Orientador: Lisiane Fernandes de Carvalho. / Coorientador: Carolina Krebs de Souza. / Dissertação (Mestrado em Engenharia Química) - Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Centro de Ciências Tecnológicas, Universidade Regional de Blumenau, Blumenau.

O consumo mundial de produtos frescos tem aumentado nos últimos anos, devido a preocupação da população com a saúde. Entretanto, a busca por uma alimentação mais saudável vem aumentando o risco de surtos de doenças veiculadas por frutas e hortaliças, tendo em vista, que estes alimentos são geralmente consumidos in natura. Embora qualquer patógeno possa ser um problema potencial nesses produtos, Salmonella spp. tem grande relevância em saúde pública. A contaminação potencial por esse patógeno em frutas, é possível devido a contaminação cruzada e falta de boas práticas agrícolas durante o cultivo, colheita, manuseio e distribuição. Nas frutas de baixa acidez, dentre as quais está o caqui, Salmonella spp pode ainda ter condições para sobreviver e se multiplicar. O caqui é uma fruta de relevante importância sócio-econômica, com crescente demanda para exportação, no entanto, o mercado importador está cada vez mais exigente em relação a segurança alimentar. No Brasil, não existem informações sobre a ocorrência de Salmonella spp em caqui, bem como, a respeito do comportamento desse patógeno na polpa e na casca dessa fruta. Desse modo, os objetivos do presente estudo foram: (1) verificar a incidência de Salmonella spp na superfície do caqui, (2) estudar a sobrevivência e multiplicação de S. Enteritidis na polpa e na casca dessa fruta armazenada a diferentes temperaturas de incubação. Para tanto, em 2005 foram coletadas 77 amostras de caqui Fuyu e 80 amostras de caqui Rama Forte no varejo na cidade de Campinas-SP e a mesma proporção no ano de 2006. Adicionalmente em 2006 também foram coletadas 134 amostras de caqui Rama Forte e 134 amostras de caqui Fuyu no CEAGESP, na cidade de São Paulo. A pesquisa para Salmonella spp foi realizada pelo sistema BAX®, que se baseia na reação da polimerase em cadeia (PCR). Os parâmetros de crescimento de S. Enteritidis (duração da fase lag, taxa de crescimento exponencial e tempo de geração) foram obtidos dos dados experimentais. Os resultados mostraram que das 582 amostras analisadas 5 (0,9%) foram positivas para Salmonella spp, indicando que condições sanitárias durante o crescimento no campo (água de irrigação, adubo, etc.), colheita, condições de transporte e armazenamento, assim como a manipulação das frutas podem levar a contaminação. Os dados de crescimento obtidos para Salmonella mostram que este patógeno pode sobreviver e se multiplicar tanto na polpa quanto na casca do caqui, nas duas variedades estudadas e mesmo a baixas temperaturas. / The worldwide consumption of fresh produce has increased in the last years, due to an increased concern among the population about health. However, the search for more healthful eating habits has also increasing the risk of acquiring a foodborne disease, as these products generally are consumed raw. Although any pathogen can be a potential problem in these produces, Salmonella spp. is of great relevance in public health. The potential contamination for this pathogen in fruits, is possible due to cross contamination and poor agricultural practices during harvest, handling and distribution. In low acid fruits, amongst which is persimmon, Salmonella spp can still have conditions to survive and to multiply. The persimmon is a fruit of great economic importance, with increasing demand for exportation, however, the import market has an increase demand for food safety. There are not in Brazil, information about the occurrence of Salmonella spp in persimmon, as well as, information regarding the behavior of this pathogen in the pulp and the rind of this fruit. Thus, the objectives of the present study had been: (1) to verify the incidence of Salmonella spp on the surface of persimmon, (2) to study the survival and multiplication of S. Enteritidis on the peel and in the pulp of this fruit stored at different temperatures of incubation. For this survey in 2005 and 2006 harvests, 77 samples and 80 samples of \'Fuyu\' and \'Rama Forte\' persimmon respectively collected in the retail in Campinas city - SP. Additionally in 2006, 134 samples of each \'Rama Forte\' and \'Fuyu\' persimmon were also collected in the CEAGESP, in São Paulo city. The analyses had been carried using the BAX® system (Dupont/Qualicon), that is based on the Polymerase Chain Reaction (PCR). The parameters of growth during the evaluation of the ability of growth of S. Enteritidis (lag phase duration, exponential growth rate and generation time) were obtained from experimental data. Salmonella spp were detected in five samples (0,9%) of those analysed. The growth data obtained for Salmonella indicated that this pathogen can survive and multiply on the peel as well as in the pulp in the two studied varieties and even at low temperatures.

Motivado pela crescente importância que os animais domésticos vêem causando na sociedade humana, tanto em relação à busca de melhor qualidade de vida, quanto em relação ao seu valor epidemiológico, visto que são poucos os estudos sobre este assunto, este trabalho objetivou-se em identificar e traçar o perfil de sensibilidade frente aos antífúngicos das espécies de leveduras potencialmente patogênicas isoladas da mucosa oral de cães sem raça definida, da cidade de Campinas, São Paulo. Por motivos de segurança, os animais selecionados foram anestesiados para a realização de exame clínico da cavidade oral e coleta de amostras da região de mucosa oral, seguida de inoculação em ágar Sabouraund dextrose com cloranfenicol. A partir do crescimento em placa, foram isoladas as colônias de fungos leveduriformes, submetidas a exames macromorfológicos e micromorfológicos, meio cromogênico, provas bioquímicas (urease e método API 20C AUX) e teste de sensibilidade aos antifúngicos. Dos 50 animais participantes do estudo, os cães com idade superior a 4 anos e os que apresentavam doença periodontal tiveram maior percentual de isolamento. Foram identificadas 43 leveduras das 45 amostras isoladas, sendo elas 86% (37) correspondentes ao gênero Candida spp, 11,6% (5) pertencentes ao gênero Trichosporon spp e 2,3% (1) do gênero Malassezia pachydermatis. O perfil de sensibilidade pelo método \"Etest\" identificou importante resistência de algumas amostras à antifúngicos rotineiramente utilizados na clínica médica veterinária, o que ressalta a importância da continuidade deste trabalho para o melhoramento da conduta clínica e para a explicação dos inúmeros tratamentos recidivos tanto em animais como em humanos. / Regarding the increasing impact that that the pets have been causing to the human society as its relation to the search for a better quality of life, and its relation with the epidemiological value, this study aimed to identify and draw the profile of the susceptibility to the antifungal drugs of the potentially pathogenic species of yeasts isolated from the oral canine mucosa of animals from indefinite breed of the city of Campinas, São Paulo. For their safety, the selected animals were anesthetized to have a short clinic exam of the oral cavity performed and to have samples from the oral mucosa collected. Later an inoculation in Sabouraud Dextrose Agar with chloramphenicol was performed. After the growth on a dish, colonies of fungi with yeast shape were isolated and submitted to macro morphological and micro morphological exams, chromogenous medium, biochemical proofs (urease and API 20C AUX method), and the test of the susceptibility to the antifungal drugs. Among the 50 animals taken part in the study, the dogs over 4 years old and those which presented periodontal diseases had a higher isolation percentage. Yeasts were identified 43 of the 45 isolates, being that 86%(37) were from the genus Candida spp, 11,6% (5) belonged to the genus Trichosporon spp., and 2,3% (1) belonged to the genus Malasseziapachydermatis.The susceptibility profile through the \"Etest®\" method identified a relevant resistance of some strains to the antifungal drugs commonly used in the veterinary medical clinic. This found highlights the relevance of the continuity of this study to improve the clinical conduct and to explain many relapse treatments in both animals and humans.

Introdução: Nas últimas décadas, as infeções fúngicas invasivas por leveduras tornou-se um importante problema de saúde pública, dado sua incidência crescente relacionada ao aumento da população suscetível. O reconhecimento destes patógenos em aspectos como, distribuicão ambiental e caraterísticas fenotípicas, são pilares essenciais para sua vigilância e controle. Objetivo: Descrever a frequência dos agentes de criptococose e outras leveduras com potencial patogênico e comparar essa frequência em excretas de aves silvestres em três municípios do estado de São Paulo, com vistas a melhor conhecimento da distribuição desses agentes no ambiente, além de determinar o perfil de suscetibilidade in vitro a antifúngicos de uso clínico. Método: No período de 2 anos, aves silvestres foram identificadas em áreas de circulação de 3 municípios de São Paulo (Praia Grande, Santos e Rio Claro) e submetidas à coleta de excretas para isolamento de leveduras com potencial patogênico. Análise microscópica e macroscópica para classificação presuntiva de gênero foram realizados em todas as colônias de leveduras obtidas das amostras de excretas. A suscetibilidade dos isolados de leveduras aos antífúngicos: fluconazol, voriconazol e anfotericina B foi determinada segundo método de referência europeu (AFST-EUCAST). Análise de dados: Foi utilizada a regressão de Poisson com a opção robusta para estimar razões de prevalência e identificar variáveis associadas com os principais isolados identificados, com opção de cluster para agrupar os isolados por excreta. Foi avaliado o nível de concordância entre os dois métodos de identificação (fenotípico e MALDI-TOF), utilizando o coeficiente Kappa. Adicionalmente, foi estimada a correlação entre os MIC´s dos fármacos estudados no total de espécies identificadas, utilizando o coeficiente de correlação de Spearman. Resultados: Das 294 excretas coletadas, 42,2 por cento continham leveduras, incluindo espécies de Candida 62 por cento , seguido por Rhodotorula 16,4 por cento , Cryptococcus 10,4 por cento , Trichosporon 6,6 por cento e Pichia 2,7 por cento . Muitas espécies, verificadas em alta frequência, tem forte potêncial de causar infecção invasiva, como: C. parapsilosis stricto sensu, C. tropicalis, Clavispora lusitaniae, C. krusei, C. orthopsilosis, C. glabrata, C. laurenti, C. albicans, C. metapsilosis, C. nivariensis e Meyerozyma guilliermondii. A resistência ao fluconazol, voriconazol e anfotericina B ocorreu nesses isolados, sendo documentada uma forte correlação entre a susceptibilidade, principalmente entre os azois (fluconazol e voriconazol), no entanto, a correlação mesmo sendo menor também foi significativa entre esses fármacos e a anfotericina. De 13 espécies de aves silvestres dispersoras de leveduras, as de maior frequência foram: Sula leucogaster 26,2 por cento , Turdus leucomelas 17 por cento , Larus dominicanus 15 por cento , Thalasseus maximus 11,2 por cento , Thalasseus acuflavidus 5,4 por cento , Tangara sayaca 4,4 por cento , Turdus amaurochalinus 3,7 por cento , Sterna hirundinacea e Pitangus sulphuratus 2,7 por cento . Os gêneros identificados apresentaram associações entre local, estação do ano e espécies de aves. Conclusões: Dentre as principais espécies de aves estudadas, 3 eram de hábitos migratórios (Thalasseus maximus, Thalasseus acuflavidus e Sterna hirundinacea) o que permite inferir dispersão interamericana de leveduras patogênicas. Diversas espécies resistentes a antifúngicos foram descritas, pela primeira vez, em excretas de aves silvestres conferindo a este estudo o valor de contribuir para o conhecimento da epidemiologia das infecções fúngicas por leveduras. / Background: In recent decades, invasive yeast fungal infections have become an important public health problem, due to their increasing incidence related to the increase in the susceptible population. The recognition of these pathogens in aspects such as environmental distribution and phenotypic characteristics are essential pillars for their surveillance and control. Objective: To describe the frequency of cryptococcosis agents and other yeasts with pathogenic potential and to compare this frequency in excreta of wild birds in three municipalities of the state of São Paulo, with a view to a better knowledge of the distribution of these agents in the environment, in addition to determining the profile of in vitro susceptibility to antifungals for clinical use. Method: During two years, wild birds were identified in circulation areas of three municipalities of São Paulo (Praia Grande, Santos and Rio Claro) and were screened for yeasts with pathogenic potential. Microscopic and macroscopic analysis for presumptive genus classification were performed in all yeast colonies obtained from excreta samples. Susceptibility of yeast isolates to antifungals: fluconazole, amphotericin B and voriconazole was determined according to the European reference method (AFST-EUCAST). Data analysis: Poisson regression was used with the robust option to estimate prevalence ratios and to identify variables associated with the main isolates identified, with option of cluster to group the isolates by excreta. The level of agreement between the two identification methods (phenotype and MALDI-TOF) was evaluated using the Kappa coefficient. Additionally, the correlation was estimated between MICs of the drugs studied in total of species identified, using Spearman\'s correlation coefficients. Results: Of the 294 excreta collected, half contained yeasts, including Candida species (62 per cent ), followed by Rhodotorula (16.4 per cent ), Cryptococcus (10.4 per cent ), Trichosporon (6.3 per cent ) and Pichia (2.7 per cent ). Many species, verified at high frequency, have a strong potential to cause invasive infection, such as: C. parapsilosis stricto sensu, C. tropicalis, Clavispora lusitaniae, C. krusei, C. orthopsilosis, C. glabrata, C. laurentii, C. albicans, C. metapsilosis, C. nivariensis and Meyerozyma guilliermondii. Resistance to fluconazole, voriconazole and amphotericin B occurred in these isolates and a strong correlation was reported between susceptibility, mainly between azole (fluconazole and voriconazole), however, the correlation, even though it was lower, was also significant between these drugs and amphotericin. From 13 species of wild birds dispersing yeasts, the ones with the highest frequency were: Sula leucogaster 26,2 per cent , Turdus leucomelas 17 per cent , Larus dominicanus 15 per cent , Thalasseus maximus 11,2 per cent , Thalasseus acuflavidus 5,4 per cent , Tangara sayaca 4,4 per cent , Turdus amaurochalinus 3,7 per cent , Sterna hirundinacea e Pitangus sulphuratus 2,7 per cent . The identified genera presented associations between site, season of the year and species of birds. Conclusion: Among the main species of birds studied, 3 were of migratory habits (Thalasseus maximus, Thalasseus acuflavidus and Sterna hirundinacea), which allows inferring the inter - American dispersion of pathogenic yeasts. Several species resistant to antifungal were described for the first time in excreta of wild birds, conferring to this study the value of contributing to the knowledge of the epidemiology of fungal infections by yeasts.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-05-03T14:54:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4334538 bytes, checksum: 8b68b0035b83d763aadc2d8775cd8836 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-03T14:54:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4334538 bytes, checksum: 8b68b0035b83d763aadc2d8775cd8836 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho descreve a síntese e o estudo da atividade antifúngica e antibacteriana de quatorze complexos de Ni(II) com fosfinas e N-arilsulfonilditiocarbimatos, e de dez sais derivados de complexos aniônicos bis(N-arilsulfonilditiocarbimato)niquelato(II). Os complexos neutros apresentam a fórmula geral [Ni(S 2C=NSO2R)(Fosfina)], sendo R= C6H5, 4-CH3C6H5, 2-CH3C6H5, 4-FC6H5,4-ClC6H5,4-BrC6H5,4-IC6H5, e Fosfina = cis-1,2- bis(difenilfosfina)eteno(dppet) ou trifenilfosfina (PPh3). Destes, oito são inéditos. Os sais apresentam a fórmula geral: [A]2[Ni(S2C=NSO2R)2], sendo A = (PPh3Me+), (PPh3Et+), (PPh3Bu+), (PPh4+) e (C4H9N+) e R= C6H5 , 4-FC6H5. Destes, seis são inéditos. Para a caracterização dos compostos foram utilizadas medidas de condutividade, medidas de pontos de fusão, espectroscopia eletrônica (UV-vis), espectroscopia vibracional (IV), espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN de 1H e 13 C), e espectrometria de massas de alta resolução. Os dados físico-químicos obtidos estão consistentes com as fórmulas propostas. Os resultados dos experimentos de espectrometria de massas de alta resolução estão consistentes com as composições esperadas. Os espectros vibracionais indicaram a presença dos ligantes nas substâncias sintetizadas e os espectros de UV-vis e RMN confirmaram uma geometria quadrática em torno do átomo de níquel. A atividade dos compostos foi testada frente o fungo Colletotrichum acutatum e as bactérias Escherichia coli e Staphylococcus aureus. Para os compostos neutros com a fosfina dppet, o método Poison Food não se mostrou eficiente para avaliar a atividade antifúngica devido à baixa solubilidade em água dessas substâncias. Já os compostos neutros contendo trifenilfosfina se mostraram muito ativos contra essa espécie de fungo, com os valores de IC50 de modo geral menores que bis(dietilditiocarbamato)zinco, princípio ativo do fungicida Ziram. Não foi possível a obtenção dos valores de IC50 para os compostos iônicos, pois houve a precipitação dos compostos no meio de cultura, mesmo assim foi observada uma atividade de 20 a 45% de inibição para esses compostos a 1,0 mmol.L-1. Somente os compostos com trifenilfosfina apresentaram atividade contra a bactéria E.coli, os demais compostos não mostraram difusão no meio de cultura. Nenhum composto avaliado se mostrou ativo contra a bactéria S.aureus. / The neutral complexes present the general formula [Ni(S2C=NSO2R)(Phosphine)], where R = C6H5, 4-CH3C6H5, 2-CH3C6H5, 4-FC6H5, 4-ClC6H5, 4-BrC6H5, 4-IC6H5, and Phosphine = cis- 1,2-bis(diphenylphosphine)ethylene (dppet) or triphenylphosphine (PPh3). Eight of them are new complexes. The salts have the general formula: [A] 2[Ni(S2C=NSO2R)2], where A = (PPh3Me+), (PPh3Et+), (PPh3Bu+), (PPh4+), (C4H9N+) and R= C6H5 or 4-FC6H5. Six of them are new compounds. Experiments of conductivity, melting points, electronic spectroscopy (UV-vis), vibrational spectroscopy (IR), nuclear magnetic resonance spectroscopy ( 1H and 13 C NMR), and high-resolution mass spectrometry were performed for the characterization of the compounds. The physico-chemical data are consistent with the proposed formulae. The high-resolution mass spectrometry experiment results are consistent with the expected compositions. The vibrational spectra indicate the presence of the dithiocarbimate and/or phosphine ligands. UV-vis and NMR spectra confirmed a quadratic geometry around the nickel atom. The activity of the compounds against the fungus Colletotrichum acutatum was tested using the Poison Food method. The neutral compounds containing PPh3 were very active, with lower IC50 values than bis(diethyldithiocarbamato)zinc, the active ingredient of the fungicide Ziram. The Poison Food method was not efficient to evaluate the antifungal activity of the compounds containing dppet, due to their low solubility in the aqueous medium. The salts inhibited the fungus growth from 20 to 45% at 1,0 mmol.L-1. It was not possible to obtain their IC50 values, due to precipitation of the compounds in the culture medium above this concentration. The activities against the bacteria Escherichia coli and Staphylococcus aureus was tested using the disc diffusion method. The compounds containing PPh3 were active against E. coli and were inactive against the S. aureus. As the other compounds showed no diffusion in the culture medium, their tests were inconclusive.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-07T15:27:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1815676 bytes, checksum: 0d62c2dc57ee0ade1ba91497365e0867 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-07T15:27:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1815676 bytes, checksum: 0d62c2dc57ee0ade1ba91497365e0867 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A mastite bovina é considerada por muitos autores a principal doença do rebanho leiteiro. Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae são patógenos contagiosos comumente associados à forma subclínica e persistente da doença. A caracterização de estirpes em circulação nos rebanhos é de extrema importância na definição de estratégias de manejo para o controle da doença e de marcadores de prognóstico da mastite. No capítulo 1, 175 amostras positivas para o teste California Mastitis (CMT) foram coletadas de vacas holandesas e análises microbiológicas revelaram a presença de S. agalactiae em 34,2% das amostras. Em 36% das amostras foi observado o crescimento de bactérias pertencentes a outros grupos, em especial com S. aureus. A tipagem de S. agalactiae pela metodologia multilocus de repetições em tandem de número variável (MLVA) revelou seis genótipos (SagT1-T6), sendo SagT1 o mais prevalente no rebanho e também o mais frequentemente isolado de infecções mistas com S. aureus. Os isolados de S. agalactiae foram fortes produtores de biofilme in vitro e produziram hemólise do tipo beta. A análise de virulência dos isolados em larvas de Galleria mellonella definiu os tipos SagT3 e SagT1 como os mais e menos virulentos, respectivamente. Porém, dois isolados pertencentes a esses tipos não invadiram nem apresentaram efeito citotóxico em células epiteliais bovinas MAC-T. No capítulo 2, genomas de quatro estirpes de S. aureus causadoras de mastite subclínica, sendo SAU302 e SAU1364 isoladas de infecções persistentes e SAU170 e SAU1269 de infecções não persistentes, foram sequenciados. Uma grande conservação foi encontrada entre os genomas, como tamanho médio de 2,6 Mb, 32,8% de conteúdo GC e 2589 CDS. A tipagem por MLST classificou SAU170, SAU302, e SAU1364 como ST126, um tipo frequentemente encontrado em rebanhos brasileiros, e SAU1269, como ST1, associado a infecções humanas e bovinas. A comparação entre os genomas sequenciados e uma referência construída com genomas de dois isolados de mastite bovina, revelou uma identidade maior que 90% para a maioria dos genes anotados. A análise filogenética dos isolados sequenciados agrupou em ramos separados isolados de diferentes manifestações, sugerindo que algumas das particularidades compartilhadas entre isolados podem estar relacionados à persistência das infecções causadas por eles. A análise de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) mostrou SNPs em genes relacionados à adesão das células bacterianas ao hospedeiro e na sequência de agrC, proteína receptora do sinal de quorum-sensing em S. aureus, alguns deles importantes para estrutura da proteína. / Bovine mastitis is considered the main disease of the dairy herd. Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae are contagious pathogens commonly associated with subclinical and persistent form of the disease. The characterization of circulating strains in herds is of utmost importance to define management strategies to the control of the disease and to identify mastitis prognostic markers. In the first chapter, 175 milk samples positive for the California Mastitis Test (CMT) were collected from Holstein cows and microbiological analyzes revealed the presence of S. agalactiae in 34.2% of samples. The growth of bacteria belonging to other groups, in particular S. aureus, was seen in 36% of the milk samples. Multilocus variable-number tandem repeat analysis (MLVA) revealed the presence of six genotypes (SagT1-T6) of S. agalactiae in the herd with SagT1 being the most prevalent and also the most frequently isolated from mixed infections with S. aureus. S. agalactiae isolates were beta-hemolytic and strong in vitro biofilm producers. Virulence analysis in Galleria mellonella larvae defined the SagT3 and SagT1 types as the most and the less virulent, respectively. However, invasion and cytotoxicity in MAC-T cells did not reveal any difference between them. In Chapter 2, the genomes of four strains of Staphylococcus aureus causing subclinical mastitis, SAU302 and SAU1364 isolated from persistent infections and SAU170 and SAU1269 from non-persistent infections, were sequenced. A major conservation was found among them like the average size (2.6 Mb), the GC content (32.8%), and the CDS (2589). Multilocus Sequencing typing classified SAU170, SAU302 and SAU1364 as ST126, a type often found in Brazilian herds, while SAU1269 was classified as ST1, commonly associated with human and bovine infections. Comparative analyses with the genome of S. aureus RF122, a strain that causes severe mastitis, showed more than 90% of identity with annotated genes. Phylogenetic analysis grouped the sequenced genomes into separate branches suggesting that some of the characteristics shared between the isolates can be related to the persistence of infections. Single nucleotide polymorphisms (SNP) were found in genes related to bacterial adhesion and in agrC that codes for a receptor protein involved in quorum-sensing signaling in S. aureus, some of them important for protein structure.

Motivado pela crescente importância que os animais domésticos vêem causando na sociedade humana, tanto em relação à busca de melhor qualidade de vida, quanto em relação ao seu valor epidemiológico, visto que são poucos os estudos sobre este assunto, este trabalho objetivou-se em identificar e traçar o perfil de sensibilidade frente aos antífúngicos das espécies de leveduras potencialmente patogênicas isoladas da mucosa oral de cães sem raça definida, da cidade de Campinas, São Paulo. Por motivos de segurança, os animais selecionados foram anestesiados para a realização de exame clínico da cavidade oral e coleta de amostras da região de mucosa oral, seguida de inoculação em ágar Sabouraund dextrose com cloranfenicol. A partir do crescimento em placa, foram isoladas as colônias de fungos leveduriformes, submetidas a exames macromorfológicos e micromorfológicos, meio cromogênico, provas bioquímicas (urease e método API 20C AUX) e teste de sensibilidade aos antifúngicos. Dos 50 animais participantes do estudo, os cães com idade superior a 4 anos e os que apresentavam doença periodontal tiveram maior percentual de isolamento. Foram identificadas 43 leveduras das 45 amostras isoladas, sendo elas 86% (37) correspondentes ao gênero Candida spp, 11,6% (5) pertencentes ao gênero Trichosporon spp e 2,3% (1) do gênero Malassezia pachydermatis. O perfil de sensibilidade pelo método \"Etest\" identificou importante resistência de algumas amostras à antifúngicos rotineiramente utilizados na clínica médica veterinária, o que ressalta a importância da continuidade deste trabalho para o melhoramento da conduta clínica e para a explicação dos inúmeros tratamentos recidivos tanto em animais como em humanos. / Regarding the increasing impact that that the pets have been causing to the human society as its relation to the search for a better quality of life, and its relation with the epidemiological value, this study aimed to identify and draw the profile of the susceptibility to the antifungal drugs of the potentially pathogenic species of yeasts isolated from the oral canine mucosa of animals from indefinite breed of the city of Campinas, São Paulo. For their safety, the selected animals were anesthetized to have a short clinic exam of the oral cavity performed and to have samples from the oral mucosa collected. Later an inoculation in Sabouraud Dextrose Agar with chloramphenicol was performed. After the growth on a dish, colonies of fungi with yeast shape were isolated and submitted to macro morphological and micro morphological exams, chromogenous medium, biochemical proofs (urease and API 20C AUX method), and the test of the susceptibility to the antifungal drugs. Among the 50 animals taken part in the study, the dogs over 4 years old and those which presented periodontal diseases had a higher isolation percentage. Yeasts were identified 43 of the 45 isolates, being that 86%(37) were from the genus Candida spp, 11,6% (5) belonged to the genus Trichosporon spp., and 2,3% (1) belonged to the genus Malasseziapachydermatis.The susceptibility profile through the \"Etest®\" method identified a relevant resistance of some strains to the antifungal drugs commonly used in the veterinary medical clinic. This found highlights the relevance of the continuity of this study to improve the clinical conduct and to explain many relapse treatments in both animals and humans.

Os biofilmes, especialmente de bactérias patogênicas como Listeria monocytogenes, têm chamado a atenção nos laticínios pelos riscos que implicam ao consumidor, devido aos repetidos surtos causados por ingestão de lácteos contaminados. A legislação brasileira apenas especifica L. monocytogenes em queijos. Além disso, os biofilmes geram problemas econômicos para a indústria e diminuem a eficiência dos agentes sanificantes empregados. O objetivo do trabalho foi avaliar a formação de biofilmes de L. monocytogenes em diferentes tempos, temperaturas, superfícies e resíduos lácteos, bem como a presença de Lactobacillus plantarum como competidor, assim como analisar a eficiência do processo CIP (Clean In Place) de um pasteurizador de leite com quaternário de amônia. As populações bacterianas dos biofilmes foram avaliadas através da técnica do suabe e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). O modelo experimental foi baseado na formação de biofilmes de L. monocytogenes em cupons de aço inoxidável 304, silicone e borracha. Os cupons permaneceram imersos por 10 horas, a 5ºC e 35ºC, em leite UHT integral, desnatado e creme de leite UHT, seguido da incubação em diferentes tempos (0, 18 e 114 horas) e temperaturas (5ºC e 35ºC) para a formação do biofilme. A competição foi realizada em aço inoxidável a 35ºC, nos tempos 0 e 18 horas. O processo CIP teve sua eficiência avaliada na remoção de biofilmes de L. monocytogenes na presença de leite integral e desnatado, simulando a limpeza e sanificação de um pasteurizador de leite. A formação de biofilmes pro L. monocytogenes foi influenciada pela baixa temperatura (5ºC), podendo ocorrer em áreas de refrigeração dos laticínios. O microrganismo é capaz de sobreviver e formar biofilmes por longos períodos nas superfícies de aço inoxidável, silicone e borracha na presença de resíduos de leite integral, desnatado e creme de leite. O crescimento em competição por Lactobacillus plantarum não inibiu a formação de biofilmes por L. monocytogenes e crescimento de células planctônicas. O processo CIP foi eficiente em todas as condições estudadas, eliminando as células de L. monocytogenes. / The biofilm, especially of pathogenic bacteria Listeria monocytogenes, have been getting the attention in the dairy products for the risks that implicate the consumer, due to the repeated outbreaks caused by ingestion of milky polluted. The Brazilian legislation just specifies L. monocytogenes in cheeses. Besides, the biofilm generate economical problems for the industry and they reduce the agents used sanitizers efficiency. The objective of the work was to evaluate the formation of biofilms of L. monocytogenes in different times, temperatures, surfaces and milky residues, as well as the presence of Lactobacillus plantarum as competitor, as well as analyzing the efficiency of the process CIP (Clean In Place) of a milk pasteurize whit quaternary of ammonium. The bacterial populations of the biofilms were appraised through the technique of the swab and Scanning Electron Microscopy (SEM).The experimental model was based on the formation of biofilms of L. monocytogenes in coupons of stainless steel 304, silicon and rubber. The coupons stayed immersed by 10 hours, to 5ºC and 35ºC, in skim milk UHT, skimmed and cream of milk UHT, following by the incubation in different times (0, 18 and 114 hours) and temperatures (5ºC and 35ºC) for the formation of the biofilm. The competition was accomplished in stainless steel to 35ºC, in the times 0 and 18 hours. The process CIP had his efficiency appraised in the removal of biofilms of L. monocytogenes in presence of skim milk and skimmed, simulating the cleaning and sanitation of a milk pasteurizer. The biofilmes formation for L. monocytogenes was influenced by the low temperature (5ºC), could happen in areas of cooling of the dairy products. The microorganism is capable of to survive and to form biofilmes for long periods in the surfaces of stainless steel, silicon and eraser in the presence of residues of integral milk, skimmed and cream of milk. The growth in competition for Lactobacillus plantarum didn\'t inhibit the biofilms formation for L. monocytogenes and growth of cells. The process CIP it was efficient in all of the studied conditions, eliminating the cells of L. monocytogenes.

Phrynops geoffroanus é uma espécie de quelônio com ampla distribuição na América do Sul, ocupando diversos tipos de habitat, inclusive rios urbanos poluídos. Com o objetivo de se conhecer aspectos ecológicos da espécie em ambientes antropizados, durante os anos de 2006 e 2007 foi realizado um estudo na bacia do rio Piracicaba, tendo como sítios amostrais o rio Piracicaba e seu afluente o ribeirão Piracicamirim. Um dos temas deste estudo foi à avaliação de aspectos sanitários da espécie. Foi investigado o perfil hematológico dos cágados no rio Piracicaba e ribeirão Piracicamirim, e avaliado um índice de estresse (razão heterófilo/linfócito), que além dos dois corpos d\'água foi adicionado um grupo de animais provenientes de cativeiro, da Fundação Parque Zoológico de São Paulo. A diferença entre um rio de maior volume, Piracicaba, e seu afluente Piracicamirim, ambos poluídos e com diferentes históricos de ocupação do solo, pouco influenciaram nas variações dos dados hematológicos dos cágados e os animais não apresentaram nenhum sinal de enfermidade através dos resultados obtidos no hemograma. Estas análises foram o tema do primeiro capítulo desta dissertação. Outro aspecto sanitário avaliado foi a microbiota bacteriana oral dos cágados em ambos os corpos d\'água, abordado no segundo capítulo. As amostras foram incubadas a 25 e 37ºC. Avaliou-se a patogenicidade das bactérias tanto para os cágados quanto para seres humanos. Houve crescimento de bactérias patogênicas para o homem e para os animais e a bactéria mais prevalente a 37ºC foi a Escherichia coli. Apesar disso, os cágados não apresentaram sinal aparente de infecção. Estudos de longo prazo são recomendados para animais residentes em ambientes antropizados, monitorando-se o estado sanitário e aspectos ecológicos e demográficos. / Phrynops geoffroanus is a freshwater turtle species, with a wide distribution in South America, living in many types of habitats, including polluted urban rivers. During 2006 and 2007, aiming to study ecological aspects of the species in anthropogenic environments, it was conducted an investigation at Piracicaba River Basin, in two sample sites, the Piracicaba river and its tributary, Piracicamirim stream. One of the topics studied was a health assessment of the turtles. It was examined the blood profile in Piracicaba and Piracicamirim turtles and evaluated a measure of stress (heterophil/lymphocyte ratio), that had another study group besides the animals from the rivers, turtles in captivity from Sao Paulo Zoo Park Foundation. The difference between a large river, Piracicaba and its tributary Piracicamirim, both polluted and with different soil use and occupation had a little influence on turtles\' hematological variation, and the animals did not show any sign of disease through the blood profile examination. These evaluations were the subject of the thesis\' first chapter. Another part of the health assessment study, subject of the second chapter, was the oral microbiota investigation, performed in Piracicaba and Piracicamirim turtles. The samples were incubated at 25 and 37º Celsius, aiming to check the bacterium\'s pathogenicity for the animals and for humans. The results showed growth of pathogenic bacterium for both and the most prevalent bacteria at 37ºC was Escherichia coli. Although, the turtles did not show any sign of infection. Long-term studies are suggested for turtles living in anthropogenic environments to monitor their health status, demography and ecological issues.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-10-09T20:37:27Z No. of bitstreams: 1 tamiryssilvabarino.pdf: 1193174 bytes, checksum: 4ad4ca2cfdc016bc7f65fda94a5fb98d (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-10-10T12:20:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 tamiryssilvabarino.pdf: 1193174 bytes, checksum: 4ad4ca2cfdc016bc7f65fda94a5fb98d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-10T12:20:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tamiryssilvabarino.pdf: 1193174 bytes, checksum: 4ad4ca2cfdc016bc7f65fda94a5fb98d (MD5) Previous issue date: 2017-02-13 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Microrganismos patogênicos são responsáveis pelo desenvolvimento de diversas infecções, e em ambientes hospitalares, levam muitos pacientes ao óbito. Modificar esse quadro é necessário, todavia as bactérias apresentam distintos mecanismos de resistência após mutações em seu DNA. Além disso, o uso indiscriminado de antibióticos gera continuamente a seleção natural e propagação de cepas mais resistentes fazendo com que os antibióticos percam sua eficácia com o passar dos anos. Diante desse panorama, a elaboração de um nanocarreador contendo peptídeos antimicrobianos (PAMs ou AMPs do inglês Antimicrobial Peptides) tornase uma interessante alternativa contra bactérias patogênicas. O objetivo deste trabalho foi sintetizar nanoesferas de alginato de sódio pelo método de Gelificação Ionotrópica para a entrega de AMPs Lrot3 às células bacterianas de Escherichia Coli 25922 e Staphylococcus epidermidis 12228. A atividade antimicrobiana dos peptídeos livres e nanoestruturados (128, 64, 32, 16, 8 e 4µg/mL), foi avaliada por meio da concentração mínima inibitória (MIC), e o potencial citotóxico investigado em células HEK 293 humanas utilizando o ensaio de MTT (Tetrazólio de azul de tiazolilo). Os dados foram avaliados por ANOVA e as médias comparada pelo teste de Tukey. Para a bactéria E. coli 25922, o peptídeo livre na concentração de 64 µg/mL destacou-se por ser a única concentração com atividade antimicrobiana significativa (P˂0,01), apresentando ação similar ao do cloranfenicol (128 µg/mL e 64 µg/mL). As nanopartículas contendo AMPs, por sua vez, mostraram-se eficazes em todas as concentrações (P˂0,01). Diferentemente se deu no S. epidermidis 12228, onde observou-se maior resistência da bactéria a todos tratamentos. Os resultados do MTT sugerem que as nanopartículas de alginato não apresentam citotoxicidade in vitro, motivando a continuidade deste estudo. Concluindo, os AMPs nanoestruturados tem potencial para serem utilizados no combate a infecções ocasionadas por E. coli. / Pathogenic microorganisms are responsible for the development of various infections, particularly in hospital environment, leading to death in many patients. It is therefore necessary to change this scenario, it is difficult, however, because the bacteria have very distinct resistance mechanisms after mutations in their DNA. Furthermore, the indiscriminate use of antibiotics continuously generates the selection and propagation of more resistant strains, causing loss of effectiveness of antibiotics over the years. In this case, the development of a nanocarrier containing Antimicrobial Peptides (AMPs) becomes an interesting alternative against pathogenic bacteria. This paper aims to synthesize the delivery of AMPs to bacterial cells of Escherichia coli 25922 and Staphylococcus epidermidis 12228 through the use of nanospheres of sodium alginate by ionotropic gelation method. Alginate stands out for being a polyanionic, biodegradable and biocompatible polymer, which show interaction with Lrot3 cationic AMP. The antimicrobial activity of free and nanostructured peptides (128, 64, 32, 16, 8 e 4 µg/mL) was evaluated by the minimum inhibitory concentration (MIC) and the cytotoxic potential investigated in human HEK 293 cells using the MTT Assay (Tetrazolium thiazolyl blue). The data were evaluated by ANOVA and the means compared by Tukey test. For Gramnegative E. coli 25922 bacteria, the free peptide at concentration of 64 µg/mL stood out for being the only concentration with significant antimicrobial activity (P˂0,01), showing similar action to the chloramphenicol, at concentrations of 128 µg/mL and 64 µg/mL, respectively. NPs, in turn, showed inhibitory activity at all concentrations (P˂0,01). Unlike occurred in S. epidermidis 12228, which was observed more bacterial resistance to all treatments. The MTT data suggest that alginate nanoparticles do not exhibit in vitro cytotoxicity, encouraging the continuation of this study. In conclusion, the nanostructured AMPs has the potential to be used to fight infections caused by E. coli.