Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-09-04T12:56:30Z No. of bitstreams: 1 Ludymila Furtado Cantanhede.pdf: 2024123 bytes, checksum: c6c240c3b28427794e299888dcab2f37 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-04T12:56:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ludymila Furtado Cantanhede.pdf: 2024123 bytes, checksum: c6c240c3b28427794e299888dcab2f37 (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Biotechniques applied to bovine reproduction still have limitations and many are linked to a lack of knowledge about an update of macromolecules added to the medium of in vitro oocyte maturation (IVM), embryonic development process and cell difference, as well as genes of inhibitors related to pluripotency in in vitro production in this species. Follicle stimulating hormone (FSH) is present in most IVM protocols because of its importance in large cumulus cells, estradiol synthesis and cytoplasmic and nuclear maturation of the oocyte. However, few studies report an influence of FSH on gene activity during maturation. Considering the identification and modification of the biochemistry of the medium and mechanisms of action of the genes contributed to improvements in the various biotechniques applied to the reproduction to increase the production of animals of high genetic value, this work had the objective of evaluating an influence of FSH in cumulus during maturation of bovine oocytes. Hormonal and biochemical analyzes of the in vitro maturation medium before and MAB, with and FSH (G-FSH, G-FSHIN, G-CTL, G-CTLIN), as well as an analysis of the expression of pluripotency related genes in cumulus of cattle matured with and without FSH (G-FSH and G-CTL) collected in slaughterhouses of the Zona da Mata and Agreste of Pernambuco. A concentration of estradiol was observed by immunoassay and concentration of protein, glycogen, sugar and lipid (biochemical analysis) through a spectrophotometer in the analysis of real-time PCR (RT-qPCR). For statistical analysis, normality was assessed by Shapiro-Wilk test to be submitted to analysis of variance (Test F) and, or Tukey HSD test, level of significance of 5.0%. Increased cumulus cell amplitudes were observed during maturation in the FSH medium when compared to the non-FSH medium. In addition, FSH influences glycogen consumption by cells, decreasing their concentration not medium, due to the need for high energy demand for the process. Influence was observed in the expression of RONIN and CMYC, in which the hormone stimulates RONIN activity and represses CMYC. Thus, FSH influences a maturation of oocytes, besides also acting in the energetic activity of the cumulus-oocyte complex of bovine without cellular and molecular physics. / As biotécnicas aplicadas à reprodução de bovinos ainda possuem limitações e muitas estão ligadas a falta de conhecimento sobre a atuação de macromoléculas adicionadas ao meio de maturação ovocitária in vitro (MIV), ao processo de desenvolvimento embrionário e diferenciação celular, bem como as alterações de genes relacionados à pluripotência na produção in vitro nesta espécie. O hormônio folículo estimulante (FSH) está presente na maioria dos protocolos de MIV, devido a sua importância na expansão das células do cumulus, síntese de estradiol e maturação citoplasmática e nuclear do ovócito. Porém, poucos estudos relatam a influência do FSH na atividade gênica durante a maturação. Visto que a identificação e elucidação das modificações bioquímicas do meio e dos mecanismos de ação desses genes contribuiriam para melhorias nas diversas biotécnicas aplicadas à reprodução e para o aumento da produção de animais de alto valor genético, este trabalho teve como objetivo avaliar a influencia do FSH em células do cumulus durante a maturação de ovócitos bovinos. Foram feitas análises hormonal e bioquímicas do meio de maturação in vitro antes e após a MIV, com e sem FSH (G-FSH, G-FSHIN, G-CTL, G-CTLIN) bem como a análise da expressão de genes relacionados à pluripotência em células do cumulus de bovinos maturados com e sem FSH (G-FSH e G-CTL) coletados em abatedouros da região da Zona da Mata e Agreste de Pernambuco. Foi observada a concentração de estradiol por imunoensaio e concentração de proteína, glicogênio, açúcar e lipídeo (análise bioquímica) através de espectofotômetro na análise de expressão relativa por PCR em tempo real (RT-qPCR). Para análise estatística avaliou-se a normalidade pelo teste de Shapiro-Wilk para serem então submetidos à análise de variância (ANOVA), Teste F e, posteriormente o teste de Tukey HSD, nível de significância de 5,0%. Foi observada maior expansão das células do cumulus durante a maturação em meio contendo FSH, quando comparado ao meio sem FSH. Além disso, o FSH influenciou o consumo de glicogênio pelas células, diminuindo sua concentração no meio, sugerindo grande demanda de energia para o processo. Observou-se influência do FSH sobre a expressão de RONIN e CMYC, nos quais o hormônio estimula a atividade de RONIN e reprime CMYC. Dessa forma, o FSH influencia a maturação de ovócitos bovinos, além de atuar também na atividade energética do complexo cumulus-ovócito de nos níveis celulares e moleculares.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_daniel_savio.pdf: 201214 bytes, checksum: f8921438dab6324aed14b7b44d06de38 (MD5) Previous issue date: 2011-12-15 / The use of artificial insemination (AI) with heterospermic doses (Het) in swine may benefit reproductive performance by diluting individual differences among boars. However, such practice may also mask the true reproductive potential of some individuals, which can be measured through homospermic AI (Hom). This study evaluated boar reproductive performance after AI with Hom and Het doses. Ejaculates were collected from 4 boars and combined in 10 treatments: 4 with Hom doses (boars A, B, C and D) and 6 with Het doses (AB, AC, AD, BC, BD and CD) all having concentration of 3 billion spermatozoa in 80 mL doses with equal contribution of each boar. The in vitro analyses of sperm quality were: sperm membrane, DNA and acrossome integrity; mitochondrial functionality; and in vitro oocyte penetration. Thereafter, 511 females having parities from 1 to 6 were inseminated and the farrowing rate (FR) and total litter size (TB) were recorded. Both FR (Hom = 90.5% and Hem = 89.9%), and TB (Hom = 12.4 ± 0.4 and Het = 12.7 ± 0.7) did not differ (P>0,05). Some differences were observed among treatments, such as: the maximum FR (98.0%) for treatment AC and the minimum (87.0) for boar B; and a difference of two piglets among the maximum (for the CD treatment) and the minimum observed value (for the AC treatment). The only difference observed on the in vitro evaluations (P<0.05), occurred for the in vitro oocyte penetration by sperm from boars B (56.4%) and C (29.0%). No differences were detected in reproductive performance after AI using homospermic and heterospemic doses. / A utilização de inseminação artificial (IA) com doses heterospérmicas (Het) pode ser benéfica para a suinocultura, por diluir deficiências individuais entre o desempenho reprodutivo de machos. No entanto, esta prática pode mascarar o potencial reprodutivo de outros reprodutores, o que poderia ser avaliado com o uso de inseminação artificial com doses homospérmicas (Hom). Este trabalho avaliou o desempenho reprodutivo de machos suínos após IA com doses Hom e Het. Ejaculados colhidos de 4 machos foram combinados em 10 tratamentos: 4 com doses Hom (machos A, B, C e D) e 6 com doses Het (AB, AC, AD, BC, BD, e CD), todos com concentração de 3 bilhões de espermatozóides em doses de 80 mL, com contribuição igual de cada macho. Realizaram-se testes para analise de integridade da membrana, do DNA espermático e do acrossoma, da funcionalidade da mitocôndria e da penetração ovocitária in vitro. Foram inseminadas 511 fêmeas de ordem de parto de 1 a 6. A taxa de parição (TP) e o número total de leitões nascidos por parto (TN) foram registrados. Tanto a TP (Hom = 90,5% e Het = 89,9%), quanto o TN (Hom = 12,4 ± 0,4 e Het = 12,7 ± 0,7), não diferiram (P>0,05). Foram observadas algumas diferenças entre os tratamentos, como a TP máxima ocorrendo para o tratamento AC (98.0%) e uma TP mínima de 87.0% para o macho B (P<0.05). Quanto ao TN, uma diferença de 2,0 leitões foi observada entre o valor máximo (tratamento CD) e o mínimo (tratamento AC). Quanto às avaliações in vitro, foram observadas diferenças apenas quanto ao teste de penetração in vitro (P<0,05), entre os machos B (56,4%) e C (29,2%). Não foram detectadas diferenças no desempenho reprodutivo com IA com doses homo e heterospérmicas.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_gissele_rambo.pdf: 235931 bytes, checksum: a4e2ca4dc38eed3295f04e66a374e019 (MD5) Previous issue date: 2008-11-24 / The evaluation of the efficiency of semen cryopreservation is critical to make the use of frozen semen feasible in artificial insemination programs in swine. This study compared the efficiency of two non-penetrating cryoprotectants (dimetilacetamide-DMA or glycerol) on parameters of post-thawing semen quality and in vitro fertility with frozen swine semen. The sperm-rich fractions of 28 ejaculates from four boars were frozen with either DMA or glycerol. The efficiency of semen freezing was evaluated through parameters of post-thawing semen quality and in vitro penetration (IVP) of swine oocytes and embryo production. For samples frozen with DMA, sperm motility (38.1%) and membrane integrity (39.9%) were greater (P < 0.05) than those for glycerol (21.9% and 13.0%, respectively). Both the IVP rate and the number of spermatozoa per oocyte were greater (P < 0.05) for DMA (27.9% and 29.2, respectively) than for glycerol (13.6% and 20.7, respectively). The cleavage rate with DMA and glycerol samples (13.0% and 15.6%, respectively) were similar (P > 0.05). The embryo development rate did not differ (P < 0.05) for DMA (15.8%) and glycerol (22.0%). Therefore, when compared to glycerol, DMA was associated with improved post-thawing semen quality and in vitro fertility. / A avaliação da eficiência da criopreservação do sêmen é uma importante ferramenta para viabilizar o uso de sêmen congelado na inseminação artificial em suínos. Um experimento foi realizado a fim de identificar qual crioprotetor interno (dimetilacetamida-DMA ou glicerol) seria associado com melhores indicadores de qualidade seminal pós-descongelamento e fertilidade in vitro com sêmen suíno congelado. A fração espermática rica em espermatozóides de 28 ejaculados provenientes de quatro machos foi congelada com DMA ou glicerol. Para estimar o sucesso da criopreservação do sêmen foram utilizados parâmetros de qualidade seminal pós-descongelamento, teste de penetração in vitro (TPIV) de ovócitos suínos e produção in vitro de embriões. Para amostras congeladas com DMA, a motilidade (38,1%) e a integridade da membrana espermática (39,9%) foram superiores (P < 0,05) às observadas com glicerol (21,9% e 13,0%, respectivamente). A taxa de TPIV e o número de espermatozóides por ovócito também foram superiores (P < 0,05) para a DMA (27,9% e 29,2, respectivamente) do que para o glicerol (13,6% e 20,7, respectivamente). A taxa de clivagem alcançada com a DMA (13,0%) foi similar (P > 0,05) à obtida com glicerol (15,6%). A taxa de desenvolvimento embrionário não diferiu (P > 0,05) entre DMA e glicerol (15,8% e 22,0%, respectivamente). Portanto, considerando o conjunto de todos os testes, em comparação com o glicerol, a DMA foi associada com melhores indicadores de qualidade seminal e fertilidade in vitro.