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Caracterização molecular de isolados de Trypanosoma cruzi obtidos de mulheres durante a fase crônica da doença de Chagas

Avelar, Juliana Boaventura 29 February 2008 (has links)
Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Juliana Boaventura.pdf: 941307 bytes, checksum: 439636680eb32ef1d8b5574e0286aa19 (MD5) Previous issue date: 2008-02-29 / Chagas disease is a zoonotic disease caused by a protozoan plagued called Trypanosoma cruzi, it is a particular problem in Latin America, where it is estimated that 12 to 14 million people are infected. The populations of Trypanosoma cruzi can be divided into two major groups, the Trypanossoma cruzi I (TCI) and Trypanossoma cruzi II (TCII), the last being more heterogeneous and divided into five subgroups TCIIa, TCIIb, TCIIc, TCIId and TCIIe However, little is known of epidemiological and clinical implications of these ratings. The frequency of vertical transmission of Chagas disease can vary from 1.6 to 18.5% in accordance with the region and the methodology used in the studies. The aim of this study was to genetic characterization of 30 isolates of T. cruzi through the blood of patients with Chagas disease in the chronic phase, pregnant and not pregnant. The genetic characterization was performed with three different markers that amplified regions of the 18S and 24S α DNA ribosomal and mini-exon of the gene that allows classify the groups and subgroups of the parasite and the analysis of genetic variability among isolates of T. cruzi was performed the characterization of the variable region of minicicles of kDNA through the technique of Low-Stringency Single Specific Primer-PCR (LSSP-PCR). The 30 patients studied 75% (25/30) were women and 25% (5 / 30) not pregnant. The patients are the four different Brazilian regions being the States of Bahia 53.3% (16/30), Goiás 40.0% (12/30), Paraíba 3.3% (1 / 30) and the Federal District 3, 3% (1 / 30). The analysis of rDNA allowed show the TCII in 100% of the isolated populations in the regions studied, where the subgroup TCIIb/e has been detected in (96.66%) and TCIId in (3.33%) the latter is a sample of the group Control of the State of Bahia. The genetic variability between the 30 samples was 24.08 ± 14.4% share of bands among pairs. There was no difference between the share of bands patients of Bahia and Goiás, where the value of significance was less than 5%. There was no difference between the percentages of bands showed in analyses by age of the patients, gestational age and in the analysis of the groups of pregnant and not pregnant. In reviewing more than one tube of blood per patient coming evidenced profiles of signatures genomic complex and heterogeneous with 62.5% of bands shared less than 77% and only 37.5% had rates higher than 83% of bands sharing among samples. Suggesting so our isolates showed a great genetic variability. / A doença de Chagas é uma zoonose causada por um protozoário flagelado denominado Trypanosoma cruzi, trata-se de um problema específico da América Latina, onde estima-se que 12 a 14 milhões de pessoas estejam infectadas. As populações de Trypanosoma cruzi podem ser divididas em dois grandes grupos, o Trypanossoma cruzi I (TCI) e o Trypanossoma cruzi II (TCII), sendo o último mais heterogêneo e subdividido em cinco subgrupos TCIIa, TCIIb, TCIIc, TCIId e TCIIe, porém, pouco se sabe das implicações clínicas e epidemiológicas dessas classificações. A freqüência da transmissão vertical da doença de Chagas pode variar de 1,6 a 18,5% de acordo com a região e a metodologia usada nos estudos. O objetivo desse estudo foi a caracterização genética de 30 isolados de T. cruzi por meio da hemocultura de pacientes com doença de Chagas na fase crônica, gestantes e não gestantes. A caracterização genética foi realizada com três diferentes marcadores que amplificaram regiões 24Sα e 18S do DNA ribossômico e do gene mini-exon que permite classificar os grupos e subgrupos do parasito e para a análise da variabilidade genética entre os isolados do T. cruzi foi realizada a caracterização da região variável dos minicírculos do kDNA por meio da técnica de Low stringency specifc primer (LSSP-PCR), das 30 pacientes estudadas 75% (25/30) eram gestantes e 25% (5/30) não gestantes. As pacientes são de quarto regiões brasileiras distintas sendo elas dos Estados da Bahia 53,3% (16/30), Goiás 40,0% (12/30), Paraíba 3,3% (1/30) e Distrito Federal 3,3% (1/30). A análise do rDNA permitiu evidenciar o TCII em 100% das populações isoladas nas regiões estudadas, onde o subgrupo TCIIb/e foi detectado em (96,66%) e o TCIId em (3,33%) este último corresponde a uma amostra do grupo controle do Estado da Bahia. A variabilidade genética entre as 30 amostras analisadas foi de 24,08 ± 14,4% de compartilhamento de bandas entre os pares. Houve diferença no compartilhamento de bandas entre as pacientes da Bahia e Goiás, onde o valor de significância foi menor que 5%. Não houve diferença entre as porcentagens de bandas compartilhadas nas análises realizadas por faixa etária das pacientes, idade gestacional e na análise dos grupos de gestantes e não gestantes. Ao analisar mais de um tubo proveniente da hemocultura por paciente evidenciamos perfis de assinaturas gênicas complexas e heterogêneas com 62,5% de bandas compartilhadas menor que 77% e apenas 37,5% tiveram índices maiores que 83% de compartilhamento de bandas entre as amostras. Sugerindo assim que nossos isolados apresentaram uma grande variabilidade genética.

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