Orientador: Jean Leandro dos Santos / Banca: Carlota de Oliveira Rangel Yagui / Banca: Flávio da Silva Emery / Resumo: A Anemia Falciforme (A.F.) é uma doença hematológica genética na qual ocorre mutação no gene da β-hemoglobina. Essa mutação promove polimerização das moléculas de hemoglobina, promovendo alterações (afoiçamento) da estrutura física dos eritrócitos e aumento da adesão das células sanguíneas no vaso contribuindo para o aumento do processo vaso-oclusivo, principal característica da doença. A doença promove um processo inflamatório crônico e há aumento de diversas citocinas pró-inflamatórias, a exemplo do TNF-α, sendo este, portanto um importante alvo para intervenção terapêutica. A hidroxiuréia (HU) é o único fármaco disponível para o tratamento e seus efeitos benéficos estão associados à capacidade de biotransformação da mesma em óxido nítrico. Entretando, a mielotoxicidade e demais efeitos deletérios da HU, torna importante a introdução de novos fármacos que agregue os efeitos benéficos da mesma sem sua potencial toxicidade. O NO desempenha efeitos benéficos tais como: vasodilatação, inibição da agregação plaquetária e produção de hemoglobina fetal (HbF), esta última tem função de diminuir a polimerização da hemoglobina. Nesse contexto, em continuidade com uma linha de pesquisa que visa o planejamento, síntese e avaliação farmacológica de novos protótipos candidatos a fármacos para tratamento das complicações da anemia falciforme, foi sintetizada uma nova série de quatro compostos híbridos inéditos (I-IV) contendo a subunidade ftalimídica (inibidora de TNF-α) e o núcleo furoxânico (doador de NO) espaçados pela subunidade N-acilidrazona. Todos os compostos apresentaram-se como doadores de NO. Os compostos I a IV mostraram-se inibidores de TNF-, sendo o composto IV o mais promissor, inibindo em torno de 65% em concentrações menores que os demais. No ensaio de agregação plaquetária induzida por ADP, os compostos III e IV foram capazes de inibir sigficativamente a ... / Abstract: Sickle Cell Anemia is a genetic blood disease in which there is a mutation in the β-hemoglobin gene. This mutation promotes polymerization of hemoglobin molecules that change the structure of the erythrocyte cytoskeleton promoting sickling of the cell. Moreover, there is increased adhesion of blood cells in the vessel contributing to the increasement of the vaso-occlusive process, the main characteristic of the disease. It is further known that the chronic inflammation associated with the disease contributes to a number of complications and among the process responsible for this proinflammatory cytokine is TNF-α, which is an important target for therapeutic intervention. Hydroxyurea (HU) is the only available drug for treatment and its beneficial effects are associated with the same capacity biotransformation of nitric oxide. The NO plays beneficial effects such as vasodilation, inhibition of platelet aggregation and production of fetal hemoglobin (Hb F), latter has the function of decreasing polymerization of hemoglobin. In this context, continuing the research line that aims at planning , synthesis and pharmacological evaluation of new prototypes drug candidates for the treatment of sickle cell anemia complications, in this work have synthesized a series of four new hybrid compounds ( I- IV) containing the phtalimide (TNF-alfa inhibitory subunit) and furoxan subunits ( nitric oxide donors) according to structural design. The compounds were presented as NO donors. Compounds I-IV were shown to be inhibitors of TNF-α in the immunoassay of this cytokine assay and the compound IV is the most promising inhibiting between 65% in smaller concentrations than the other. In the assay of ADP-induced platelet aggregation, compounds III and IV were able to inhibit platelet aggregation sigficantily. In addition, the compound I after 72 hours was able to increase the gene expression of gamma globin approximately two times the control, at a ... / Mestre

Orientador: Valéria Marçal Félix de Lima / Banca:Juliana Regina Peiró / Banca: Aparecida de Fátima Michelin / Resumo: A Leishmaniose visceral (LV) no Brasil representa um grave problema de saúde pública; portanto, é importante estudar novas alternativas para o tratamento de cães infectados. O imunomodulador agregado de magnésio-amônio fosfolinoleato-palmitoleato anidrido proteína (P-MAPA) melhora a imunocompetência quando o sistema imunológico está comprometido, mas sua dependência de receptores Toll-like (TLRs) e os mecanismos envolvidos na resposta imune ainda não estão claros. Estudou-se a ação in vitro de P-MAPA sobre a expressão de TLR2 e TLR4, espécies reativas de oxigénio (ROS), óxido nítrico (NO) e p38 ativada por mitógeno proteína quinase (p38MAPK) e fosforilação de IKK em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e macrófagos de cães saudáveis e infectados. O PBMC ou macrófagos foram isolados e cultivados com diferentes concentrações de P-MAPA (20,100 e 200 μg/mL) em uma atmosfera húmida, a 37°C com 5% de CO2. A observação revelou que nos macrófagos de cães infectados com Leishmania sp. mostraram uma diminuição em TLR2 em comparação com cães saudáveis e em indução com P-MAPA. ROS foram aumentados em PBMC de cães infectados com Leishmania sp. em comparação com cães saudáveis e P-MAPA melhorou a produção de ROS. A produção de NO foi aumentada no sobrenadante da cultura a partir de macrófagos estimulados por P-MAPA em ambos os grupos de cães saudáveis e infectados com Leishmania sp. O tratamento de macrófagos de cães saudáveis com imunomodulador P-MAPA induziu p38 MAPK e fosforilação de IKK, sugerindo a transdução de sinal por esta via. Estas descobertas sugerem que a P-MAPA tem potencial como uma droga terapêutica no tratamento de leishmaniose visceral canina / Abstract: Visceral leishmaniasis (VL) in Brazil represents a serious public health problem; therefore, it is important to study new alternatives to treat infected dogs. The immunomodulator protein aggregate magnesium-ammonium phospholinoleate-palmitoleate anhydride (P-MAPA) improves immunocompetence when the immune system is impaired, but its dependence on Toll-like receptors (TLRs) and the mechanisms involved in the immune response remain unclear. The in vitro action of P-MAPA on the expression of TLR2 and TLR4, reactive oxygen species (ROS), nitric oxide (NO) and p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) and IKK phosphorylation were studied in mononuclear cells from peripheral blood and macrophages from healthy and Leishmania-infected dogs. The PBMC or macrophages were isolated and cultured with different concentrations of P-MAPA (20,100 and 200 μg/mL) in a humid environment at 37°C with 5% CO2. Observation revealed that Leishmania-infected dogs showed a decrease in TLR2 in macrophages compared with healthy dogs and in induction with P-MAPA. ROS were increased in PBMCs from Leishmania sp.-infected dogs compared with healthy dogs and P-MAPA improved ROS production. NO production was increased in culture supernatant from macrophages stimulated by P-MAPA in both healthy and Leishmania-infected dogs. Treatment of macrophages from healthy dogs with immunomodulatory P-MAPA induced p38 MAPK and IKK phosphorylation, suggesting signal transduction by this pathway. These findings suggest that P-MAPA has potential as a therapeutic drug in the treatment of canine visceral leishmaniasis / Mestre

Orientador: Maria Stella Gonçalves Raddi / Coorientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Clarice Queico Fujimura Leite / Banca: Emanuel Carrilho / Banca: Fernanda de Freitas Anibal / Banca: Paulo Inácio da Costa / Resumo: Helicobacter pylori é o principal agente etiológico causador da gastrite crônica, úlcera péptica, adenocarcinoma e linfoma gástrico. Concentrações subinibitórias de antimicrobianos podem modificar os fatores de virulência da bactéria e, consequentemente, a relação micro-organismo/hospedeiro, podendo alterar a progressão da infecção. Este estudo avaliou fatores de virulência de H. pylori cultivados em ½ e ¼ da concentração inibitória mínima de amoxicilina que poderiam alterar a liberação de citocinas, indução de óxido nítrico e apoptose em macrófagos RAW 264.7 infectados. A análise proteômica foi realizada por eletroforese bidimensional e a identificação das proteínas diferencialmente expressas através da digestão por tripsina e espectrometria de massas A indução de óxido nítrico foi analisada através do reagente de Griess, as citocinas (interleucina - 1 beta, interleucina - 6, interleucina - 10, interleucina - 12, fator de necrose tumoral alfa e fator transformador de crescimento - beta) por ensaio imunoenzimático e apoptose por citometria, após 24 horas de infecção. Nossos resultados demonstraram que H. pylori previamente mantidos em sub-CIMs de amoxicilina apresentaram maior expressão de proteínas de choque térmico, enolase, argininosuccinato sintase, superóxido dismutase, ATP alfa sintase e proteína ativadora de neutrófilo, proteínas capazes de aumentar a indução de NO, IL - 1 β e IL - 12 e apoptose em relação à macrófagos infectados com H. pylori sem tratamento. Estes resultados sugerem que a amoxicilina em concentrações subinibitórias pode estimular a resposta imune no hospedeiro através da indução de alguns fator ... / Abstract: The infection caused by Helicobacter pylori is considered a major etiology agent in chronic gastritis, peptic ulcer, gastric carcinoma and gastric lymphomas. Sub-inhibitory concentrations of antibiotics have been shown to change virulent expression of microorganisms, which may change the progression of infection. This study assessed virulence factors of H. pylori after contact with ½ and ¼ the minimal inhibitory concentration of amoxicillin subinhibitory concentrations of amoxicillin that could modify the induction of cytokines, nitric oxide and apoptosis by infect RAW 264.7 macrophage-like cells. The proteomic analysis was realized by two dimensional electrophoresis and proteins differential expressions were characterized by tryptic digestion and mass spectroscopy. The induction of nitric oxide was assayed by Griess reagent, cytokines (interleukin - 1 beta, interleukin - 6, interleukin - 10, interleukin - 12, tumor necrosis factor alpha and transforming growth factor - beta) by Enzyme-Liked Immunoabsorbent Assay and apoptosis by annexin V - fluorescein isothiocyanate after 24 hours. Our results demonstrated that H. pylori previously maintained in sub - MICs of amoxicillin showed higher expression of virulence factors such as heat shock proteins, enolase, argininosuccinate synthetase, superoxide dismutase, ATP synthase alpha and neutrophil-activating protein inducing more oxide nitric, interleukin - 1β and interleukin - 12 and increased apoptosis than macrophages infected with H. pylori without treatment. These results suggest that amoxicillin, at sub-inhibitory concentrations, could contribute to the stimulation of immune response in the ... / Doutor

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Orivaldo Pereira Ramos / Banca: Ana Marisa Fusco Almeida / Resumo: A esporotricose é uma micose de distribuição universal causada por fungos termodimórficos do complexo de espécies de Sporothrix schenckii. A forma mais comum da doença é a linfocutânea que compromete pele, tecido subcutâneo e gânglios linfáticos regionais. Células do sistema imune inato reconhecem patógenos por meio de receptores de reconhecimento de padrão (PRRs). Dentre esses, podemos destacar a família dos receptores do tipo "Toll-like" (TLRs) e dos receptores de lectina do tipo C (CLRs), os quais possuem membros capazes de reconhecer antígenos fúngicos. A interação entre os PRRs e os padrões moleculares associados aos patógenos (PAMPs) desencadeia uma série de vias de sinalização envolvidas na modulação da resposta adaptativa subsequente e na potencialização da capacidade fagocítica e microbicida dos macrófagos e de outros fagócitos. A Dectina-1 é um CLR amplamente expresso em macrófagos, células dendríticas e neutrófilos, sendo um receptor para β-glucana implicado no processo de fagocitose, no "burst" oxidativo e na produção de fatores solúveis, tais como citocinas e quimiocinas. O objetivo do presente estudo foi avaliar o papel das β-glucanas, reconhecidas ligantes de Dectina-1, na fagocitose e na produção de intermediários do oxigênio (H2O2) e nitrogênio (NO) e de mediadores solúveis por macrófagos peritoneais de camundongos Balb/c durante a infecção por S. schenckii ATCC 16345. Para tanto, os macrófagos foram desafiados com a fração álcali-insolúvel (F1) extraída da parede celular de S. schenckii, composta principalmente de β-glucanas, com uma β-1,3-glucana pura comercial ou com o fungo íntegro termo-inativado. Nossos resultados mostraram que tanto a fagocitose das leveduras de S. schenckii, como a produção de NO, H2O2 e das citocinas IL-10, TNF-α e IL-1β se dá pelo reconhecimento tanto das β-glucanas... / Abstract: Sporotrichosis is a worldwide distributed mycosis caused by thermodimorphic fungi from the Sporothrix schenckii species complex. The disease's most common form is the lymphocutaneous, which compromises the skin, subcutaneous tissue and regional lymphatic ganglia. Cells from the innate immune system recognize pathogens through pattern recognition receptors (PRRs). Among these, the toll-like (TLRs) and C-type lectin (CLRs) receptors can be highlighted for having members capable of recognizing fungal antigens. The interaction between PRRs and pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) triggers various signaling pathways involved in modulating the following adaptive response and in potentiating the phagocytic and microbicidal capabilities of macrophages and other phagocytes. Dectin-1 is a widely expressed CLR in macrophages, dendritic cells and neutrophils, being a receptor for β-glucan implicated in the phagocytic process, the oxidative burst, and in the production of soluble mediators such as cytokines and chemokines. The present study was aimed at assessing the role of β-glucans, known Dectin-1 ligands, in the phagocytosis and production of soluble mediators, oxygen (H2O2), and nitrogen (NO) intermediates by peritoneal macrophages from Balb/c mice during infection with S. schenckii ATCC 16345. In order to do that, the macrophages were challenged with the alkali-insoluble fraction (F1) extracted from the S. schenckii cell wall, which is mainly composed of β-glucans, with a purified commercial β-1,3-glucan, or with whole heat-killed S. schenckii yeasts. Our results showed that phagocytosis of the S. schenckii yeasts, as well as production of NO, H2O2, and the cytokines IL-10, TNF-α and IL-1β occur by the recognition of both the β-glucans and other additional components found in the F1 fraction. Furthermore, Dectin-1 expression was augmented on days 10 and 15 ... / Mestre

Neste trabalho propusemos a utilização do fotossensibilizador ZnPC associado ao complexo nitrosilo de rutênio Ru-tpy por meio de lipossomas de longo tempo de circulação, com o objetivo de analisar o efeito sinérgico das espécies reativas de oxigênio (EROs) e espécies reativas de nitrogênio (ERONs) geradas respectivamente pelos mesmos, atuando sobre uma linhagem celular neoplásica. Foram estudadas as propriedades fotofísicas e fotoquímicas do sistema misto ZnPC/Ru-tpy empregando-se técnicas de espectroscopia no estado estacionário e resolvido no tempo. Com isto foi possível determinar importantes parâmetros que elucidaram seu perfil fotodinâmico, confirmando sua viabilidade para aplicação em estudos in vitro e in vivo. Estes estudos também indicaram uma possível interação entre a ZnPC e o complexo Ru-tpy através do mecanismo de transferência de elétron do fotossensibilizador para o complexo de rutênio, desta forma liberando o NO. Realizamos os estudos em meio biológico utilizando a linhagem neoplásica B16-F10, avaliando a toxicidade dos sistemas lipossomais na ausência e na presença de luz. Os nossos resultados demonstraram que o sistema misto ZnPC/Ru-tpy em meio lipossomal apresenta propriedades fotofísicas e fotobiológicas úteis, gerando as espécies reativas (EROs e ERONs) atuando sinergicamente pela TFD. / We proposed in this work the use of photosensitizer Zinc phthalocyanine (ZnPC) associated with the nitrosyl ruthenium complex (Ru-tpy) in long circulation liposomes (stealth liposome), with the aim of analyzing the synergistic effects of the reactive of oxygen species (EROs) and reactive of nitrogen species (ERONs) generated, acting on the neoplastic cell line. The photophysical and photochemical properties of the mix system ZnPC/Ru-tpy were studied being used spectroscopic techniques in the stationary state and resolved in the time. With these studies were possible to determine important parameters that elucidated its photodynamic profile, confirming the viability for application in studies in vitro and in vivo. These studies also indicated the possible interaction between ZnPC and the complex Ru-tpy through the electron transfer process from the photosensitizer to the nitrosyl ruthenium complex which leads to release nitric oxide (NO). We accomplished the biological studies using the neoplastic cell line B16-F10, evaluating the toxicity of the liposomes in the absence and presence of light. Our results demonstrated that the system ZnPC/Ru-tpy in the stealth liposome presents useful photophysical and photobiological properties, generating the species reactives (EROs and ERONs) to work synergically for the Photodynamic Therapy (PDT).

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-05T17:19:23Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Larissa_Feitosa.pdf: 848936 bytes, checksum: 0d1603516e4fb06932b8ae8ee1691d07 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T17:19:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_Larissa_Feitosa.pdf: 848936 bytes, checksum: 0d1603516e4fb06932b8ae8ee1691d07 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-03-15 / A asma induzida pelo exerc cio (AIE) e o broncoespasmo induzido por exerc cio (BIE) s o conhecidos como obstru es transit rias das vias a reas que ocorrem logo ap s o exerc cio vigoroso, sendo seus principais sintomas a dispn ia, a tosse, o sibilo e a constric o tor cica. O diagn stico da AIE e BIE demonstrado atrav s da espirometria, quando se compara os valores de repouso com os valores ap s o exerc cio. Por m, para atingir os crit rios de qualidade a realiza o da manobra de espirometria deve ser realizada somente por indiv duos cooperativos. Nesse contexto, o objetivo geral dessa disserta o foi o de avaliar a acur cia da pletismografia optoeletr nica (POE) no diagn stico da AIE em crian as asm ticas em idade escolar. O artigo 1 teve como objetivo avaliar a acur cia da POE no diagn stico da AIE. Este foi um estudo de acur cia. Foram avaliadas 45 crian as com diagn stico de asma. Inicialmente foram realizadas as grava es atrav s da POE seguidas das manobras de espirometria for ada. Ap s realiza o do teste de broncoprovoca o em esteira os dois testes foram realizados novamente no 5 , 10 , 15 , 20 e 30 minuto. O ponto de corte de 10% de queda do volume expirat rio for ado no primeiro segundo em rela o ao valor basal foi utilizado para diagn stico da AIE. Das 40 crian as que permaneceram at o final do estudo, 16 (40%) tiveram AIE. De acordo com a curva ROC, o ponto de corte de 0,185% para o volume expirat rio final da caixa tor cica forneceu uma sensibilidade m dia (IC 95%) de 93,75% (0,69-0,99) para uma especificidade de 83,33% (0,63-0,95). A rea abaixo da curva ROC foi de 0,93 (0,85-1,00) para p<0,001. O valor preditivo positivo foi de 78,95% (54,43%-93,95%) e o valor preditivo negativo foi de 95,24% (76,18-99,88). Portanto, a POE pode ser utilizada com acur cia para substituir a espirometria nos indiv duos que n o sejam capazes de realizar as manobras de espirometria adequadamente. O artigo 2 teve como objetivo avaliar a acur cia do xido n trico exalado (ONe) no diagn stico do BIE atrav s de uma revis o sistem tica. Foi realizada uma busca por dois pesquisadores independentes nas bases de dados PubMed, Lilacs, SciELO e SCOPUS. Foram utilizadas combina es de palavras que inclu ssem as palavras broncoespasmo induzido por exerc cio, xido n trico exalado e diagn stico. Foram encontrados 56 artigos e ap s as exclus es pelo t tulo, resumo e texto, restaram 6 artigos para an lise. Quatro estudos encontraram valores preditivos negativos acima de 88%, j o valor preditivo positivo deste teste variou de 16% a 100%. A medida do ONe poder ser uma ferramenta segura para evitar o teste de exerc cio nos casos negativos, reduzindo o impacto individual e econ mico dessa afec o.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-09-28T21:58:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Louana Cassiano da Silva Lima.pdf: 2717845 bytes, checksum: 2599701c376944d076e919cdfe99782d (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-22T20:43:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Louana Cassiano da Silva Lima.pdf: 2717845 bytes, checksum: 2599701c376944d076e919cdfe99782d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-22T20:43:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Louana Cassiano da Silva Lima.pdf: 2717845 bytes, checksum: 2599701c376944d076e919cdfe99782d (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / FACEPE / Introdução: Ocitocina, vasopressina e óxido nítrico são substâncias envolvidas na modulação da dor. Migrânea e fibromialgia são doenças que compartilham mecanismos fisiopatológicos semelhantes e tem a dor como principal característica, apresentando o envolvimento de muitas substâncias na origem do quadro álgico. Objetivo: dosar as concentrações de ocitocina, vasopressina e óxido nítrico no LCR de mulheres com migrânea e fibromialgia e correlacionar os níveis com: intensidade da dor de cabeça, impacto da cefaleia, sintomatologia de depressão e de ansiedade, níveis de estresse, qualidade do sono e fadiga. Método: amostra composta por 33 mulheres, as quais foram submetidas a coleta de LCR durante procedimento de raquianestesia com posterior análise pela técnica de radioimunoensaio. Além da coleta do LCR também foi solicitado que respondessem a questionários referentes ao impacto da cefaleia, depressão, ansiedade, estresse, fagida e qualidade de sono. As mulheres foram divididas em grupos de acordo com a presença de migrânea, de acordo com os critérios da ICHD-III e com a presença de fibromialgia, de acordo com os critérios da ACR (2010). Resultados: não foram encontradas diferenças estatísticas entre as concentrações das substâncias e os grupos de mulheres que não apresentavam dor, mulheres apenas com migrânea e mulheres com migrânea associada à fibromialgia, bem como também não houve correlação entre estas e intensidade da dor de cabeça, impacto da cefaleia, sintomatologia depressiva e ansiosa, fadiga, estresse e qualidade de sono. Conclusão: apesar de não ser evidenciada relação entre as concentrações liquóricas de ocitocina, vasopressina e óxido nítrico em mulheres com migrânea e com fibromialgia, não existem estudos envolvendo a análise dessas substâncias no LCR de humanos, sendo este um estudo pioneiro no que diz respeito a coletar substâncias envolvidas na modulação da dor no próprio SNC. / Introduction: Oxytocin, vasopressin and nitric oxide are substances involved in pain modulation. Migraine and fibromyalgia share similar pathophysiological mechanisms and have pain as the main characteristic, like involvement of many substances in the origin of pain. Objective: To measure oxytocin, vasopressin and nitric oxide levels in the CSF of women with migraine and/or fibromyalgia and to correlate its between: headache severity, headache impact, depression and anxiety symptoms, stress levels, sleep quality and fatigue. Method: Thirty-three 33 women composed the sample. CSF was collected during spinal anesthesia, and then these samples were analyzed by radioimmunoassay technique. These women were asked to answer questionnaires about the impact of headache, depression, anxiety, stress, fatigue, and quality of sleep. The women were divided into groups according to the presence of migraine according to the ICHD-III criteria and the presence of fibromyalgia according to the ACR (2010) criteria. Results: There was no difference between oxytocin and nitric oxide levels and the group of women with no pain, with only migraine and with migraine + FM. There was no correlation between oxytocin and nitric oxide levels and intensity of headache, impact of headache, depressive and anxious symptomatology, fatigue, stress and quality of sleep. Conclusion: Although no correlation were found between oxytocin, vasopressin and nitric oxide levels in women with migraine and fibromyalgia, there are no studies involving the analysis of these substances in human CSF, which is a pioneering study with regard to collect substances involved in CNS pain modulation.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Este estudio evaluó el efecto de la terapia antioxidante sobre la expresión de la isoenzima NOS en placenta de ovejas que gestaron en la altura, debido a que la hipoxia propia de este ambiente genera estrés oxidativo. Para ello se utilizaron dos grupos de ovejas, uno nativo de altura (HH), el otro proveniente del valle Lluta (500 msnm) (LH) que desarrollaron su gestación a una altitud de 3580 m. La mitad de cada grupo recibió diariamente suplementación oral de vitamina C (500 mg) y E (350 UI) durante la preñez. A los 100 días de gestación se midió la concentración plasmática de vitaminas antioxidantes y se determinó la presencia y actividad de isoenzimas NOS (nNOS, iNOS y eNOS), en 4 placentomas por cada animal. La concentración plasmática de vitaminas en ovejas suplementadas fueron dos a tres veces mayor que en ovejas no suplementadas. No se evidenció presencia de las enzimas iNOS y nNOS a través de la técnica de Western-Blot. La eNOS fue detectada en las muestras analizadas, siendo mayor la expresión en animales recién expuestos a la hipoxia (LH) que en nativos de esta condición (HH). La administración de vitaminas disminuyó significativamente la expresión de la enzima eNOS en el lado materno de la placenta. En cuanto a la actividad de esta enzima, fue detectada sólo para las isoformas dependientes de Ca+2, detectándose mayor actividad en la placenta fetal de animales suplementados con antioxidantes. Sin embargo, aún cuando la disparidad en el comportamiento de las porciones materna y fetal de la placenta podría estar relacionado a la presencia de diferentes rutas metabólicas, estas se traducen en una aparente mejora en la capacidad de transporte, ya que los fetos de los grupos suplementados logran un mejor crecimiento

El NO participa en una amplia gama de procesos biológicos, entre ellos se presume la adaptación a la hipoxia medioambiental. Por tal motivo se determinaron los niveles de nitritos en plasma en un total de 270 ratas albinas machos, divididas en dos ensayos: la mitad sometidos a hipoxia a la altura de 3,320 m.s.n.m confrontados a un grupo control a nivel del mar. La determinación del óxido nítrico (NO) fue indirecta mediante la cuantificación de los nitritos (NO2) y nitratos (NO3) por la reacción de Griess, (1879). Todos los animales fueron muestreados en grupos de 15 los días 1, 2, 5, 7, 14, 21, 28, 35 y 42 respectivamente. La mayor concentración de óxido nítrico en el grupo hipóxia medioambiental se encontró en el día 2 de muestreo ((α = 0.05). Los niveles plasmáticos de óxido nítrico en el grupo hipóxia medioambiental presentaron diferencias significativas con el grupo control (p – valor = 0.001) encontrándose incrementados con respecto al grupo control (α = 0.05). Estos resultados proponen que la hipoxia medioambiental produce un aumento de la síntesis de ON, como consecuencia de procesos adaptativos a la altura, corroborando los resultados de otros trabajos e investigaciones. / NO participate in an ample rate of biological processes, among them presumes the adaptation to the environmental hypoxia. By such reason the plasma levels of nitrates were determined in a total of 270 rats male, divided in two tests: half put under hypoxia to the height of 3.320 mts. confronted to a group control at level of the sea). The determination of nitric oxide (NO) was indirect by means of the cuantification nitrates (NO2) and nitrites (NO3), by the reaction of Griess, (1879). All the animals were tested in groups of 15, on the days 1, 2, 5, 7, 14, 21, 28, 35 y 42 respectively. The greater concentration of NO in the group submissive environmental hypoxia was in day 2 of sampling (α = 0.05). The NO levels in the hypoxia environmental group presented significant differences with the group control (p – value = 0,001) being increased with respect to the group control (α = 0.05). These results propose that environmental hypoxia produces an increase of the synthesis of nitric oxide, consequence of adaptive processes to the height, corroborating the results of other works and investigations.

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