Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) is categorized into nonalcoholic fatty liver (NAFL) and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) and has emerged as a risk factor for more critical clinical conditions. However, the underlying mechanisms of NAFLD pathogenesis are not fully understood. In this study, expression of proteins associated with endoplasmic reticulum (ER) stress, apoptosis and autophagy were analyzed in normal, NAFL and NASH human livers by western blotting. Levels of some ER stress-transducing transcription factors, including cleaved activating transcription factor 6, were higher in NASH than in the normal tissues. However, the expression of a majority of the ER chaperones and foldases analyzed, including glucose-regulated protein 78 and ER protein 44, was lower in NASH than in the normal tissues. Levels of apoptosis markers, such as cleaved poly (ADP-ribose) polymerase, were also lower in NASH tissues, in which expression of some B-cell lymphoma-2 family proteins was up-or down-regulated compared to the normal tissues. The level of the autophagy substrate p62 was not different in NASH and normal tissues, although some autophagy regulators were up-or down-regulated in the NASH tissues compared to the normal tissues. Levels of most of the proteins analyzed in NAFL tissues were either similar to those in one of the other two types, NASH and normal, or were somewhere in between. Together, these findings suggest that regulation of certain important tissues processes involved in protein quality control and cell survival were broadly compromised in the NAFLD tissues.

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第18147号 / 医博第3867号 / 新制||医||1002(附属図書館) / 31005 / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 川口 義弥, 教授 坂井 義治, 教授 千葉 勉 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DGAM

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Nonalcoholic fatty liver disease is a common condition associated with metabolic syndrome. It is the most common cause of elevated liver enzymes in U.S. adults, and is diagnosed after ruling out other causes of steatosis (fatty infiltration of liver), particularly infectious hepatitis and alcohol abuse. Liver biopsy may be considered if greater diagnostic and prognostic certainty is desired, particularly in patients with diabetes, patients who are morbidly obese, and in patients with an aspartate transaminase to alanine transaminase ratio greater than one, because these patients are at risk of having more advanced disease. Weight loss is the primary treatment for obese patients with nonalcoholic fatty liver disease. Medications used to treat insulin resistance, hyperlipidemia, and obesity have been shown to improve transaminase levels, steatosis, and histologic findings. However, no treatments have been shown to affect patient-oriented outcomes.

A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) abrange alterações desde esteatose até esteato-hepatite não alcoólica (EHNA), podendo evoluir para fibrose, cirrose e carcinoma hepatocelular. A DHGNA é considerada a doença hepática mais comum na atualidade e com prevalência mundial alarmante. Esta doença caracteriza-se, basicamente, pela deposição de triglicérides nos hepatócitos, podendo evoluir com inflamação e fibrose, e está intimamente associada com resistência à insulina (RI), diabetes mellitus tipo 2 e obesidade. Os hepatócitos representam as principais células hepáticas e se comunicam através de junções do tipo gap, formadas principalmente por conexina 32 (Cx32). Esta proteína apresenta importante função no controle da homeostase tecidual, regulando processos fisiológicos e tem sido associada como agente protetor na hepatocarcinogênese e outros processos patológicos, porem pouco se sabe sobre sua participação na DHGNA. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a participação da Cx32 na fisiopatogênese da DHGNA, utilizando camundongos knockout para Cx32 (Cx32-KO) submetidos a uma dieta hiperlipídica deficiente em colina. Foram analisados dados biométricos, histopatológicos, função hepática, RI, citocinas inflamatórias, adipocinas, estresse oxidativo, peroxidação lipídica e a expressão de genes envolvidos na DHGNA. Os animais Cx32-KO apresentaram maior acumulo de triglicérides hepáticos em relação aos animais selvagens e, consequentemente, maior peso absoluto e relativo do fígado. Adicionalmente, apresentaram maior inflamação hepática demonstrado pela exacerbação da citocina TNF-α e supressão da IL-10, maior dano hepatocelular indicado pelo aumento das enzimas AST e ALT, aumento da peroxidação lipídica e alterações na expressão de genes chaves na fisiopatogênese da DHGNA, como SREBP1c. No entanto, não houve diferença nos marcadores histopatológicos, RI e estresse oxidativo hepático. Por fim, os animais Cx32-KO apresentaram maior produção de leptina e adiponectina no tecido adiposo. Todos esses resultados revelam que a Cx32 pode atuar como um agente protetor ao desenvolvimento da DHGNA, sugerindo seu potencial como novo alvo terapêutico / Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) covers a spectrum of liver diseases ranging from steatosis to nonalcoholic steatohepatitis (NASH), liver fibrosis, cirrhosis and eventually hepatocellular carcinoma. NAFLD is currently the most common liver disease in the world with an alarming prevalence worldwide. This disease is characterized by the deposition of triglycerides in hepatocytes and can develop inflammation and fibrosis. NAFLD is closely associated with insulin resistance (IR), type 2 diabetes mellitus and obesity. The gap junctions mediate intercellular communication and are critical for maintaining integral cellular processes. In hepatocytes, the major type of liver cells, the gap junctions are formed mainly by connexin 32 (Cx32). This protein is important for the control of tissue homeostasis and for physiological processesregulation. It has been linked as a protective agent in hepatocarcinogenesis and other pathological processes. However, little is known about its role on NAFLD. Thus, the aim of this study was to evaluate the participation of Cx32 in the pathogenesis of NAFLD using WT and Cx32-knockout mice (Cx32-KO) subjected to a high-fat diet deficient in choline. NAFLD was evaluated based on a battery of clinically relevant read-outs, including histopathological examination, inflammatory citokines, liver damage markers, in-depth lipid analysis, assessment of oxidative stress, insulin and glucose tolerance and lipid-related biomarkers.The Cx32-KO animals showed higher accumulation of hepatic triglycerides, increased inflammation and lipid peroxidation and increased production of leptin and adiponectin in the adipose tissue when compared with WT. Moreover, there was no difference in histopathological markers, RI and hepatic oxidative stress. Taken together, all these results show that Cx32 is a protective agent to the development of the disease, suggesting its potential as a novel therapeutic target in NAFLD

A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) abrange alterações desde esteatose até esteato-hepatite não alcoólica (EHNA), podendo evoluir para fibrose, cirrose e carcinoma hepatocelular. A DHGNA é considerada a doença hepática mais comum na atualidade e com prevalência mundial alarmante. Esta doença caracteriza-se, basicamente, pela deposição de triglicérides nos hepatócitos, podendo evoluir com inflamação e fibrose, e está intimamente associada com resistência à insulina (RI), diabetes mellitus tipo 2 e obesidade. Os hepatócitos representam as principais células hepáticas e se comunicam através de junções do tipo gap, formadas principalmente por conexina 32 (Cx32). Esta proteína apresenta importante função no controle da homeostase tecidual, regulando processos fisiológicos e tem sido associada como agente protetor na hepatocarcinogênese e outros processos patológicos, porem pouco se sabe sobre sua participação na DHGNA. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a participação da Cx32 na fisiopatogênese da DHGNA, utilizando camundongos knockout para Cx32 (Cx32-KO) submetidos a uma dieta hiperlipídica deficiente em colina. Foram analisados dados biométricos, histopatológicos, função hepática, RI, citocinas inflamatórias, adipocinas, estresse oxidativo, peroxidação lipídica e a expressão de genes envolvidos na DHGNA. Os animais Cx32-KO apresentaram maior acumulo de triglicérides hepáticos em relação aos animais selvagens e, consequentemente, maior peso absoluto e relativo do fígado. Adicionalmente, apresentaram maior inflamação hepática demonstrado pela exacerbação da citocina TNF-α e supressão da IL-10, maior dano hepatocelular indicado pelo aumento das enzimas AST e ALT, aumento da peroxidação lipídica e alterações na expressão de genes chaves na fisiopatogênese da DHGNA, como SREBP1c. No entanto, não houve diferença nos marcadores histopatológicos, RI e estresse oxidativo hepático. Por fim, os animais Cx32-KO apresentaram maior produção de leptina e adiponectina no tecido adiposo. Todos esses resultados revelam que a Cx32 pode atuar como um agente protetor ao desenvolvimento da DHGNA, sugerindo seu potencial como novo alvo terapêutico / Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) covers a spectrum of liver diseases ranging from steatosis to nonalcoholic steatohepatitis (NASH), liver fibrosis, cirrhosis and eventually hepatocellular carcinoma. NAFLD is currently the most common liver disease in the world with an alarming prevalence worldwide. This disease is characterized by the deposition of triglycerides in hepatocytes and can develop inflammation and fibrosis. NAFLD is closely associated with insulin resistance (IR), type 2 diabetes mellitus and obesity. The gap junctions mediate intercellular communication and are critical for maintaining integral cellular processes. In hepatocytes, the major type of liver cells, the gap junctions are formed mainly by connexin 32 (Cx32). This protein is important for the control of tissue homeostasis and for physiological processesregulation. It has been linked as a protective agent in hepatocarcinogenesis and other pathological processes. However, little is known about its role on NAFLD. Thus, the aim of this study was to evaluate the participation of Cx32 in the pathogenesis of NAFLD using WT and Cx32-knockout mice (Cx32-KO) subjected to a high-fat diet deficient in choline. NAFLD was evaluated based on a battery of clinically relevant read-outs, including histopathological examination, inflammatory citokines, liver damage markers, in-depth lipid analysis, assessment of oxidative stress, insulin and glucose tolerance and lipid-related biomarkers.The Cx32-KO animals showed higher accumulation of hepatic triglycerides, increased inflammation and lipid peroxidation and increased production of leptin and adiponectin in the adipose tissue when compared with WT. Moreover, there was no difference in histopathological markers, RI and hepatic oxidative stress. Taken together, all these results show that Cx32 is a protective agent to the development of the disease, suggesting its potential as a novel therapeutic target in NAFLD

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivo: Avaliar o efeito da intervenção nutricional como tratamento exclusivo na resistência à insulina, parâmetros bioquímicos de síndrome metabólica e grau de esteatose hepática em portadores de doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA). Métodos: 31 portadores de DHGNA, diagnosticados por tomografia computadorizada e/ou biópsia hepática receberam dieta com restrição de 500 a 1000 kcal/dia. O valor energético total (VET) foi distribuído em 15% proteína, 55% carboidrato e 30% gordura. Foram avaliados no início do estudo e após 6 meses de tratamento: grau de esteatose hepática e obesidade visceral por meio de tomografia computadorizada. Níveis séricos de alanina aminotransferase (ALT), gama glutamil transferase (GGT), aspartato aminotransferase (AST), e fosfatase alcalina, e parâmetros de síndrome metabólica (SM), glicemia, triglicerídeos e da lipoproteína de alta intensidade (HDL-C) foram medidos por método automatizado. As medidas antropométricas, índice de massa corpórea (IMC), circunferência da cintura (CC) e relação cintura/quadril e o consumo alimentar (pelo registro alimentar de 7 dias) foram avaliados mensalmente. Ao final do acompanhamento, os pacientes foram considerados como aderentes ou não aderentes de acordo com perda de peso maior ou menor que 5% do peso inicial, respectivamente. Os testes de Mann-Whitney, quiquadrado e Wilcoxon foram utilizados na análise estatística. Resultados: Dos 31 pacientes incluídos, 17 foram classificados como aderentes (grupo 1) e 14 como não aderentes (grupo 2). No grupo 2 foi observada redução significante dos valores do índice de massa corpórea (IMC), circunferência da cintura (CC) , enquanto entre os pacientes que aderiram à dieta, além da melhora significante de todos os parâmetros antropométricos, também houve redução estatisticamente significante nos níveis da alanina aminotransferase (ALT) , gama glutamil transferase (GGT), insulina, HOMA–IR, gordura visceral, gordura total, e da densidade tomográfica do fígado, assim como aumento da lipoproteína de alta intensidade (HDL-C). Nesses pacientes houve diminuição estatisticamente significante do valor calórico total com diminuição do consumo de gordura total e saturada. Conclusão: O tratamento nutricional como terapia exclusiva, com a perda de pelo menos 5% de peso inicial, foi capaz de modificar os parâmetros metabólicos de síndrome metabólica, valores das enzimas hepáticas e o grau de esteatose em portadores de doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA), demonstrando que a intervenção dietética é efetiva no tratamento da doença. / Purpose: Evaluate the effect of diet therapy as exclusive treatment on insulin resistance, biochemical parameters of metabolic syndrome and degree of hepatic steatosis in patients with nonalcoolic fatty liver disease (NAFLD). Methods: Thirty-one patients diagnosed with NAFLD by computed tomography and/or liver biopsy received a restricted diet of energy (reduction of 500 to 100 kcal/day) containing 15% protein, 55% carbohydrates and 30% fat. The following parameters were evaluated at the entry and 6 months after dietary instructions: the degree of hepatic steatosis and visceral obesity by computed tomography, the serum aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), gamma-glutamyl transferase (GGT) levels, metabolic syndrome parameters, glycemia, triglycerides and high density liprotein (HDL-c) were measured by an automated method. Insulin concentration was determined by immunofluorometry and insulin resistance (IR) was calculated by homeostasis model assessment (HOMA-IR). Anthropometric variables, body mass index (BMI), waist circumference, waist-to-hip ratio, and food intake (7-day diary) were evaluated monthly. At the end of follow-up, the patients were classified as adherent or non-adherent to treatment according to a weight loss of more or less than 5% of initial body weight, respectively. Results were analyzed statistically using the Mann- Whitney, chi-square and Wilcoxon tests. Results: Seventeen of the 31 patients were classified as adherent (group 1) and 14 as non-adherent (group 2). Group 2 presented only a significant reduction in body mass index (BMI) and waist circumference. In contrast, in group 1, in addition to significant improvement of all anthropometric parameters, a significant reduction was observed in alanine aminotransferase (ALT) and gamma-glutamyl transferase (GGT) levels, homeostasis model assessment (HOMA-IR), visceral fat and tomographic liver density, together with an increase in high density liprotein (HDL-c) serum levels. These patients decrease presented a significant in total energy intake and in the amount of total and saturated fat. Conclusions: Nutritional intervention as exclusive treatment, with a loss of at least 5% of initial weight, was able to modify metabolic syndrome parameters, liver enzymes and degree of steatosis in patients with NAFLD, demonstrating that dietary intervention is effective in the treatment of this disease. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

京都大学 / 新制・論文博士 / 博士(医学) / 乙第13398号 / 論医博第2222号 / 新制||医||1051(附属図書館) / (主査)教授 妹尾 浩, 教授 中山 健夫, 教授 西浦 博 / 学位規則第4条第2項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

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Orientador: Carlos Antonio Caramori / Resumo: A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) é a alteração mais comum do metabolismo hepático, associada à obesidade, resistência à insulina e à síndrome metabólica. Compreende amplo espectro de alterações, que tem em comum a esteatose, em indivíduos que não consomem álcool. Além da sobrecarga de ingestão calórica, outros fatores como alterações do metabolismo do ferro podem estar relacionados à patogênese ou progressão da DHGNA. Analisamos no presente estudo as possíveis relações de marcadores do metabolismo do ferro com a intensidade das lesões hepáticas na DHGNA em indivíduos obesos. Foram estudados 88 indivíduos adultos, de ambos os gêneros, obesos (IMC >30), com diagnóstico histológico de DHGNA, acompanhados no ambulatório de Gastroenterologia e Hepatologia da FMB-Unesp. Os marcadores do metabolismo do ferro avaliados foram: níveis séricos de ferro, ferritina e transferrina, bem como o índice de saturação da transferrina (IST). A presença e intensidade da deposição de ferro no parênquima hepático foram investigadas pelo método histoquímico do Azul da Prússia (Perls). A intensidade da esteatose e o grau de fibrose foram avaliados nas biópsias hepáticas. Dos 88 indivíduos avaliados, 31 (35,2 %) apresentaram aumento dos níveis séricos de ferritina e 12 (13,6%) apresentaram valores de IST acima de 45 %. A avaliação histológica, das biópsias hepáticas, demonstrou a presença de fibrose em 48/88 casos (54,54%), sendo 21/88 (23,86%) de intensidade leve e 27/88 (30,68%) caso... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor