Angiogenesis, the formation of new blood vessels from pre-existing ones, is a crucial step in many pathologies, including tumor growth and metastasis. We developed an adenovirus vector allowing the 16K hPRL expression, an antiangiogenic factor, in situ. We show 16K hPRL inhibits oxygen-induced retinopathy in mice. Then, using the 16K-Ad vector, we investigated the ability of 16K hPRL to prevent metastatic spread through inhibition of angiogenesis. We show that 16K hPRL administered via adenovirus-mediated gene transfer inhibits tumor growth in a subcutaneous B16-F10 mouse melanoma model by reducing the size and width of tumor vessels. We also show, for the first time, that 16K hPRL considerably reduces the establishment of B16-F10 metastases in an experimental lung metastasis model. These results highlight a potential role for 16K hPRL in anticancer therapy for both primary tumors and metastases. In parallel, we have sought to identify in human 16K PRL (16K hPRL) a peptide that might be responsible for its antiangiogenic activity. Although the 16K fragments of the other three human PRL/GH-family members are also potently antiangiogenic, the sequence similarity of these fragments is low (around 35% similarity between all mammalian PRL/GH sequences). This led us to seek a peculiar common structural feature rather than a similar sequence. We demonstrate that all these fragments possess a 14-amino-acid sequence having the characteristics of a tilted peptide. We show for the first time that tilted peptides exert antiangiogenic activity. The tilted peptides of hPRL and hGH induce endothelial cell apoptosis, inhibit endothelial cell proliferation, and inhibit capillary formation both in vitro and in vivo. These antiangiogenic effects are abolished when the peptides hydrophobicity gradient is altered by mutation. We further demonstrate for the first time that the well-known tilted peptides of SIV gp32 and Alzheimers beta-amyloid peptide are also angiogenesis inhibitors. Taken together these results point to a potential new role for tilted peptides in regulating angiogenesis. Langiogenèse, la formation de nouveaux vaisseaux à partir de vaisseaux préexistants, joue un rôle important dans de nombreuses pathologies incluant la croissance tumorale et la dissémination des métastases. Nous avons développé un vecteur adénoviral (16K-Ad) nous permettant de produire le facteur antiangiogène hPRL 16K directement in situ. Une première analyse permettant détudier les effets de la hPRL 16K produite par lapproche adénovirale a été réalisée in vivo. Nous montrons tout dabord que la hPRL 16K produite est capable de prévenir la néovascularisation rétinienne dans un modèle murin de rétinopathie. Par la suite, en utilisant le vecteur 16K-Ad, nous montrons que la hPRL 16K peut inhiber le développement tumoral dans un modèle murin développant des tumeurs formées par les cellules de mélanome B16-F10 dans le tissu sous-cutané. Cette inhibition de la croissance tumorale est corrélée avec une diminution de la taille des vaisseaux. Nous montrons aussi, pour la première fois, que la hPRL 16K peut considérablement réduire létablissement des métastases B16-F10 dans un modèle expérimental de métastases se développant dans le poumon. Ces résultats soulignent le rôle potentiel de la hPRL 16K dans la thérapie anticancéreuse dirigée contre les tumeurs primaires et les métastases. Parallèlement à ces travaux, nous nous sommes attachés à identifier une région responsable de lactivité de la hPRL 16K. Partant du fait que les fragments 16K des trois autres membres de la famille humaine PRL/GH sont aussi de puissants facteurs antiangiogènes, malgré que leur similarité de séquence soit faible (environ 35% de similarité entre les séquences de la PRL et de la GH), nous avons recherché une caractéristique structurale commune partagée par ces différents fragments. Nous avons identifié un domaine susceptible d'adopter une structure en peptide oblique dans les séquences protéiques des fragments de 16 kDa de la famille PRL/GH. Leffet antiangiogène des peptides obliques de la hPRL 16K et de la hGH 16K est montré dans des expériences menées in vitro et in vivo. Nous montrons également leffet antiangiogène des peptides obliques du peptide de fusion gp 32 du virus SIV et du peptide b-amyloïde.

Les glycoprotéines de fusion virales de classe 1 contrôlent la fusion entre lenveloppe virale et la membrane cellulaire. Ces glycoprotéines présentent une extrémité N-terminale indispensable à la fusion, le peptide de fusion. Les peptides de fusion sont capables dinduire à eux seuls la fusion de membranes in vitro. Dans cette étude, nous avons dabord analysé les peptides de fusion de gp41 du HIV et de gp30 du BLV. Ces deux peptides de fusion sont des peptides obliques : ils sinsèrent obliquement dans la membrane sous forme hélicoïdale. Nos études ont montré une relation entre la capacité de ces deux peptides de fusion à sinsérer obliquement dans la membrane et la capacité de leurs glycoprotéines de fusion à induire la fusion. Dans le cas du BLV, nous avons également montré une relation entre lobliquité du peptide de fusion et sa fusogénicité. Cette relation obliquité-fusogénicité a été utilisée pour prédire avec succès la région minimale des deux peptides de fusion suffisante pour induire une fusion significative in vitro, qui correspond respectivement aux douze et aux quinze premiers acides aminés de gp41 et gp30. Nos résultats montrent également que le peptide caméléon, un peptide de novo avec une structure labile, sinsère obliquement dans la membrane et induit la fusion in vitro. Le fait que ce peptide fasse partie des peptides obliques, comme les peptides de fusion du HIV et BLV, renforce lhypothèse dun lien entre la fusogénicité des peptides de fusion et leur flexibilité structurale. De nombreuses études réalisées sur les glycoprotéines de fusion de classe 1 indiquent que le domaine transmembranaire intervient également dans la fusion virale. Ce domaine doit être suffisamment long pour que la fusion soit complète. Dans ce travail, nous avons montré quun peptide transmembranaire modèle, le peptide KALR, est capable de sinsérer et dinduire la fusion de liposomes in vitro. En comparant les résultats de modélisation moléculaire avec ceux de FTIR et ceux de la fusion de phase lipidique/perméabilisation de liposomes, nous avons également montré que le taux dinsertion membranaire et la fusogénicité de KALR dépendent de la longueur de son cur hydrophobe. En effet, le taux dinsertion de KALR dans la membrane est beaucoup plus important lorsquil contient un cur hydrophobe lui permettant de traverser entièrement la membrane. Dans cette situation, KALR est capable dinduire la déstabilisation et la fusion de membranes alors que lorsque son cur hydrophobe est trop court pour lui permettre de traverser la membrane, il en est incapable. Ces résultats ont permis dapporter des éléments de compréhension des mécanismes intervenant lors de la fusion induite par les glycoprotéines de fusion virales. / Abstract: Class 1 fusion glycoproteins of viruses are involved in the fusion between viral envelope and cell membrane. The N-terminal extremity of these glycoproteins, called fusion peptide, is essential for fusion. Fusion peptides are able to induce by themselves in vitro membrane fusion. Firstly, we analysed fusion peptides of HIV-1 gp41 and BLV gp30. These two peptides are tilted peptides: they insert obliquely in the membrane when helical. Our studies showed a correlation between the ability of these two fusion peptides to insert obliquely in the membrane and the ability of whole glycoproteins to induce fusion. For BLV, a relationship between the obliquity of the fusion peptide and its fusogenicity was also observed. This obliquity/fusogenicity relationship was used to successfully predict the minimal region of the two fusion peptides sufficient to induce significant in vitro fusion. The minimal fusion peptide corresponds respectively to the twelve and to the fifteen first residues of gp41 and gp30. Our results also showed that the chameleon peptide, a de novo peptide with structural flexibility, inserts obliquely into the membrane and induces in vitro fusion. The fact that this peptide is a tilted peptide, like fusion peptides of HIV-1 and BLV, confirms the hypothesis of a relationship between the fusion peptides fusogenicity and their structural flexibility. A lot of studies on class 1 fusion glycoproteins of viruses indicate that the transmembrane domain is also directly involved in the viral fusion. Glycoproteins must have a domain long enough to induce complete fusion. In this study, we showed that a model transmembrane peptide, KALR peptide, is able to insert into membranes and to induce their fusion. By comparing molecular modelling results with those of FTIR, of liposomes lipid-mixing and of liposomes leakage, we also showed that the insertion rate into the membranes and the fusogenicity of KALR depend on the length of its hydrophobic core. Indeed, the insertion rate of KALR into the membrane is greatly larger when it contains a hydrophobic core long enough to allow the peptide to traverse the membrane. In this situation, KALR is able to destabilize membranes and to induce their fusion, while when it is too short to match the membrane, it is unable to induce fusion. These results allow to better understanding mechanisms involved in the fusion induced by viral fusion glycoproteins.