Os métodos de tratamento para a obesidade em cães e gatos focam na restrição calórica, seja restringindo a ingestão de alimento ou alimentando o animal com dietas hipocalóricas. Entretanto, esses métodos frequentemente falham, sendo necessárias estratégias alternativas para promover a perda de peso. O objetivo desse estudo foi investigar as diferenças na microbiota fecal entre animais magros e obesos e determinar se a castração e/ou a perda de peso estão associadas com mudanças na população microbiana. No primeiro experimento, a composição da microbiota fecal foi avaliada nos gatos magros inteiros, magros castrados e obesos castrados, antes e depois da perda de peso. Os gatos obesos foram submetidos a seis semanas de restrição energética e apresentaram redução na massa gorda após a perda de peso (P<0,001), embora o peso corporal não tenha mudado (P>0,05). Firmicutes, seguido de Bacteroidetes foram os filos predominantes em todos os grupos. O grupo dos magros castrados tiveram o perfil de bactérias que era esperado para os obesos, com maior abundância de Firmicutes e menor de Bacteroidetes (P<0,05). Não foram observadas diferenças entre os grupos magros inteiros e obesos castrados. A população microbiana dos gatos obesos mostrou poucas alterações com a perda de peso. No segundo experimento, o teste foi realizado quando os cães estavam magros, após consumo ad libitum para promover o ganho de peso e após a perda de peso. As seguintes concentrações séricas foram analisadas: glicose, colesterol, triglicerídeos, albumina, creatinina, fosfatase alcalina (FA), alanina aminotransferase (ALT), proteínas totais (PT), insulina e leptina. As amostras de fezes foram analisadas para determinar a abundância de Bacteroidetes e Firmicutes. As concentrações de triglicerídeos, colesterol, albumina, FA, ALT e PT foram maiores (P<0,05) nos cães obesos quando comparados aos magros. Bacteroidetes foi mais abundante (P<0,001) nos magros e Firmicutes não diferiu entre os grupos (P>0,05). Após a perda de peso, os níveis de colesterol e PT e a abundância de Bacteroidetes permaneceram inalteradas estatisticamente. Conclui-se então que, nos modelos testados, há diferenças na microbiota fecal entre os grupos dos estudos realizados. Entretanto, no estudo com os gatos a obesidade pareceu não influenciar o crescimento das diferentes populações de microorganismos. / Treatment methods for obesity in dogs and cats focus on calorie restriction, either by restricting the calorie intake of the animal, or by feeding energy diluted diets. However, these methods often fail, requiring additional strategies to promote weight loss. The objective of this study was to investigate differences in the gut microbiota between lean and obese animals and determine whether neutering and/or weight loss are associated with changes in the microbial populations. In the first experiment, the composition of the faecal microbiota was evaluated in lean intact, lean neutered and obese neutered cats, before and after weight loss. The obese cats were submitted to six weeks of energy restriction and showed less fat body mass after weight loss (p<0.001), although the body weight has not changed (P>0.05). Firmicutes followed by Bacteroidetes were the predominant bacterial phyla in all groups. The lean neutered cats had a bacterial profile of what one would expect from the obese cats, with greater abundance (P<0.05) of Firmicutes and lower abundance (P<0.05) of Bacteroidetes. There were no significant differences between lean intact and obese neutered. The microbe populations of obese cats showed very few changes with weight loss. In the second experiment, testing was performed when the dogs were lean, after ad libitum feeding to promote weight gain and after weight loss. Serum concentrations were analyzed: glucose, cholesterol, triglycerides, albumin, creatinine, alkaline phosphatase (ALP), alanine aminotransferase (ALT), total proteins (TP), insulin and leptin. Faecal samples were analyzed to determine the abundances of Bacteroidetes and Firmicutes. Triglycerides, cholesterol, albumin, PA, ALT and TP were greater (P<0.05) in obese dogs when compared to the lean. The abundance of Bacteroidetes was greater (P<0.001) in the lean group and the phylum Firmicutes showed no differences among the groups (P>0.05). After weight loss, the levels of cholesterol and TP and the abundance of Bacteroidetes remained unchanged statistically. In conclusion, differences in the faecal microbiota were observed among the groups of both studies. However, in the study with cats, obesity seems not to influence the growth of diverse populations of microrganisms.

O emprego de enzimas lignocelulolíticas secretadas por microrganismos para a produção de etanol de segunda geração tem motivado pesquisas na área da engenharia de processos fermentativos, genômica e secretômica. Entre os microrganismos com potencial para a produção de celulases destacam-se variantes genéticos do fungo filamentoso Penicillium echinulatum caracterizados por produzirem altos títulos enzimáticos. Neste trabalho, estudouse a secretômica da linhagem selvagem 2HH e do mutante S1M29 de P. echinulatum, em cultivo submerso, empregando diferentes fontes de carbono: glicose, glicerol, celulose e bagaço de cana-de-açúcar pré-tratado por explosão a vapor. Análises enzimáticas possibilitaram identificar que P. echinulatum produz celulases, hemicelulases, esterases e, em menor proporção, pectinases e amilases. Outrossim, os maiores títulos enzimáticos para a maioria das enzimas foram verificados na linhagem mutante. Nos meios formulados com bagaço de cana-de-açúcar ou celulose verificou-se a indução das maiores produções enzimáticas para ambas as linhagens. A análise do secretoma por 1D-PAGE seguido de LCMS/ MS das amostras de 96 horas de cultivo permitiu identificar que em ambas as linhagens há predominância de enzimas CAZy, sendo celulases, hemicelulases e enzimas degradadoras de parede celular fúngica as mais predominantes. Celobiohidrolases, endoglicanases, β-glicosidases, xilanases, β-xilosidases e mananases foram identificadas e, em quantidades menores, ligninases, pectinases, amilases, esterases e solenina, entre outras proteínas (adesão, chaperonas, oxidoredutases, proteases, peptidases, lipases, glutaminases e hipotéticas). Os meios elaborados com glicose ou glicerol foram utilizados pelo fungo para a produção de amilases, ligninases e enzimas degradadoras da parede celular fúngica. Destaca-se a secreção 2 a 3 vezes maior de celulases pela linhagem mutante, sendo que o meio de cultivo elaborado com bagaço de cana-de-açúcar proporcionou a secreção de maiores quantidades de celulases para o mutante. Nesta condição, o complexo celulolítico da linhagem S1M29 constitui-se de 55% de celobiohidrolases, 38% de endoglicanases e 1% de β-glicosidases. Estes dados sugerem que durante o melhoramento genético do fungo ocorreram mudanças, embora não direcionais, possivelmente em nível da regulação da expressão gênica, modificações póstraducionais e alterações na capacidade para secretar proteínas extracelulares que tornaram a linhagem mutante S1M29 com potencial para ser empregada na hidrólise de lignocelulósicos. / The use of lignocellulolytic enzymes secreting by microorganisms for the production of second-generation ethanol has motivated research in the field of fermentation processes engineering, genomics and secretomics. Among the microorganisms with the potential for cellulases production are genetic variants of the filamentous fungus Penicillium echinulatum characterized by produce high enzymatic titers. In this work, it was studied the secretome of the wild type 2HH and mutant S1M29 of P. echinulatum in submerged cultivation on different carbon sources: glucose, glycerol, cellulose and sugar cane bagasse pretreated by steam explosion). Enzymatic analysis allowed verifying that P. echinulatum produces cellulases, hemicellulases, esterases, and minor proportion, pectinases and amylases. Furthermore, the major enzymes titers for most enzymes dosed were verified in the mutant strain. It was verified in the media formulated with sugar cane bagasse or cellulose the induction of the highest enzyme production for both strains. The analysis of secretome by 1DPAGE followed by LC-MS/MS, of samples collected at 96 hours of cultivation, showed that in both strains there is a predominance of CAZy enzymes, being cellulases, hemicellulases and fungal cell wall degrading enzymes the most prevalent. Cellobiohydrolases, endoglucanases, β-glucosidase, xylanase, endoxylanase, β-mannanases and xylosidases were identified and, in smaller amounts, ligninases, pectinases, amylases, esterases and swollenin, among other proteins (adhesion, chaperones, oxidoreductases, proteases, peptidases, lipases, glutaminases and hypothetical). The media elaborated with glucose or glycerol were used for producing of amylases, ligninases and fungal cell wall degrading enzymes. Highlights the secretion of 2-3 times more cellulases by the mutant, being the medium prepared with sugar cane bagasse afforded the secretion of large cellulases quantities for the mutant. In this condition, the cellulolytic complex of S1M29 strain consists of 55% cellobiohydrolases, 38% endoglucanases and 1% β-glucosidase. These data suggest that during the genetic improvement of the fungus changes occurred, although not directional, possibly at the level of regulation of gene expression, post-translational modifications and changes in the ability to secrete extracellular proteins, that have made the mutant S1M29 a potential strain to be employed in hydrolysis of lignocellulose.

PETROBRAS, BIOGÁS, Brasil

Orientadores: Pedro Luiz Rosalen, Hyun Koo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-07T01:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Yatsuda_Regiane_D.pdf: 2220152 bytes, checksum: af7c550978d5b4b9b4ba19a84d7cb6c0 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O uso de plantas medicinais vem crescendo nos últimos anos e isto é devido principalmente as descobertas de suas propriedades biológicas, e entre estas plantas destacam-se as do gênero Mikania. Assim, a procura pela descoberta de novos produtos naturais com atividade antibacteriana para a prevenção de doenças bucais e talvez com menores efeitos adversos quando comparados aos produtos industrializados seria muito importante para obtenção de um meio efetivo de controle da formação de um biofilme patogênico. Assim, em estudos anteriores, a fração hexânica das plantas Mikania laevigata e Mikania glomerata apresentaram atividade antimicrobiana e inibiram a aderência dos estreptococos do grupo mutans. Deste modo, o objetivo geral deste trabalho foi avaliar o efeito antimicrobiano dos compostos isolados das frações hexânicas das plantas M. laevigata e M. glomerata (guaco) sobre os estreptococos do grupo mutans. Para isso, foram realizados três estudos, sendo o objetivo do estudo 1 analisar a composição química e o efeito antimicrobiano dos compostos isolados e identificados das frações hexânicas das plantas M. laevigata e M. glomerata sobre o crescimento bacteriano e a aderência celular dos estreptococos do grupo mutans. O objetivo do estudo 2 foi determinar a influência destes compostos isolados na formação e na composição de polissacarídeos de biofilmes de Streptococcus mutans UA159 formados em discos de hidroxiapatita, na queda de pH gücolítico e seu efeito na translocação de prótons pela atividade da ATPase. Além disso, foram realizados estudos para analisar seu efeito na atividade de glucosiltransferase (GTF) B em solução (GTF-sol) e em superfície (GTF-sup). O objetivo do estudo 3 foi avaliar as atividades dos compostos isolados da Mikania utilizando modelo experimental de cárie em ratos. No estudo 1, os ácidos cupressênico, diterpênico e caurenóico foram os compostos que apresentaram atividade antimicrobiana (CIM entre 2,5-20 ng/mL e CBM entre 2,5-40 jjg/mL) e inibição da aderência celular entre 1,25-5 ug/mL, sendo que os compostos espatulenol, caurenol, ácido grandiflórico não apresentaram atividade biológica nas concentrações testadas. No estudo 2, somente os três compostos ativos isolados da Mikania foram avaliados na concentração 500 }ig/mL. Os resultados demonstraram que os ácidos cupressênico, diterpênico e caurenóico apresentaram efeito na viabilidade bacteriana dos biofilmes, reduziram a produção de ácidos orgânicos (pH final entre 6,4-5,8) e a atividade da ATPase (28-40%). Os compostos também foram potentes inibidores da atividade de GTFs, tanto em solução quanto em superfície de hidroxiapatita, sendo 50-60% de redução para GTF B-sol e 50-80% de redução para GTF B-surf. Nos biofilmes, o peso seco e a quantidade de polissacarídeos solúveis, insolúveis e intracelulares também foram significativamente reduzidos com o tratamento dos três compostos (p<0,05). No estudo 3, a aplicação tópica 2 vezes ao dia dos ácidos cupressênico, diterpênico e caurenóico (500 ug/mL) promoveu a redução na incidência de cárie em superfície lisa e sulcai (p<0,05), além da diminuição na porcentagem de infecção por S. mutans UA159 pelos ácidos diterpênico e caurenóico, não sendo afetada a microbiota total dessas ratas. Desta brma, concluímos que os ácidos cupressênico, diterpênico e caurenóico isolados da M. laevigata e M. glomerata possuem potencial antimicrobiano, inibindo os fatores de virulência dos Streptococcus mutans e a cárie em modelo in vivo, demonstrando serem promissores agentes anti-cárie e antí-placa / Abstract: Considering the great use of plants as medicinal substances in the popular medicine, it is critical to investigate their biological and chemical properties in order to not anly help to enhance our understanding of the therapeutic potential of these natural products, but also how to make them more effective pharmacological agents. The development of therapeutic agents aimed at disrupting both colonization of the teeth by dental pathogens and the subsequent formation of dental plaque is one of the prime strategies to reduce the incidence of tooth decay. The hexanic fraction of the plants Mikania laevigata and Mikania glomerata showed antimicrobial activities and inhibit the adherence of mutans streptococci. The overall aim of this study was to evaluate the antimicrobial effect of the isolated compounds of the hexanic fractions of Mikania laevigata and Mikania glomerata (guaco) on mutans streptococci. Therefore, three studies were carried out. in study 1 ,the antimicrobial activity of the isolated compounds was assessed by determination of minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC) and inhibition of cell adherence (Adh) to glass surface of mutans streptococci. In study 2, the influence of the isolated compounds were evaluated on viability, development, polysaccharide composition and acidogenicity of S. mutans biofilms, on glucans production by purified glucosyltransferases (GTFs) adsorbed to hydroxyapatite beads, and on membrane-associated F-ATPase and glycolytic activities. In study 3, the influence of the isolated compounds on caries development in vivo was evaluated. The acids cupressenic, diterpenic and kaurenoic were the compounds most effective in inhibiting the growth of the bacterial strains tested (MIC 2.5-20 ug/ml and MBC 2.5-40 ug/ml) and adherence cells (1.25-5 ug/ml). These three compounds were tested on the concentration of 500 pg/ml on tne study 2, and showed antimicrobial activity reducing the viable cells and the dry-weight of the biofilm treated, and also reduced the soluble, insoluble extracellular and intracellular polysaccharide of this biofilms. The compounds were able to reduce the acid production on the biofilms (final pH between 6.4 and 5.8) and the activity of F-ATPase (28-40%). The activity of the GTF B on solution (50-60%) and on surface (50-80%) of hydroxyapatite was also reduced by the three compounds. In study 3, the topical application twice a day of cupressenic, diterpenic and kaurenoic acids (500 ug/ml) showed cariostatic effect on smooth-surface and sulcal caries, and also showing reduction of the percentage of Streptococcus mutans UA159 infection by diterpenic and kaurenoic acids (p<0.05), not showing differences on the total microbiology (p>0.05). In conclusion, the cupressenic, diterpenic and kaurenoic acids isolated from M. laevigata and M. glomerata have relevant antimicrobial activity and inhibit the virulence factors of mutans streptococci in vitro and in vivo, being promising anti-caries and anti-plaque agents / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:51:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:58:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / &#65279;A inoculação de sementes de leguminosas de grãos tais como soja [Glycine max. (L.)], feijão (Phaseolus vulgaris L.) e pastagens tem sido uma estratégia efetiva e conveniente para introduzir estirpes eficientes de Bradyrhizobium/Rhizobium em solos agrícolas sem histórico de cultivo anterior dessa cultura ou quando as estirpes ivas são ineficientes no processo biológico de aquisição de nitrogênio. Através do uso de substrato turfoso previamente esterilizado como veículo da bactéria, os efeitos ambientais adversos podem ser amenizados, pois este substrato atua diretamente, na sobrevivência da bactéria através do fornecimento de nutrientes. O Brasil requer que os substratos turfosos sejam pré-esterilizados através de radiação gama de cobalto-60 (60Co), sendo recomendada a dose de 50 kGy para uma efetiva eliminação de patógenos e saprófitas, que podem competir com a bactéria introduzida. Recentemente, a utilização de aceleradores de elétrons foi considerada uma nova alternativa de radiação para pré-esterilização da turfa, pois, por se constituir de processo oxidativo avançado, gera radicais altamente reativos, eficientes na eliminação de agentes contaminantes. Esta técnica é considerada ecologicamente mais segura que a radiação gama, além de ser um processo mais rápido. Há, porém, a característica de ter menor profundidade de penetração da radiação em relação ao 60Co. O presente estudo comparou o método usando doses crescentes de radiação gama por 60Co e por feixe de elétrons (0, 10, 20, 30, 40 e 50 kGy). Os dados experimentais (7, 14, 21 e 28 dias para a fase curta e 150, 180 e 210 dias para a fase longa de incubação) mostraram um elevado número de células da bactéria Rhizobium tropici CM-01 gusA+ inoculada em substratos turfosos submetidos aos dois processos de esterilização, sendo que ambos processos atenderam aos padrões mínimos requeridos pelas normas brasileiras (validade de 180 dias e presença acima de 1 x 108 células/g de substrato). Sob doses mais elevadas, acima de 40 kGy, o método por feixe de elétrons foi mais eficiente em eliminar actinobactérias, consideradas sérias antagonistas de bactérias inoculantes em turfas e que surgiram após 150 dias. Em um segundo estudo, usando o isolado CM-01 celB+ por um período de 30 dias, os resultados confirmaram a eficiência do método por feixe de elétrons na fase de crescimento bacteriano, mesmo para dose baixa de 10 kGy. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:35:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:04:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Muitas das proteínas de valor biomédico relevante são encontradas em baixas concentrações em suas fontes nativas. O alto nível de expressão de proteínas recombinantes em E. coli, muitas vezes gera o acúmulo de proteínas como agregados insolúveis no citoplasma e/ou periplasma da bactéria, denominados de corpos de inclusão (CI). A alta pressão tem sido amplamente utilizada no estudo da conformação das proteínas,ela modula as interações proteína-proteína e proteína-solvente através de mudanças no volume das mesmas, promovendo a entrada de água nas cavidades não expostas da molécula e promovendo hidratação e solubilização dos agregados. O presente trabalho teve como objetivo a renaturação de proteínas recombinantes expressas como CI em Escherichia coli usando alta pressão hidrostática como condição branda de dissociação dos agregados. As tiorredoxinas TsnC e TrxA, a proteína YbbN e a proteína comigratória com bacterioferritina (Bcp), todas de Xylella fastidiosa, foram estudadas neste trabalho. As condições de renaturação foram otimizadas, utilizando-se diferentes proporções do par redox, concentrações de GdnHCl, presença de aditivos e esquemas de descompressão. Para a quantificação e análise da eficácia do processo de renaturação das proteínas sob pressão foram utilizadas as técnicas de microscopia eletrônica de varredura dos CI e de SDS-PAGE, e ensaios de atividade enzimática das proteínas. A TsnC foi renaturada em Tris HCl 50 mM com proporção de 10GSH:1GSSG em concentração final de 10 mM, 0,75 M GdnHCl, na presença de 0,5 M de Triton-X e a pressão utilizada foi de 2,4 kbar por 1 hora e 30 minutos seguida de descompressão direta e incubação por 16 horas em pressão atmosférica. O rendimento final de obtenção de TsnC solúvel foi altíssimo, de até 89,9%. A renaturação de proteína YbbN, nunca antes descrita, foi obtida em tampão de renaturação Tris HCl 50 mM, na presença de 0,5 M de L-Arginina e a pressão utilizada foi de 2,4 kbar por 1 hora e 30 minutos seguida de descompressão direta e incubação por 16 horas em pressão atmosférica. A proteína YbbN, que apresentou atividade de tioredoxina, foi renaturada com rendimento de até 98% a partir da proteína insolúvel nos CI. Foi possível a solubilização da tiorredoxina TrxA e Bcp sob alta pressão hidrostática em tampão de renaturação Tris HCl 50 mM, utilizando diferentes proporções do par redox na concentração final de 10 mM e 1,5 M de GdnHCl, porém não foi possível obter a atividade biológicas destas proteínas. Mostramos também que a L-Arginina apresenta efeito auxiliar na solubilização dos CI induzida pela alta pressão, e ao mesmo tempo se mostrou altamente protetora contra a inativação da atividade da YbbN promovida pela incubação em altas temperaturas, o que sugere que a presença deste aminoácido pode ter alta aplicabilidade juntamente com a aplicação de altas pressões para elevar os rendimentos de renaturação de proteínas recombinantes a partir de CI. / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:54:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:07:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A saúde bucal, na maioria dos municípios brasileiros, constitui ainda um grande desafio aos princípios do Sistema Único de Saúde, principalmente no que se refere à universalização, à eqüidade do atendimento e alto custo envolvido na terapia restauradora. A procura pela descoberta de novos compostos metabólicos com atividade antibacteriana para a prevenção de doenças bucais e talvez com menores impactos a saúde e financeiros, seria muito importante para obtenção de um meio efetivo de controle da formação de um biofilme patogênico e da cárie dental. O objetivo deste trabalho é estudar a viabilidade biotecnológica do uso de venenos nativos de diferentes serpentes quanto à capacidade de inibir o crescimento de Streptococcus mutans, principal agente envolvido na cárie dental. Nossos resultados mostraram que os venenos das serpentes Bothrops moojeni e Bothrops jararacussu inibiram o crescimento de Streptococcus mutans e o componente responsável pela inibição parece ser a peróxido de hidrogênio. Apesar de ainda não totalmente conclusivos, os ensaios já realizados, permitem afirmar que venenos de serpentes são ferramentas importantes na inibição do crescimento de patógenos, especificamente daqueles envolvidos nas doenças cariogênicas. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:54:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:08:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O comércio de vegetais minimamente processados (VMP) tem crescido substancialmente nos últimos anos devido a sua conveniência, frescor e aparente salubridade. No entanto, o processamento mínimo não reduz as populações de microrganismos patogênicos para níveis seguros. A irradiação de alimentos é utilizada para estender a vida de prateleira e inativar patógenos presentes nos alimentos. Seu uso combinado com o processamento mínimo poderia aumentar a segurança e qualidade dos VMP. Dois diferentes métodos de detecção de alimentos irradiados, um biológico, o DEFT/APC, e outro bioquímico, o teste do cometa, foram aplicados a VMP com o objetivo de testar sua aplicabilidade na detecção do tratamento por radiação. O DEFT/APC é um método de varredura microbiológico baseado no uso da técnica de epifluorescência direta em filtro (DEFT) e da contagem padrão em placas (APC). O teste do cometa detecta o dano no DNA devido, por exemplo, a radiação ionizante. Amostras de acelga, agrião, alface, catalônia, couve, escarola, espinafre e repolho do comércio varejista foram irradiadas com 0,5kGy e 1,0kGy utilizando um irradiador de 60Co. O processamento por irradiação garantiu a redução de pelo menos dois ciclos logarítmicos nas populações de microrganismos aeróbios e psicrotróficos. Em geral, com o aumento das doses de radiação, as contagens DEFT se mantiveram similares independentemente do processamento por irradiação, enquanto as contagens APC diminuíram gradualmente. A diferença das duas contagens aumentou gradualmente com o incremento da dose em todas as amostras. Uma diferença entre o valor de DEFT e do APC maior a 2,0 log seria indicativa de que o VMP foi tratado por irradiação. O teste do cometa permitiu distinguir amostras não irradiadas das irradiadas, que mostraram diferentes tipos de cometas decorrentes da fragmentação do DNA. Tanto o método DEFT/APC quanto o teste do cometa foram satisfatoriamente utilizados como métodos de varredura para a detecção do tratamento por irradiação. / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:54:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:09:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 12709.pdf: 3501983 bytes, checksum: d0d74c465390f06fe4437cbb8a2991a5 (MD5) / Dissertacao (Mestrado Profissionalizante em Lasers em Odontologia) / IPEN/D-MPLO / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP; Faculdade de Odontologia, Universidade de Sao Paulo, Sao Paulo

Orientadores: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes, Morgana Eli Vianna / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-12T22:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Berber_VanessaBellocchio_D.pdf: 16111409 bytes, checksum: 6315b69f4dd46d14c10d7d9b11ded2cd (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Os objetivos deste estudo foram: identificar a microbiota dos canais radiculares (CR) e bolsas periodontais (BP) de dentes com polpas necrosadas, lesões periapicais, sangramento gengival e bolsas periodontais pelos métodos de cultura microbiológica e PCR; verificar a capacidade do preparo químico-mecânico (PQM) e do uso de medicação intracanal por 7 (clorexidina gel 2%) e 14 dias (hidróxido de cálcio e associação entre hidróxido de cálcio e clorexidina gel 2%) em reduzir a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL) no canal radicular e na bolsa periodontal associada e investigar possíveis associações entre as espécies bacterianas detectadas e entre microrganismos e sinais e sintomas clínicos. Amostras foram coletadas de CR (E1) e BP (P1) antes e após o PQM (E2, P2) e após o uso de medicação (E3, P3). Foram utilizados meio de transporte, cultura e incubação adequados e os microrganismos identificados por testes bioquímicos. O DNA bacteriano das amostras foi extraído e "primers" específicos para Treponema denticola, Treponema socranskii, Gemella morbillorum (Gm), Tannerella forsythia, Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa), Porphyromonas endodontalis, Porphyromonas gingivalis (Pg), Prevotella intermedia (Pi), Prevotella tannerae (Pt), Prevotella nigrescens (Pn), Fusobacterium nucleatum, Filifactor alocis, Parvimonas micra (Pm) foram utilizados para detecção destas espécies por PCR. Os resultados mostraram que as UFC/mL iniciais médias foram 17,33 x 10 6 nos CR e 17,93 x 108 nas BP, após o PQM foram 15,25 x 104 nos CR e 8,53 x 108 nas BP e após o uso das medicações intracanais 7,6 x 104 nos CR e de 3,88 x 108 nas BP. Pela cultura, os microrganismos mais encontrados nos CR foram Pi/Pn/Pt e Fn em 45% de E1, Pi/Pn/Pt (5%), P propionicum (5%), S salivarius (5%), M varians (5%) em E2, A naeslundii e P propionicum em 36,6% de E3. Nas BP, os mais encontrados foram Pg e Gm em 50% dos casos de P1, Pm em 62,5% de P2 e Fn em 73,3% de P3. Por PCR, nos CR e nas BP, em todos os momentos da terapia endodôntica, Pm foi o microrganismo mais frequente. Verificou-se que Pm, Td e Tf foram encontrados em maior número em P2 que em E2 e que Pe e Fn estavam mais presentes em P3 que em E3. Nas primeiras coletas não houve diferenças estatisticamente significantes. Concluiu-se que, os canais radiculares e as bolsas periodontais de dentes com comprometimento pulpar e bolsa periodontal apresentaram-se infectados com uma combinação de espécies de microrganismos formada principalmente por bactérias anaeróbias estritas e facultativas, grampositivas, o PQM foi o grande responsável pela redução dos microrganismos dos CR, correlações estatísticas positivas foram observadas entre a presença de sinais e sintomas de origem endodôntica e periodontal e algumas espécies bacterianas, e também entre as espécies, quaisquer das medicações intracanais testadas não foram capazes de alterar ou reduzir a microbiota da bolsa periodontal associada no período de 7 ou 14 dias, não houve diferenças de eficiência antimicrobiana entre as medicações intracanais utilizadas tanto no canal radicular como na bolsa periodontal no período estudado. / Abstract: The aims of this study were to investigate the microbiota of root canals (RC) and periodontal pockets (PP) from teeth with pulp necrosis, periapical lesion, gingival bleeding and periodontal pockets by culture and PCR; to verify the ability of chemo-mechanical preparation (CMP) and intracanal dressings (2% chorhexidine, calcium hydroxide and association of both medications) on reducing colony forming unit (CFU/mL) counting in the period of 7 or 14 days in the root canal and periodontal pocket; and to investigate possible associations among detected bacterial species and microorganisms and between signs and symptoms. Samples were collected from RC (E1) and PP (P1) before and after CMP (E2 and P2) and after the use of intracanal dressings (E3, P3). Adequate transport medium, culture, incubation and biochemical tests were used. DNA of samples was extracted and primers species-specific to Treponema denticola, Treponema socranskii), Gemella morbillorum (Gm), Tannerella forsythia (Tf), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa), Porphyromonas endodontalis (Pe), Porphyromonas gingivalis (Pg), Prevotella intermedia (Pi), Prevotella tannerae (Pt), Prevotella nigrescens (Pn), Fusobacterium nucleatum (Fn), Filifactor alocis (Fa), Parvimonas micra (Pm) were used to detect these species by PCR. The results showed that the average of initial CFU/mL was 17.33 x 10 6 in RC and 17.93 x 108 in PP, after CMP 15.25 x 104 in RC and 8.53 x 108 in PP and after the use of intracanal medications 7.6 x 104 in RC and 3.88 x 108 in PP. By culture, the most frequent microorganisms in RC were:Pi/Pn/Pt and Fn in 45% of the E1, Pi/Pn/Pt (5%), P propionicum (5%), S salivarius (5%), M varians (5%) in E2, A naeslundii and P propionicum in 36.6% of the E3. In PP, Pg and Gm were in 50% of P1 while Pm was the most isolated in P2 (62.5%) and Fn in P3 (73.3%). By PCR, in both sites, in all moments of the endodontic therapy, Pm was the mostly found microorganism. It was verified that Pm, Td and Tf were found in greater number in P2 than in E2; and Pe and Fn were more presented in P2 than in E2. There were no statistic differences in the initial samples. It was concluded that, RC and PP from teeth with endo-perio lesion were infected with a combination of microorganisms species, mainly strict and facultative anaerobe bacteria, grampositives; CMP was responsible for the mainly microbial reduction in root canals and the use of intracanal dressings in the established time did not achieve any antimicrobial effect in adjacent periodontal pockets, positive statistic correlations were noted between detected bacterial species and microorganisms and signs and symptoms, there were no statistic differences in the antimicrobial efficacy among the intracanal dressings in RC and PP in the studied period. / Doutorado / Endodontia / Doutor em Clínica Odontológica