Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Objetivos: Avaliar os mediadores inflamatÃrios e as alteraÃÃes motoras gastrintestinais no curso da mucosite intestinal experimental induzida por 5-FU. MÃtodos: Para avaliar as citocinas utilizamos camundongos balb-c ou c57/black (25-30g), tratados com IL-1Ra (100mg/Kg, i.p., diariamente) ou deficientes para IL-4 (IL-4 -/-) ou para IL-18 (IL-18 -/-). A fim de estudar a participaÃÃo de PAF e 5-LO, utilizamos o BN52021 (20mg/Kg, s.c., diariamente) ou camundongos deficientes para o receptor de PAF (PAF -/-) ou para 5-LO (5-LO -/-). Para avaliar a participaÃÃo de NO, animais receberam aminoguanidina (50mg/Kg, i.p., diariamente), a fim de estudar o papel da morte celular: utilizaram-se animais deficientes para FAS (FAS -/-). Todos os camundongos receberam 5-FU (450mg/Kg, i.p., dose Ãnica) ou salina. ApÃs 3 dias, os animais foram sacrificados e amostras do duodeno, do jejuno e do Ãleo foram obtidas para avaliaÃÃo morfomÃtrica, da atividade de MPO e para dosagem de citocinas. Para estudar as alteraÃÃes motoras gastrintestinais, ratos Wistar (250-350g) receberam 5-FU (150mg/Kg, i.p., dose Ãnica). ApÃs 1, 3, 5, 15 ou 30 dias, foram sacrificados e o duodeno, o jejuno e o Ãleo foram obtidos para avaliaÃÃo morfomÃtrica, para medida da atividade de MPO e para dosagem de GSH. Outro grupo de ratos recebeu salina glicosada + tecnÃcio (v.o). ApÃs 3 ou 15 dias, o estÃmago e segmentos do intestino (P1-P5) foram obtidos para avaliar esvaziamento gÃstrico (cintilografia). A resposta mecÃnica foi obtida utilizando-se um transdutor de forÃa isomÃtrico acoplado a um sistema de aquisiÃÃo de dados. Carbacol (10-10-10-4M) foi aplicado sobre mÃsculo liso do estÃmago ou do duodeno de ratos tratados ou nÃo com 5-FU. Resultados: Em Camundongos balb-c e c57/black, 5-FU induziu diminuiÃÃo na razÃo vilo/cripta no duodeno, jejuno e Ãleo, importante infiltrado neutrofÃlico e um aumento nas concentraÃÃes de TNF- α , IL-1 β , IL-6, KC. O tratamento com IL-1Ra (100mg/kg) reverteu à diminuiÃÃo da razÃo vilo/cripta no duodeno, jejuno e Ãleo, à infiltraÃÃo de neutrÃfilos e o aumento de TNF-α IL-1β, KC induzida por 5-FU. IL-4 -/- tiveram uma menor reduÃÃo da razÃo vilo/cripta no duodeno, jejuno e Ãleo em comparaÃÃo aos animais selvagens tratados com 5-FU, bem como apresentaram menor infiltrado neutrofÃlico e diminuiÃÃo de TNF-α, IL-1β, IL-6 e KC no duodeno. PAF -/- nÃo tiveram alteraÃÃes da razÃo vilo/cripta no duodeno, aumento na concentraÃÃo de IL-1β e KC com o tratamento com 5-FU. O tratamento com BN 52021 (20mg/kg) reverteu à diminuiÃÃo da razÃo vilo/cripta no duodeno de animais c57/black tratados. O tratamento com aminoguanidina (50mg/kg), bem como IL-18 -/-, 5-LO -/- e FAS -/- nÃo apresentaram diferenÃas significativas quando comparados com os camundongos selvagens em relaÃÃo a mucosite por 5-FU. Em relaÃÃo aos ratos, 5-FU (150mg/kg) induziu importante perda de peso, diminuiÃÃo da razÃo vilo/cripta, infiltrado neutrofÃlico e reduÃÃo dos nÃveis de GSH no duodeno, jejuno e Ãleo no 3 dia. No 15 dia apÃs o tratamento com 5-FU as alteraÃÃes encontradas foram restabelecidas. Encontrou-se significativo retarde no esvaziamento gÃstrico e no trÃnsito gastrintestinal em ratos tratados com 5-FU no 3 e 15 dias. Por fim, houve uma hipercontratilidade no mÃsculo liso do fundo gÃstrico e duodenal de ratos no 3 e 15 dia pÃs tratamento com 5-FU. ConclusÃo: 5-Fluorouracil induz mucosite intestinal em camundongos com a participaÃÃo de IL-1β, IL-4, PAF, tambÃm, induz mucosite intestinal em ratos associada a dismotilidade gastrintestinal que persiste com a resoluÃÃo da inflamaÃÃo

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / IntroduÃÃo: A mucosite intestinal (MI) à um efeito colateral comum e limitante da quimioterapia com irinotecano. Estudos sugerem a participaÃÃo de citocinas, como TNF-&#945;, IL-1&#946; e IL-18 na fisiopatologia da MI, alÃm de demonstrar que inibidores nÃo seletivos de citocinas, como pentoxifilina, atenuam a MI por irinotecano. O papel das citocinas està bem estabelecido no Ãmbito das doenÃas inflamatÃrias intestinais, inclusive com utilizaÃÃo de tratamentos visando inibir seletivamente componentes da casacata inflamatÃria, como, por exemplo, o anticorpo monoclonal anti-TNF&#945;, infliximabe, que tem um efeito benÃfico comprovado no tratamento da doenÃa de Crohn, artrite reumatÃide e espondilite anquilosante. Hà escassos estudos na literatura de terapia alvo anti-citocinas inflamatÃrias no contexto da mucosite intestinal induzida por quimioterÃpico. Objetivo: Avaliar o papel do Infliximabe sobre as alteraÃÃes inflamatÃrias e disfunÃÃo intestinal associados à MI induzida por Irinotecano. MÃtodos: Camundongos C57BL&#61487;6 foram divididos em grupos (n=5-9) e tratados por 4 dias com salina (5 ml&#61487;kg, i.p) ou irinotecano (75 mg&#61487;kg, i.p) ou prÃ-tratados com infliximabe (5 mg&#61487;kg, e.v, dose Ãnica) 1 hora antes da primeira injeÃÃo de irinotecano. O peso e mortalidade foram avaliados diariamente. No 5o dia avaliou-se a diarrÃia por escores, o leucograma e, apÃs sacrifÃcio, coletou-se o duodeno para dosagem da atividade de mieloperoxidase (MPO) e de IL-1&#946;, expressÃo de Ãxido nÃtrico sintase induzida (iNOS), anÃlise de escores histopatolÃgicos, morfometria e contratilidade in vitro ao carbacol. Resultados: Os animais tratados com irinotecano apresentaram mucosite intestinal, evidenciada por aumento significativo (p<0,05) nos escores de diarrÃia, diminuiÃÃo do comprimento e Ãrea do vilo, aumento da atividade de MPO, aumento no nÃvel tecidual de IL-1&#946; e de expressÃo de iNOS e hipercontratilidade da musculatura lisa duodenal, alÃm de terem apresentado leucopenia, quando comparado com o grupo tratado com salina. O grupo de animais que recebeu infliximabe previamente ao tratamento com irinotecano apresentou melhora significativa (p<0,05) nos parÃmetros inflamatÃrios avaliados (atividade de MPO, nÃvel tecidual de IL-1&#946;, expressÃo de iNOS), comparado com o grupo tratado apenas com irinotecano. Contudo, a perda ponderal, a mortalidade e a disfunÃÃo intestinal (diarrÃia e contratilidade intestinal in vitro) nÃo foram afetadas pelo tratamento com infliximabe (p>0,05). ConclusÃes: Os resultados mostram o proeminente efeito antiinflamatÃrio da terapia anti TNF-&#945; com infliximabe na MI induzida por irinotecano. Tal droga, no entanto, nÃo foi capaz de alterar a sobrevida e de proteger contra a disfunÃÃo na MI experimental por irinotecano. Adicionalmente, acentuou a leucopenia induzida pelo irinotecano, o que pode aumentar o risco de complicaÃÃes infecciosas. / IntroduÃÃo: A mucosite intestinal (MI) à um efeito colateral comum e limitante da quimioterapia com irinotecano. Estudos sugerem a participaÃÃo de citocinas, como TNF-&#945;, IL-1&#946; e IL-18 na fisiopatologia da MI, alÃm de demonstrar que inibidores nÃo seletivos de citocinas, como pentoxifilina, atenuam a MI por irinotecano. O papel das citocinas està bem estabelecido no Ãmbito das doenÃas inflamatÃrias intestinais, inclusive com utilizaÃÃo de tratamentos visando inibir seletivamente componentes da casacata inflamatÃria, como, por exemplo, o anticorpo monoclonal anti-TNF&#945;, infliximabe, que tem um efeito benÃfico comprovado no tratamento da doenÃa de Crohn, artrite reumatÃide e espondilite anquilosante. Hà escassos estudos na literatura de terapia alvo anti-citocinas inflamatÃrias no contexto da mucosite intestinal induzida por quimioterÃpico. Objetivo: Avaliar o papel do Infliximabe sobre as alteraÃÃes inflamatÃrias e disfunÃÃo intestinal associados à MI induzida por Irinotecano. MÃtodos: Camundongos C57BL&#61487;6 foram divididos em grupos (n=5-9) e tratados por 4 dias com salina (5 ml&#61487;kg, i.p) ou irinotecano (75 mg&#61487;kg, i.p) ou prÃ-tratados com infliximabe (5 mg&#61487;kg, e.v, dose Ãnica) 1 hora antes da primeira injeÃÃo de irinotecano. O peso e mortalidade foram avaliados diariamente. No 5o dia avaliou-se a diarrÃia por escores, o leucograma e, apÃs sacrifÃcio, coletou-se o duodeno para dosagem da atividade de mieloperoxidase (MPO) e de IL-1&#946;, expressÃo de Ãxido nÃtrico sintase induzida (iNOS), anÃlise de escores histopatolÃgicos, morfometria e contratilidade in vitro ao carbacol. Resultados: Os animais tratados com irinotecano apresentaram mucosite intestinal, evidenciada por aumento significativo (p<0,05) nos escores de diarrÃia, diminuiÃÃo do comprimento e Ãrea do vilo, aumento da atividade de MPO, aumento no nÃvel tecidual de IL-1&#946; e de expressÃo de iNOS e hipercontratilidade da musculatura lisa duodenal, alÃm de terem apresentado leucopenia, quando comparado com o grupo tratado com salina. O grupo de animais que recebeu infliximabe previamente ao tratamento com irinotecano apresentou melhora significativa (p<0,05) nos parÃmetros inflamatÃrios avaliados (atividade de MPO, nÃvel tecidual de IL-1&#946;, expressÃo de iNOS), comparado com o grupo tratado apenas com irinotecano. Contudo, a perda ponderal, a mortalidade e a disfunÃÃo intestinal (diarrÃia e contratilidade intestinal in vitro) nÃo foram afetadas pelo tratamento com infliximabe (p>0,05). ConclusÃes: Os resultados mostram o proeminente efeito antiinflamatÃrio da terapia anti TNF-&#945; com infliximabe na MI induzida por irinotecano. Tal droga, no entanto, nÃo foi capaz de alterar a sobrevida e de proteger contra a disfunÃÃo na MI experimental por irinotecano. Adicionalmente, acentuou a leucopenia induzida pelo irinotecano, o que pode aumentar o risco de complicaÃÃes infecciosas. / Introduction: Intestinal mucositis (IM) is a common limiting side effect of anticancer therapy with irinotecan. Previous studies have reported the involvement of cytokines, such as TNF-&#945;, IL-1&#946; e IL-18 in the pathogenesis of irinotecan-induced IM, besides demonstrating that nonselective inhibitors of cytokines such as pentoxifylline, attenuate chemotherapy-induced IM. The role of cytokines is well established in the context of inflammatory bowel disease. It is used in clinical practice treatments that target inflammatory cascade components, for example, the anti-TNF monoclonal antibody, infliximab, which has a beneficial effect in the treatment of Crohnâs disease, rheumatoid arthritis and ankylosing spondylitis. There is a lack of information regarding the effect of selective cytokine target therapy on anticancer drug toxicity. Aims: To investigate the protective role of a selective TNF-&#945; inhibitor, infliximab, on irinotecan-induced IM. Methods: C57BL&#61487;6 mice were divided into groups (n=5-9) and treated for 4 days with saline (5 mL/kg, i.p.) or irinotecan (75 mg/kg/4 days, i.p) or were given infliximabe (5 mg/kg, e.v, single dose) 1 hour before the first irinotecan injection. Body weight and mortality were assessed daily. On the 5th day the diarrhea was evaluated using scores and the blood was collected for white blood cell count (WBC). After euthanasia, samples of duodenum was collected for myeloperoxydase assay, tissue IL-1&#946; dosage, western blot (WB) of the inducible nitric oxide synthase, morphometric analysis and in vitro evaluation of duodenal contractility. Results: Irinotecan induced IM demonstrated by the significant (p<0,05) increase in diarrhea, decrease in length and area of the villi increased MPO activity, increased IL-1&#946; dosage and expression of iNOS and intestinal smooth muscle over-contractility when compared with saline treated group. The group treated with irinotecan also presented leucopenia, when compared with control group. The group treated with infliximab previously to irinotecan showed a significant improvement of inflammatory parameters (MPO activity, IL-1&#946;, expression of iNOS), when compared withn irinotecan-treated group. However, animal weight loss, mortality and gut disfunction (diarrhea and intestinal contractility) were not affected by infliximab treatment (p>0,05). Conclusion: The results suggest for the first time the proeminent anti-inflammatory effect of the target therapy anti-TNF-&#945; with infliximab on irinotecan-induced IM. However, such treatment did not alter the survival and did not protect against intestinal dysfunction in irinotecan-induced IM. Additionally accentuated leukopenia induced by irinotecan, which can increase the risk of infections. / Introduction: Intestinal mucositis (IM) is a common limiting side effect of anticancer therapy with irinotecan. Previous studies have reported the involvement of cytokines, such as TNF-&#945;, IL-1&#946; e IL-18 in the pathogenesis of irinotecan-induced IM, besides demonstrating that nonselective inhibitors of cytokines such as pentoxifylline, attenuate chemotherapy-induced IM. The role of cytokines is well established in the context of inflammatory bowel disease. It is used in clinical practice treatments that target inflammatory cascade components, for example, the anti-TNF monoclonal antibody, infliximab, which has a beneficial effect in the treatment of Crohnâs disease, rheumatoid arthritis and ankylosing spondylitis. There is a lack of information regarding the effect of selective cytokine target therapy on anticancer drug toxicity. Aims: To investigate the protective role of a selective TNF-&#945; inhibitor, infliximab, on irinotecan-induced IM. Methods: C57BL&#61487;6 mice were divided into groups (n=5-9) and treated for 4 days with saline (5 mL/kg, i.p.) or irinotecan (75 mg/kg/4 days, i.p) or were given infliximabe (5 mg/kg, e.v, single dose) 1 hour before the first irinotecan injection. Body weight and mortality were assessed daily. On the 5th day the diarrhea was evaluated using scores and the blood was collected for white blood cell count (WBC). After euthanasia, samples of duodenum was collected for myeloperoxydase assay, tissue IL-1&#946; dosage, western blot (WB) of the inducible nitric oxide synthase, morphometric analysis and in vitro evaluation of duodenal contractility. Results: Irinotecan induced IM demonstrated by the significant (p<0,05) increase in diarrhea, decrease in length and area of the villi increased MPO activity, increased IL-1&#946; dosage and expression of iNOS and intestinal smooth muscle over-contractility when compared with saline treated group. The group treated with irinotecan also presented leucopenia, when compared with control group. The group treated with infliximab previously to irinotecan showed a significant improvement of inflammatory parameters (MPO activity, IL-1&#946;, expression of iNOS), when compared withn irinotecan-treated group. However, animal weight loss, mortality and gut disfunction (diarrhea and intestinal contractility) were not affected by infliximab treatment (p>0,05). Conclusion: The results suggest for the first time the proeminent anti-inflammatory effect of the target therapy anti-TNF-&#945; with infliximab on irinotecan-induced IM. However, such treatment did not alter the survival and did not protect against intestinal dysfunction in irinotecan-induced IM. Additionally accentuated leukopenia induced by irinotecan, which can increase the risk of infections.

nÃo hà / A mucosite oral (MO) à um efeito colateral freqÃente e dose limitante da terapia do cÃncer, caracterizada por intensa reaÃÃo inflamatÃria na mucosa e formaÃÃo de Ãlceras na cavidade orofarÃngea. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da atorvastatina (ATV), droga utilizada para reduzir os nÃveis sÃricos de colesterol e que tem atividade antiinflamatÃria, na mucosite oral induzida por 5-fluorouracil (5-FU) em hamsters Golden Sirian. A mucosite oral foi induzida pela administraÃÃo intraperitoneal (i.p.) de 5-FU no 1 e 2 dias do experimento (60 e 40 mg/kg, respectivamente), com subseqÃentes escoriaÃÃes na mucosa jugal, no quarto dia. Os animais foram tratados intraperitonealmente (i.p.) com ATV 1, 5 ou 10 mg/kg ou salina ou salina/etanol 5% vol/vol 30 minutos antes de cada injeÃÃo do 5-FU e diariamente por 5 ou 10 dias. Os animais foram sacrificados no 5 ou 10 dia e amostras de mucosa jugal e dos principais ÃrgÃos vitais foram coletados para anÃlise histopatolÃgica. A determinaÃÃo dos nÃveis de TNF-&#945;, IL-1&#946;, nitrito, grupos sulfidrilas nÃo proteicos (NP-SH), ensaio da mieloperoxidase (MPO), imunohistoquÃmica para TNF-&#945;, Ãxido nÃtrico sintase induzida (iNOS), NF-KB-p50, NF-kB-p50 NLS (sequÃncia de localizaÃÃo nuclear) e a expressÃo do NF-kB-p50 por Western Blot foram outros parÃmetros avaliados em amostras coletadas da mucosa jugal dos animais. O sangue foi coletado para leucograma, anÃlise dos parÃmetros bioquÃmicos e anÃlise da bacteremia. Atorvastatina nas doses de 1 e 5 mg/kg reduziu o dano na mucosa e a inflamaÃÃo, bem como os nÃveis de citocinas, nitrito e a atividade da MPO no 5 e 10 dia da MO. Ademais, atorvastatina 1 e 5 mg/Kg diminuiu a marcaÃÃo imunohistoquÃmica para TNF-&#945;, NOSi, NF-kB-p50, NF-kB-p50 NLS, bem como a expressÃo do NF-kB-p50 na mucosa jugal dos hamsters submetidos a MO, no 5 dia. ATV 1 mg/Kg aumentou os nÃveis de NP-SH na mucosa jugal dos animais, quando comparado com os grupos 5-FU no 10 dia da MO. A associaÃÃo de ATV 5 mg/Kg e 5-FU diminuiu a taxa de sobrevida, amplificou a leucopenia dos animais, aumentou os nÃveis sÃricos de transaminases e causou lesÃo hepÃtica. NÃs tambÃm detectamos a presenÃa de bacilos Gram negativos no sangue de 100% dos animais tratados com ATV 5mg/Kg + 5-FU. Esses resultados sugerem que a atorvastatina previne o dano na mucosa oral e a inflamaÃÃo associada com MO induzida por 5-FU, entretanto a combinaÃÃo de altas doses de ATV com 5-FU induz hepatotoxicidade, amplificaÃÃo da leucopenia e bacteremia, que merecem atenÃÃo e futuros estudos em humanos. / Oral mucositis (OM) is a frequent side effect and dose-limiting of cancer therapy, characterized by intense inflammatory mucosal reaction and formation of ulcers in oropharyngeal cavity. The aim of this study was to evaluate the effect of atorvastatin (ATV) â cholesterol lowering drug with anti-inflammatory activity - in oral mucositis induced by 5-fluorouracil (5-FU) in Golden Sirian hamsters. Oral mucositis was induced by intraperitoneal (i.p.) administration of 5-FU in the first and second days of experiment (60 and 40 mg/kg i.p., respectively), with subsequent excoriations of the cheek pouch mucosa on the fourth day. The animals were treated by intraperitoneal route (i.p.) with ATV 1, 5 or 10 mg/kg or saline or saline and 5% vol/vol ethanol 30 min before 5-FU injection and daily for 5 or 10 days. The animals were sacrificed on the 5th or 10th day and samples of cheek pouches and major vital organs were removed for histopathological analysis. The determination of TNF-&#945;, IL-1&#946;, nitrite, non-protein sulfhydryl group (NP-SH) levels, myeloperoxidase (MPO) assay, immunohistochemistry for TNF-&#945;, induced nitric oxide synthase (iNOS), NF-kB-p50, NF-kB-p50 NLS and the expression of NF-kB-p50 by Western Blot were other parameters evaluated in the samples collected from the oral mucosa of animals. Blood was collected for a leukogram, analysis of biochemical parameters and analysis of bacteremia. Atorvastatin at doses of 1 and 5 mg/kg reduced mucosal damage and inflammation, as well as the levels of cytokines, nitrite, and myeloperoxidase activity on the 5th and 10th day of OM. Moreover, ATV 1 and 5 mg/kg decreased the immunohistochemical staining for TNF-&#945;, iNOS, NF-kB-p50, NF-kB-p50 NLS and expression of NF-kB-p50 of the cheek pouch mucosa on the 5th day of OM. ATV at 1 mg/kg increased cheek pouch NP-SH when compared to 5-FU groups on the 10th day of OM. The association of ATV 5 mg/kg and 5-FU decreased the survival rate, amplified the leukopenia of animals, increased transaminase serum levels and caused liver lesions. We also detected the presence of Gram negative bacillus in the blood of 100% of the animals treated with ATV 5 mg/kg + 5-FU. These results suggest that atorvastatin prevent mucosal damage and inflammation associated with 5-FU-induced OM, but the association of a higher dose of ATV with 5-FU induced hepatotoxicity, amplified leucopenia and bacteremia, which deserves attention and further research in humans.

A Mucosite Oral (MO) é uma consequência debilitante do tratamento oncológico, que pode ser tratada com o uso do laser de baixa potência (LBP). Entretanto, ainda não há consenso na literatura a respeito de parâmetros dosimétricos para o reparo da mucosa oral. Dessa forma, o objetivo do estudo foi comparar diferentes protocolos com laser de baixa potência (FLBP) para o tratamento da MO, através de análises clínicas e histológicas. Quinze hamsters foram usados, em um modelo de indução de MO por 5-Fluorouracil (5-FU) e ranhuras superficiais na mucosa oral, com 7 dias de acompanhamento clínico. Os animais foram divididos em cinco grupos: Controle (C), que recebeu apenas anestesia e o veículo do quimioterápico, Controle-Quimioterapia (CQ) que recebeu anestesia, 5-FU e ranhuras, Laser Protocolo 1 (L1) que recebeu o mesmo do grupo CQ + FLBP 6 J/cm²/0,24 J (um ponto), Laser Protocolo 2 (L2) o mesmo do grupo CQ + FLBP 25 J/cm²/1 J (um ponto) e Laser Protocolo 3 (L3), o mesmo do grupo CQ + FLBP 6 J/cm²/0,96 J (4 pontos de 0,24J). O laser foi utilizado em ?=660 nm, com área do spot de 0,04 cm² e 40 mW de potência. O melhor protocolo de FLBP para manter os graus de MO mais baixos, em relação ao grupo CQ, foi o L1, seguido dos protocolos L2 e L3. Os resultados histológicos demonstraram padrão semelhante entre os grupos L1, L2 e C, com alguns vasos sanguíneos e a presença de um fino epitélio de aspecto contínuo no dia 7. Nossos resultados sugerem que o modo de aplicação do LBP e a energia entregue por área pode interferir na reparação da MO. / Oral mucositis (OM) is a dose-limited debilitating consequence from cancer treatment that could be treated with low level laser therapy (LLLT); however, there is no consensus about its dosimetric parameters for oral mucosa healing. Thus, the aim of this study is to compare different LLLT protocols on the treatment of OM, through clinical and histological analysis. Fifteen hamsters were used, in an induced model of OM by 5-Fluorouracil (5-FU) and superficial scratching in oral mucosa, in seven days of follow-up. The animals were divided into 5 groups: Control (C) which received only anesthesia and chemotherapic vehicle; Control-Chemotherapy (Ch) which received anesthesia, 5-FU and scratches; Laser Protocol 1 (L1) the same as Ch group + LLLT 6 J/cm²/0.24J (one point); Laser Protocol 2 (L2) the same as Ch group + LLLT 25J/cm²/1J (one point); and Laser Protocol 3 (L3) the same as Ch group + LLLT 6 J/cm²/0.96 J (4 points of 0.24J). The laser that was used has ?=660 nm, 0.04 cm² of spot area and 40 mW of power. The best LLLT protocol to maintain lowest OM levels compared to Ch group was L1, followed by L2 and L3. Histological results demonstrated a similar pattern among L1, L2 and C groups, with some blood vessels presence and continuous aspect of a thin epithelium, on day 7. Our results suggest that the application mode of LLLT and the energy delivered per area could interfere in the oral mucositis healing.

Considerando a mucosite oral (MO) e a hipofunção das glândulas salivares (HGS) consequências debilitantes da quimioterapia (QT), este trabalho teve como objetivo induzir, em hamsters, MO e HGS, através do quimioterápico 5- Fluorouracil (5-FU), e comparar, através de análises clínicas, bioquímicas e histológicas, diferentes fototerapias no tratamento da MO, assim como o efeito do laser no tratamento da HGS. Cento e oitenta animais foram divididos em dois grupos, controle e experimental, onde, o grupo controle foi subdividido em grupo C, o qual recebeu somente anestesia/veículo de diluição do quimioterápico e o CQ, o qual recebeu anestesia/quimioterapia e indução da MO. O grupo experimental foi também subdividido em grupo L: com indução de MO e tratamento com LED, 630nm, 1,2J/cm2; LA: MO e tratamento com laser de alta potência (LAP), 808nm, 10J/cm2; LB: MO e tratamento com laser de baixa potência (LBP), 660nm, 6J/cm2 e o LG: sem MO e tratamento com LBP, 780nm, 5J/cm², na região das glândulas salivares (GS) submandibulares (GSSM) e sublinguais GSSL). A MO foi induzida através de ranhuras após QT e foi avaliada, clinicamente, através de escalas específicas. Os animais foram sacrificados após 5, 7 e 10 dias de experimento e a mucosa oral e as GS removidas para análises bioquímicas (TNF- e análise de proteína total, LDH e parâmetros do sistema antioxidante, respectivamente) e histológicas (análise por microscopia de luz e imuno-histoquímica para as amostras de mucosa, e por microscopia de luz, eletrônica de transmissão e imunocitoquímica para as amostras de GS). Após análises estatísticas, os resultados clínicos, bioquímicos e histológicos mostraram que os tratamentos com LBP e LED foram eficazes no tratamento da MO, com diminuição da concentração de TNF- no dia 7 (p<0.05) e completa cicatrização das lesões ao termino do experimento, com maior formação de tecido de granulação e angiogênese. Além disso, a expressão de citoqueratina 10, analisada por imunohistoquímica, apresentou-se menos intensa comparada ao grupo CQ. O LAP não prejudicou a cicatrização final da MO quando comparada ao grupo CQ. O LBP também se mostrou eficaz para a HGS causada pelo 5-FU, uma vez que os parâmetros estudados para o grupo LG foram similares para os animais do grupo C na maior parte dos tempos experimentais. A HGS do grupo CQ foi representada por importantes alterações morfológicas, estruturais e bioquímicas, como a atrofia das unidades secretoras terminais, aumento do estroma glandular na GS sublingual e alterações na expressão de EGF, NGF e PIP2 nas GSSM, assim como alteração na expressão de mucina e p16 nas GSSL. De acordo com as análises bioquímicas, foram observadas alterações na atividade das enzimas antioxidantes catalase, peroxidase e superóxido dismutase e da atividade da enzima lactato desidrogenase (p<0.05) tanto para a GSSM quanto para a GSSL. Com base nos resultados, podemos concluir que as fototerapias com LBP e LED diminuem a severidade da MO por acelerar a reparação tecidual e diminuir o processo inflamatório, assim como o LBP é eficaz no tratamento da HGS induzida pelo quimioterápico 5-FU. / Considering oral mucositis (OM) and salivary glands hipofunction (SGH) debilitating consequences of chemotherapy (CT), the aim of this study was to compare, through clinical, biochemical and histological analysis, different photherapies on the treatment of OM and SGH induced by injections of the chemotherapic agent 5-Fluorouracil in hamsters. One-hundred-eighty animals were divided into two groups, control and experimental, which were subdivided in group C: anesthesia/chemotherapy vehicle and CQ: anesthesia, chemotherapy/OM induction, for control group and in group L: anesthesia, chemotherapy/OM and phototherapy with LED (1,2 J/cm², 1.2 J of total energy), LA: anesthesia, chemotherapy/OM and phototherapy with highpower laser (HPL) (10 J/cm², 10 J of total energy), LB: anesthesia, chemotherapy/OM and phototherapy with low-power laser (LPL) (6 J/cm², 1.2 J of total energy) and LG: anesthesia, chemotherapy and phototherapy with LPL (5 J/cm2) on salivary gland (SG) (submandibular and sublingual) areas for experimental group. The OM was induced by slots on oral mucosa, which were performed after chemotherapy treatment. The OM was analyzed through specific clinical scales and after 5, 7 and 10 days, the animals were sacrificed and the oral mucosa and submandibular and sublingual glands removed for biochemical (TNF- and total protein concentration, LDH and antioxidant system parameters, respectively) and histological (light microscopy and immune-histochemical for OM samples, and light microscopy, electronic transmission and immunocitochemical for SG samples) analysis. After statistical analysis, the clinical, biochemical and histological results showed Led and LPL as efficient treatments for OM, with decrease of TNF- concentration on day 7 (p<0.05) and complete lesions healing on last day of experiment, showing increase of granulation tissue and new blood vessels formation. In agreement, the citokeratin 10 expression by immunehistochemistry, showed less intensity when was compared with CQ group. The HPL had no interference on OM final healing in comparison with CQ group. The LPL also showed good results on treatment of SGH induced by 5- FU. The SGH on CQ group included important morphological, structural and biochemical changes, as acinar atrophy, increase of glandular stroma on sublingual glands and important changes for EGF, NGF and PIP2 expression on submandibular glands, and for mucin and p16 gene expression on sublingual glands. Furthermore, the biochemical analysis showed changes on antioxidant enzime system activity, catalase, peroxidase and superoxide dismutase, and also for dehidrogenase lactate activity (p<0.05). The results of the present study suggest the phototherapies with LPL and LED where efficient on decrease of OM severity, accelerating tissue repair and decreasing the inflammatory process, as well as, the LPL efficient as treatment of SGH induced by 5-FU.

Orientador: Márcio Ajudarte Lopes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T15:56:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gonzalez-Arriagada_WilfredoAlejandro_D.pdf: 1774961 bytes, checksum: b24f3765bd65d083c27d09fc2ffbd39b (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A radioterapia causa alterações na composição salivar e as proteínas PLUNC participam na resposta imune inata da cavidade oral. O objetivo desse estudo foi verificar se a radioterapia é capaz de modificar a expressão de PLUNC salivar e se essas proteínas estão associadas com os efeitos colaterais. MATERIAIS E MÉTODOS: Foi coletada saliva não estimulada de 65 voluntários (45 pacientes com câncer e 20 controles). No grupo de estudo a coleta foi realizada uma semana antes do início da radioterapia, no meio do tratamento e uma semana após o término. A expressão de SPLUNC1 e SPLUNC2A foi detectada por western blot, e foi analisada com os dados clínico-patológicos e efeitos colaterais. RESULTADOS: Foi notada uma redução do fluxo salivar durante e após o término da radioterapia, sendo mais acentuada nos pacientes que foram submetidos a radioterapia envolvendo a região facial. O campo de radiação facial foi correlacionado com os efeitos colaterais, principalmente com a presença (p=0,0110) e intensidade (p=0,0143) de mucosite. SPLUNC1 e SPLUNC2A foram detectadas na saliva dos pacientes sem tratamento em concentrações variáveis. O grupo de estudo mostrou níveis de SPLUNC2A significantemente maiores que o grupo controle, enquanto SPLUNC1 não mostrou diferenças. A concentração de PLUNC foi modificada pela radioterapia, observando diminuição dos níveis de SPLUNC2A na sua forma glicosilada (p<,0001) e aumento dos níveis de SPLUNC1 (p=0,0081) na segunda e terceira coletas. A única associação entre efeitos colaterais da radioterapia e PLUNC foi a presença (p=0,0363) e intensidade (p=0,0500) da mucosite com maiores níveis SPLUNC1. CONCLUSÕES: O presente estudo reportou que os níveis de SPLUNC1 e SPLUNC2A glicosilada são afetados pela radioterapia, sugerindo que essas proteínas podem ter importância no microambiente oral dos pacientes irradiados na cabeça e pescoço / Abstract: Radiotherapy causes alteration in saliva composition and PLUNC proteins participate in innate immunity of the oral cavity. The aim of this study was to verify if radiotherapy is able to modify the salivary PLUNC expression and if they are associated with radiotherapy side-effects. MATERIALS AND METHODS: Unstimulated whole-mouth saliva of 65 voluntaries (45 cancer patients and 20 controls) was collected. In the study group the collection was performed one week before the beginning of radiotherapy, in the middle of the treatment and one week after finishing. SPLUNC1 and SPLUNC2A expression were detected by western blotting and was analyzed with clinicopathological data and radiotherapy side-effects. RESULTS: Reduction of salivary flow rates was observed during and after conclusion of radiotherapy, being more accentuated in patients who underwent radiotherapy involving the facial region. Facial radiation field was correlated with collateral effects, mainly with the presence (p=0.0110) and severity (p=0.0143) of mucositis. SPLUNC1 and SPLUNC2A were detected in saliva of patients without treatment in variable concentrations. The study group showed levels of SPLUNC2A significantly higher than the control group, while SPLUNC1 did not show differences. Concentration of PLUNC was modified by radiotherapy, observing decreasing of glycosilated form of SPLUNC2A levels (p<.0001) and increasing of SPLUNC1 levels (p=0.0081) in the second and third collections. The only association between collateral effects of radiotherapy and PLUNC was the presence of mucositis (p=0.0363) and its severity (p=0.0500) with higher levels of SPLUNC1. CONCLUSIONS: The present study reported that levels of SPLUNC1 and glycosilated SPLUNC2A are affected by the radiotherapy, suggesting that these proteins may have importance in the oral microenvironment of irradiated head and neck cancer patients / Doutorado / Estomatologia / Doutor em Estomatopatologia

Introduction: Oral mucositis is an inflammatory and frequently ulcerative side effect of cancer therapy, which has been identified by patients as the most debilitating side effect of their treatment. Mucositis is a dose limiting toxicity which exerts a substantial clinical and economic impact and negatively affects patient quality of life. The patient experience of mucositis is under-reported in the literature. To date, no interventions have been identified that have proven successful in the prevention of mucositis for patients receiving all types of therapy. Vitamin E has shown conflicting results in clinical trials. This thesis combines appraisal of the literature and empirical research,and uses lessons learned from previous studies together with the results of a feasibility study to identify a best practice model for future trials. Methods: The Cochrane risk of bias (ROB) instrument was used to assess the ROB in the studies included in the Cochrane prevention review. A sensitivity analysis was conducted after studies assessed at unclear or high risk of overall bias were excluded. A systematic review of assessment instruments was conducted which identified 50 instruments. Consideration of the appropriateness of these instruments for the use in a clinical trial for the prevention of mucositis was based on the practicality, comparability, and reproducibility, and the impact of these instruments on patients. Three of these instruments were chosen for use in a clinical trial of adults undergoing stem cell transplant. Finally, a feasibility study was designed, developed and conducted which investigated vitamin E for the prevention of mucositis in patients undergoing conditioning for bone marrow transplantation. Through lessons learned from previous studies, consultations with medical professional, the MHRA, ethics committee and suppliers, a protocol was developed for a double blind RCT. The process of gaining MHRA and ethical approval, and the repackaging of intervention and placebo products to meet MA-IMP requirements are described. Results: 130 articles were assessed for risk of bias. Only ten studies were assessed as being at low overall risk of bias. Blinding of outcome assessors and adequate allocation concealment were identified to be important considerations in the planning of future studies. Although only nine patients were recruited into the feasibility study, a number of issues affecting the design and conduct of future trials were identified. Recruitment in particular was identified to be problematic. Strategies for overcoming this problem in future trials were discussed. The methods of blinding and allocation concealment employed were found to be feasible for use in future trials. Expected adverse events patients undergoing stem cell transplantation were also reported. Conclusion: Further studies are required to investigate interventions for the prevention of mucositis. It is of upmost importance that these trials are rigorous in both their methodology and subsequent reporting in order to elicit the maximum benefit for patients taking part in clinical trials, and future patients undergoing therapy for cancer.

Um dos maiores desafios da Implantodontia é manter a osseointegração e a saúde dos tecidos peri-implantares após a instalação da prótese. Para que uma reabilitação sobre implantes tenha longevidade é necessário que se realize a manutenção da saúde dos tecidos peri-implantares. Existe uma relação direta entre o acúmulo de biofilme e a presença da inflamação desses tecidos, denominada mucosite. Essa condição pode evoluir para uma peri-implantite. A proposta deste estudo foi encontrar uma solução preventiva às doenças peri-implantares, através do controle do biofilme. Avaliou-se a ação antibacteriana de três tipos de revestimentos nanoestruturados com prata aplicados à superfície de discos de titânio frente a cepas de microrganismos peri-implanto-patogênicos. Após determinado o melhor revestimento, analisou-se, também, se a quantidade de prata (3 ou 6 camadas) melhorava sua ação antimicrobiana. Foram confeccionados discos de titânio divididos em 4 grupos: titânio sem deposição (controle), titânio com deposição de solução coloidais de prata e sílica (Si02), titânio com deposição de solução coloidal hidrotermalizada de prata e dióxido de titânio (TiAg) e titânio com deposição de solução hidrotermalizada somente com dióxido de titânio (TiAa). Testou se a efetividade da atividade antimicrobiana dos revestimentos estudados por meio da contagem das colônias bacterianas, encontradas na superfície das placas de ágar sangue. Para permitir uma contagem correta do crescimento das colônias, realizou se diluição seriada e, após incubação a 37°C em anaerobiose, a contagem do número de colônias e, posteriormente, o cálculo das unidades formadoras de colônia (UFC/mL). Após determinação do melhor revestimento, foram desenvolvidos biofilmes monoespécie sobre discos de titânio com 3 e 6 camadas do revestimento SiO2, além dos grupos controle positivo (C.positivo) e negativo (C.negativo), utilizando as cepas Streptococcus gordonii. A atividade microbiana nos biofilmes foi determinada pelo método de XTT. Utilizou-se três discos de cada grupo por teste (triplicata) e realizado a leitura em espectrofotômetro à 450 nm e 492 nm. Os resultados obtidos com cepa de A. actinomycetemcomitans, apresentaram diferença estatística (p<= 0,01) entre o grupo controle (branco) e os grupos teste. Observou-se um maior número de bactérias A.a na superfície branca quando comparado com as superfícies nanoestruturadas com prata, sendo que o grupo SiO2 foi o que apresentou melhor resultado. Notou-se, também, que houve uma maior quantidade da bactéria P.gingivalis na superfície dos discos brancos quando comparado com os grupos com revestimentos nanoestruturados com prata. As bactérias S.aureus e F.nucleatum , porém, não apresentaram redução nos discos com filmes nanoestruturados quando comparados ao disco sem revestimento. Os discos com 6 camadas do revestimento SiO2 apresentaram eficiência semelhante a clorexidina 0,12%, na redução do biofilme da S.gordonii. Conclui-se que os revestimentos nanoestruturados com partículas de prata foram efetivos na redução de UFC/ml das bactérias A. actinomycetemcomitans e P.gingivalis, com o melhor resultado observado com revestimento SiO2. A concentração da prata interferiu positivamente nos resultados com a bactéria S.gordonii. / One of implantology\'s major challenge is to maintain the osseointegration and health of the peri-implant tissues after the installation of the prosthesis. To ensure implant rehabilitation\'s longevity it is necessary to maintain the health of the peri-implant tissues. There is a direct relationship between the accumulation of biofilm and the presence of inflammation of these tissues, called mucositis. This condition can progress to peri-implantitis. The purpose of this study was to find a preventive solution to peri-implant diseases through biofilm control. For this, the antibacterial action against strains of peri-implant-pathogenic of three types of nanostructured coatings with silver applied to the surface of titanium discs microorganisms was evaluated. After determining the best coating, it was also analyzed whether the amount of silver (3 or 6 layers) improved its antimicrobial action. Titanium disks were divided into 4 groups: titanium without deposition (control), titanium with deposition of colloidal solution of silver and silica (SiO2), titanium with deposition of colloidal hydrothermalized solution of silver and titanium dioxide (TiAg) and titanium with deposition of a hydrothermal solution only with titanium dioxide (TiAa). The effectiveness of the coatings was tested by counting the bacterial colonies found on the surface of the blood agar plates. In order to allow a correct colony count, a serial dilution was performed and, after incubation at 37 ° C in anaerobiosis, counting the number of colonies and, later, calculating the colony forming units (CFU / mL). After determination of the best coating, monospecies biofilms were prepared on 3 and 6 layer titanium discs of the SiO2 coating, in addition to the positive control (C.positive) and negative (negative) groups, using Streptococcus gordonii strains. The microbial activity in biofilms was determined by the XTT method. Three disks of each group were used per test (triplicate) and the spectrophotometer read at 450 nm and 492 nm. The results obtained with A. actinomycetemcomitans strain presented a statistical difference (p<=0.01) between the control group (blank) and the test groups. A higher number of A.a bacteria was observed on the blank surface when compared to the nanostructured surfaces with silver, and the SiO2 group showed the best results. It was also noted that there was a greater amount of P.gingivalis bacteria on the surface of the blank discs when compared to the groups with nanostructured coatings with silver. The bacteria S. aureus and F. nucleatum, however, did not present reduction in the discs with nanostructured films when compared to the disc without coating. The 6- layer discs of the SiO2 coating presented similar efficiency to 0.12% chlorhexidine in reducing the S. gordonii biofilm. We concluded that nanostructured coatings with silver particles were effective in reducing CFU/ml of A. actinomycetemcomitans and P.gingivalis bacteria and the best result was observed with SiO2 coating. The concentration of silver interfered positively decreasing S.gordonii bacteria number.

A radioterapia tem importante aplicação clínica no tratamento das neoplasias malignas de cabeça e pescoço. A mucosite oral causada pelo efeito das radiações ionizantes, nos tecidos normais, manifesta-se como processo inflamatório reativo, com alta prevalência e diferentes graus de envolvimento tecidual. Os avanços alcançados com os laseres de baixa potência, assim como o uso de alguns fármacos, indicam a possibilidade de adoção de uma estratégia eficaz na terapia da mucosite oral. O presente estudo teve como objetivo avaliar a aplicação do laser de baixa potência associado ou não ao uso de antimicrobiano tópico (clorexidina gel 0,2%) no tratamento da mucosite oral. Quatorze pacientes portadores de neoplasia maligna na região de cabeça e pescoço, com indicação de tratamento radio e ou radioquimioterápico foram alocados em dois grupos: Grupo I: laser e Grupo II: laser e clorexidina. Os pacientes foram submetidos a tratamento profilático e terapêutico durante oito semanas. O grau de severidade da mucosite foi avaliado pelo método da OMS e a dor pela escala visual analógica (EVA). Os resultados mostraram que não houve diferença significativa entre a aplicação do laser isolado ou associado ao uso do antimicrobiano tópico. A laserterapia promoveu redução da dor e do grau de severidade da mucosite oral induzida pela radioterapia. Novos estudos devem ser realizados com a finalidade de serem estabelecidos protocolos padronizados e efetivos na abordagem terapêutica da mucosite oral. / Radiotherapy has an important clinical role in the treatment of the malignant tumors of head and neck. Oral mucositis induced by radiotherapy is a reactive inflammatory process of the oral mucosae with high prevalence and different degrees of tissue involvement. The advances reached with low power lasers devices, as well as the use of some medicines, indicate the possibility of adoption of an efficient strategy in handling with the oral mucositis. The aim of the present study was to evaluate the application of the low power laser associated or not with topical antimicrobials use in oral mucositis treatment. Fourteen patients with head and neck cancer undergoing radiotherapy, with or not associated chemotherapy, were located in two groups: Group I: laser and Group II: laser and clorexidine. All the patients were submitted to prophylactic and therapeutical treatment during eight weeks. The grade and severity of mucositis was evaluated using the WHO scale and pain was measured by visual analogue scale (VAS). The study showed that there is not significant difference between the use of laser application only or associated with topical antimicrobials. Lasertherapy promoted decrease of the pain and the severity grade of oral mucositis induced by radiotherapy. New studies must be developed in order to establish standardized and effective protocols in oral mucositis management.

Submitted by Michele Mologni (mologni@unoeste.br) on 2018-11-27T17:31:18Z No. of bitstreams: 1 Carolini Rossetti Cervini.pdf: 405222 bytes, checksum: 83a6122ca8a8ad6a37bff5bf733a0373 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-27T17:31:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carolini Rossetti Cervini.pdf: 405222 bytes, checksum: 83a6122ca8a8ad6a37bff5bf733a0373 (MD5) Previous issue date: 2017-09-27 / . / .