Resumo: A fêmea da espécie eqüina é considerada monovulatória sazonal, o que é "ator limitante a produção de embriões ao longo do ano. Esta limitação poderia inimizada se houvesse uma resposta superovulatória eficiente em melhorar a ção de embriões. Protocolos mais recentes desenvolvidos em nosso atório utilizando-se o Extrato de Pituitária Eqüina (EPE) têm permitido uma esposta superovulatória. Contudo o número de embriões recuperados ainda sido inferior ao das ovulações, em conseqüência de fatores ainda não inados. O presente estudo teve por objetivo: verificar se o tratamento com o - administrado duas vezes ao dia, altera a maturação nuclear e citoplasmática I ito, avaliar o ambiente folicular mensurando os níveis de 17(3-estradiol, E5~)tlerona, progesterona, inibina e óxido nítrico, bem como o perfil eletroforético eínas no fluido folicular entre éguas superovuladas e não superovuladas. amos também o transporte do oócito para o oviduto. Este trabalho foi o em quatro experimentos: Experimento I "Estudo do transporte dos oócitos oviduto de éguas superovuladas com extrato de pituitária eqüina"; ento II "Efeito da superovulação na recuperação de oócitos quando da ~-es foliculares guiadas por ultra-sonografia"; Experimento 111 "Avaliação do e folicular de éguas superovuladas"; Experimento IV "Avaliação da '"'ação oocitária de éguas superovuladas com extrato de pituitária equina". O ento I" foi desenvolvido na Universidade de Rio Cuarto (Argentina), foram _za.:las 22 éguas de 3 - 12 anos, (09 éguas controles; 13 éguas tratadas _ . Estes animais foram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The equine female is considered a seasonal mono-ovulatory specie, which is a restrictive factor in respect to embryo production throughout the year. This limitation could be minimized if an efficient superovulatory response and consequent improvement of embryo production were possible. More recent protocols developed in our lab using EPE (equine pituitary extract) have allowed a good superovulatory response. However, the number of embryos recovered has been inferior to the number of ovulations detected due to unknown factors. The present study has the following objectives: Verify if the EPE treatment administered twice daily would alter the oocyte cytoplasmic and nuclear maturation; and to evaluate the follicular environment by measuring estradiol 17-, testosterone, progesterone, inhibin and nitric oxide. The electrophoresis pattern of proteins in follicular fluid from superovulated and non- superovulated mares was determined. In addition, the oocyte transport through the oviduct was investigated. The present study was divided into four experiments. Experiment I: Study of oocyte transport to the oviduct in superovulated mares using equine pituitary extract. Experiment II: Effect of superovulation on oocyte recovery using transvaginal ultrasound guided follicular aspiration. Experiment III: Evaluation of follicular environment in superovulated mares. Experiment IV: Oocyte maturation in superovulated in mares using equine pituitary extract. Experiment I was performed at Rio Cuarto University, Argentina. In the related study, 22 mares aging from 3 to 12 years were used (9 control mares, 13 EPE treated mares). These mares were monitored daily by ultrasound until the presence of a follicle ≥ 30mm in diameter, being then examined twice daily. The superovulation protocol used consisted in 25mg of EPE twice a day, intramuscularly, starting at day 7 post- ovulation... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Cezinande de Meira / Banca: Frederico Ozanam Papa / Banca: Rubens Pais de Arruda / Banca: Carlos Antonio de carvalho Fernandes / Doutor

Orientadora: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Flávio Vieira Meirelles / Resumo: Butirolactona I (Bl-I) pode ser utilizada em sistemas PIV de embriões para bloquear a meiose durante o transporte de oócitos obtidos de OPU. O objetivo deste estudo foi verificar a concentração de BL-I eficaz durante o transporte de oócito bovinos. Oócitos (n=4581) foram pré-maturados em criotubos contendo meio com 10 ou 100μM de Bl-I, acrescido ou não de HEPES (20mM), no período de 5 horas em estufa portátil Minitub e transferidos para incubadora com atmosfera e temperatura controlada, permanecendo por mais 19 horas. Em seguida foram maturados a 38,5ºC em atmosfera de 5% de CO2 durante 20 horas, fecundados e os zigotos cultivados. Foram avaliadas a maturação nuclear e a maturação citoplasmática após pré-MIV e MIV (24h.-controles e 20h.-tratados). A fertilização foi avaliada após 18 h. da inseminação. Os embriões foram analisados quanto ao seu desenvolvimento e qualidade. Os dados foram avaliados por ANOVA (p<o,o5). A maioria dos oócitos tratados permaneceu em GV e após MIV houve a reversão do bloqueio, mas a eficiência foi menor com 10 μM de Bl-I. A maturação citoplasmática foi beneficiada de acordo a distribuição das mitocôndrias, no entanto, quanto à distribuição dos grânulos corticais apenas o bloqueio realizado com 100 μM Bl-I permitiu uma maturação. A taxa de fecundação foi prejudicada pelo tempo de transporte, mesmo nos oócitos tratados. A ocorrência de polispermia foi correlacionada à porcentagem de oócitos com grânulos corticais imaturos. O desenvolvimento embrionário sofreu um atraso pela utilização de 100μM de Bl-I, porém boa porcentagem de blastocistos de qualidade foi atingida. Assim, o bloqueio com 100μM de Bl-I possui efeitos benéficos na PIV de embriões de oócitos transportados por longo tempo. / Abstract: Butirolactone-I (Bl-I), can be used in systems for in vitro production (IVP) of embryos to block meiosis during the transport of oocytes from OPU. The objective of this study is to assess the concentration of BL-I more efficient during the transport of bovine oocytes. Oocytes (n = 4581) were prematured in criotubes containing medium with 10 or 100 μM of Bl-I with or without HEPES (20mM) in a portable incubator at 38,5°C without CO2 equilibration in the first 5 h, being later transferred to a incubator at 38.5°C and 5% CO2 in humidified air during the 19 hours remaining. Following were matured, fertilized and the zygotes cultured at 38.5°C and 5% CO2. Were evaluated the nuclear maturation and the cytoplasmic maturation after pre-IVM and after IVM (24h. controls and 20 h. treatments). Fertilization was assessed 18 hours after insemination. The embryos development and quality were analyzed. The data were evaluated by ANOVA (P< 0, 05). Most remained in GV oocytes treated and after IVM was the reversal of the blockage, but the efficiency was lower with 10 μM of Bl-I. The cytoplasmic maturation during the time of meiosis blockage was benefited from the distribution agreement and potential of mitochondria, however, about the distribution of cortical granules only blocking conducted with 100μM Bl-I had a complete maturation. The rate of fertilization was damage by the time of transport, and the meiosis blockage with Bl-I did not improve the percentage of fertilized oocytes. The occurrence of polispermia was correlated with the percentage of oocytes with immature cortical granules. The embryo developmentb was delayed by the use of 100μM of Bl-I, but a good percentage of blastocysts of good quality reached. So, the use of 100μM of Bl-I has beneficial effects on the IPV of embryos from oocytes transported at a long time. / Mestre

Made available in DSpace on 2015-04-17T14:49:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1652130 bytes, checksum: c211617d969984519d85dc26c1432c15 (MD5) Previous issue date: 2012-12-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Sun-dried beef is a largely consumed, appreciated product in Brazil. However, there are few scientific studies regarding its tenderness. Tenderness is a relevant issue because consumers usually refer to it as the main quality attribute for meat. Studies on sun-dried beef tenderness in samples sold in the market of João Pessoa, followed by the assessment of the natural maturation effects on the tenderness of laboratory processed sun-dried beef were carried out in order to learn and improve this product quality. The efficiency of both milk and whey as potential tenderizing agents for sun-dried beef was also tested. Therefore, an instrumental analysis, shear force (SF), sensory analysis (QDA), sarcomere length (SL), and collagen quantification were also used as indicators. The research on the meats sold in João Pessoa has identified large variations. City divided into regions (R1, R2 and R3) were called acquired samples A1, A2 and A3, respectively. Sun-dried beef from region 3 was considered very soft by tasters, achieving 6.7 points; the maximum SF was 2.70 kgf and the highest SL was 1.89 &#956;m. Furthermore, samples 1 and 2 showed almost equal values for tenderness (SF and QDA), except for SL, which have indicated sample 2 as the less tender. Concerning the laboratory processed meats, the raw materials were tested in maturation intervals of 7,14, and 21 days at 0°C before processing. According to the tested indicators, maturation has positively influenced tenderness in every sun-dried beef sample. QDA, SF, and myofibrillar fragmentation index (MFI) showed concordant data, suggesting that the sample matured for seven days was the softest. On the other hand, probably due to the small quantity of connective tissue in the meat cut used in processing, collagen quantification was not suitable as evaluation tool for assessing sun-dried beef tenderness. Immersing meat for 24 and 48 hours at 4 °C in milk and whey before processing helped testing both substances as potential tenderizer agents for sun-dried beef. It was verified that the applied treatments have failed to alter the processed meat composition, as it was also proved that dairy enzymes did not change the tenderness of these products. What probably occurs is the enhanced flavor generated by the use of milk in the meat processing, which provides greater acceptance by consumers. Thus, it is suggested that maturation as raw-material treatment for sun-dried beef processing provides tenderness, improves its quality and provides an increase in the added value of this typically Brazilian product. / A carne-de-sol é um produto de largo consumo e apreciação no Brasil, entretanto, são poucos os estudos científicos relativos à sua maciez. O interesse nesse assunto refere-se ao fato de que a maciez é o principal atributo de qualidade relativo às carnes referido pelo consumidor. Com o objetivo de conhecer e melhorar a qualidade desse produto pesquisou-se a maciez das carnes-de-sol comercializadas no comércio de João Pessoa e em seguida, verificou-se o efeito da maturação natural na maciez de carnes-de-sol processadas em laboratório. Também foi testada a eficácia do leite e do soro de leite como agentes amaciadores da carne-de-sol, sendo utilizados como indicadores a força de cisalhamento (FC), a análise sensorial através da análise descritiva quantitativa (ADQ), o comprimento do sarcômero (CS) e a quantificação do colágeno. Na pesquisa das carnes comercializadas em João Pessoa foram identificadas grandes variações. Da cidade dividida em regiões (R1, R2 e R3) foram adquiridas amostras denominadas A1, A2 e A3, respectivamente. A carne-de-sol da região 3 foi considerada muito macia pelos provadores, com pontuação de 6,7; apresentou FC máxima de 2,70 kgf e maior CS com 1,89 &#956;m. Paralelamente, as amostras 1 e 2 apresentaram valores de maciez muito próximos (FC e ADQ) exceto pelo CS que indicou a amostra 2 como menos macia. Quando as carnes-de-sol foram processadas em laboratório, testou-se 7, 14 e 21 dias de maturação a 0 ºC das matérias-primas previamente ao processamento. Segundo os indicadores testados, a maturação influenciou positivamente na maciez de todas as carnes-de-sol. Através da ADQ, da FC e do IFM verificou-se que a amostra maturada por sete dias foi a mais macia. Já a quantificação de colágeno não se apresentou como um eficaz instrumento avaliativo de maciez em carnes-de-sol provavelmente devido ao corte cárneo utilizado para o processamento conter baixas quantidades de tecido conjuntivo. No estudo do leite e do soro de leite como prováveis agentes amaciantes foram testados a imersão da carne por 24 e 48 horas a 4 °C previamente ao processamento em carne-de-sol. Foi verificado que os tratamentos aplicados não alteraram a composição das carnes processadas, assim como ficou constatado que as enzimas lácteas não modificaram a maciez dos produtos. O que provavelmente ocorre é o fato de que o leite atua como um agente melhorador do sabor da carne, o que é percebido e apreciado pelo consumidor. Diante do exposto, pode-se concluir que maturar a carne por sete dias previamente à elaboração da carne-de-sol ocasiona uma melhoria na qualidade do produto e assim, proporciona um incremento no valor agregado desse alimento tradicional brasileiro.

Este estudo foi realizado com o objetivo de: 1) determinar a influência da tensão de oxigênio na viabilidade das células do cumulus oriundas de oócitos caninos maturados em meio com alta concentração de glicose (11,0 mM); 2) determinar a taxa de maturação in vitro de oócitos caninos mantidos em meio contendo altas concentrações de glicose (11,0 mM), bem como avaliar o efeito da tensão de oxigênio sobre a taxa de maturação in vitro de oócitos caninos; 3) determinar a influência da adição de água de coco em pó (ACP-318®) ao meio de maturação com alta concentração de glicose (11,0 mM) na taxa de maturação in vitro de oócitos caninos. O meio de maturação usado nos experimentos foi TCM 199 suplementado com 26,19 mM de bicarbonato de sódio, 50 μg/ml de gentamicina, 0,20 mM de ácido pirúvico, 20 μg/ml de estradiol, 0,5 μg/ml de FSH e 0,03 UI/ml hCG. O meio de maturação era modificado de acordo com a proposta experimental apresentada. Os resultados do primeiro experimento mostraram diferença estatística nas taxas de apoptose nas células do cumulus entre os três grupos avaliados. Foi concluído que células do cumulus oriundas de COCs caninos cultivados em meio contendo altas concentrações de glicose apresentaram significativamente menos apoptose do que as cultivadas em meio com soro fetal bovino, e que a baixa tensão de oxigênio foi eficiente em reduzir a ocorrência de apoptose nas células do cumulus. No segundo experimento deste estudo, os índices mais elevados (p < 0,001) de oócitos degenerados foram obtidos, quando TCM 199 era suplementado com 10 % de FCS. Uma influência positiva sobre a retomada de meiose e aquisição de metáfase I (MI) foi observada quando os oócitos caninos foram maturados em meio livre de soro e com altas concentrações de glicose. Foi concluído que a adição de FCS ao meio de maturação de oócitos caninos resulta em altas taxas de degeneração dos oócitos e que a redução da tensão de oxigênio não resultou em melhora da taxa de maturação nuclear dos oócitos caninos. Os resultados obtidos no terceiro experimento mostraram que nos grupos experimentais cujo meio foi suplementado com ACP-318®, houve melhora significativa (p < 0,05) na taxa de maturação nuclear dos oócitos caninos. Oócitos maturados em meio suplementado com 5% de ACP-318® mostraram-se menos susceptíveis a alterações na configuração típica da cromatina que os maturados com 10% de ACP-318® no meio de maturação. Os resultados sugerem que tanto a integridade da morfologia nuclear, como a progressão da meiose dos oócitos caninos são positivamente influenciadas quando estes são expostos ao TCM 199 com alta concentração de glicose e suplementado com 5% de ACP-318®. / This study was designed: 1) determine the influence of oxygen tension on cumulus cell (CC) viability from canine oocytes in vitro matured in high glucose medium (11.0 mM); 2) determine the influence of two oxygen tensions on the nuclear maturation of canine oocytes in vitro matured in high glucose medium (11.0 mM); 3) determine the influence of powdered coconut water (ACP-318®) diluted in high glucose (11.0 mM) TCM199 in the achievement of nuclear in vitro maturation (IVM) of canine oocytes. Basic medium used in the experiments was TCM 199 suplemented with 26.19 mM sodium bicarbonate, 50 μg/ml gentamicin, 0.20 mM piruvic acid, 20 μg/ml oestradiol, 0.5 μg/ml FSH and 0.03 IU/ml hCG. Maturation medium was modified following the beyond described experimental proposals. The results of the first experiment showed that there was statistical difference in the rate of CCs apoptosis among the three groups. It was concluded that CCs of canine COCs cultured in high-glucose medium showed significantly less apoptosis than those cultured in medium with FCS. Low O2 tension was efficient in reducing apoptosis in canine CCs. In the second experiment of this study, the highest rates (p < 0.001) of degenerated oocytes were achieved when TCM 199 was added with 10% FCS. A positive influence on the meiosis resumption and on the MI acquisition rate was observed when canine oocytes were matured in defined high-glucose medium. It was concluded that the addition of FCS in the maturation medium of canine oocytes result in a high level of degenerated oocytes, and that the low level of oxygen tension did not improve the nuclear maturation of canine oocytes. The results achieved on the third experiment showed that in the experimental groups with the medium supplemented with ACP-318® (groups 2 and 3) enhanced the rates of oocytes’ nuclear maturation (p < 0.05). Ooocytes matured in medium added with 5% powdered coconut water (ACP-318®) were less prone to deviation of typical chromatin configuration than those matured in medium added with 10% ACP-318®. The results suggest that oocytes’ nuclear morphology integrity and meiosis achievement were positively influenced when exposed to high glucose TCM199 supplemented with 5% powdered coconut water.

O presente trabalho estuda as alternativas de financiamento do processo de criação de valor de uma empresa, com ênfase na opção de capital de risco (venture capital). O estudo está dividido em três capítulos. O primeiro apresenta, com base nas teorias de finanças, o processo de tomada de decisão de financiamento, podendo este ser via capital próprio ou dívida, sendo apresentadas as principais opções destas duas modalidades gerais. O segundo capítulo aborda a evolução histórica, a forma de funcionamento e os principais mercados da indústria de capital de risco no mundo. O terceiro capítulo efetua análise de dados para um período de 15 anos de uma gestora privada, onde se avaliou, para uma amostra de 24 empresas de diversos setores, qual é a curva de maturação dos investimentos da gestora. Verificou-se que, principalmente para as pequenas e médias empresas, o processo de financiamento é um elemento de grande dificuldade na construção e crescimento das suas operações, com prazos mais longos de maturação. Ou seja, como principal resultado, o estudo dos dados dos investimentos realizados pela empresa gestora privada no Brasil sugere que o processo de criação de valor destas empresas demanda um tempo adicional ao que tradicionalmente se espera. Diante do crescimento da indústria de capital de risco no mundo, esta modalidade de financiamento pode apresentar maior disseminação e escolha por esta alternativa pelas pequenas e médias empresas, tendo em consideração a questão da curva de maturação mais dilatada. / The present research studies the financing alternatives of the process of creating value to a company, with emphasis on the option of venture capital. The study is divided into three chapters. The first presents, based on the theories of finance, the process of financing decision making, and it may be via equity or debt, presenting the main options of these two general procedures. The second chapter discusses the historical evolution, the form of operation and the main markets of the risk capital industry in the world. The third chapter performs data analysis for a period of 15 years of a private holding company, which evaluated, for a sample of 24 companies in various sectors, what is the maturation curve of the investments of the managing body. It was found that, especially for small and medium sized enterprises, the funding process is a key element of great difficulty in construction and growth of its operations, with longer deadlines of maturation. In other words, as main results, the study of the data of the investments made by the private company in Brazil suggests that the process of creation of value of these companies demand an additional time to which is traditionally expected. Before the growth of the venture capital industry in the world, this modality of financing may present greater dissemination and choice for this alternative by small and medium enterprises, taking into account the issue of maturation curve more dilated.

L'étude de la maturation cérébrale a pour objectif une meilleure compréhension du développement du cerveau durant la grossesse et la mise en évidence des liens entre la modification des structures cérébrales et le développement cognitif. Cette étude est rendue particulièrement difficile par l'évolution constante que connaissent ces structures au cours de cette période, évolution due notamment à la croissance et à l'organisation des tissus cérébraux. La technique de visualisation privilégiée pour observer le cerveau est l'imagerie par résonance magnétique (IRM), méthode non invasive permettant l'acquisition d'images des structures cérébrales in vivo et en trois dimensions à une résolution relativement élevée. Cependant, les différences anatomiques et l'évolution rapide des structures cérébrales chez le fœtus nécessitent une nouvelle modélisation du cerveau. Le travail de cette thèse est composé de deux parties. Tout d'abord, nous avons modifié l'algorithme FCM (Fuzzy C-Means) de manière à permettre une meilleure prise en compte du bruit et du biais de l'image grâce à la méthode des moyennes non-locales issue du débruitage d'image. Ces travaux ont fait l'objet d'une validation à partir de bases d'images synthétiques et réelles. Enfin, nous nous sommes penchés sur la problématique de la segmentation des tissus cérébraux en IRM fœtale, et nous avons introduit un modèle comportant des contraintes topologiques de manière à permettre une segmentation séquentielle des tissus, en se fondant sur la position relative des différentes structures. Ces travaux ont fait l'objet d'une validation à partir de cas réels. / The study of cerebral maturation aims at a better understanding of the brain's development during the pregnancy and the high lightment of the links between the change in cerebral structures and the cognitive development. This study is particularly difficult because of the constant evolution of these structures during the pregnancy. This evolution is due to the growing and the organisation of the different cerebral tissues. The preferred visualisation technique used to observe the brain is the magnetic resonance imaging (MRI), which is a non invasive acquisition technique of in vivo 3D cerebral images with a relative high resolution. Nevertheless, significant anatomical differences and the fast evolution of the fetal cerebral structures require a new modelisation of the brain. This thesis is divided in two parts. First, we modified the Fuzzy C-Means (FCM) algorithm in order to allow a better consideration of images noise and intensity bias thanks to the non-local means method, originaly elaborated for denoising purposes. These work were validated with databases of simulated and real images. Finally, we focused on the segmentation of cerebral tissues in fetal MRI by introducing topological constraints in order to obtain a sequential segmentation, based on relative positions of the tissus. These work were validated with real cases.

The aim of the present work, based on two experiments, was to evaluate the impact of photostimulation as a prevention for delaying the sexual maturation of brook trout (Salvenilus fontinalis). Another additional experiment was to describe which effect has photostimulation on the consequences of aggressive behaviour of males. Two experimental groups were established and differed in illumination sources: the metal halide lamps (HAL) and the light emitting diodes (LED). The photostimulation timing (photoperiod) was tested in following experiment. In both tested groups (HAL and LED) the photoperiod was prolonged to 18L:6D in comparison to the control group with natural photoperiod. The results shows that before spawning females and males in both tested groups (HAL and LED) reached significantly higher body weight up to 100 g (=0.05) due to desirable delayed sexual maturation (up to one month). By obtaining the same results in both groups, clearly profitable source of illumination was LED and the time for sufficient application before spawning was 67 days. Moreover photostimulation had also positively reflected in the elimination of aggressive behaviour of males. The results of the present study suggest that photostimulation may be applicable in the intensive culture systems of salmonids in the Czech Republic.

The aim of presented work was a study of the effect of temperature on the development of mature oocytes of sterlet during prespawn period. At the turn of 2013 and 2014 was conducted our experiment with females of sterlet. Experimental fish were divided into two main groups. The first group was exposed to the heated water and a second group was kept in natural water temperature. Four biopsies were carried out during attempt. The samples were measured, and then was calculated oocyte polarization index (PI). For more accurate results processing fish were divided into two subgroups within both groups. 1st subgroups had at first biopsy PI 12.5 % and 2 subgroups PI> 12.5 %. In less mature females the effect of temperature was statistically significant (p < 0.05) while in more mature females the opposite was true (p > 0.05). From a total assessment follows that the temperature had no significant importance for the rate of oocytes maturation (p > 0.05). Experimental results indicate that the heating method can be used to accelerate the maturation especially in less mature fish and for synchronization spawning.

Dentre os principais desafios que persistem no campo da biologia da reprodução está a compreensão da natureza dos processos celulares e moleculares que determinam a qualidade dos oócitos. Um dos fenômenos a serem melhor compreendidos é a aquisição da competência do oócito, e qual o papel desempenhado pelo ambiente folicular que circunda o gameta no seu potencial de desenvolvimento. As células foliculares, especialmente as células do cumulus, certamente desempenham um papel fundamental na aquisição da competência de oócitos in vivo. Durante a maturação in vitro (MIV) do oócito observa-se expansão e mucificação das células da granulosa que formam o complexo cumulus oophorus-oócito (CCO), em função da intensa síntese de componentes da matriz extracelular. Essas modificações no aspecto do cumulus são utilizadas como indicativo da ocorrência de maturação oocitária e contribuem para que ocorra a fecundação. A expressão de proteínas associadas à matriz extracelular das células do cumulus pode estar sob influência de fatores de origem oocitária, e também pode estar relacionada à composição do meio de MIV. Os objetivos deste trabalho foram: 1) avaliar a expressão dos transcritos dos genes que codificam para as proteínas ácido hialurônico sintase 2 (HAS2), link protein 1 (HAPLN1), conexina 43 (GJA1) e b-actina (ACTB) em complexos cumuli-oócitos (CCOs) bovinos não maturados, e submetidos à maturação in vitro em meios com diferentes suplementações protéicas; e 2) avaliar as taxas de maturação nuclear dos oócitos submetidos às diferentes condições de MIV. Os CCOs foram obtidos a partir de ovários coletados de fêmeas bovinas logo após o abate, selecionados morfologicamente e distribuídos em três grupos experimentais: G1: CCOs não maturados; G2: CCOs submetidos à MIV em meio TCM suplementado com soro fetal bovino (SFB); G3: CCOs submetidos à MIV em meio TCM suplementado com albumina sérica bovina (BSA). A MIV foi realizada em a 39oC, 5% de CO2 e máxima umidade relativa, por 22 a 24 horas. Para a extração do RNA total das amostras de CCOs foi utilizado o reagente TRIzol®. O RNA total foi submetido à captação específica do mRNA através de separação magnética (Dynabeads® mRNATM DIRECT Micro Kit). Os mRNAs foram transcritos reversamente em cDNA utilizando-se a técnica de RT-PCR, para avaliar os padrões de expressão dos transcritos. Parte dos oócitos dos grupos G2 e G3 foi desnudada das células do cumulus, e submetida à coloração com Hoechst 33342, para avaliação da maturação nuclear. A análise dos resultados de abundância relativa dos mRNAs de interesse mostrou diferença significativa entre os diferentes grupos testados para os transcritos de HAS2 (p=0,000), link protein 1 (p=0,001), conexina 43 (p=0,007) e b-actina (p=0,011), sendo maior nos grupos de CCOs submetidos à MIV em meio suplementado com SFB. A avaliação da morfologia nuclear não mostrou diferenças significativas entre as taxas de maturação nos grupos G2 e G3. Pode-se concluir que a exposição de CCOs bovinos à diferentes condições de MIV influenciou a expressão dos transcritos de HAS2, link protein 1, conexina 43 e b-actina. Entretanto, a MIV em presença de SFB ou BSA não mostrou diferença nas taxas de retomada da meiose e de maturação nuclear. / Understanding the cellular and molecular processes that determine the oocytes quality is one of the main challenges that persist in biology of reproduction. The acquisition of oocyte competence, and the role played by the follicular environment surrounding the gamete in its development potential are phenomena to be better understood. Follicular cells, especially the cumulus cells, certainly play a role in the oocyte competence acquisition in vivo. During in vitro maturation (IVM) of oocytes was observed expansion and mucification of granulosa cells forming the cumulus-oocyte complex (COC), due to the intense synthesis of extracellular matrix components. These changes in the appearance of cumulus are used as indicative of the oocyte maturation occurrence and contribute to fertilization to occur. The expression of proteins associated with the extracellular matrix of cumulus cells may be under the influence of oocyte origin, and may also be related to the composition of the IVM medium. The aim of this work were 1) to evaluate the expression of gene transcripts coding for proteins hyaluronic acid synthase 2 (HAS2), link protein 1 (HAPLN1), connexin 43 (GJA1) and actin-b (ACTB) in bovine cumulus-oocyte complexes (COCs) not matured or submitted to IVM in media with different proteic supplements, and 2) assess the rates of nuclear maturation of oocytes subjected to different conditions of IVM. The COCs were obtained from ovaries collected from cows immediately after slaughter, morphologically selected and divided into three groups: G1: not matured COCs; G2: COCs submitted to IVM in TCM supplemented with fetal calf serum (FCS); and G3: COCs submitted to IVM in TCM supplemented with bovine serum albumin (BSA). IVM was performed at 39°C in 5% CO2 and maximum relative humidity for 22 to 24 hours. For extraction of total RNA of COCs samples, TRIzol® reagent was used. Total RNA was subjected to capture of specific mRNA by magnetic separation (Dynabeads® mRNATM DIRECT Micro Kit). The mRNAs were reverse-transcribed into cDNA using the RT-PCR to evaluate the expression patterns of transcripts. Some of the oocytes from G2 and G3 was stripped of cumulus cells, and subjected to staining with Hoechst 33342 to assess nuclear maturation. The analysis of relative abundance of interest mRNAs showed a significant difference between the different groups tested for transcripts of HAS2 (p = 0.000), link protein 1 (p = 0.001), connexin 43 (p = 0.007) and actin-b (p = 0.011), being higher in the groups of COCs submitted to IVM in medium supplemented with FCS. The evaluation of nuclear morphology showed no significant differences between maturation rates of G2 and G3. In conclusion, the IVM in media supplemented with FCS or BSA showed differeces in HAS2, link protein 1, connexin 43 and actin-b transcripts expression of bovine COCs. However, the nuclear maturation rates of oocytes subjected to IVM in media with different proteic supplements was not affected.

A maturação biológica tem demonstrado efeito positivo sobre os valores absolutos de consumo máximo de oxigênio (VO2max), limiares ventilatórios (LV1 e LV2) e torque muscular (TM) durante o crescimento, mas não está totalmente elucidado se este efeito é resultado apenas do aumento do tamanho corporal, da metodologia de normalização ou da melhora de fatores qualitativos do sistema cardiorrespiratório e muscular. Assim, conduzimos dois estudos com o objetivo de verificar o efeito da maturação biológica sobre: (1°) VO2max, LV2 e LV1; (2º) TM e arquitetura muscular. No primeiro estudo, 79 jogadores de futebol classificados em três grupos de acordo com seu estágio maturacional, pré-púberes (PREP, n=14), púberes (PUB, n=38) e pós-púberes (POSP, n=27) realizaram um teste progressivo máximo em esteira para determinarmos o VO2max, LV2 e LV1. Os resultados demonstraram que o volume muscular estimado total (VMT) foi considerado a melhor variável de normalização e evidenciou que os valores de VO2max ml.ml-0,43.min-1 foram significativamente maiores nos grupos POSP (112,9±9,9) e PUB (107,4±9,5) em relação ao grupo PREP (100,0±7,8), com a maturação biológica apresentando efeito positivo de 18%. O LV2 (ml.ml-0,48.min-1) apresentou diferença significativa apenas entre os grupos POSP (57,3±5,7) e PREP (51,7±5,3), mas a maturação biológica não apresentou efeito significativo sobre essa variável. O LV1 (ml.ml-0,43.min-1) não apresentou diferenças significativas entre os grupos, mas a maturação biológica apresentou efeito positivo de 5,7%. No segundo estudo, 34 jogadores de futebol classificados em dois grupos de acordo com seu estágio maturacional, PUB (n=15) e POSP (n= 19) realizaram uma dinamometria isocinética para mensurarmos o TM máximo conjuntamente com uma ultrasonografia para determinarmos as variáveis de arquitetura muscular. Os resultados demonstraram que não existiam diferenças significativas (p>0,05) para o TM isométrico, concêntrico e excêntrico para as 18 contrações musculares testadas entre os grupos quando foram devidamente normalizados por expoentes alométricos específicos referentes à massa corporal (MC), além disso, a maturação biológica não demonstrou efeito consistente e independente das variáveis de arquitetura muscular. A espessura muscular (EM), comprimento do fascículo (CF), CF normalizado (CFn), ângulo de penação (AP) e a área de secção transversa (AST) não apresentaram difeferenças significativas entre os grupos (p>0,05), enquanto que, diferenças significativas foram estabelecidas para o comprimento da coxa e volume muscular estimado dos extensores do joelho (VM). As variáveis de arquitetura muscular demonstram ser variáveis explicativas do TM (10-36%). Os resultados dos dois estudos permitem concluir que a maturação biológica apresentou efeito positivo sobre o VO2max e LV1, mas não apresentou efeito consistente e independente das variáveis de aquitetura muscular para o TM isométrico, concêntrico e excêntrico quando os dados foram devidamente normalizados por expoentes alométricos referentes ao VMT no primeiro estudo e por expoentes alométricos específicos referente a MC no segundo estudo, demonstrando que a normalização é um fator chave para compreendermos os efeitos da maturação biológica sobre as variáveis mensuradas. / The biological maturation show a positive effect on the maximal oxygen uptake (VO2max) values, ventilatory threshold (VT1 and VT2) and muscle torque (T) during growth, however it is not completely elucidated if these effects happen only related the body size increased, the methodology standardization or the qualitative factors improvement of the cardiorespiratory and muscular system. Thus, we conducted two studies to determinate the biological maturation effect on: (1) VO2max, VT2 and VT1; (2) T and muscle architecture. Seventy-nine soccer players, placed in three groups according to their maturational stage, pre-pubescent (PREP, n=14), pubescent (PUB, n=38) and post-pubescent (POSP, n=27), participated in the first study. They performed a progressive maximal treadmill test to determine the VO2max, VT2 and VT1. The estimated total muscle volume (TMV) was considered the greater variable standardization, beside the VO2max ml.ml-0.43.min-1 values were significantly higher in groups POSP (112.9 ± 9. 9) and PUB (107.4 ± 9.5) comparing with PREP group (100.0 ± 7.8), even though the positive effect of 18% of the biological maturation. There was difference in VT2 (ml.ml-0.48.min-1) between POSP (57.3 ± 5.7) and PREP (51.7 ± 5.3) groups; however the biological maturation did not show significant effect on this variable. The VT1 (ml.ml-0.43.min-1) showed no significant differences between groups, but there was a positive effect of 5.7% in the biological maturation. In the second study, 34 soccer players were placed in two groups according to their pubertal stage, PUB (n=15) and POSP (n=19). An isokinetic dynamometry was performed to measure the maximum T and an ultrasound was used to determine the muscle architecture variables. No differences (p>0.05) were found in T isometric, concentric and eccentric contractions between the groups when these variables were properly normalized by specific allometric exponents related to body mass (BM). Additionally, biological maturation there was no consistent and independent effect of variables muscle architecture on T. The muscle thickness (MT), fascicle length (Lf), Lf normalized (Lfn), pennation angle (θp) and cross-sectional area (CSA) show no significant differences between the groups (p>0.05). Significant differences were established for the thigh muscle length and estimated knee extensors volume (MV) and muscle architecture variables were considered explanatory variables of T (10-36%). Both studies results showed that the biological maturity had a positive effect on VO2max and VT1, but there were no consistent and independent effect of the muscle architecture variables in isometric, concentric and eccentric T when these variables were properly normalized using allometric exponents related to TVM in the first study and using a specific allometric exponents related to BM in the second. These results demonstrate that the standardization is a key factor to understand the biological maturation effects on the measured variables.