Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T20:41:37Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_rmb_dr_botfmvz.pdf: 1409163 bytes, checksum: 77f246cac8ac22e33da1c78a59c32e6e (MD5) / O presente trabalho teve por objetivo avaliar os aspectos clínico, laboratorial, histopatológico e tratamento na intoxicação experimental com o veneno da serpente Crotalus durissus terrificus em cães. Foram utilizados 21 cães, adultos, sem raça definida, divididos em três grupos com sete animais: grupo I - somente veneno; grupo II - veneno + cinco ampolas de soro antiofídico + fluidoterapia; grupo III - veneno + cinco ampolas de soro antiofídico + fluidoterapia + alcalinização da urina. O veneno da serpente Crotalus durissus terrificus liofolizado e reconstituído em solução salina foi inoculado pela via subcutânea, na dose de 1mg/kg de peso vivo, na face lateral da coxa do membro posterior esquerdo dos cães dos grupos I, II e III. Os animais foram submetidos às avaliações clínica, hematológica, hemostática, urinálise, bioquímica sérica, hemogasometria, pressão arterial sistólica, eletrocardiograma e mielograma. Três animais de cada grupo foram eutanasiados e foram colhidas amostras do tecido muscular para avaliação histopatológica. Os resultados mostraram a eficácia da soroterapia na neutralização do veneno e mostrou que o veneno da serpente Crotalus durissus terrificus provoca alterações clínica, hematológica, hemostática, de urinálise, hemogasométrica, da pressão arterial sistólica, do mielograma e histopatológica nos cães. Não houve evidências de alterações eletrocardiográficas e bioquímica. / This work evaluated the clinical, laboratorial, histological and treatment in the experimental intoxication with the venom of the Crotalus durissus terrificus snake in dogs. Twenty-one adults (mixed breed) dogs divided in three groups with seven animals were used: group I - only venom; group II - venom + five bladders of anti-ophidic serum + fluid therapy; group III - venom + five bladders of anti-ophidic serum + fluid therapy + alkalization of the urine. The lyophilized venom of the Crotalus durissus terrificus snake was reconstituted in saline solution and inoculated subcutaneous, in the dose of 1mg/kg B.W., in the lateral face of the left thigh of the dogs of the groups I, II and III. The animals were submitted to clinical, hematological evaluation, hemostatic, urinalysis, biochemical, blood gas analysis, systolic arterial pressure, electrocardiogram and mielograma. Three animals of each group were eutanasied and samples from the muscular tissue and popliteal lymphonode were collected for hitopatological evaluation. The results showed the effectiveness of the serum therapy in the neutralization of the venom and it showed that the venom of the Crotalus durissus terrificus snake causes clinical, hematological, hemostatic, of urinary, hemogasometric changes, of the systolic arterial pressure, of the mielograma and histopathological in the dogs. There were no evidences of alterations eletrocardiografic and biochemical alterations.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-19Bitstream added on 2014-06-13T18:39:04Z : No. of bitstreams: 1 matayoshi_pm_me_botfmvz.pdf: 3681017 bytes, checksum: f1870e3236cf8dcb421bbce2949ab641 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se caracterizar o ciclo reprodutivo sazonal de 28 cascavéis adultas Crotalus durissus terrificus (14 machos e 14 fêmeas), recém chegadas da natureza, provenientes da região de Botucatu - SP. Para tanto, foram realizadas avaliações ultrassonográficas do sistema reprodutor e dosagens séricas de progesterona e testosterona. As coletas e os exames foram realizados em diferentes meses do ano (abril, julho, outubro e janeiro), representando as quatro estações climáticas. As fêmeas que apresentaram crescimento folicular também foram avaliadas nos meses de setembro e dezembro de 2010, e abril de 2011 para melhor acompanhamento da dinâmica folicular e evolução gestacional. Foi possível identificar e caracterizar ultrassonograficamente estruturas reprodutivas como testículos, folículos prévitelogênicos e vitelogênicos, embriões e ovos atrésicos. Os testículos apresentaram maior comprimento em janeiro. Os maiores níveis séricos de testosterona foram observados em janeiro e abril, pico da espermatogênese e fase de cópula, respectivamente. Os folículos vitelogênicos em crescimento foram visibilizados nas avaliações de abril e julho. As ovulações e as gestações iniciaram em setembro e outubro, onde foi observado um aumento nos níveis séricos de progesterona que se mantiveram altos durante toda a gestação, decaindo após o parto. As gestações duraram aproximadamente quatro meses e os nascimentos ocorreram entre dezembro e janeiro. As fêmeas em período não reprodutivo apresentaram folículos pré-vitelogêncios e níveis baixos de progesterona em todas as avaliações / This study aimed to characterize the seasonal reproductive cycle of 28 adult Crotalus durissus terrificus rattlesnakes (14 males and 14 females) newly arrived from the wild in the region of Botucatu, SP. For this purpose, we performed sonographic evaluations of their reproductive system and measurement of progesterone and testosterone from serum samples. Blood collections and examinations were conducted in different months of the year (April, July, October and January), which represented the four seasons. Females that had follicular growth were also evaluated in September and December of 2010 and April 2011 for better monitoring of the follicular dynamics and pregnancy evolution. It was possible to identify and characterize by ultrasound reproductive structures like testes, previtellogenic and vitellogenic follicles, atretic eggs and embryos. The testes showed greater length in January. The higher serum levels of testosterone were observed in January and April, which represented the peak phase of spermatogenesis and mating, respectively. Vitellogenic growing follicles were seen in evaluations in April and July. Ovulations and pregnancies started in September and October, when serum progesterone levels increased, and then remained high throughout pregnancy, decreasing after birth. The pregnancies lasted about four months and births occurred between December and January. Females in nonreproductive period had previtellogenic follicles and low levels of progesterone in all evaluations

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-15Bitstream added on 2014-06-13T18:26:28Z : No. of bitstreams: 1 cardoso_ff_me_botib.pdf: 693511 bytes, checksum: ce598a499b044fd23ed66dd6f42f2f0a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os acidentes envolvendo as serpentes do gênero Bothrops se destacam no Brasil e em outros países da América Latina, representando 90% das notificações. O envenenamento botrópico é caracterizado por intensa mionecrose local que não é eficientemente neutralizada pelo único tratamento disponível, isto é, a soroterapia. Como conseqüência, em casos graves, este acidente pode levar a amputação de membros, desabilitando a vítima. Os principais responsáveis pelo desenvolvimento da mionecrose são proteínas com estruturas homólogas às enzimas fosfolipases A2 (PLA2s). Entre essas se destacam as variantes cataliticamente inativas que apresentam como característica um resíduo de lisina na posição 49 (Lys49-PLA2s). Tradicionalmente, as Lys49-PLA2s são consideradas miotoxinas não-neurotóxicas, uma vez que não induzem paralisia in vivo. No entanto, em preparações isoladas, tal efeito é observado. Recentemente, sugeriu-se que a paralisia muscular in vitro, da mesma forma que a lesão muscular, resultaria da atividade desestabilizadora de membrana da fibra muscular induzida por estas toxinas. O presente estudo teve como objetivo investigar a relação entre os efeitos miotóxico e paralisante das Lys49-PLA2s e contribuir para o esclarecimento do mecanismo de ação e da relação estrutura/atividade dessas toxinas. Sendo assim, realizaram-se estudos miográficos e morfológicos em preparações neuromusculares de camundongos utilizando a PrTX-I (Lys49-PLA2 isolada do veneno de Bothrops pirajai) e potenciais inibidores vegetais (ácido rosmarínico, ácido caféico e ácido aristolóquico). Os resultados obtidos mostraram as diferentes capacidades dos compostos vegetais em neutralizar os efeitos miotóxico e paralisante da PrTX-I. Assim, o ácido rosmarínico neutralizou ambos os efeitos eficientemente... / Accidents caused by Bothrops snake genus stand out in Brazil and other Latin American countries, representing 90% of notifications. Bothropic envenoming is characterized by intense local myonecrosis, not effectively neutralized by serum therapy, the only available treatment. As a result, in severe cases, these accidents can lead to amputation of limbs, disabling the victim. The main responsibles for myonecrosis development are proteins with homologous structures from enzymes phospholipase A2 (PLA2s). Among these stand out catalytically inactive variants that have a characteristic lysine residue at position 49 (Lys49-PLA2s). Traditionally, Lys49-PLA2s myotoxins are considered non-neurotoxic, since they do not induce paralysis in vivo. However, this effect is observed in isolated preparations. It was recently suggested that muscle paralysis in vitro, as well as muscle injury, would result from the destabilizing activity of the muscle fiber membrane induced by these toxins. This study aimed to investigate the relationship between paralyzing and myotoxic effects of Lys49-PLA2s and contribute to the elucidation of the mechanism of action and structure/activity relationship of these toxins. Therefore, myographical and morphological studies were performed in neuromuscular preparations of mice using PrTX-I (Lys49-PLA2 isolated from Bothrops pirajai venom) and potential inhibitors from plants (rosmarinic acid, caffeic acid and aristolochic acid) as experimental tools. The results showed the different skills of plant compounds to neutralize myotoxic and paralyzing effects of PrTX-I. Thus, the rosmarinic acid efficiently neutralized both effects, whereas caffeic acid only partially inhibited the... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-20Bitstream added on 2014-06-13T20:42:45Z : No. of bitstreams: 1 cavalcante_wlg_dr_botib.pdf: 540446 bytes, checksum: aa99d8f07bfca51a15835afc3dc14831 (MD5) / As fosfolipases A2 (PLA2s) que apresentam substituição do resíduo de aspartato pelo de lisina na posição 49, PLA2s Lys49 homólogas, são importantes componentes miotóxicos dos venenos de serpentes da família Viperidae. Estas proteínas induzem severa mionecrose através de um mecanismo cálcio-independente. Tradicionalmente, as PLA2s Lys49 são classificadas como miotoxinas não-neurotóxicas, visto que não causam paralisia quando injetadas in vivo, mesmo em doses elevadas. No entanto, vários estudos in vitro demonstram que as PLA2s Lys49 dos venenos de serpentes do gênero Bothrops induzem bloqueio neuromuscular em preparações isoladas. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi avançar no conhecimento do mecanismo da ação paralisante in vitro destas toxinas. Para tanto, foram caracterizadas as atividades da MjTX-II, isolada do veneno da Bothrops moojeni, em preparações frênico-diafragma de camundongos, através de estudos miográfico, eletrofisiológico e morfológico. Os efeitos desta toxina foram comparados com os da PrTX-I e da BthTX-I, isoladas do veneno da Bothrops pirajai e da Bothrops jararacussu, respectivamente. Além disto, foi avaliada a capacidade da suramina e do extrato aquoso de Casearia sylvestris em neutralizarem as ações destas toxinas. Os resultados obtidos mostraram que a MjTX-II, da mesma forma que a BthTX-I e a PrTX-I, induziu efeitos miotóxico e bloqueador neuromuscular na preparação frênico-diafragma de camundongos. O estudo eletrofisiológico revelou a atividade despolarizante das três toxinas na membrana da fibra muscular, bem como a habilidade da MjTX-II em induzir aumento na freqüência dos potenciais de placa motora terminal em miniatura. A pré-incubação com e extrato aquoso de Casearia sylvestris neutralizou as atividades miotóxica e bloqueadora neuromuscular das três toxinas. De forma similar, a pré-incubação com... / Phospholipases A2 (PLA2s) with a lysine substituting for the highly conserved aspartate 49, Lys49 PLA2 homologues, are important myotoxic components in venoms from snakes of Viperidae family. These proteins induce conspicuous myonecrosis by a catalytically-independent mechanism. Traditionally, the Lys49 PLA2 homologues are classified as non-neurotoxic myotoxins given their inability to cause paralytic effect when injected in vivo, even at relatively high doses. However, a series of in vitro studies has shown that several Lys49 PLA2 homologues from Bothrops snake venoms induce neuromuscular blocking activity on nerve-muscle preparations in vitro. Therefore, the aim of this work was to advance in the understanding of the mechanisms underlying the in vitro paralyzing action of these proteins. Thus, we characterized the activities of MjTX-II, from Bothrops moojeni venom, in mice phrenic-diaphragm preparation by means of myographical, electrophysiological and morphological approaches. The effects of this toxin were compared with those of PrTX-I and BthTX-I, from Bothrops pirajai and Bothrops jararacussu venoms, respectively. Besides this, we evaluated the ability of suramin and the aqueous extract of Casearia sylvestris in neutralizing the actions of these toxins. The results showed that the MjTX-II, as well as BthTX-I and PrTX-I, induced myotoxic and neuromuscular blocking activities in phrenic-diaphragm preparation of mice. The electrophysiological study revealed the depolarizing activity of these toxins in the muscle fiber membrane and the ability of MjTX-II to increase the frequency of miniature endplate potentials. The pre-incubation with the aqueous extract of Casearia sylvestris neutralized both myotoxic and neuromuscular blocking activities of all toxins. Similarly, the pre-incubation with suramin neutralized the activities of MjTX-II. Taken together, these findings suggest that the ... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-18Bitstream added on 2014-06-13T20:31:20Z : No. of bitstreams: 1 saad_e_me_botfm.pdf: 33538599 bytes, checksum: 7da3936c04f4568697b6251d1fd6b720 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O veneno de Bothrops jararaca é constituído de misturas complexas de toxinas e entre os principais componentes estão as lectinas, metaloproteinases, serinoproteinases, desintegrinas, fosfolipases e os peptídeos. Esta composição pode variar de acordo com a idade, o sexo e a região da serpente. Este trabalho avaliou a variação individual do veneno de Bothrops jararaca da região de Botucatu – São Paulo, por meio da sua caracterização enzimática, bioquímica e farmacológica. Foram utilizados testes in vitro e ensaios biológicos. As atividades dos venenos foram comparadas ao Veneno Referência Nacional. A dosagem protéica apresentou variações entre os grupos de serpentes adultas (80% proteínas) e filhotes (40% proteínas). O perfil eletroforético apresentou perfis similares, geralmente com massas moleculares de 50 a 25 kDa, porém com variações intraespecíficas. O RP-HPLC revelou variações na concentração das proteínas. Na atividade coagulante não houve variação entre os grupos formados por adultos, no entanto, houve uma grande variação entre os grupos de filhotes e Veneno Referência Nacional, sendo estes mais coagulantes. A atividade hemorrágica mostrou maior atividade nos venenos de animais adultos, principalmente em machos recém chegados da natureza. Entretanto, os filhotes mantidos em regime de cativeiro apresentaram valores elevados, ficando muito próximos aos valores obtidos de machos adultos. Na atividade edematogênica, verificou-se um aumento do edema em todos os grupos de estudo não sendo possível avaliar se houve uma variação ontogenética entre os grupos estudados. Na dose letal média (DL50) houve uma grande variação de toxicidade em relação aos venenos, sendo as fêmeas cativas, três vezes mais tóxicas comparadas aos filhotes. Os resultados deste estudo ilustram a complexidade intra e interespecífica presentes em venenos de serpentes... / Bothrops jararaca venom comprises a complex mixture of toxins. Among its main components are: lectins, metalloproteinases, serine proteinases, disintegrins, phospholipases, and peptides. The venom composition can be present age, sex and region variation. This present study evaluated the individual variation of Bothrops jararaca venom in Botucatu region, São Paulo state, through enzymatic, biochemical and pharmacological characterizations of snake venoms which employed in vitro techniques and in vivo analysis. Venoms actions were compared with those of the National Venom Reference. Protein dosage varied between adult (80% proteins) and newborn (40% proteins). The electrophoretic profiles were similar, usually presenting molecular masses from 25 to 50 kDa; however, intraspecies variations were present. Due to the complexity of the technique, it was not possible to detect the individual chromatographic variations by means of RP-HPLC revealed individual protein variations on venom composition. There was no variation in the coagulant activity among adult groups; however, a great variation was observed between newborn groups and the National Venom Reference, the latter showing higher coagulant activity. Venoms from adult animals revealed greater hemorrhagic activity, mainly in newly captured males. Nevertheless, newborn kept in captivity also presented elevated hemorrhagic activity, close to that of adult males. Regarding the edematous activity, there was edema increase in all studied groups, therefore, it was not possible to evaluate if ontogenetic variations were present among studied animals. Concerning the median lethal dose (LD50), a great variation in venom toxicity was observed and captive females were three times more toxic when compared to newborn. Our findings showed the intraand interspecies complexity of snake venoms possibly represented by ontogenetic, sexual and environmental... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-09-26T13:15:00Z No. of bitstreams: 2 Tese - Kayena Delaix Zaqueo.pdf: 7739033 bytes, checksum: 806f81f900a0ed32e6a2052560d17a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-09-26T13:15:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Kayena Delaix Zaqueo.pdf: 7739033 bytes, checksum: 806f81f900a0ed32e6a2052560d17a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T13:15:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Kayena Delaix Zaqueo.pdf: 7739033 bytes, checksum: 806f81f900a0ed32e6a2052560d17a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-08-07 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Snake venoms are formed by organic and inorganic compounds and result in a complex product of biological nature which present as main objectives the detention, death and the promotion of initial digestion of its prey. In addition, presents a vast potential for exploration of molecules with pharmaceutical applications. Among organic compounds protease should be highlighted due its ability to cause changes on hemostatic system. Snake venoms serine proteases (SVSPs) are a class of proteases that act on different factors of the coagulation cascade. One SVSPs class is described as thrombin-like (SVTLEs) by mimicking some thrombin activities and displays coagulant ability in vitro through the degradation of fibrinogen chains α and/or β. The objectives were (i) to characterize structurally BpirSP-39 previously isolated from Bothrops pirajai venom and (ii) to isolate and characterize the first serine protease (SP) of B. brazili. Studies of this magnitude are justified because they can provide important information on the involvement of proteins during envenoming, which can contribute to a better understanding of the mechanisms of action of these enzymes. Primary and tertiary structures model of both isolated SPs were elucidated. BpirSP-39 presented 224 amino acids and has high identity when compared to other SVSPs. BbrzSP-32 was obtained from B. brazili venom after two chromatographic steps (affinity and reverse phase) and its primary structure showed 240 amino acid residues. Both SPs characterized are enzymes which may take the SP’s structure of Agkistrodon halys (PDB ID: 4E7N), an enzyme used as a model for molecular modeling. The enzymes are glycoproteins globular and monomeric with two α-helices and two barrels formed by sheet-β. BbrzSP- 32 showed 36 kDa of relative molecular mass and its absolute mass was confirmed by mass spectrometry as 32,520 Da. It present 79.48% identity when compared to other SVSPs and was able to degrade the α-chain of fibrinogen, in vitro models, and is considered a SVTLE-A. It showed a dose-dependent activity in the process of degradation of fibrin networks demonstrating greater specificity for this activity when compared to its thrombolytic action. BbrzSP-32 demonstrated proteolysis activity on gelatin and chromogenic substrates for serine proteases and thrombin-like enzymes (S- 2288 and S-2238 respectively), besides having coagulant activity on human plasma. 13 After pre-incubation with PMSF and benzamidine the coagulants and proteolytic activities on S-2288 and S-2238 substrate were reduced. BbrzSP-32 shows stability against pH and temperature variations, demonstrating optimum activity between 30 and 40 °C and in the pH range 7.5 to 8.5. The enzyme does not induce or interferes with the clotting washed platelets. When incubated with parasites Trypanosoma cruzi or Leishmania infantum, promastigotes and the epimastigote forms, respectively, and S. epidermidis (gram positive-bacteria), the enzyme presented to cytotoxic on microorganisms, furthermore, was able to reduce the biofilm formation by the bacteria species. Both SPs present potential biotechnological. / Os venenos de serpentes são constituídos por compostos orgânicos e inorgânicos, resultando em um produto biológico eficiente e de natureza complexa, que tem como principais objetivos a imobilização, morte e a promoção da digestão inicial das presas. Além disso, apresentam um enorme potencial para prospecção de moléculas com aplicação farmacológica. Dentre os compostos orgânicos destacam-se as proteínas, principalmente as proteases, pois apresentam capacidade em alterar o sistema hemostático. As serinoproteases dos venenos de serpentes (SVSPs) pertencem à classe de proteases que agem sobre diferentes fatores da cascata de coagulação. Uma das classes de SVSPs é descrita como trombina-símile (SVTLEs) por mimetizar algumas atividades da trombina, exibindo capacidade coagulante in vitro por intermédio da degradação das cadeias α e/ou β do fibrinogênio. Os objetivos do trabalho foram (i) caracterizar estruturalmente a BpirSP-39 isolada previamente do veneno de Bothrops pirajai e (ii) isolar e caracterizar a primeira serinoprotease (SP) do veneno de B. brazili. Estudos dessa magnitude justificam-se, pois podem trazer importantes informações sobre a participação das proteínas durante o envenenamento, podendo auxiliar no melhor conhecimento sobre os mecanismos de ações destas enzimas. As estruturas primárias, bem como, os modelos tridimensionais de ambas SPs isoladas foram elucidados. A BpirSP-39 possui 224 aminoácidos e apresenta elevada identidade com outras SVSPs. A BbrzSP-32 foi obtida do veneno de B. brazili após duas etapas cromatográficas (afinidade e fase reversa) e sua estrutura primária apresentou 240 resíduos de aminoácidos. Ambas as enzimas caracterizadas podem assumir a estrutura da SP de Agkistrodon halys (PDB ID: 4E7N), proteína utilizada como modelo para a modelagem molecular, sendo glicoproteínas monoméricas globulares com duas α- hélices e dois barris formados por folhas-β. Com relação à BbrzSP-32, por intermédio de eletroforese foi obtida a massa molecular relativa (36 kDa), sendo sua massa absoluta confirmada por espectrometria de massa como 32.520 Da. A BbrzSP-32 possui identidade de até 79,48% quando comparada a outras SVSPs e foi capaz de, em modelos in vitro, degradar a cadeia α do fibrinogênio, sendo considerada uma SVTLE11 A. Possui atividade dose dependente no processo de degradação de redes de fibrina, demonstrando maior especificidade por essa atividade quando comparada à sua ação trombolítica. Apresenta atividade de proteólise sobre gelatina e substratos cromogênicos, para serinoproteases e enzimas trombina-símile (S-2288 e S-2238, respectivamente), além de possuir atividade coagulante sobre o plasma humano. As atividades de proteólise sobre os substratos S-2288 e S-2238, bem como, coagulantes, foram reduzidas por PMSF e benzamidina e, em menor proporção por EDTA. A BbrzSP-32 apresenta relativa estabilidade frente a variações de pH e temperatura, demonstrando maiores atividades entre 30 e 40 ºC e, em intervalo de pH 7,5 à 8,5. A enzima não induz ou interfere na coagulação de plaquetas lavadas. Quando incubada com os parasitos Trypanosoma cruzi e Leishmania infantum, nas formas epimastigota e promastigota, respectivamente, e bactérias gram-positiva da espécie Staphylococcus epidermidis, apresentou-se citotóxica sobre os microrganismos, além disso, foi capaz de reduzir o biofilme formado pela espécie de bactéria. Ambas SPs apresentam potenciais biotecnológicos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-21Bitstream added on 2014-06-13T20:21:23Z : No. of bitstreams: 1 ullah_a_dr_sjrp.pdf: 8822371 bytes, checksum: 27ee15e9c877124a634e8bf6e77c40bb (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Um certo número de proteínas do veneno foram purificadas, caracterizadas e as suas estruturas foram determinadas para delinear as suas especialidades. (a) A LAAO de Bothrops jararacussu indicou uma maior especialidade para os resíduos hidrófobos, devido a uma substituição de Trp430por lle. O FAD ligado estava em uma conformação diferente do relatado em outros estudos. (b) O domínio rico em cisteína da metaloproteinase (MP III) de Bothrops moojeni pode adotar diferentes orientações relativas. (c) O local de distribuição de carga de serino proteinases é fundamental para determinar a especificidade da enzima. (d) A conformação tetramérica da Lys49 PLA2 de Bothrops brazili indica coexistência de dois estados diméricas. (e) A adição de uma segunda ponte dissulfeto estabiliza o loop catalítico e Trp 230 adota uma conformação diferente na ligação do substrato. Estes resultados contribuem para melhorar a nossa compreensão do modo de ação e função dessas proteínas / A number of venom proteins were purified, characterized and their structures were determined to delineate their specificities. (a) The LAAO from Bothrops jararacussu indicated a higher specifity for hydrophobic residues due to a substitution of Trp430 by lle. The bound FAD was in a diferente conformation to that reported in other studies. (b) The cysteine rich domain of the metalloproteinase (MP III) from Bothrops moojeni can adopt different relative orientations. (c) The local charge distribution of serine proteinases is instrumental in determining enzyme specificity. (d) The tetrameric conformation of the Lys49 PLA2 from Bothrops brazili indicates coexistence of two dimeric states. (e) The addition of a second disulphide bridge stabilizes the catalytic loop and Trp 230 adopts a different conformation on substrate binding. These results contribute to improve our understanding of the mode of action and function of these proteins

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-13Bitstream added on 2014-08-13T18:01:14Z : No. of bitstreams: 1 000734578_20141213.pdf: 582180 bytes, checksum: 39bc1ce8faae49b36e5f6872f7230f69 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-19T18:32:48Z: 000734578_20141213.pdf,Bitstream added on 2014-12-19T18:33:35Z : No. of bitstreams: 1 000734578.pdf: 6353831 bytes, checksum: 2085747c5839b745c38dd84ed2d34826 (MD5) / Ainda nos dias de hoje, o envenenamento ofídico é um problema de saúde pública, afetando sobretudo, regiões de clima tropical, subtropical e áreas rurais de países da África, Ásia, Oceania e América Latina. No Brasil, os gêneros de serpentes Bothrops e Crotalus são responsáveis por quase 90% dos acidentes ofídicos, sendo que os acidentes provocados por este último apresentam relativa alta taxa de mortalidade. O veneno das serpentes do gênero Bothrops possuem uma classe de fosfolipases A2, as Lys49-PLA2s, que não possuem atividade catalítica, mas são capazes de induzir a mionecrose por uma mecanismo não catalítico que não é totalmente conhecido. Com relação às fosfolipases A2 veneno das serpentes do gênero Crotalus, o complexo crotoxina, formado pela crotoxina A (não catalítica) e a crotoxina B (catalítica) pode constituir até cerca de 60% do veneno desses animais, como no caso da subespécie Crotalus durissus terrificus, e é uma potente neurotoxina que provoca um grande bloqueio da transmissão neuromuscular. Neste trabalho, utilizando diversas técnicas teóricas e experimentais, sobretudo cristalografia de raios X, são apresentados diversos resultados que visam aprofundar o conhecimento acerca do funcionamento destas proteínas. Com relação à crotoxina, é apresentado a estrutura cristalográfica da crotoxina B de Crotalus durissus colillineatus, a expressão heteróloga da isoforma CBa2 da crotoxina B de Crotalus durissus terrificus para a posterior produção de formas mutantes sítio-dirigidas e resultados da análise do espalhamento de raios X a baixo ângulo da crotoxina e de suas subunidades isoladas, gerando informações relevantes e inéditas acerca da oligomerização destas proteínas. No caso das Lys49-PLA2s isoladas do veneno botrópico, são apresentadas duas novas estruturas cristalográficas dessa classe de proteínas isolada da serpente amazônica B. brazili. A análise ... / Snakebite is a very serious public health problem still today, affecting tropical and subtropical countries, especially the rural areas of Africa, Asia, Oceania and Latin America. In Brazil, Bothrops and Crotalus snake genus are responsible of almost 90% of snakebites. The venoms of Bothrops snakes have a class of phospholipases A2, known as Lys49-PLA2s, which do not have catalytic activity. However, they are able to induce myonecrosis by a non-catalytic mechanism that is not fully understood. In the venom of Crotalus snakes, a phospholipase A2, known as crotoxin constitutes about 60% of the venom from these animals. This protein is a potent neurotoxin that causes a large block of neuromuscular transmission formed by complexation of crotoxin A (non-catalytic) and crotoxin B (catalytic). In this work, it was used several theoretical and experimental techniques, in particular X-ray protein crystallography, to generate information to extend the knowledge of the action of these proteins. Regarding to crotoxin, the crystal structure of crotoxin B isolated from Crotalus durissus colillinetaus was solved and the heterologous expression of isoform CBa2 of crotoxin B from Crotalus durissus terrificus was performed, in order to, subsequently, produce site-directed mutants. Furthermore, it is presented small angle X-ray scattering experiments with the crotoxin and its isolated subunits that provided intriguing and novel information about the oligomerization of these proteins. Regarding to Lys49-PLA2s from Bothrops snakes, it is presented two new crystal structures of this class isolated from Amazonian snake B. brazili. The analysis of these structures and the structural comparison to other Lys49-PLA2s crystallographic structures generated new information about the position of hydrophobic residues in C-terminal portion of these proteins. This information led us to a new proposition of the mechanism of action of these proteins. It is also presented ...

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:28:39Z : No. of bitstreams: 1 000851800.pdf: 2743529 bytes, checksum: 906cc73f800fb84816d009112f3a0c9b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / INTRODUÇÃO: A cirrose é o estágio final da doença hepática. Causada principalmente pelas hepatites virais e ingestão de álcool, o único tratamento específico atual é o transplante O projeto Global Burden of Disease (GBD) publicou recentemente na BMC Medicine uma nova avaliação da mortalidade pela cirrose. Vários métodos e fontes de dados levaram a estimativa global de pouco mais de um milhão de mortes em 2010, cerca de 2% de todas as mortes. Nos últimos anos, as pesquisas biotecnológicas favoreceram a descoberta da terapia alternativa para cirrose usando células tronco. Estas geraram grande expectativa na regeneração tecidual e sua aplicação no tratamento. Um dos grandes desafios enfrentados foi sua reduzida fixação das células no fígado, com dispersão para todo organismo e sem a efetividade esperada. As metodologias ainda não encontraram uma maneira eficaz de impedir que estas células difundam para os outros órgãos diminuindo sua eficácia pretendida. OBJETIVO: Avaliar o selante de fibrina derivado da peçonha de serpente (SFDPS) como arcabouço para células tronco mesenquimais (CTMs) em fígados cirróticos. MÉTODOS: O modelo de cirrose experimental em ratos foi induzido pela tioacetamida (C2H5NS), aplicada duas vezes por semana por via intraperitoneal (i.v.) na dose de 200mg/kg. A coleta de sangue foi realizada uma vez por mês para as analises bioquímicas. O isolamento das células tronco foi realizado de acordo com Gasparotto et al., 2014. A marcação para citometria foi realizada em segunda passagem com os marcadores RT1 AW2 FITC, CLASS RT1 PE, CD11b, CD44, CD90, CD34, CD105, CD73, CD45, ICAM. A biomarcação da serinoprotease, um dos componentes do selante, foi realizada com o kit Alexa Fluor 488 Protein Labeling Kit (A30006v). A cirurgia foi realizada sob anestesia inalatória com isoflurano; os animais foram selecionados aleatoriamente em três grupos os quais receberam o tratamento especificado. Na... / Introduction: Cirrhosis is the final stage of liver disease mainly caused by viral hepatitis, alcohol intake, and currently it can only be reversed by liver transplantation. In a new assessment of mortality of liver cirrhosis by design Global Burden of Disease (GBD) in the BMC Medicine, a variety of methods and data sources has led to an overall estimate of just over a million deaths in 2010, which was about 2% of all deaths. In recent years, research has intensified on biotech issues, favoring therapeutic discovery of stem cells to cirrhosis, which have generated great expectations in tissue regeneration of the liver and its application. However, a major problem faced was its low setting in cirrhotic liver, with spread to the whole body and without the expected effectiveness. The investigations have not yet found a way to effectively prevent stem cells spread to other organs reducing their effectiveness regeneration. AIM: Evaluate the fibrin glue derived from snake venom (SFDPS) as a scaffold for stem cells in cirrhotic livers. Methods: The model of experimental cirrhosis in rats was induced by Thioacetamide (C2H5NS), twice per week intraperitoneally (iv) at 200 mg / kg. The of blood collection was performed for biochemical analysis in B200 equipment. Isolation of stem cells was performed according Gasparotto et al. 2014. The markup for cytometry was performed on the second pass with markers RT1 AW2 FITC, CLASS RT1 PE, CD11b, CD44, CD90, CD34, CD105, CD73, CD45, ICAM. The biomarker of serine protease was performed with Alexa Fluor 488 Protein Labeling Kit (A30006v) kit. The surgery has been realized with inhalational anesthesia, the animals were separated into three groups where they received the treatment selected. Histology of 5μm sections were hematoxylin and eosin for staining (HE) and Picrosirius. Immunostaining was performed according to kit Click-it ® Imaging kits EdU. RESULTS: The development of cirrhosis was macroscopically ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-06Bitstream added on 2014-06-13T19:12:06Z : No. of bitstreams: 1 cunha_rm_me_botib.pdf: 829808 bytes, checksum: 0d58883f9479527d834af5abe27ce09a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os acidentes botrópicos representam cerca de 87% dos envenenamentos ofídicos registrados no Brasil e se destacam pelas graves seqüelas que limitam a vida do acidentado. O principal efeito tóxico local destes é a mionecrose, que pode levar à perda tecidual permanente e à amputação. A mionecrose pode ser decorrente da isquemia do tecido muscular, causada por fatores hemorrágicos presentes nestes venenos (metaloproteases), ou da presença de miotoxinas (PLA2s) que afetam diretamente o tecido muscular. O método mais eficaz para o tratamento dos envenenamentos ofídicos é a soroterapia passiva. No entanto, esta é limitada devido à relativa ineficácia do soro em neutralizar a mionecrose dos venenos botrópicos, além de muitas comunidades não terem acesso à soroterapia. Estes fatores conduzem a busca de métodos alternativos, como o uso de extratos vegetais. Evidências mostram que o extrato aquoso da Casearia sylvestris, conhecida popularmente como “guaçatonga, é capaz de neutralizar efeitos tóxicos de venenos brutos e de suas miotoxinas isoladas. A Casearia sylvestris apresenta diversos outros efeitos terapêuticos como: anti-séptico, antiinflamatório, anestésico local, anti-tumoral, anti-úlcera e cicatrizante. Devido à escassez de estudos experimentais para avaliar a eficácia de extratos vegetais na redução dos danos locais ocasionados pelo envenenamento botrópico, torna-se importante avaliar a potencial atividade antiofídica da Casearia sylvestris. O presente estudo teve por objetivo investigar o uso do extrato aquoso da Casearia sylvestris, como terapêutica tópica dos efeitos locais do envenenamento botrópico experimental em camundongos. Foi avaliada a capacidade do extrato bruto da planta em neutralizar a mionecrose induzida pelo veneno da Bothrops jararacussu e/ou acelerar o processo de regeneração... / Bothrops accidents represent about 87% of snakebites recorded in Brazil and account for serious the consequences that affect the life of the victim with social and economic repercussions. Its main toxic effect is myonecrosis, which can lead to permanent tissue loss and amputation. Myonecrosis may result from muscle tissue ischemia, hemorrhage caused by factors present in these venoms (metalloproteases), or the presence of myotoxins (PLA2s) that directly affect muscle tissue. The most effective treatment is passive serotherapy. However, this is limited due the relative ineffectiveness of the serum to neutralize the myonecrosis of Bothrops venoms and the lack of access to serotherapy by many communities. These factors lead to alternative methods such as the use of plant extracts. Evidence shows that the aqueous extract of Casearia sylvestris, known popularly as guaçatonga, is able to neutralize the toxic effects of venom and their crude myotoxins isolated. Casearia sylvestris presents several other therapeutic effects such as, antiseptic, antiinflammatory, local anesthetic, anti-tumor, anti-ulcer and wound healing. Due to the scarcity of experimental studies to evaluate the efficacy of plant extracts in reducing the harm caused by Bothrops envenomation, it is important to evaluate the potential activity of antiophidic Casearia sylvestris as a complement to conventional serum therapy. The present study aimed to investigate the use of aqueous extract of Casearia sylvestris, topical therapy as complementary to local effects of Bothrops envenomation in experimental mice. We evaluated the ability of the crude extract of the plant to neutralize myonecrosis induced by the venom of Bothrops jararacussu and / or accelerate the process of muscle regeneration. The onset of myonecrosis and the regenerative process... (Complete abstract click electronic access below)