Οι υπερίτες του αζώτου (nitrogen mustards) συνιστούν μία αποτελεσματική ομάδα φαρμάκων που χρησιμοποιούνται στη χημειοθεραπεία του καρκίνου. Πρόσφατα ευρήματα της ερευνητικής μας ομάδας έδειξαν ότι οι υπερίτες του αζώτου μελφαλάνη (MEL), χλωραμπουκίλη (CAB) και ο δραστικός της μεταβολίτης, το PHE, επιδεικνύουν ισχυρή θραυσματογόνο δράση, αλλά επιπρόσθετα, εμφανίζουν ανευπλοειδογόνο δράση, διαταράσσοντας το χρωμοσωματικό αποχωρισμό μέσω τροποποιήσεων της δομής και λειτουργίας της μιτωτικής συσκευής. Στην παρούσα διατριβή, διερευνήθηκε περαιτέρω ο μηχανισμός της ανευπλοειδογόνου δράσης των παραπάνω δραστικών ενώσεων και πραγματοποιήθηκε σύγκριση της γενετικής δράσης δύο νέων στεροειδών αναλόγων του PHE, τα ανάλογα ΕΑ-92 και ΕΑ-97 με αυτήν των MEL, CAB και PHE. Τα στεροειδή ανάλογα σχεδιάστηκαν με στόχο την αύξηση της εκλεκτικότητας της αντινεοπλασματικής δράσης. Η ικανότητα των MEL, CAB και PHE να προκαλούν φαινόμενα χρωμοσωματικής καθυστέρησης μελετήθηκε σε σύγκριση με τα στεροειδή ανάλογα ΕΑ-92 και ΕΑ-97. Η μελέτη πραγματοποιήθηκε σε ανθρώπινα λεμφοκύτταρα in vitro με τη μέθοδο αναστολής της κυτταροκίνησης (CBMN) σε συνδυασμό με τη μέθοδο FISH και τη χρήση πανκεντρομερικού ανιχνευτή. Επιβεβαιώθηκε η θραυσματογόνος και ανευπλοειδογόνος δράση των ενώσεων MEL, CAB και PHE, ενώ φάνηκε ότι τα στεροειδή ανάλογα ΕΑ-92 και ΕΑ-97 προκαλούν αποκλειστικά χρωμοσωματική θραύση. Το φαινόμενο της χρωμοσωματικής καθυστέρησης μελετήθηκε επίσης με τη μέθοδο CREST στην κυτταρική σειρά ποντικού C2C12. Με τη μέθοδο αυτή, επιβεβαιώθηκε η διπλή γενετική δράση των ενώσεων MEL, CAB και PHE. Τα στεροειδή ανάλογα ΕΑ-92 και ΕΑ-97 εμφανίστηκαν ως οι ηπιότεροι επαγωγείς ΜΝ και προκαλούν κυρίως χρωμοσωματική θραύση, ενώ ήπια ανευπλοειδογόνο δράση παρουσίασε μόνο το ανάλογο ΕΑ-92. Ακολούθως, εξετάσθηκε η ικανότητα των υπό εξέταση χημικών ενώσεων ΕΑ-92 και ΕΑ-97, να επηρεάζουν τη δομή και λειτουργία της μιτωτικής συσκευής σε σχέση με αυτήν των ενώσεων MEL, CAB, PHE, με διπλό ανοσοφθορισμό για τη β- και γ-τουμπουλίνη. Παρατηρήθηκε ότι όλες οι ενώσεις, εκτός από το στεροειδές ΕΑ-97 προκαλούν τη δημιουργία πολυπολικών μεταφάσεων, ενώ όλες οι ενώσεις επάγουν το σχηματισμό μεσοφασικών κυττάρων με ανώμαλο αριθμό κεντροσωμάτων. Όλες οι υπό εξέταση χημικές ενώσεις εμφανίζουν κυτταροτοξικότητα και καθυστέρηση του κυτταρικού κύκλου σε καλλιέργειες ανθρώπινων λεμφοκυττάρων και στα κύτταρα ποντικού C2C12. Στη συνέχεια διερευνήθηκε η ικανότητα των υπό εξέταση ενώσεων να επάγουν την απόπτωση και μελετήθηκε ο ρόλος της απόπτωσης στην εκδήλωση της γενετικής δράσης των ενώσεων MEL, CAB και PHE. Η μελέτη αυτή πραγματοποιήθηκε στα κύτταρα C2C12 με τη μέθοδο της διπλής χρώσης Αννεξίνης V/Ιωδιούχου προπιδίου και το διπλό ανοσοφθορισμό β- και γ-τουμπουλίνης, ανεξάρτητα, σε κύτταρα ποντικού C2C12, παρουσία του γενικού αναστολέα της δράσης των κασπασών, Z-VAD-FMK, αλλά και αναστολέων της δράσης συγκεκριμένων κασπασών. Όλες οι υπό εξέταση ενώσεις επάγουν χαμηλά ποσοστά απόπτωσης. Οι κασπάσες-3, -6 και -8 συμμετέχουν στην επαγόμενη από τη MEL απόπτωση αλλά δεν συμμετέχουν στην απομάκρυνση των κυττάρων με μικροπυρήνες που επάγονται από τη δράση της ίδιας ένωσης. Η απόπτωση αποτελεί μηχανισμό απομάκρυνσης των κυττάρων με μικροπυρήνες και κανονικό κεντροσωματικό αριθμό που επάγονται από τις ενώσεις MEL, CAB και PHE. Αντίθετα, τα κύτταρα με υπεράριθμα κεντροσώματα, που προκύπτουν από τη δράση των παραπάνω ενώσεων δεν απομακρύνονται μέσω απόπτωσης. Για την περαιτέρω διερεύνηση του μηχανισμού με τον οποίο οι δραστικές ενώσεις MEL και CAB εκφράζουν τις ανευπλοειδογόνες ιδιότητες τους, μελετήθηκε η επίδραση τους στην έκφραση των πρωτεϊνών Aurora-B, survivin, Aurora-A και γ-τουμπουλίνη σε κύτταρα ποντικού C2C12, με τη μέθοδο της ανοσοαποτύπωσης των πρωτεϊνών. Παράλληλα μελετήθηκε η ένωση ΕΑ-97, η οποία σύμφωνα με τα ευρήματα μας, εμφάνισε αποκλειστικά θραυσματογόνο δράση. Οι ενώσεις MEL και CAB, εκδηλώνουν τις ανευπλοειδογόνες ιδιότητες τους προκαλώντας μείωση της έκφρασης των πρωτεϊνών Aurora-B και survivin και επάγοντας την αύξηση της έκφρασης της πρωτεΐνης Aurora-A. Επιπρόσθετα, η ένωση MEL, προκαλεί αύξηση της έκφρασης της γ-τουμπουλίνης. Τα ευρήματα αυτά υποδεικνύουν τη συμμετοχή των παραπάνω πρωτεϊνών στην εκδήλωση της ανευπλοειδογόνου δράσης των ενώσεων που μελετήθηκαν. Αντίθετα το στεροειδές ανάλογο ΕΑ-97 που εμφανίζει αποκλειστικά θραυσματογόνο δράση, δεν μεταβάλλει την έκφραση των παραπάνω πρωτεϊνών. / Nitrogen mustards represent an effective class of drugs that are used in chemotherapy. Recent findings of our group have shown that nitrogen mustard analogues, melphalan (MEL), chlorambucil (CAB) and PHE, in addition to their clastogenic activity, they exert their aneugenic potential by affecting chromosome segregation due to modifications of mitotic apparatus. In the present study, we investigated the mechanism by which the above compounds display their aneugenicity in comparison with two new steroidal analogues of PHE, EA-92 and EA-97, which were designed aiming at most effective antineoplasmatic activity. The ability of MEL, CAB and PHE to induce chromosome delay events was studied in comparison with the steroidal analogues EA-92 and EA-97. The mechanism of micronucleation was determined by Cytokinesis Block Micronucleus assay (CBMN assay) in combination with Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) using pancentromeric DNA probe. It was confirmed that MEL, CAB and PHE generated MNi by two mechanisms, chromosome breakage and chromosome delay, while EA-92 and EA-97 induced the formation of MN originated exclusively from chromosome breakage events. The ability of the tested compounds to induce chromosome delay was also investigated in C2C12 mouse cells by CREST analysis. The dual genetic activity of MEL, CAB, and PHE was confirmed in a different biological system. The analogues EA-92 and EA-97 appeared as weaker MN inducers and they induced mainly chromosome breakage, while a weak aneugenic activity was observed for EA-92. The ability of the nitrogen mustard analogues to affect the organization of mitotic apparatus was investigated in comparison with MEL, CAB and PHE by double immunofluorescence of β- and γ-tubulin in C2C12 mouse cells. It was observed that all compounds, except EA-97, induced mutlipolar metaphases, and also generated interphase cells with abnormal centrosome number. All compounds displayed increased cytotoxicity and they caused cell cycle delay in human lymphocyte cultures and in C2C12 mouse cells. The ability of the tested compounds to induce apoptosis was studied by Annexin V/PI assay. It was revealed that all compounds induced apoptosis. The effect of apoptosis on the genetic activity of MEL, CAB and PHE was investigated by inhibition of apoptosis in the presence of the inhibitor Z-VAD-FMK and the use of specific inhibitors for caspase -3, -6, -8 and -1. For this reason Annexin V/PI assay and double immunofluorescence of β- and γ-tubulin were performed, independently in C2C12 mouse cells. Caspases -3, -6 and -8 are involved in melphalan-induced apoptosis, but they are not involved in the elimination of cells in the presence of melphalan. Apoptosis is the responsible mechanism for the exclusion of cells with MNi and normal centrosome number that are induced by MEL, CAB and PHE. On the contrary, cells exerting supernumerary centrosomes are not eliminated by apoptosis in the presence of the above compounds. To further elucidate the mechanisms by which MEL and CAB exert their aneugenic potential, we examined the ability of the compounds to alter the expression of proteins having important role in chromosome segregation, such as the proteins Aurora-B, survivin, Aurora-A and γ-tubulin. The analysis was performed by Western blot method in C2C12 mouse cells. We also studied the steroid analogue EA-97, which according to our findings acts as a pure clastogen and do not exert aneugenic potential as opposed to MEL and CAB. MEL and CAB exert their aneugenic potential by the reduction of Aurora-B and survivin expression and by enhancing the expression of Aurora-A. γ-tubulin was upregulated in the presence of MEL. These findings show the implication of these proteins in chromosome delay events induced by MEL and CAB. On the other hand, the analogue EA-97 did not affect the expression of the above proteins.

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O processo de tratamento da madeira utiliza substâncias que geram compostos perigosos que podem contaminar os compartimentos ambientais. O presente estudo avaliou uma área sob influência da contaminação de solo proveniente das atividades de uma usina de tratamento de madeira desativada. A presença e o efeito de compostos mutagênicos em amostras ambientais foram utilizados como marcadores de exposição associada à avaliação de marcadores genéticos de efeito precoce em humanos, com foco em crianças como grupo sensível. Uma área 1750 m distante da usina, fora do quadrante dispersão preferencial atmosférica e em oposição à drenagem do local, foi utilizada como local de referência para a coleta de amostras e comparação. Extratos orgânicos de água de abastecimento, poeira de sótão e material particulado atmosférico fino (PM2,5) foram avaliados para mutagenicidade por meio do ensaio Salmonella/microssoma. Cobre (Cu), cromo (Cr), arsênio (As) e pentaclorofenol (PCP) foram quantificados em amostras de poeira do sótão. Os 16 Hidrocarbonetos Policíclicos Aromáticos (HPAs) prioritários foram avaliados nos extratos de PM2,5 e poeira do sótão. Crianças residentes no entorno da usina e na área de referência foram avaliadas quanto à presença de micronúcleos em amostras de sangue e mucosa oral, e danos primários no DNA, pelo ensaio cometa em linfócitos de sangue periférico. De acordo com a análise de metais, as residências perto da entrada da usina foram as mais afetadas. PCP foi identificado em amostras de poeira de sótão (0,49 mg/kg) e a concentração total de HPAs nesta matriz variou 0,40-13,31 mg/g, com maior dispersão. Todas as amostras de poeira do sótão em que a concentração total de HPAs estava acima de 2μg/g apresentaram resposta positiva para a atividade mutagênica. A contribuição dos HPAs para a mutagênese na poeira de sótão representou 10%, indicando que outros compostos podem contribuir para o efeito mutagênico. A atividade mutagênica e a concentração de HPAs nas amostras de PM2,5foram, de maneira geral, mais elevadas na área de risco, embora em alguns períodos de amostragem a área de referência atingiu valores semelhantes ou mesmo superiores. O efeito mutagênico e as concentrações de HPAs observados nas amostras de PM2,5 foram semelhantes aos valores encontrados em estudos que avaliaram áreas urbanas e com influência industrial. Extratos orgânicos de água de abastecimento não apresentaram mutagenicidade. As frequências de MN em linfócitos de sangue periférico e de células binucleadas na mucosa oral foram significativamente maiores no grupo de risco. Nos demais biomarcadores avaliados não foram observadas diferenças significativas entre os grupos. O conjunto de resultados indica a necessidade de novas avaliações utilizando grupo de referência menos suscetível às influências da área contaminada. O conjunto de dados coletados neste estudo indica a necessidade de uma avaliação mais cuidadosa dos biomarcadores individualmente e de um grupo de referência menos suscetível a influências da área contaminada. Apesar da ausência de diferenças significativas entre os grupos de risco e de referência em biomarcadores de danos no DNA avaliados em crianças, os resultados observados nas amostras de poeira de sótão e PM2,5 sugerem que a população esteve ou ainda está potencialmente exposta a substâncias capazes de causar efeitos adversos à saúde humana. / The mutagenic activity and the concentration of PAHs in PM2.5 samples were generally higher in the risk area, although in some periods the reference area has reached similar or even higher values. The mutagenic effect and the concentrations of PAHs recorded in the PM2.5 samples were similar to those found in studies that assessed areas of intense urban occupation and industrial influence. Organic extracts from supply water showed no mutagenicity. The MN frequencies in peripheral blood lymphocytes and binucleated cells of the oral mucosa were significantly higher in the risk group. No significant differences between children from the reference and risk area were observed in others genetic biomarkers assessed. The result set indicates the need for further evaluations using reference group less susceptible to the influences of the contaminated area. The set of data collected in this study indicates the need for a more cautious assessment of biomarkers individually, and a reference group less susceptible to influences from the contaminated area is necessary. Despite the absence of significant differences between the risk and reference groups in biomarkers of DNA damage assessed in children, the results in attic and PM2.5 samples suggest that the population was or is still potentially exposed to substances with strong negatives effects on human health.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Sorbitol é um poliol encontrado em produtos para fins especiais, como diet e light, Dentro deste contexto, incluem-se as lactantes como grandes consumidoras, almejando o retorno mais rápido ao peso pré-gestacional. Devido à grande carência em dados referentes às consequências metabólicas do consumo excessivo destes tipos de produtos, o objetivo deste trabalho foi avaliar os possíveis efeitos da ingestão materna de sorbitol na lactação sobre os perfis nutricional, bioquímico e toxicológico nas proles amamentadas. O teste da Salmonella/microssoma foi utilizado, inicialmente, na avaliação mutagênica e citotóxica com linhagens de S. enterica sorovar Typhimurium (TA97, TA98, TA100, TA102, TA104 e TA1535). Verificamos a capacidade de reversão da mutação (I.M.) e sobrevivência (%), em diferentes concentrações (0,4; 4; 40; 400; 4000 e 5000 μg/placa). Os resultados foram considerados positivos para valores de I.M. ≥ 2,0. Ratas wistar lactantes (6 por grupo experimental), cada uma com 6 filhotes, receberam sorbitol (0,00015 mg/g/dia; 0,0015 mg/g/dia e 0,15 mg/g/dia), nos primeiros 14 dias da lactação. Neste período, avaliamos a biometria das mães e proles, consumo de ração e ingestão hídrica das mães. Após a lactação, as ratas mães foram ordenhadas, e, junto com as proles, sacrificadas por punção cardíaca, para coleta de sangue total. Os fígados das proles foram submetidos ao método de perfusão, para obtenção de hepatócitos em cultura primária, ao final dos 14 dias de lactação. Os fêmures das proles foram retirados, para obtenção da medula óssea. A bioquímica de sangue das proles (glicose, triglicerídeo, colesterol total, LDL, proteínas totais, albumina, ALT, AST, cálcio total e ionizado) foi analisada, assim como a bioquímica do leite ordenhado (triglicerídeos). Os testes do micronúcleo em medual óssea e hepatócitos, assim como o teste Cometa em sangue total, foram utilizados para avaliação genotóxica e citotóxica, de acordo com as diretrizes da OECD. Os resultados mostraram que, em concentrações mais baixas (0,00015 e 0,0015 mg/g), o sorbitol induziu o ganho de peso, principalmente na menor concentração (0,00015 mg/g), e alterações no perfil lipídico do sangue em todas as concentrações. As quantidades de triglicerídeo no leite variaram em função da dose ingerida, reduzida na maior concentração (0,15 mg/g) e aumentada na menor (0,00015 mg/g). A maior concentração (0,15 mg/g) resultou em perda de peso das mães e proles, diminuição de proteínas viscerais totais, albumina e aumento de enzimas hepáticas (ALT e AST) nas proles. Os resultados do teste da Salmonella/microssoma não indicaram mutagenicidade, entretanto, uma relação de dependência entre dose e Índice de Mutagenicidade (I.M.). Ambos os testes, micronúcleos de medula óssea e hepatócitos, apresentaram uma citotoxicidade dose dependente, estatisticamente significativa em relação ao grupo controle, corroborando com a genotoxicidade do teste Cometa e dependência de dose encontrada no teste da Salmonella/microssoma. Em concentrações mais baixas, parece existir modulação das vias lipogênicas, em contrapartida, nas mais altas a toxicidade parece dificultar tais alterações, induzindo o efeito contrário. Concluimos que o consumo excessivo de sorbitol resulta em alterações metabólicas e toxicológicas em lactentes, mesmo sendo considerado seguro pelo FDA e ANVISA. / Sorbitol is a polyol found in products for special purposes such as diet and light, Within this context, include lactating women as major consumers, aiming for a faster return to pre-pregnancy weight. Due to the great need for data on metabolic consequences of excessive consumption of these types of products, the objective of this study was to evaluate the possible effects of maternal intake of sorbitol in lactation on profiles nutritional, biochemical and toxicological in breastfed offspring. The test Salmonella/microsome was used initially in evaluating cytotoxic and mutagenic to Salmonella enterica sorovar Typhimurium strains deficient in the synthesis of the amino acid histidine. Lactating female Wistar rats (6 per experimental group), each with six puppies received sorbitol (0.00015 mg/g/day, 0.0015 mg/g/day and 0.15 mg/g/day) the first 14 days of lactation. In this period, we evaluate the biometrics of mothers and offspring, feed intake and water intake of the mothers. After lactation, the mother rats were milked, and, along with the proles, sacrificed by cardiac puncture for blood collection total. The livers of offspring were subjected to perfusion method for obtaining hepatocytes in primary culture, the end of the 14 days of lactation. The fêmurs of offspring were removed to obtain bone marrow. The biochemistry of blood offspring (glucose, triglycerides, total cholesterol, LDL, total protein, albumin, ALT, AST, total and ionized calcium) was analyzed as well as the biochemistry of milk milked (triglycerides). Micronucleus tests in bone medual and hepatocytes, as well as the Comet assay in whole blood, were used to evaluate cytotoxic and genotoxic, according to the OECD guidelines. The results showed that at lower concentrations (0.00015 and 0.0015 mg/g), sorbitol induced weight gain, especially at the lower concentration (0.00015 mg/g), and changes in blood lipid profiles in all concentrations. The amounts of triglycerides in milk varied according to the dose ingested reduced at the higher concentration (0.15 mg/g) and increased in the lower (0.00015 mg/g). The highest concentration (0.15 mg/g) resulted in weight loss of mothers and offspring, decreased visceral proteins, albumin and increased liver enzymes (ALT and AST) in the offspring. The test results of the Salmonella/microsome mutagenicity had not, however, a dependency relationship between dose and Mutagenicity Index (MI). Both tests, and bone marrow micronucleus hepatocyte cytotoxicity showed a dose dependent, statistically significant compared to the control group, supporting the Comet genotoxicity testing and dose dependency of the test found Salmonella / microsome. At lower concentrations, there appears to be modulation of lipogenic pathways in return, the higher the toxicity seems to hinder such changes, inducing the opposite effect. We conclude that excessive consumption of sorbitol could result in metabolic and toxicological disorders in infants and lactating rats, even though considered safe by the FDA and ANVISA.

Resumo: Devido às crescentes expansões demográficas e industriais observadas nas últimas décadas, o meio ambiente tem recebido uma carga significativamente crescente de efluentes domésticos, industriais e agrícolas, causando impactos severos nos ecossistemas e um potencial comprometimento à saúde humana. Dentre os efluentes domésticos, podemos citar uma gama de poluentes, tais como químicos de diversas categorias, além de contaminações por agentes biológicos diversos. Já os efluentes industriais contêm poluentes orgânicos e/ou inorgânicos, dependendo da atividade industrial. Baseando-se nestes dados, este trabalho teve como objetivo investigar, por meio de ensaios biológicos com dois organismos-teste, a possível presença de contaminantes com potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico, que são despejados ao longo do rio Preto, inclusive na Represa Municipal de São José do Rio Preto. O material biológico utilizado neste estudo constituiu-se de sementes de Allium cepa (cebola) e peixes da espécie Oreochromis niloticus (Tilápia). Coletas de águas foram realizadas, sazonalmente, nos meses de agosto de 2006 e 2007 (estação seca) e março de 2007 e 2008 (estação chuvosa), em seis pontos distintos: Ponto 1 (P1), 8 km antes do represamento; Ponto 2 (P2), 1 km antes do represamento; Ponto 3 (P3), local de despejo do esgoto; Ponto 4 (P4), margem oposta do despejo do esgoto; Ponto 5 (P5), saída do represamento; Ponto 6 (P6), 1 km após o represamento. Análises químicas foram realizadas para todas as coletas realizadas. Para a realização do estudo, 100 sementes de Allium cepa foram submetidas à germinação, em placa de Petri, em amostras de águas coletadas nos seis diferentes pontos do rio Preto, em água ultra pura (controle negativo) e em uma substância reconhecidamente aneugênica (Trifluralina - controle positivo), sempre à temperatura ambiente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Due to increasing population and industrial expansion observed in recent decades, the environment has received a significant increased burden of domestic industrial and agricultural sewerage, which can cause severe impacts on ecosystems, and a potential damage to human health as well. A wide range of harmful pollutants can be found in domestic effluent, such as chemicals from various categories, in addition to contamination by various biological agents. On the other hand, industrial effluents contain organic and / or inorganic pollutants, depending on industrial activity. Based on these data, this study aimed to investigate, by means of biological tests with two test-organism, the possible presence of contaminants with cytotoxic, genotoxic and mutagenic potential, which are dumped along the Preto river, an important river that flows in the region of Sao Jose do Rio Preto/SP. The biological material used in this study consisted of seeds of Allium cepa (onion) and one specie of fish (Tilapia: Oreochromis niloticus). Water samples were taken seasonally in August 2006 and 2007 (dry season) and March 2007, and 2008 (rainy season), in six distinct sites: Site 1 (S1), 8 km before the damming, Site 2 (S2), 1 km before the damming, Site 3 (S3), place of sewerage discharge; Site 4 (S4), opposite margin of sewage discharge, Site 5 (S5), end of the damming; Site 6 (S6) 1 km after damming. Chemical analyses were performed for all collected samples. For the study, 100 seeds of A. cepa were submitted to germination in Petri dishes with samples water from six different sites of the Preto river, Ultra pure water (negative control), and with an aneugenic substance (Trifluralin - positive control). For most of collection points and periods studied, root meristems cells of A. cepa, exposed to water samples collected along the Preto river, showed no significant differences... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria Aparecida Marin-Morales / Coorientador: Maria Tecília Vilela de Azeredo-Oliveira / Banca: Regina Teresa Rosim Monteiro / Banca: Carmem Silvia Fontanetti Christofoletti / Banca: Eduardo Alves de Almeida / Banca: Mary Massumi Itoyama / Doutor

Este trabalho teve como objetivo estudar a bioconcentração de elementos-traço no músculo e a presença de micronúcleos nos eritrócitos de Cathorops spixii, coletados no Complexo Estuarino-Lagunar de Cananéia-Iguape, nos setores norte e sul, no verão e inverno de 2009, verificando a influência sazonal e antrópica em cada área. As análises dos elementos traços foram realizadas por Ativação Neutrônica e Espectrometria de Absorção Atômica. Em geral, os peixes apresentaram níveis seguros para consumo humano, exceto para o As, sobretudo nos peixes capturados em Cananéia. Recomenda-se a revisão dos índices de As em relação aos produtos marinhos e mais estudos da relação entre salinidade e bioacumulação deste elemento. Pb e Hg apresentaram maiores concentrações nos peixes de Iguape, independentemente da época do ano, enquanto que As e Cr foram mais elevados em Cananéia. As variações sazonais, nas duas regiões, mostraram que o Hg, Cd e Co apresentaram maiores concentrações no verão, enquanto que o As e o Cr foram maiores no inverno. A expressão de micronúcleo foi baixa, sendo ligeiramente maior na região norte, local mais exposto aos contaminantes devido ao aporte de água do Rio Ribeira de Iguape por meio do canal do Valo Grande, que trás consigo resíduos dos municípios localizados no vale do Ribeira. C. spixii mostrou ser um bom biomonitor ambiental, com potencial para integrar programas de monitoramento em ambientes costeiros e estuarinos em nível nacional. / The aim of this work was study the bioaccumulation of trace elements in the muscle and the presence of micronuclei in the erythrocytes of Cathorops spixii, collected in the Cananéia-Iguape Estuarine-Lagoon Complex, in the sectors north and south, in the summer and winter of 2009, in order to verify the anthropogenic and seasonal influences in each area. Trace elements were analyzed by Neutronic Activation and Atomic Absorption Spectrometry techniques. In general, the fishes had levels safe for human consumption, except for As, especially in fish caught in Cananéia. It is recommended the review of the legislation besides the study of the relationship between salinity and bioaccumulation of this element. Pb and Hg showed higher concentrations in the fishes from Iguape, regardless of the season, while As and Cr were higher in those captured in Cananéia. Seasonal variations in both regions showed higher concentrations of Hg, Cd and Co in the summer, while As and Cr were higher in the winter. The expression micronuclei was low, being slightly higher in the northern region, the most exposed to the contaminants due to the inflow of water from Ribeira de Iguape River, through the Valo Grande Channel, which brings with it waste of municipalities located in the Ribeira Valley. C. spixii proved to be a good environmental biomonitor with potential to integrate monitoring programs in coastal and estuarine environments at the national level.

Submitted by YADIRA ANSOAR RODRIGUEZ null (yansoar@gmail.com) on 2016-09-13T01:47:22Z No. of bitstreams: 1 Tese com anexos.pdf: 2549765 bytes, checksum: 4ed9c23afef907cf3b9fa391cc0f7cb9 (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica, Folha de rosto e folha de aprovação. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija estas informações e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-09-14T20:21:24Z (GMT) / Submitted by YADIRA ANSOAR RODRIGUEZ null (yansoar@gmail.com) on 2016-09-14T21:01:11Z No. of bitstreams: 1 Tese VF.pdf: 2830119 bytes, checksum: 3b30a5eef5a71be48f3fcf3950b1dc44 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-09-15T19:20:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ansoarrodriguez_y_dr_rcla.pdf: 2830119 bytes, checksum: 3b30a5eef5a71be48f3fcf3950b1dc44 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T19:20:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ansoarrodriguez_y_dr_rcla.pdf: 2830119 bytes, checksum: 3b30a5eef5a71be48f3fcf3950b1dc44 (MD5) Previous issue date: 2016-07-26 / Asociación Universitaria Iberoamericana de Postgrado (AIUP) / A aplicação indiscriminada de agrotóxicos constitui uma das maiores preocupações na atualidade, sendo o Brasil um dos países que mais uso faz destes produtos. O imidacloprido (IMI) é um dos inseticidas mais utilizados no mundo, principalmente nas culturas de cana-de-açúcar, citros, algodão e café. Apesar de seus benefícios, pode apresentar potencial tóxico e genotóxico em organismos não alvo. O uso de bioindicadores permite o estudo dos possíveis riscos destas substâncias nos organismos. Entre estes, plantas superiores e organismos aquáticos são considerados excelentes para avaliar efeitos de agrotóxicos no ambiente. Neste estudo, foram avaliados os efeitos de IMI em organismos não alvos (Allium cepa, Tradescantia pallida e Oreochromis niloticus) expostos a diferentes concentrações, baseadas na aplicação deste inseticida na cultura de cana-de-açúcar, por meio de ensaios celulares e moleculares. Foram testadas concentrações equivalentes à dose do produto recomendada para esta cultura (400 g/ha), a metade (200 g/ha) para simulação da diluição natural e o dobro (800 g/ha) para simulação do uso indiscriminado. O teste de aberrações cromossômicas e de micronúcleos (MN) em A. cepa e T. pallida foram utilizados para avaliar a toxicidade e genotoxicidade. Ensaio do cometa e teste do MN em eritrócitos de O. niloticus, avaliaram danos em nível primário e cromossômico. Análise das alterações histopatológicas no fígado de O. niloticus e localização in situ das proteínas de choque térmico (HSP70) analisadas sob microscopia de luz e imuno-histoquímica, respectivamente, foram empregadas para verificar o potencial tóxico em nível celular. Os resultados no teste de A. cepa e T. pallida, demonstraram que o IMI induziu alterações cromossômicas e o aumento da frequência de MN. Também foi observado indução do dano primário em eritrócitos de O. niloticus nas concentrações testadas e dano em nível cromossômico na maior concentração. Alterações hepáticas também foram observadas em todas as concentrações testadas, entre elas: degeneração hidrópica, núcleos picnóticos e perda do limite celular. A concentração mais alta (250μg/L) induziu um aumento de lípidos ácidos e neutros e dos níveis de marcação da proteína HSP70. Diante dos resultados pode-se concluir que o IMI, nas concentrações testadas, foi genotóxico para os organismos, além de induzir alterações histopatológicas e ativar mecanismos citoprotetores mediados por proteína de choque térmico. Este inseticida apresentou potencial tóxico e genotóxico nos organismos testados, os quais não são alvos de ação deste agrotóxico, fato este que deve ser levado em consideração para sua aplicação. / The indiscriminate application of pesticides is a major concern nowadays, and Brazil is one of the countries which use these products heavily on agriculture. The imidacloprid (IMI) is an insecticide sold worldwide, being widely used on sugar cane, citrus, cotton and coffee crops. Despite its benefits, IMI may have potential for inducing genetic changes in non-target organisms. In this sense, the use of bioindicators like higher plants and fishes allow the assessment of possible effects and risks to the environment derived from the use of this insecticide in agriculture. In this study, we evaluated the effects of IMI on non-target organisms (Allium cepa, Tradescantia pallida and Oreochromis niloticus) exposed to different concentrations, based on the application of this insecticide in the sugarcane culture, through cellular and molecular assays. A concentration equivalent to the recommended dose of the product for this culture (400 g/ha), the half (200 g/ha) for simulation of natural dilution and double (800 g/ha) that simulates the indiscriminate use. Chromosomal aberrations and micronucleus test (MN) in A. cepa and T. pallida were analyzed for toxicity and genotoxicity study. Comet assay and MN test in O. niloticus erythrocytes assess damage to primary and chromosomal level. Analysis of histopathological changes in the O. niloticus liver and in situ localization of heat shock protein (HSP70) were analyzed by light microscopy and immunohistochemistry, respectively, were performed to measure the toxic potential at the cellular level. The results in A. cepa and T. pallida assay, demonstrated that the IMI induced chromosomal alterations and increased frequency of MN. It was also observed induction of primary damage in O. niloticus erythrocytes at all concentrations and damage to the chromosomal level in the highest concentration. Liver changes were also found in all tested concentrations, as: hydropic degeneration, pyknotic nuclei and loss of cell limits. The highest concentration (250μg/L) showed an increase of acid and neutral lipids and labelling levels of HSP70 protein. Given the results it is possible to concluded that the IMI in the tested concentrations was genotoxic in these organisms, besides inducing histopathologic changes and activated cytoprotective mechanisms mediated by heat shock protein. This insecticide has a toxic and genotoxic potential for these organisms, which are not the target of action of this pesticide; fact should be considered for its application.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AlexandreEM_TESE.pdf: 2243848 bytes, checksum: 084d61604c2aa96c5c502207145559c0 (MD5) Previous issue date: 2011-05-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / The occurrence of human cancer in the municipality of Lucr?cia (RN, Brazil) has shown high frequencies (INCA, 2007). Tests of micronucleus (MN) and nuclear abnormalities (NA) were performed to assess the genotoxic potential of water from the Lucr?cia dam, which is located in a semi-arid region under the influence of crop irrigation and irregular rainfall. Water samples were collected in this source for analyzing the concentration of cyanobacteria, metals and radioactivity. Erythrocytes of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) were collected in dam and cells of human oral mucosa in the urban area of this municipality for the bioassays of MN and NA. In fish were also analyzed concentrations of metals in samples of liver and gills. The genotoxicity tests with biological samples of fish and humans have shown significant increases in the frequencies of MN and NA (p ≤ 0.05) and are indicative of increased DNA damage in relation to the control groups. In conclusion, the results obtained from water samples and biological municipality of Lucr?cia indicates that the presence of chemical and microbiological pollutants, and increase of genotoxic in human of this municipality. We suggest the implementation of advanced water treatment, to prevent further degradation of the aquatic environment and decrease in the life quality. This research of environmental quality assessment was performed in order to contemplate a multi and interdisciplinary character of this water resource and that can induce genotoxic damage in the organisms in this study region / A ocorr?ncia de c?ncer humano na regi?o do munic?pio de Lucr?cia (RN, Brasil) tem mostrado freq??ncias elevadas (INCA, 2007). Foram aplicados testes de micron?cleos (MN) e altera??es nucleares (NA) para avaliar o potencial genot?xico das ?guas do a?ude de Lucr?cia, que est? localizado numa regi?o semi-?rida sob influ?ncia de irriga??o agr?cola e precipita??o irregular. Foram coletadas amostras de ?gua nesse manancial para an?lise da concentra??o de cianobact?rias, metais e radioatividade. Foram coletados eritr?citos de til?pia do Nilo (Oreochromis niloticus) no manancial e c?lulas de mucosa oral humana na ?rea urbana desse munic?pio para os bioensaios de MN e NA. Nos peixes tamb?m foram analisadas as concentra??es de metais em amostras de br?nquias e f?gado. Os testes de genotoxicidade com amostras biol?gicas de peixes e humanos mostraram aumentos significantivos nas freq??ncias de MN e NA (p ≤ 0,05) e s?o indicativos de aumento nos danos ao DNA em rela??o aos grupos controles. Concluindo, os resultados obtidos com as amostras de ?gua e biol?gicas do a?ude de Lucr?cia indicam a presen?a de poluentes qu?micos e microbiol?gicos, e tamb?m aumento do potencial genot?xico na popula??o humana desse munic?pio. Sugerimos a execu??o de tratamento h?drico avan?ado, para prevenir futura degrada??o desse ambiente aqu?tico e redu??o da qualidade de vida. Esta pesquisa de avalia??o da qualidade ambiental foi executada de forma a contemplar uma abordagem multi e interdisciplinar da caracter?stica deste recurso h?drico e os danos genot?xicos que possam induzir nos organismos desta regi?o em estudo

Submitted by Lígia Ângelo Tavares (ligia.atavares@gmail.com) on 2018-05-25T15:51:29Z No. of bitstreams: 1 DISSERAÇÃO - LIGIA SCHWARZMEIER - MESTRADO.pdf: 3091413 bytes, checksum: 654a7ae7d828dff5e2f782ebb4eb3c96 (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-05-25T19:44:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 schwarzmeier_la_me_sjc.pdf: 3091413 bytes, checksum: 654a7ae7d828dff5e2f782ebb4eb3c96 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-25T19:44:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 schwarzmeier_la_me_sjc.pdf: 3091413 bytes, checksum: 654a7ae7d828dff5e2f782ebb4eb3c96 (MD5) Previous issue date: 2018-03-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo desta pesquisa foi investigar a frequência de micronúcleos e anomalias metanucleares na mucosa bucal de vaporizadores de cigarro eletrônico e de fumantes de cigarro industrializado, e comparar com ex-fumantes e não fumantes para determinar se existe diferença no dano citogenético e citotóxico, bem como se o dano diminui após a cessação tabágica. Os pacientes foram divididos em 4 grupos: Controle; E-cig; Fumante e Ex-fumante. Os critérios de inclusão adotados foram: ausência de histórico de neoplasia maligna bucal e ausência de quaisquer sinais clínicos visíveis de alteração no local avaliado. Foi realizada avaliação quanto ao grau de dependência nicotínica, por meio do Teste de Fagerström para Dependênca à Cigarro e Escore de Consumo Situacional Issa, e quanto ao perfil tabágico dos pacientes. A mensuração de CO expirado foi utilizada como critério objetivo de avaliação de consumo de tabaco, bem como a concentração de cotinina no sangue capilar dos pacientes avaliados. As amostras foram coletadas por meio de citologia esfoliativa da região de bordo lateral de língua e soalho bucal. Os esfregaços obtidos foram fixados com spray alcoólico e as lâminas coradas pelo método de Feulgen. Posteriormente, foi realizada a investigação dos micronúcleos e das anomalias metanucleares. Para a comparação dos dados não paramétricos foram utilizados os testes Kruskal-Wallis e Mann-Whitney. Já para as correlações e associações entre os dados, foram utilizados o teste da correlação de Spearman e o Teste Exato de Fisher, respectivamente. Foi adotado um nível de significância de 5% para todos os testes. A partir dos resultados, observou-se diferença significante entre os grupos E-cig e Controle (p=0,0072), e também entre os grupos Fumante e Controle (p=0,0004), no total de MN. Em contrapartida os grupos E-cig e Ex-fumante foram semelhantes, enquanto que o grupo Fumante foi significativamente maior que o grupo Ex-fumante (p=0,0370) também no total de MN. Também foi possível observar diferença significante entre os grupos E-cig e Ex-fumante, bem como entre os grupos E-cig e Controle em todas as anomalias metanucleares, exceto cariorrexe. Os grupos Fumante e Ex-fumante foram diferentes em cariorrexe (p=0,0517), e nuclear bud (p=0,0470) apenas, e o grupo Fumante foi significativamente maior que o grupo Controle em todas as anomalias metanucleares. A comparação entre os grupos E-cig e Fumante não foi realizada, devido à ingestão de altas doses de bebidas alcoólicas no grupo E-cig. O tabagismo promove danos citotóxicos e citogenéticos e o uso de E-cig associado ao álcool parece causar genotoxicidade e citotoxicidade. A cessação tabágica promove reversibilidade dos danos causados anteriormente. / The objective of this research was to investigate the frequency of micronuclei and metanuclear anomalies in the oral mucosa of electronic cigarette vaporizers and smokers of industrialized cigarettes and to compare with former smokers and nonsmokers to determine if there is a difference in cytogenetic and cytotoxic damage, as well as if it decreases after smoking cessation. The patients were divided into 4 groups: Control; E-cig; Smoker; and Former smoker. The inclusion criteria adopted were: absence of a history of oral malignancy and absence of any visible clinical signs of alteration at the evaluated site. An assessment was made of the degree of nicotinic dependence, using the Fagerström Test for Cigarette Dependence and the Issa Situational Consumption Score, and of the smoking profile of the patients. Measurement of expired CO was used as the objective criterion for the evaluation of tobacco consumption as well as the concentration of cotinine in the capillary blood of the evaluated patients. The samples were collected from the tongue lateral region and floor of the mouth by means of exfoliative cytology. The smears obtained were fixed with alcoholic spray and the slides were stained by the Feulgen method. Subsequently, the investigation of the micronuclei (MN) and metanuclear anomalies was carried out. For the non-parametric data, the Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests were performed. For the correlations and associations between the data, the Spearman correlation test and the Fisher Exact Test were respectively used. A significance level of 5% was adopted for all tests. From the results, we observed a significant difference between groups E-cig and Control (p = 0.0072), and also between groups Smoker and Control (p = 0.0004), in the total of MN. In contrast, groups E-cig and Former smoker were similar, whereas the group of Smoker was significantly higher than Former smoker (p = 0.0370) also in the total of MN. It was also possible to observe a significant difference between E-cig and Former smoker, as well as between E-cig and Control in all metanuclear anomalies, except for karyorrhexis. Already Smoker and Former smoker, they were different in karyorrhexis (p = 0.0517), and nuclear bud (p = 0.0470) only, and Smoker was significantly higher than Control in all metanuclear abnormalities. The comparison between groups E-cig and Smoker could not be performed due to the ingestion of high doses of alcoholic beverages in E-cig group. Smoking promotes cytotoxic and cytogenetic damage and the use of alcohol-associated electronic cigarettes appears to cause genotoxicity and cytotoxicity. Smoking cessation promotes reversibility of previously caused harm.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:55:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaFSRN_DISSERT.pdf: 3363450 bytes, checksum: e0cb6b317ff11cb49abf8a59b8c7c5bc (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The use of pesticides is being used intensively with severe consequences for exposed farmers. This study aimed to describe the socioeconomic and health profiles of 60 farmers in the city of Touros / RN through the questionnaire recommended by: (International Commission for Protection against Environmental Mutagens and Carcinogens (ICPEMC). The analysis of these data allowed to prove the importance of knowledge about the socioeconomic and health profile of rural farmers as a way to understand the reality of this population, that is vulnerable to exposure due to the lack of knowledge and conditions. Aiming to analyze the frequency of micronucleus (MN) and other nuclear abnormalities in oral mucosa cells of 54 farmers that work in the city of Touros / RN it was applied the micronucleus test (MN) in oral mucosa. Our results showed an increased frequency of MN and other nuclear abnormalities related to the exposure and effects of pesticides on health. Based on the results, it is clear that farmers are using pesticide in the wrong way and compromising their health. A Cordel has been developed as a method to taking the results to the people affected by the pesticides. Therefore this study alerts to the need for profound changes in the social, cultural and health context to reduce health risks for both people and for the environment / O uso de agrot?xicos esta sendo usado de maneira intensiva com graves consequ?ncias para os agricultores expostos. O presente estudo teve como objetivo descrever os perfis de sa?de e socioecon?mico de 60 agricultores no Munic?pio de Touros/RN atrav?s do question?rio recomendado por: (International Commission for Protection against Environmental Mutagens and Carcinogens (ICPEMC). As an?lises desses dados permitiu comprovar a import?ncia do conhecimento do perfil socioecon?mico e de sa?de de agricultores rurais como forma de entender a realidade dessa popula??o, que pela falta de conhecimentos e condi??es encontram-se vulner?veis a exposi??o de agrot?xicos. Com objetivo de analisar a frequ?ncia de micron?cleos (MN) e outras anormalidade nucleares em c?lulas da mucosa oral de 54 agricultores que trabalham no Munic?pio de Touros/RN aplicou-se o Teste de micron?cleo (MN) em mucosa bucal. Os nossos resultados mostraram uma frequ?ncia aumentada de MN e outras anormalidades nucleares relacionados com a exposi??o e efeitos dos defensivos agr?colas na sa?de. A partir dos resultados obtidos, fica not?rio que os agricultores est?o aplicando os agrot?xicos de maneira err?nea e comprometendo a sua sa?de. Como estrat?gia socioeducativas foi desenvolvido um Cordel baseado no texto e nos resultados encontrados no presente estudo. Desta forma este estudo alerta para a necessidade de profundas mudan?as sociais, culturais e no ?mbito da sa?de para diminuir os riscos a sa?de tanto para as pessoas quanto para o ambiente