As lesões periapicais são induzidas por uma infecção crônica da polpa dental. Antígenos microbianos estimulam a resposta imune específica e inespecífica nos tecidos apicais. Como consequência desse processo, diante da incapacidade das defesas do hospedeiro para erradicar a infecção, uma lesão periapical é formada, com o objetivo de restringir a invasão microbiana. O desenvolvimento da periodontite apical crônica depende de uma fina regulação da ativação dos linfócitos. A ativação das células T requer dois sinais, um mediado pelo complexo TCR, após o reconhecimento do antígeno, e o outro mediado pela interação dos receptores coestimulatórios. CD28 é um receptor coestimulatório, enquanto CTLA-4 e PD-1 induzem um sinal inibitório para a ativação de células T. Para compreender o envolvimento de células T na periodontite apical crônica, avaliamos a presença destas células na lesão periapical e os fatores coestimulatórios, citocinas e espécies reativas do oxigênio que estas células estariam produzindo. As amostras analisadas foram de tecido gengival para o grupo controle (n = 20) e lesões periapicais para o grupo com periodontite apical crônica (n = 20). Quanto ao perfil celular das lesões periapicais, os resultados mostraram que linfócitos T (59,3 ± 3,7%) foram as células predominantes, sendo a subpopulação CD4+ (72,7 ± 3,4%) a mais encontrada. A seguir, verificou-se a expressão de moléculas de superfície em células T. Observou-se que a expressão de CD28 (0,5 ± 0,5%) foi significativamente mais baixa em amostras de lesões periapicais que no grupo controle principalmente para linfócito T CD8+. Já CTLA-4 foi identificado em altos níveis para pacientes com periodontite apical tanto para CD3+CD4+ (86,1 ± 2,6%) quanto para CD3+CD8+ (59,8 ± 8,6%). PD-1 (73,5 ± 5,6%) e PD-L1 (59,8 ± 8,6%) apresentaram alta positividade para CD3+CD4+. Esses resultados indicaram um possível envolvimento da via de sinalização de PD-1 e PD-L1 na modulação da resposta de células T de pacientes com periodontite apical crônica. A dosagem de citocinas revelou alta positividade para todas as citocinas investigadas (TGF-; TNF-; IFN- e IL-10). Óxido Nítrico e mieloperoxidase produzidas por neutrófilos e responsáveis pela degradação tecidual também foram detectadas em altas doses nas amostras de pacientes com periodontite apical. O conhecimento sobre o papel das moléculas coestimulatórias na imunopatogênese da periodontite apical crônica servirá de base para o direcionamento de novas estratégias de prevenção, assim como o desenvolvimento de novos procedimentos terapêuticos. / Periapical lesions are induced by the chronic infection of dental pulp. Microbial antigens stimulate both non-specific and specific immune response in periapical tissue. As a consequence of these processes and the inability of host defense mechanisms to eradicate infection, chronic periapical lesion are formed, with the aim of restricting microbial invasion. Negative co-stimulatory signals mediated via cell surface molecules such as cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen 4 (CTLA-4) and programmed death-1 (PD-1) play a critical role in down- modulation immune responses and maintaining peripheral tolerance. Both CTLA-4 and PD-1 are induced on actived T cell, and these are involved in the immunophatogenesis of periapical lesions. Inhibitory signals mediated via molecules such as programmed-death-1 (PD-1) play a critical role in down-modulating immune responses and maintaining peripheral tolerance. We investigated the involvement of cytokines and PD-1 engagement in mediating the T cell activation in chronic periapical diseases. Gingival samples from healthy individuals (n= 20) and patients with chronic periapical periodontitis (n= 20) were collected and used for the subsequent assays. The leukocytes in the lesion site were evaluated using flow cytometry. The production of cytokines interferon-gamma (IFN-), interleukin (IL)-10, tumor necrosis factor-alpha (TNF-) and transforming growth factor-beta (TGF-) was evaluated by ELISA. We observed a significant increase in the total number of leukocytes from periapical lesions as compared with healthy group. Our results for the composition of infiltrating cell in periapical lesion showed that the predominant cells were lymphocytes T (59,3 ± 3,7%) and contained a higher proportion of CD4+ cells (72,7 ± 3,4%). T cells from patients with periapical lesions expressed significantly higher levels of PD-1 (73,5 ± 5,6%) and PD-L1 (59,8 ± 8,6%). The levels of CTLA-4 were higher in CD3+CD4+ (86,1± 2,6%) and CD3+ CD8+ (59,8 ± 8,6%) cells, but in contrast the expression of CD28 was lower than control group. In addition, CD4+ and CD8+ T cells expressing PD-1 accumulate in lesions with chronic periapical periodontitis. Moreover, PD-L1 expression was intense in macrophage from patients. Our data clearly showed that lesions samples contained elevated amounts of TGF-, IL-10, TNF- and IFN- when compared with healthy gingival tissue from control individuals. These data show that PD-1 and CTLA-4 engagement could be involved in the modulation of T cells activation in patients with chronic periapical periodontitis.

As lesões periapicais são induzidas por uma infecção crônica da polpa dental. Antígenos microbianos estimulam a resposta imune específica e inespecífica nos tecidos apicais. Como consequência desse processo, diante da incapacidade das defesas do hospedeiro para erradicar a infecção, uma lesão periapical é formada, com o objetivo de restringir a invasão microbiana. O desenvolvimento da periodontite apical crônica depende de uma fina regulação da ativação dos linfócitos. A ativação das células T requer dois sinais, um mediado pelo complexo TCR, após o reconhecimento do antígeno, e o outro mediado pela interação dos receptores coestimulatórios. CD28 é um receptor coestimulatório, enquanto CTLA-4 e PD-1 induzem um sinal inibitório para a ativação de células T. Para compreender o envolvimento de células T na periodontite apical crônica, avaliamos a presença destas células na lesão periapical e os fatores coestimulatórios, citocinas e espécies reativas do oxigênio que estas células estariam produzindo. As amostras analisadas foram de tecido gengival para o grupo controle (n = 20) e lesões periapicais para o grupo com periodontite apical crônica (n = 20). Quanto ao perfil celular das lesões periapicais, os resultados mostraram que linfócitos T (59,3 ± 3,7%) foram as células predominantes, sendo a subpopulação CD4+ (72,7 ± 3,4%) a mais encontrada. A seguir, verificou-se a expressão de moléculas de superfície em células T. Observou-se que a expressão de CD28 (0,5 ± 0,5%) foi significativamente mais baixa em amostras de lesões periapicais que no grupo controle principalmente para linfócito T CD8+. Já CTLA-4 foi identificado em altos níveis para pacientes com periodontite apical tanto para CD3+CD4+ (86,1 ± 2,6%) quanto para CD3+CD8+ (59,8 ± 8,6%). PD-1 (73,5 ± 5,6%) e PD-L1 (59,8 ± 8,6%) apresentaram alta positividade para CD3+CD4+. Esses resultados indicaram um possível envolvimento da via de sinalização de PD-1 e PD-L1 na modulação da resposta de células T de pacientes com periodontite apical crônica. A dosagem de citocinas revelou alta positividade para todas as citocinas investigadas (TGF-; TNF-; IFN- e IL-10). Óxido Nítrico e mieloperoxidase produzidas por neutrófilos e responsáveis pela degradação tecidual também foram detectadas em altas doses nas amostras de pacientes com periodontite apical. O conhecimento sobre o papel das moléculas coestimulatórias na imunopatogênese da periodontite apical crônica servirá de base para o direcionamento de novas estratégias de prevenção, assim como o desenvolvimento de novos procedimentos terapêuticos. / Periapical lesions are induced by the chronic infection of dental pulp. Microbial antigens stimulate both non-specific and specific immune response in periapical tissue. As a consequence of these processes and the inability of host defense mechanisms to eradicate infection, chronic periapical lesion are formed, with the aim of restricting microbial invasion. Negative co-stimulatory signals mediated via cell surface molecules such as cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen 4 (CTLA-4) and programmed death-1 (PD-1) play a critical role in down- modulation immune responses and maintaining peripheral tolerance. Both CTLA-4 and PD-1 are induced on actived T cell, and these are involved in the immunophatogenesis of periapical lesions. Inhibitory signals mediated via molecules such as programmed-death-1 (PD-1) play a critical role in down-modulating immune responses and maintaining peripheral tolerance. We investigated the involvement of cytokines and PD-1 engagement in mediating the T cell activation in chronic periapical diseases. Gingival samples from healthy individuals (n= 20) and patients with chronic periapical periodontitis (n= 20) were collected and used for the subsequent assays. The leukocytes in the lesion site were evaluated using flow cytometry. The production of cytokines interferon-gamma (IFN-), interleukin (IL)-10, tumor necrosis factor-alpha (TNF-) and transforming growth factor-beta (TGF-) was evaluated by ELISA. We observed a significant increase in the total number of leukocytes from periapical lesions as compared with healthy group. Our results for the composition of infiltrating cell in periapical lesion showed that the predominant cells were lymphocytes T (59,3 ± 3,7%) and contained a higher proportion of CD4+ cells (72,7 ± 3,4%). T cells from patients with periapical lesions expressed significantly higher levels of PD-1 (73,5 ± 5,6%) and PD-L1 (59,8 ± 8,6%). The levels of CTLA-4 were higher in CD3+CD4+ (86,1± 2,6%) and CD3+ CD8+ (59,8 ± 8,6%) cells, but in contrast the expression of CD28 was lower than control group. In addition, CD4+ and CD8+ T cells expressing PD-1 accumulate in lesions with chronic periapical periodontitis. Moreover, PD-L1 expression was intense in macrophage from patients. Our data clearly showed that lesions samples contained elevated amounts of TGF-, IL-10, TNF- and IFN- when compared with healthy gingival tissue from control individuals. These data show that PD-1 and CTLA-4 engagement could be involved in the modulation of T cells activation in patients with chronic periapical periodontitis.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:22:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Parte 1.pdf: 1874528 bytes, checksum: 7e46501ade5b782c1d4f3f9926c18a43 (MD5) Previous issue date: 2006-11-30 / Control of the process of repair or progression of periapical lesions after endodontic treatment is monitored by conventional or digital radiography. In this research digital subtraction radiography (DSR) was used that uses the subtraction of images longitudinally, in which the change in the alveolar bone is visualized against a uniform gray background. The objectives of this study were: (1) to evaluate the repair process of periapical lesions after endodontic treatment by using DSR; (2) to quantify by means of point/pixel (picture element), area (histogram) and linear measures (profile line), the gain or loss of mineral density in the area of the lesion, using the average of the pixel values; (3) to compare the diagnostic information, suggestive of the repair process, obtained through a subjective evaluation of DSR with a conventional radiographic evaluation and digitalized image and (4) to evaluate the contribution of DSR to an early identification of the repair of periapical lesions after endodontic treatment. The sample consisted of twelve patients with a total of seventeen periapical lesions. The x-rays were digitalized and submitted to DSR using DSR software. The pixel values of the subtracted images were determined by using Image Tool software. Both the conventional x-rays as well as the digitalized and subtracted images were qualitatively evaluated. The results showed a gain in mineral density with a meandp of 133.495.17, 130.275.77 and 129.414.46 for the points/pixel, histogram and profile line tools, respectively. In the evaluation of numerical gain Pearson s Coefficient of Correlation (r) presented these values: mean of points/histogram = 0.746; mean of points/profile line = 0.724 and histogram/profile line = 0.860. When the numerical values were transformed into percentile gain meandp of 0.674.01, 1.214.33 and 1.163.36 were obtained for the points/pixels, histogram and profile line tools, respectively. In the evaluation of the percentile gain Spearman s Coefficient of Correlation (rs) showed the following values: mean of points/histogram = 0.697; mean of the points/profile line = 0.646 and histogram/profile line = 0.844. In the qualitative analysis, the frequency of success in the ordering of the correct sequence of the repair process using conventional radiography, digitalized image and DSR was 37.3%, 31.4% and 31.4%, respectively. One concluded, therefore, that: (1) the process of repair of periapical lesions after endodontic treatment can be evaluated quantitatively by means of longitudinal analysis using DSR; (2) any one of the three tools can be used to quantify the repair, considering that correlation exists between the time of repair and the increase of the value of pixel; (3) the comparative evaluation between the subjective methods using conventional radiography, digitalized image and SDR, it showed that all had been capable to evidence the process of repair of periapical lesions from the first radiography (15 days), not having difference between them and (4) the quantitative evaluation by SDR obtained to after evidence the beginning of the repair with 15 days the beginning of the endodontic treatment, even so this repair was really effective from 105 days after the beginning of the endodontic treatment. / O controle do processo de reparo ou progressão de lesões periapicais pós-tratamento endodôntico é monitorado pelo exame radiográfico convencional ou digital. Nesta pesquisa foi utilizada a subtração digital radiográfica (SDR), que utiliza a subtração de imagens longitudinalmente, na qual a mudança no osso alveolar é visualizada contra um plano de fundo (background) cinza homogêneo. Os objetivos desse estudo foram: (1) avaliar o processo de reparo de lesões periapicais pós-tratamento endodôntico por meio de SDR; (2) quantificar por meio de ponto/pixel (picture element), área (histograma) e medida linear (perfil linha) na área da lesão, o ganho ou perda de densidade mineral por meio da média dos valores dos pixels; (3) comparar as informações diagnósticas, sugestivas do processo de reparo, obtidas por meio da avaliação subjetiva da SDR com a avaliação radiográfica convencional e imagem digitalizada; e (4) avaliar a contribuição da SDR na identificação precoce do reparo de lesões periapicais pós-tratamento endodôntico. A amostra constituiu-se de doze indivíduos totalizando dezessete lesões periapicais. As radiografias foram digitalizadas e submetidas à SDR utilizando o programa DSR. As imagens subtraídas tiveram os valores de pixel determinados utilizando o programa Image Tool. Tanto as radiografias convencionais quanto as imagens digitalizadas e subtraídas foram avaliadas qualitativamente. Os resultados evidenciaram ganho de densidade mineral com médiadp de 133,495,17; 130,275,77; 129,414,46 para as ferramentas ponto/pixel; histograma e perfil linha respectivamente. Na avaliação do ganho numérico o Coeficiente de Correlação de Pearson (r) mostrou valores de: média dos pontos/ histograma = 0,746; média dos pontos/ perfil linha = 0,724 e histograma/ perfil linha = 0,860. Quando os valores numéricos foram transformados em ganho percentual foram obtidas médiadp de 0,674,01; 1,214,33; 1,163,36 para as ferramentas ponto/pixel; histograma e perfil linha respectivamente. Na avaliação do ganho percentual o Coeficiente de Correlação de Spearman (rs) mostrou valores de: média dos pontos/ histograma = 0,697; média dos pontos/ perfil linha = 0,646 e histograma/ perfil linha = 0,844. Na análise qualitativa, a freqüência de acertos na ordenação da seqüência correta do processo de reparo usando radiografia convencional, imagem digitalizada e SDR foi de 37,3%; 31,4% e 31,4% respectivamente. Concluiu-se, portanto, que: (1) o processo de reparo de lesões periapicais pós-tratamento endodôntico pode ser avaliado quantitativamente por meio de análise longitudinal com SDR (2) qualquer uma das três ferramentas pode ser utilizada para quantificar o reparo, considerando que existe correlação entre o tempo de reparo e o aumento do valor de pixel; (3) a avaliação comparativa entre os métodos subjetivos, usando radiografia convencional, imagem digitalizada e a SDR, mostrou que todos foram capazes de evidenciar o processo de reparo de lesões periapicais desde a primeira radiografia (15 dias), não havendo diferença entre eles e (4) a avaliação quantitativa por meio de SDR conseguiu evidenciar o início do reparo com 15 dias após o início do tratamento endodôntico, embora esse reparo fosse realmente efetivo a partir de 105 dias após o início do tratamento endodôntico.