pacientes con fractura de fémur registrados, 602 fueron fracturas osteoporóticas y de ellos 88 cumplieron criterios para participar en el estudio de intervención. Al año y a los 4 años, la supervivencia del grupo intervención con dosis altas de calcidiol y ejercicios, fue claramente superior y estadisticamente significativa p=0.00. La deambulación, la calidad de vida y estudio de la densidad mineral ósea y análisis corporal total, tras el año de intervención no mostraron diferencias significativas entre los grupos. Del conjunto de la muestra (602 pacientes) a los 4 años se consiguieron datos del 89% (535), de los cuales 53,3% sobrevivieron. La media de edad de los supervivientes fue de 80 años y el 15% fueron hombres. CONCLUSIÓN. Una intervención con dosis trimestrales de calcidiol 180000 UI y ejercicios diarios en domicilio durante un año, mejora la supervivencia al cabo del año y esta se mantiene al cabo de 4 años. Dicha intervención no tiene fectos sobre la deambulación, calidad de vida o densidad mineral ósea. / OBJETIVES To demonstrate the improvement in survival to the first year and 4 years after having suffered one osteoporotic femur fracture, in patients to whom a pharmacological intervention is realized by high doses of calcidiol and physical therapy during the first year. To evaluate the improvement in the deambulación, the bone mineral density, the total body analysis and the quality of life, at the end of the intervention. Parallel, to analyze the survival of all patients with one osteoporotic femur fracture who were admitted to our center during the period of study. MATERIAL AND METHODS The intervention study was a randomized prospective, single blind study with group control. The population to study were all patients admitted to the Hospital de la Santa Creu i Sant Pau (Barcelona) during the recruitment period (December 2004 to January 2007). The number of patients hospitalized for hip fracture during this period were 675. During admission, there was a screening visit where criteria of inclusion / exclusion were registered to participate in the intervention study. To those who met criteria underwent baseline visit and were randomized in the intervention group (calcidiol quarterly 180000 UI to taking in the visit of control every three months and daily exercises to do at home by the patient) or not intervention (placebo o calcidiol and basic health education). The intervention began three months after the fracture and was conducted on a quarterly basis during the first year. At 4 years, there was a return visit with a record of mortality. RESULTS Of the 675 patients with hip fracture recorded, 602 were osteoporotic fractures and of which 88 met the criteria for participation in the intervention study. After one and 4 years, survival in the intervention group with high doses of calcidiol and exercise, was significantly higher and statistically significant p=0.00. Deambulation, quality of life and study of bone mineral density and total body analysis after the intervention year did not differ between groups. The whole sample (602 patients) at 4 years data were obtained from 89% (535), of which 53.3% survived. CONCLUSION An intervention dose calcidiol 180000 UI quarterly and daily exercises at home for one year, improves survival to the end of the first year, and this is maintained after 4 years. Such intervention doesn´t indicate an effect on deambulation, quality of life or bone mineral density.

This study investigated two hypotheses. First, that chronic cocaine treatment would mimic the changes in breathing that are associated with ventilatory acclimatisation to chronic hypoxia (VAH). Second, that pre-treatment with a hypoxic stressor would bring about cross-sensitisation to cocaine. To address the first hypothesis, rats were exposed to either chronically hypoxic or chronically normoxic conditions and treated with either cocaine or saline for a 14 day period. Following this period, acute breathing trials were performed to measure resting ventilation and ventilatory chemoreflexes. The results demonstrated that chronic cocaine treatment did not induce the changes in breathing associated with VAH. To address the second hypothesis rats were exposed to a hypoxic stressor for 10 days (either intermittent hypoxia or chronic hypoxia) after which cocaine sensitisation was measured via locomotor sensitisation trials. The results demonstrated that cross-sensitisation between a hypoxic stress and cocaine was observed for intermittent but not chronic hypoxia.

La capacitat d’ingesta o sacietat i el seu control neuroendocrí són variables d'interès en la recerca en obesitat. No obstant això, el patró or actual per avaluar la sacietat mesura l'energia ingerida durant un bufet lliure. Això és car i difícil d'estandarditzar entre diferents laboratoris. Recentment, s'ha proposat mesurar la ingesta ad libitum amb una beguda nutritiva com a mètode més barat i senzill. Ambdos mètodes no han estat mai comparats. Així, el primer estudi d’aquesta tesi té com a objectiu comparar la capacitat d’ingesta i la resposta neuroendocrina postprandial, durant un bufet de menjar i amb una beguda nutritiva. Per provar això, es va demanar a voluntaris sans que fessin ambdues proves en dos dies diferents. Els resultats mostren una bona correlació de totes les variables mesurades per les dues proves i similars respostes neurohormonals postprandials. Per tant, les nostres dades donen suport a la utilització de la prova beguda en l’estudi de la fisiologia de la sacietat en humans. La sacietat és induïda quan els nutrients arriben l'intestí prim estimulant la secreció de diverses citoquines i pèptids que regulen la ingesta d'aliments, coneguts com factors de sacietat, a través de mecanismes neurohormonals. Dades prèvies del nostre grup suggerien que una arribada precoç de nutrients a l'intestí prim podia adelantar l’estat de sacietat a través de l’avançada secreció de factors de sacietat entèrics. Així, el segon estudi d’aquesta tesi tenia com a objectiu provar aquesta hipòtesi mitjançant l’acceleració farmacològica del buidament gàstric de nutrients a l'intestí prim. Usant la prova prèviament validada de la beguda nutritiva, hem demostrat que un augment en la velocitat de buidament gàstric indueix sacietat de forma precoç i, d'altra banda, una disminució significativa en la quantitat de calories ingerides. Això obre un nou i interessant camp d'estudi sobre la regulació de la ingesta i teràpies contra l'obesitat / Acute energy intake/satiation is an outcome of interest in obesity trials as it is its neuro-endocrine control. However, the gold standard to assess satiation measures energy intake during an ad libitum buffet-meal, which is expensive and difficult to standardize across laboratories. Recently, a nutrient drink test has been proposed as a more standardized, cheaper and easier method for measuring ad libitum energy intake. However, the latter has never been compared with the gold standard. Thus, in the first study of this thesis we aimed to compare energy intake and the neuro-endocrine postprandial response, during a free-buffet meal and the new nutrient-drink test. To test this we asked healthy volunteers to undergo both test on two different days. The results show a good correlation of all variables measured by the two tests and similar postprandial neuro-hormonal satiation responses. Hence, our data support the potential of the use of a simple nutrient drink test to study satiation/obesity physiology in humans. Satiation is induced when nutrients arrive to the small intestine stimulating secretion of several cytokines and peptides that regulate food intake, known as satiation factors, through neuro-hormonal mechanisms. Previous data from our group suggested us that a precocious arrival of nutrients to the small intestine might induce an earlier satiation state through precocious secretion of enteric satiation factors. Thus, in the second study of this thesis we aimed to prove this by pharmacologically accelerating gastric dumping of nutrients to the small bowel. Using the previously validated nutrient drink test we have demonstrated that an increase in gastric emptying rate induced satiation earlier and, moreover, a significant decrease in the amount of calories ingested. This opens up a new and interesting field of study on food intake regulation and obesity therapies.

La osteoporosis es una patología caracterizada por la pérdida progresiva de masa ósea debido a un desequilibrio en el remodelado óseo que provoca que las trabéculas sean más finas, estén menos conectadas y se originen microfracturas, y a largo o corto plazo, puedan provocar una fractura del hueso (González, 2004). Los flavonoides son compuestos fenólicos muy abundantes en la naturaleza con capacidad antioxidante. Algunos de ellos poseen una estructura química muy similar a los estrógenos, y son capaces de unirse a sus receptores, activándolos, por lo que pueden ejercer una función análoga (Milligan, 2000; Schaefer, 2003). Por este y otros motivos, se está considerando su inclusión como suplemento alimentario. El objetivo de nuestro estudio ha sido analizar el efecto de los flavonoides contenidos en el extracto de Humulus Lupulus L. sobre un modelo de osteoporosis secundaria a ovariectomía en ratas Sprague-Dawley a través de diferentes estudios: del peso de los animales, bioquímico general y de la fosfatasa alcalina ósea, estudio de la distribución de la masa ósea y cuantificación de la densidad mineral mediante microtomografía computerizada, estudio anatomo-patológico del grosor de las trabéculas óseas y del espesor del epitelio luminal del endometrio uterino a través del microscopio óptico, y por último, el estudio ionómico de los componentes químicos del hueso mediante espectrofotometría. Para ello, utilizamos 40 ratas Sprague-Dawley distribuidas en cuatro grupos (n=10): I: Control; II: Control ovariectomía; III: Ovariectomía + EHL D1 (0,032 g/kg) y IV: Ovariectomía + EHL D2 (0,32 g/kg). La ovariectomía realizada a los grupos II, III y IV fue bilateral y tras cuatro meses de tratamiento, los animales fueron sacrificados para extraer los huesos fémur y tibia y los úteros para su posterior análisis. Durante el experimento se pesó a los animales periódicamente y se les extrajo sangre para realizar el estudio bioquímico en tres tiempos: antes de ser tratadas, dos meses después de la intervención y al sacrificio. Al final del estudio los animales tratados presentaron un retraso del aumento de peso comparado con el grupo intervenido sin tratar. En el estudio bioquímico, los niveles séricos de calcio y fósforo se mantuvieron estables en todos los grupos experimentales y los niveles de fosfatasa alcalina total y ósea descendieron en todos los grupos. Sin embargo, nuestros resultados más relevantes fueron observados a nivel óseo. Así, tanto el grosor como el volumen de las trabéculas de los huesos de los animales tratados con EHL fueron mayores que en los animales ovariectomizados no tratados (constatado mediante histomorfometría y microtomografía computerizada). Estos animales, además, sufrieron menor pérdida de los minerales que conforman la matriz ósea que los controles operados, como confirmó el estudio ionómico. Al estudiar el epitelio endometrial uterino, observamos que el de los animales tratados con EHL mostraba proliferación y presencia de glándulas similar a la normalidad (control no operado), mientras que en los animales operados no tratados, dicho epitelio presentaba signos claros de atrofia. Por todo ello, concluimos que la ingesta de EHL ha sido efectiva en el tratamiento de la osteoporosis provocada por deprivación hormonal en nuestro estudio, siendo necesario profundizar más en el conocimiento de este agente en futuros estudios que permitan clarificar su mecanismo de acción y seguir avanzando en su posible uso en clínica humana. / Osteoporosis is a disease characterized by progressive mass bone loss due to an imbalance on bone remodeling that causes the trabeculae to be thinner, less connected and microfractures to be generated which, in short or longer term, will inflict a bone fracture (González, 2004). Flavonoids are phenolic compounds very abundant in nature with antioxidant capacity. The inclusion of flavonoids in the intake as a food supplement is being considered. Some flavonoids have a chemical structure very similar to estrogens, and they are able to bind to their receptors, activating them, so they can play an analogous role (Milligan, 2000; Schaefer, 2003). At the end of our study, treated animals showed delayed weight gain compared to untreated intervention group. In the biochemical study, serum levels of calcium and phosphorus remained stable in all experimental groups and total alkaline phosphatase levels and bone decreased in all groups. The purpose of our study was to analyze the effect of the flavonoid content in the Humulus Lupulus L. (EHL) extract on a model of osteoporosis secondary to ovariectomy in Sprague-Dawley rats through different studies: weight of the animals, general biochemistry and bone alkaline phosphatase studies, study of the bone mass distribution and quantification of the mineral density via computerized microtomography, anatomopathologic study of the thickness of the bone trabeculae and the luminal epithelium thickness in the uterine endometrium through the optic microscope and, finally, the ion measurement study of the chemical compounds of the bone via spectrophotometry. To do this, we used 40 Sprague-Dawley rats, distributed in four groups (n=10): I: Control; II: ovariectomy control; III: ovariectomy + EHL D1 (0,032 g/kg) y IV: ovariectomy + EHL D2 (0,32 g/kg). The ovariectomy done to groups II, III y IV was bilateral and after four months being treated they were sacrificed to extract each animal´s femur, tibia and uterus for subsequent analysis. During the experiment the animals were weighed periodically and blood was extracted for biochemical analysis on three occasions: before treatment, two months after the intervention and at the time of sacrifice. The most relevant results in our study were observed at the bone level. Therefore, both trabeculae thickness and volume in the bones of the animals treated with EHL were higher than in the ovariectomized untreated animals (determined via histomorphometry and microtomography). These animals, besides, suffered from a lower loss of the minerals compounding the bone matrix than the surgically operated control ones, confirmed by the ion measurement study. By studying the endometrial uterine epithelium, we realized that the one in the animals treated with EHL showed proliferation and presence of glands similar to the normal one (non-operated control), while in untreated operated animals, this epithelium showed clear signs of atrophy. Therefore, we conclude that the intake of EHL was effective in the treatment of osteoporosis caused by hormonal deprivation in our study, being necessary to go deeper into the knowledge of this agent in future studies which clarify its mechanism of action and further progress in its use in clinical practice.