Orientador: Urara Kawazoe / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T00:21:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MonteiroFilho_LuizPauloCobra_M.pdf: 2118812 bytes, checksum: a948577e483cc6e6c98d3bb599dd8489 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Em jardins zoológicos as aves cativas silvestres e as exóticas podem estar expostas a algum tipo de estresse, o que causa imunossupressão em alguns indivíduos e, conseqüentemente, facilita o parasitismo até por parasitos pouco patogênicos. Tornam-se importantes, análises periódicas da relação parasito-hospedeiro em aves cativas para a percepção e entendimento da situação no controle de doenças, principalmente considerando a possibilidade da identificação de novas espécies de parasitos intestinais em novos hospedeiros, em especial os protozoários. Com esse objetivo, foram realizados levantamentos coproparasitológicos em três jardins zoológicos (Americana-SP, Guarulhos-SP e Alfenas-MG) e em um criadouro de aves silvestres e exóticas (Sítio da Ferradura em Poços de Caldas). Amostras frescas de fezes foram coletadas em solução de dicromato de potássio a 2,0 % e processadas usando o método de Hoffman, Pons & Janer modificado, seguido do Método de McMaster modificado (flutuação em solução saturada de NaCl). Os parasitos identificados com maior freqüência foram os coccídios Eimeria spp. e o nematoda Capillaria spp. Nos Zoológicos de Americana e Guarulhos, situados no Estado de São Paulo, a prevalência média de Capillaria spp. foi de 57,1 % e 66,7 % e de Eimeria spp. foi de 42,9 % e 33,3 %, respectivamente. No Jardim Zoológico de Alfenas (MG) observou-se apenas a presença de coccídios (100,0 %), sendo que se trata de um plantel com apenas 20 aves, do setor extra e dos recintos de exposição. No Criadouro de Poços de Caldas, identificou-se 36,0 % tanto para a Capillaria spp. como para a Eimeria spp. Considerando o total de amostras examinadas das quatro instituições, o gênero de ave que apresentou maior parasitismo por coccídio foi o Ramphastos spp., apesar da maioria das aves examinadas pertencerem a Ordem Psittaciformes. Pela análise das medidas de comprimento e largura dos oocistos encontrados em Rhamphastos toco (24,54 ?m ±1,17 x 23,83 ?m ±1,54) e em Coragyps atratus (20,99 ?m ±1,24 x 17,59 ±1,78 ?m e 17,92 ?m ±0,74 x 15,59 ?m ±0,96) com medidas, morfologia e hospedeiros distintos das espécies descritas na literatura, concluiu-se a identificação de três novas espécies de Eimeria no presente estudo. Além dessas espécies, três outras espécies de Eimeria (Eimeria forresteri, E. amazonae e E. ochrocephalae) descritas na literatura também foram identificadas. A partir da avaliação dos resultados obtidos no levantamento parasitológico, algumas medidas e procedimentos de manejo referentes à prevenção auxiliaram no controle da coccidiose e capilariose em ambientes com aves cativas / Abstract: Wild and exotic captive birds living in the Zoo are under stress conditions which could affect their immune system and acquire parasite infections even those with low pathogenicity. Periodical analysis of intestinal parasites, especially protozoans are important for their control and eventually identifications of new species in new hosts. The objective of this study was to identify intestinal parasite species in captive birds of Zoo Garden of Americana, São Paulo; Zoo Garden of Guarulhos, SP and Zoo Garden of Alfenas, Minas Gerais and the Wild and Exotic Birds Breeding Place located in the ?Sítio da Ferradura?, Poços de Caldas, MG. Fresh fecal samples were collected and placed in 2,0 % potassium dichromate solution and examined after using modified concentrated method of sedimentation (Hofman, Pons & Janer) and McMaster modified floatation method. The most frequent parasites identified were Eimeria spp. and Capillaria spp. In the Zoo Garden of Guarulhos and Americana, the prevalence of Capillaria spp. was 57,1 % and 66,7 % and of Eimeria spp. was 42,9 % and 33,3 % respectively. In the Zoo Garden of Alfenas, with a small number of 20 birds, only Eimeria spp. was identified (100 %) while in the Bird Breeding Place in the Poços de Caldas 36,0 % of Capillaria spp. and Eimeria spp. were identified. Considering all the birds evaluated for intestinal parasites in four zoos, Ramphastos spp. was the most prevalent bird for coccidium parasites although the number of birds of the Order Psittaciformes was much greater them the previous one. The length and width of oocysts from fecal samples of Ramphastos toco were measured (24,54 ?m ±1,17 x 23,83 ?m ±1,54) as well as the length and the width of two oocyst types found in Coragyps atratus (20,99 ?m ±1,24 x 17,59 ±1,78 ?m and 17,92 ?m ±0,74 x 15,59 ?m ±0,96). The statistical analysis of these measures showed significant difference between them. These measures and oocyst shapes compared with other measures and morphological oocyst structures described in the literature showed difference between them. Based on this information it was possible to conclude that they were considered new species of Eimeria not described previously. Three other species of Eimeria were also identified in the present study: E forresteri, E. Amazonae and E. Ochrocephalae. Some management proceedings in captive bird's environment for the prevention of coccidiosis and capilariosis were performed successfully after overall parasite identifications in the present study / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Orientadores: Manzélio Cavazzana Júnior, Regina Maura Bueno Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-19T19:07:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Malta_RobertoCarlosGrassi_D.pdf: 3672169 bytes, checksum: 25ac1445db6b62e9892dee0a7eea948b (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: As infecções parasitárias são um dos principais problemas de saúde pública, apresentando-se de forma endêmica em diversas áreas do Brasil. Podem apresentar estreita relação com fatores sócio-demográficos e ambientais, tais como: precárias condições socioeconômicas, consumo de água contaminada, deficiente estado nutricional dos indivíduos e outros, sendo frequentemente a população infantil a mais atingida. Com o objetivo de investigar a prevalência de parasitas intestinais em populações indígenas e populações carentes e os fatores-chave envolvidos na epidemiologia de enteroparasitoses, foi realizado levantamento enteroparasitológico em moradores de 02 reservas indígenas Reserva Bororó/MS e Reserva Xingu/MT (tribos Kayabí e Juruna) -, e também em moradores de 02 cidades - Pontes e Lacerda/MT e Ibateguara/AL. A coleta de dados foi realizada de 2002 a 2009. Foram analisadas 2754 amostras de fezes pelos métodos de Faust, Hoffman, Kato-Katz, Rugai, Direto e Ziehl-Neelsen modificado. Foram obtidos dados pessoais e parâmetros socioeconômicos. Observou-se a presença de 73% de enteroparasitas na reserva indígena de Dourados, 62,77% na reserva indígena do Xingu, 52,61% no município de Pontes e Lacerda/MS e 67,42% no município de Ibateguara. As espécies de maior prevalência no sexo masculino foram Entamoeba coli (22,5%), Giardia duodenalis (11,6%), Entamoeba histolytica (13,9%) e Ascaris lumbricoides (13,6%). No sexo feminino foram Entamoeba coli (24,1%), Giardia duodenalis (8,8%), Entamoeba histolytica/díspar (13,8%) e Ascaris lumbricoides (13,3%). A prevalência de protozoários (42,6%) foi maior que de helmintos (31,1%). Para a maioria dos grupos analisados não houve diferença entre o quadro clínico de diarreia e o tipo e número de enteroparasita. O poliparasitismo foi detectado em 12,8% das amostras e o monoparasitismo em 46,5%. Os grupos etários de menor idade apresentaram predomínio de infecções por protozoários / Abstract: The parasitic infections are the major public health problems, presenting an endemic form in several areas of Brazil. They may present narrow relationship with social-demographical and environmental factors, such as: social-economical precarious conditions, consumption contaminated water, deficient nutritional condition of individuals and others, being frequently the infant population the most affected. In order to investigate the prevalence of intestinal parasites in indigenous and deprived populations and the key factors involved in the epidemiology of intestinal parasites, it was realized intestinal parasitological survey in residents of two Indian reservations: Bororó Reservation/MS and Xingu Reservation/MT (Kayabí and Juruna tribes); and also in residents of two cities: Pontes e Lacerda/MT and Ibateguara/Al. The data collection was conducted from 2002 to 2009. 2,754 faeces samples were analyzed by the methods of Faust, Hoffman, Kato-Katz, Rugai, Direct and modified Ziehl-Neelsen. The study obtained personal data and social-economical parameters. It was observed the presence of 73% of intestinal parasites in the Bororó Reservation, 62.77% in the Xingu Reservation, 52.61% in the cities of Pontes e Lacerda/MS and 67.42% in the Ibateguara city. The species of most prevalence in male individuals were Entamoeba coli (22.5%), Giardia duodenalis (11.6%), Entamoeba histolytica (13.9%) and Ascaris lumbricoides (13.6%). In female individuals were Entamoeba coli (24.1%), Giardia duodenalis (8.8%), Entamoeba histolytica/ E. díspar (13.8%) and Ascaris lumbricoides (13.3%). The prevalence of protozoan (42.6%) was higher than helminths (31.1%). For most analyzed groups there was no difference between the diarrhea clinical situation and the intestinal parasite type and number. The multiple intestinal parasite was detected in 12.8% of samples and monoparasitism in 46.5%. The minor age individuals presented the preponderance of protozoan infections / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_kathleen_tavares_winkel.pdf: 2331950 bytes, checksum: 7f0fa28998ec20ba77886582191770a3 (MD5) Previous issue date: 2013-08-27 / The murine Mus and Rattus play an important role in the transmission of diseases, both for humans and for livestock, either on his urine, feces , bites or through their ectoparasites. Considering the role played by ectoparasites of synanthropic rodents as vectors and / or reservoirs of disease, this study aimed to survey the ectoparasite fauna as well as to estimate the prevalence, abundance and mean intensity of ectoparasites in rodents captured in Pelotas, southern Rio Grande do Sul, Brazil. In the period January to May 2013 was conducted to capture sinantropic Murid (Rodentia) living through Tomahawk® traps that were exposed 22h to 7h, baited with cubes of bacon, replenished daily. The traps were placed in the port area and was taken to capture as laboratory Insect Biology DEMP/IB/UFPEL. Was captured 48 murine Mus musculus 6, Rattus rattus 7 and Rattus norvegicus 35, which were euthanized and placed in containers of water and detergent for 20 minutes after it was performed by brushing the search for ectoparasites. Obtaining a total of 6791 specimens belonging to Acari (65.4%), Anoplura (34.3%), and Siphonaptera (0.3%). No significant correlation regarding sex and weight of the hosts with the number of specimens and species of ectoparasites. The species of arthropod ectoparasites identified were Laelaps (Echinolaelaps) echidninus (Gamasida) Myocoptes musculinus (Acaridida) Radifordia lukoschusi (Actinedida), Ctenocephalides felis (Siphonaptera), Leptopsylla segnis (Siphonaptera) and Xenopsylla cheopis (Siphonaptera). Polyplax spinulosa (Anoplura) was the only species found in lice and Rhipicephalus sanguineus (Ixodida) the single tick. Polyplax spinulosa showed 100% prevalence in Rattus rattus and mean intensity of 175.83 in Rattus norvegicus, Radfordia lukoschusi showed the highest mean abundance 84.86 in Rattus rattus. / Os murídeos Mus e Rattus desempenham importante papel na transmissão de doenças, tanto para humanos quanto para animais domésticos, seja por sua urina, fezes, mordidas ou através de seus ectoparasitos. Considerando o papel desempenhado pelos ectoparasitos de roedores sinantrópicos como vetores e/ou reservatórios de doenças, este trabalho teve como objetivo inventariar a fauna ectoparasitária, bem como, estimar a prevalência, abundância e intensidade médias de ectoparasitos em roedores capturados em Pelotas, sul do Rio Grande do Sul, Brasil. No período de janeiro a maio de 2013 foi realizada a captura de murídeos sinantrópicos (Rodentia) vivos, através de armadilhas tipo Tomahawk® que ficaram expostas das 22h as 7h, iscadas com cubos de bacon, repostas diariamente. As armadilhas foram colocadas em área portuária e conforme captura foi levada ao laboratório de Biologia de Insetos DEMP/IB/UFPEL. Capturou-se 48 murídeos, 6 Mus musculus, 7 Rattus rattus e 35 Rattus norvegicus, os quais foram eutanasiados e colocados em recipientes contendo água e detergente, durante 20 minutos, após foi realizada escovação do pelo para coleta dos ectoparasitos. Obtendo-se um total de 6791 espécimes, pertencentes a Acari (65,4%), Anoplura (34,3%) e Siphonaptera (0,3%). Não houve correlação significativa quanto ao sexo e peso dos hospedeiros com o número de espécimes e espécies de ectoparasitos. As espécies de artrópodes ectoparasitos identificadas foram Laelaps (Echinolaelaps) echidninus (Gamasida), Myocoptes musculinus (Acaridida), Radifordia lukoschusi (Actinedida), Ctenocephalides felis (Siphonaptera), Leptopsylla segnis (Siphonaptera) e Xenopsylla cheopis (Siphonaptera). Polyplax spinulosa (Anoplura) foi a única espécie de piolho encontrada e Rhipicephalus sanguineus (Ixodida) o único carrapato. Polyplax spinulosa apresentou 100% de prevalência em Rattus rattus e intensidade média de 175,83 em Rattus norvegicus, já Radfordia lukoschusi apresentou a maior abundância média 84,86 em Rattus rattus.

Orientador: Marlene Tiduko Ueta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T00:02:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alarcon_DiegoFernandes_M.pdf: 8141836 bytes, checksum: 830e38e5f19d73153a16ed4df89c73bc (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Os helmintos intestinais de Lontra longicaudis (CARNIVORA, MUSTELIDAE) foram estudados, com os materiais fecais recolhidos de um pequeno riacho (Riacho Ribeirão Cachoeira) localizado em um fragmento florestal de Mata Atlântica, e de uma lagoa localizada no condomínio Notredame, ambos situados no município de Campinas, mais precisamente no distrito de Sousas. O objetivo foi relacionar, pelo levantamento de parasitas intestinais, aspectos tróficos e comportamentais de L. longicaudis à aquisição de parasitas. Em laboratório, o material fecal de cada local foi processado e analisado individualmente, utilizando-se os métodos qualitativos rotineiros de exame de fezes: sedimentação espontânea (HOFFMAN et al,. 1934) e Willis (WILLIS, 1921). Das 39 amostras coletadas em Ribeirão Cachoeira, 22 apresentaram resultados positivos para ovos e/ou larvas de helmintos (56,4%). Na lagoa do Notredame foram coletadas 29 amostras fecais, das quais 13 apresentaram resultados positivos para ovos ou larvas de helmintos (44,8%). Foram observados sete tipos morfológicos de ovos de helmintos e dois tipos de larvas de nematódeos. Dentre os ovos, os mais prevalentes, tanto no riacho (54,5% trematódeo; 22,7% Strongyloides) quanto na lagoa (46,2% trematódeo; 46,2% Strongyloides), foram o de um trematódeo e ovo de Strongyloides sp. Um dos tipos de larva encontrada foi o de Strongyloides sp, que foi a mais prevalente (54,5% riacho e 15,4% lagoa). Trata-se do primeiro registro de Strongyloides sp em lontras neotropicais / Abstract: The intestinal helminthes of the otter Lontra longicaudis (CARNIVORA, MUSTELIDAE) were studied. The fecal samples were collected in a creek (Ribeirão Cachoeira) situated in a forest fragment of Atlantic forest, and in a pond located in the Notredame house complex, both in the municipality of Campinas, Sousas district, São Paulo state, Brazil. The aim of the present study was to associate, through the intestinal parasites survey, trophic and behavioral aspects of L. longicaudis with the acquisition of parasites. The Faecal samples from each place was processed and analyzed individually, using the qualitative routine faecal methods: spontaneous sedimentation (HOFFMAN et al,. 1934) and Willis (WILLIS, 1921). From total 39 samples collected in Ribeirão Cachoeira creek, 22 were positive for eggs and /or larvae of helminthes (56,4%). In the Notredame house complex pond, samples from 29 total faecal samples collected, 13 showed positive results for eggs and /or larvae of helminthes (44,8%). Seven morphological types of helminthes eggs and two types of Nematode larvae were observed. Among the eggs, the most prevalent in the creek (54,5% trematode; 22,7% Strongyloides) and in the pond (46,2% trematode; 46,2% Strongyloides) were trematode egg and Strongyloides sp. egg. One of larvae found was of Strongyloides sp, type which was the most prevalent one (54,5% creek and 15,4% pond). This is the first occurrence of Strongyloides sp in neotropical otters / Mestrado / Mestre em Parasitologia

Organismos do gênero Acanthamoeba são muito pouco investigados no Brasil, não se conhecendo a diversidade genética e o potencial patogênico das espécies prevalentes no país. Este estudo examinou a presença de Acanthamoeba em 118 amostras de solo e água de diversas regiões do Brasil e, como resultado, 38 novas culturas axenicas foram estabelecidas. A partir do sequenciamento da subunidade menor do gene ribossômico foi possível genotipar, avaliar o polimorfismo genético das amostras brasileiras e também inferir relações filogenéticas entre isolados clínicos e de ambiente do Brasil e entre esses e as demais espécies/isolados de Acanthamoeba. Para alguns grupos de isolados brasileiros, o potencial patogênico, inferido por indicadores indiretos de virulência (termo- e osmotolerância, secreção de peptidases e efeito citopático), foi também investigado. / Organisms of the genus Acanthamoeba are poorly investigated in Brazil, not knowing the genetic diversity and pathogenic potential of the species prevalent in the country. This study examined the presence of Acanthamoeba in 118 soil and water samples from different regions of Brazil and as a result, 38 new axenic cultures were established. From the sequencing of small subunit ribosomal gene was possible to genotype, to assess the genetic polymorphism of Brazilian samples and also to infer phylogenetic relationships among clinical and environmental isolates from Brazil and between these and other species/isolates of Acanthamoeba. For some groups of Brazilian isolates, pathogenic potential, inferred by indirect indicators of virulence (thermo-and osmotolerance, secretion of peptidases and CPE), was also investigated.

A Febre Maculosa Brasileira causada por riquétsias do Grupo Febre Maculosa (GFM) e transmitida por carrapatos ocorre principalmente na Região Sudeste, onde óbitos humanos são registrados. No estado do Rio de Janeiro, a letalidade devido à riquetsiose é alta, mas só recentemente investigações epidemiológicas foram realizadas, e indicaram a participação de novas espécies de ectoparasitas na circulação das riquétsias. O objetivo geral do projeto é avaliar riquétsias em ectoparasitos coletados em áreas de casos humanos de Febre Maculosa, suspeitos, compatíveis ou confirmados, em municípios do estado com focos recentemente comunicados. A detecção e análise de genes riquetsiais indicam a presença de Rickettsia bellii, Rickettsia felis e Rickettsia rickettsii, nos vetores Amblyomma cajennense, Amblyomma dubitatum, Boophilus microplus, Ctenocephalides felis e Ctenocephalides canis, sugerindo ampla distribuição geográfica de riquétsias GFM, nas regiões Serrana, Noroeste Fluminense e Médio Paraíba do estado. / Brazilian spotted fever caused by spotted fever group (SFG) rickettsiae and mainly transmitted by ticks occurs in the southeast, where human deaths are recorded. In the state of Rio de Janeiro, lethality due to rickettsial infection is high, but only recently epidemiological investigations were conducted, and indicated the participation of new species of ectoparasites in rickettsiae circulation. The project\'s overall objective is to evaluate rickettsiae in ectoparasites collected in areas of human suspected, confirmed or compatible cases of spotted fever, in cities of the State with the recently reported outbreaks. The detection and analysis of rickettsial genes indicate the presence of Rickettsia bellii, Rickettsia felis and Rickettsia rickettsii in the vectors Amblyomma cajennense, Amblyomma dubitatum, Boophilus microplus, Ctenocephalides felis and Ctenocephalides canis, suggesting broad geographic distribution of SFG rickettsiae in the regions Serrana, Noroeste Fluminense and Médio Paraíba of the State.

Pratylenchus brachyurus é um dos nematóides mais disseminados na cultura do algodão nas áreas produtoras do Brasil. Sua patogenicidade ao algodoeiro, entretanto, é pouco estudada. Os objetivos deste trabalho foram: i) correlacionar níveis populacionais iniciais crescentes de P. brachyurus (0, 12.000, 30.000 e 75.000 exemplares/ planta) com os danos causados ao algodoeiro \'Delta Opal\'; ii) avaliar a patogenicidade de populações de P. brachyurus em algodoeiros \'Delta Opal\' e \'Fibermax 966\'; iii) testar cultivares de algodão em relação à reprodução de três populações de P. brachyurus ; iv) caracterizar a relação parasito-hospedeiro (em termos de suscetibilidade/resistência) de alguns adubos verdes, coberturas vegetais e pastagens a Pratylenchus brachyurus; v) caracterizar molecularmente populações de P. brachyurus, através de PCR-RFLP e seqüenciamento da região ITS-1 do rDNA. Os resultados sugerem que P. brachyurus é patógeno pouco agressivo da cultura do algodão, já que não se verificaram danos significativos às plantas em densidades populacionais do nematóide inferiores a 12.000 exemplares/ planta. Em relação às cultivares, todas foram suscetíveis a P. brachyurus . Entre as espécies vegetais testadas, as que se mostraram resistentes a P. brachyurus foram Crotalaria spectabilis, C. breviflora, amaranto \'BRS Alegria\', nabo forrageiro \'Comum\' e as cultivares de aveia preta Campeira Mor, IPFA 99006, Comum, CPAO 0010 e Garoa. As análises de PCRRFLP revelaram variabilidade genética entre as diferentes populações de P. brachyurus estudadas, em função dos diferentes padrões de bandas encontrados para as populações estudadas. O seqüenciamento da região ITS-1 do rDNA confirmou a variabilidade observada pela digestão enzimática, além de evidenciar heterogeneidade das regiões 18S e ITS-1 do rDNA de P. brachyurus / Although Pratylenchus brachyurus is widespread in Brazilian cotton fields, information about its importance as a cotton pathogen is scarce. The objectives of this work were: i) correlate crescent initial population densities (0; 12,000; 30,000; and 75,000 nematodes/ plant) with damage on cotton \'Delta Opal\'; ii) measure the pathogenic effect of P. brachyurus on cotton \'Delta Opal\' and \'Fibermax 966\'; iii) characterize the reaction of cotton cultivars to three populations of P. brachyurus ; iv) characterize the host reaction (in terms of susceptibility/ resistance) of some green manures, cover crops and pastures to two populations of P. brachyurus; v) characterize different populations of P. brachyurus by PCR-RFLP and sequencing of ITS-1 rDNA region. Results suggest that P. brachyurus is an eventual pathogen of cotton, since high population levels were necessary to reduce plant growth (< 12,000 nematodes/ plant). All cotton cultivars tested were rated as susceptible to P. brachyurus In relation to crop species tested, Crotalaria spectabilis, C. breviflora, amaranth \'BRS Alegria\', oil radish \'Comum\', and the black oat cultivars Campeira Mor, IPFA 99006, Comum, CPAO 0010, and Garoa were resistant to P. brachyurus PCR-RFLP showed intraspecific variability for different population of P. brachyurus studied. Sequencing of the ITS-1 rDNA region confirmed the results of the enzymatic digestion and demonstrated heterogeneity of 18S and ITS-1 rDNA regions of P. brachyurus.

O tratamento de indivíduos que apresentam leishmaniose, seja ela cutânea ou visceral, é usualmente problemático, uma vez que os medicamentos utilizados na prática clínica são altamente tóxicos, requerem administração parenteral e nem sempre promovem a cura dos pacientes. Torna-se clara, portanto, a necessidade de se pesquisar novos fármacos com potencial leishmanicida. O objetivo da presente Tese de Doutorado foi caracterizar a atividade do tamoxifeno, composto utilizado no tratamento do câncer de mama há décadas, contra diferentes espécies de Leishmania in vitro e in vivo, além de identificar seu possível mecanismo de ação. As concentrações inibitórias de tamoxifeno para 50% de culturas de parasitas tanto de cepas de laboratório como de isolados recentes de pacientes variaram de 5 a 20 mM. Além disso, nossos resultados mostraram que a aplicação intraperitoneal de 20 mg/kg/dia de citrato de tamoxifeno por duas semanas levou à redução significativa no tamanho das lesões e das úlceras na base da cauda de camundongos BALB/c infectados com L. (L.) amazonensis, bem como à diminuição da carga parasitária. Diferentes modelos de infecção animal comprovaram ainda a eficácia de tamoxifeno contra L. (L.) chagasi e L (V.) braziliensis. Apesar da atividade deste fármaco estar diretamente relacionada à inibição da ligação de estrógeno ao seu receptor, ele exibe efeitos moduladores da atividade de proteínas sinalizadoras em concentrações próximas às efetivas contra Leishmania. Primeiramente verificamos que tamoxifeno foi capaz de induzir rapidamente a alcalinização de vacúolos de macrófagos peritoniais contendo amastigotas de L. (L.) amazonensis, sendo este um efeito observado em períodos curtos e longos de incubação com a droga. Esta alcalinização parece não estar diretamente relacionada à morte dos parasitas pela alteração imediata das condições ideais do meio necessário à sobrevivência das formas amastigotas, mas sim ligada ao aumento do efeito leishmanicida de tamoxifeno, uma vez que este composto apresentou-se mais ativo na faixa de pH neutro a moderadamente alcalino. Outro alvo investigado foi a biossíntese de isoprenóides de promastigotas. Células tratadas com tamoxifeno apresentaram redução global na biossíntese de farnesol, geraniol, dolicol, ergosterol e ubiquinona após marcação metabólica com [14C]-leucina, indicando que tamoxifeno não interfere especificamente na síntese de cada um destes produtos. Iniciamos também a investigação dos efeitos do tamoxifeno no metabolismo de ceramidas em Leishmania adotando a estratégia de marcação metabólica de promastigotas com C6-NBD-ceramida. Verificamos que promastigotas de Leishmania são capazes de incorporar eficientemente ceramida conjugada ao fluoróforo NBD. Em nossos ensaios, a incubação de promastigotas tanto com os inibidores clássicos da via de biossíntese de esfingolipídios como com tamoxifeno resultou na alteração do perfil de incorporação dos precursores utilizados. O tratamento com tamoxifeno aumentou a biossíntese de glucosilceramida acetilada, elevou os níveis de ceramida acilada e diminuiu a biossíntese de fosfoesfingolipídios de promastigotas de L. (L.) amazonensis. Finalmente, nossos dados mostraram ainda que tamoxifeno permeabiliza a membrana plasmática de promastigotas de L. (L.) amazonensis e, a partir de estudos por microscopia eletrônica de transmissão, verificamos que este fármaco alterou a estrutura mitocondrial dos parasitas e provocou intensa vacuolização do citoplasma. Os resultados apresentados neste trabalho configuram o primeiro relato da atividade de tamoxifeno contra Leishmania e justificam a realização de futuros testes deste fármaco como uma alternativa na quimioterapia da leishmaniose. / The treatment of cutaneous and visceral leishmaniasis is challenging, since the drugs used are frequently ineffective, very toxic and require parenteral administration. Therefore, the discovery of new drugs with leishmanicidal activity is in pressing need. The objective of this thesis was to characterize the activity of tamoxifen, a drug used in the treatment of breast cancer for decades, against Leishmania spp. in vitro and in vivo, and to identify its possible mechanism of action. The inhibitory concentrations of tamoxifen for 50% of parasite cultures, from reference strains and recent isolates from patients, ranged from 5 to 20 mM. Moreover, we showed that the intraperitoneal administration of 20 mg/kg/day tamoxifen citrate for two weeks led to significant reductions in the lesion and ulcer sizes and parasite burden in L. (L.) amazonensis-infected BALB/c mice. Additionally, the administration of tamoxifen in two other models of animal infection proved its effectiveness against L. (L.) chagasi and L (V.) braziliensis. In an attempt to characterize tamoxifens mechanism of action against Leishmania, we found that this drug was able to induce a rapid alkalinization of macrophage vacuoles containing L. (L.) amazonensis amastigotes. This phenomenon does not appear to be related to the death of the parasites, but rather is linked to an increased antileishmanial effect of tamoxifen. Another target investigated was the interference of tamoxifen in the biosynthesis of isoprenoids. Treated cells showed an overall reduction in the biosynthesis of farnesol, geraniol, dolichol, ergosterol and ubiquinone after metabolic labeling with [14C]-leucine, indicating that tamoxifen does not interfere specifically in the synthesis of those products. We have also studied the effects of tamoxifen on Leishmania ceramide metabolism. The strategy adopted was the metabolic labeling of promastigotes with C6-NBD-ceramide. Our results showed that Leishmania is able to incorporate NBD-ceramide. The incubation of promastigotes with classical inhibitors of sphingolipid biosynthesis as well as with tamoxifen resulted in striking modifications in the pattern of sphingolipid biosynthesis. L. (L.) amazonensis promastigotes treated with tamoxifen showed increased biosynthesis of acetylated glucosylceramide and acyl-ceramide and decreased synthesis of phosphosphingolipids. Finally, our data showed that tamoxifen induced the permeabilization of the promastigote plasma membrane and, based on studies using transmission electron microscopy, we found that this drug altered the mitochondrial structure and caused intense cytoplasmic vacuolization. The results presented here comprise the first report of the activity of tamoxifen against Leishmania and offer support for future trials to evaluate tamoxifen as an alternative for leishmaniasis chemotherapy.

Organismos do gênero Acanthamoeba são muito pouco investigados no Brasil, não se conhecendo a diversidade genética e o potencial patogênico das espécies prevalentes no país. Este estudo examinou a presença de Acanthamoeba em 118 amostras de solo e água de diversas regiões do Brasil e, como resultado, 38 novas culturas axenicas foram estabelecidas. A partir do sequenciamento da subunidade menor do gene ribossômico foi possível genotipar, avaliar o polimorfismo genético das amostras brasileiras e também inferir relações filogenéticas entre isolados clínicos e de ambiente do Brasil e entre esses e as demais espécies/isolados de Acanthamoeba. Para alguns grupos de isolados brasileiros, o potencial patogênico, inferido por indicadores indiretos de virulência (termo- e osmotolerância, secreção de peptidases e efeito citopático), foi também investigado. / Organisms of the genus Acanthamoeba are poorly investigated in Brazil, not knowing the genetic diversity and pathogenic potential of the species prevalent in the country. This study examined the presence of Acanthamoeba in 118 soil and water samples from different regions of Brazil and as a result, 38 new axenic cultures were established. From the sequencing of small subunit ribosomal gene was possible to genotype, to assess the genetic polymorphism of Brazilian samples and also to infer phylogenetic relationships among clinical and environmental isolates from Brazil and between these and other species/isolates of Acanthamoeba. For some groups of Brazilian isolates, pathogenic potential, inferred by indirect indicators of virulence (thermo-and osmotolerance, secretion of peptidases and CPE), was also investigated.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:09:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 389286.pdf: 1859740 bytes, checksum: 5056bcedea79433eb88e0c64523c9659 (MD5) Previous issue date: 2007-03-26 / Angiostrongil?ase abdominal ? uma infec??o zoon?tica causada por Angiostrongylus costaricensis, um nemat?deo com uma localiza??o intra-vascular no mesent?rio. O diagn?stico ? realizado somente com exame patol?gico de fragmentos do tecido ressecado, durante o tratamento cir?rgico de curso cl?nico complicado (perfura??o intestinal e/ou obstru??o). M?todos de imunodiagn?stico mostram muitas dificuldades com rea??o cruzada de anticorpos e a diversidade de resposta humoral. Esfor?os t?m sido direcionados para uma contribui??o na identifica??o e purifica??o de ant?genos espec?ficos de parasitos no desenvolvimento de m?todos sorodiagn?sticos. No presente estudo, foi analisado o uso de uma prote?na recombinante de A. costaricensis, a prote?na de choque t?rmico (HSP 20), em ELISA como sorodiagn?stico. Um dos clones de cDNA, obtido e expresso como uma pequena prote?na de choque t?rmico HSP 20 com 147 amino?cidos, apresentou identidade com seq??ncias de pequenas prote?nas de choque t?rmico de outros nemat?deos. A seq??ncia correspondente foi sub-clonada no vetor de express?o pET-23a-d (+), utilizando a t?cnica de PCR para a constru??o da prote?na recombinante HSP 20. O alto n?vel de express?o de HSP 20 em Escherichia coli BL 21 (DE3), clonado no vetor de express?o, foi observado ap?s indu??o com 1 mM de IPTG a 37 ?C. A etapa da purifica??o do recombinante HSP 20 foi realizada com a resina de Ni-NTA. An?lise do Western blot utilizando soro de um paciente com diagn?stico confirmado para angiostrongil?ase abdominal, indicou que o produto de express?o purificado foi imunog?nico. A sensibilidade da HSP 20 foi de 33%. Entretanto, 100% de especificidade da prote?na recombinante sugere o uso de um painel de ant?genos, na tentativa de m?ltiplos testes de varredura, para um sorodiagn?stico melhor e preciso da angiostrongil?ase abdominal