Le Gallid Herpesvirus 2 (GaHV-2) est un herpesvirus responsable de lymphomes T chez le poulet qui encode 25 miARN matures regroupés en deux clusters localisés au sein des régions TRL/IRL et TR/IR. Mes travaux ont consisté en l’étude de la régulation transcriptionnelle du cluster mdvl-miR-M8-M10 situé au sein de la région IR5/TR. Le promoteur est constitué d’au moins 2 séquences répétées de 60 pb contenant des éléments de réponse à la protéine p53. Nous avons montré que cette protéine classiquement suppresseur de tumeur était détournée de sa fonction par le virus au profit de l’expression du cluster de miR viraux. D’autre part, le promoteur de l’oncomiR-21 cellulaire, surexprimé au cours de la lymphomagenèse induite par GaHV-2 et localisé au niveau d’une région hyper conservée chez les vertébrés est piloté en partie par les protéines de la famille AP-1. Nous avons montré que l’oncoprotéine virale Meq surexprimée au cours de l’infection transactivait le promoteur de miR-21. Enfin, l’étude des cibles potentielles virale ou cellulaire du miR-21 semble indiquer que ce dernier pourrait être impliqué dans les mécanismes de latence virale et de lymphomagenèse / Gallid herpes virus 2 (GaHV-2) is an alphaherpesvirus involved in lymphomas on chickens that encodes 25 matures miRNA grouped in 2 clusters localized on IRL and TRL regions. In the first hand, I studied the transcriptional regulation of the mdvl-miR-M8-M10 cluster localized on IRS/TRS region. A promoter constituted of at last 2 repeats of 60 bp harbouring p53 responsive element was identified. We showed that tumour suppressive protein p53 was diverted from its function to permit viral miRNA expression. On the second hand, the promoter of the cellular oncomiR-21, over expressed during GaHV-2 lymphomagenesis localized in a region highly conserved on vertebrate and was piloted by AP-1 proteins. We have shown that viral oncoprotein Meq overexpressed during infection transactivated gga-miR-21 promoter. At last, study ofpotential viral and cellular targets for gga-mir-21 seemed to indicate that gga-miR-21could be involved in viral latency establishment and lymphomageneSis.

Le Gallid herpesvirus 2 est un virus oncogène responsable des lymphomes T chez les poulets. L´infection par ce virus est divisée en une phase lytique dépendante de l´expression des gènes très précoces ICP4 et ICP27 et une phase latente, caractérisée par l´expression de l’ARN long non codant LAT. Nous avons montré que le gène LAT exprime de transcrits épissés alternativement, plaçant le cluster de microARN mdv1-miR-M8-M10 dans leur premier intron. Un microARN de ce cluster régule l’expression d’ICP4 et ICP27. L’étude du promoteur d’ICP27 a permis d’identifier plusieurs éléments de réponse (ER) importants, dont une boîte GC et des ER AP1 et CRE, et montré que le promoteur n’est pas transactivé par la protéine virale VP16. Nous avons identifié un transcrit épissé d’ICP27, piloté par le promoteur gK et encodant une isoforme tronquée d’ICP27. Les deux isoformes d’ICP27 colocalise avec les protéines SR du splicéosome dans le noyau, mais sont associées à des localisations différentes. / Gallid herpesvirus2 (GaHV-2) is an oncogenic herpesvirus responsible of T-cell lymphoma in chicken. GaHV-2 infections are divided into a lytic phase, depending on the expression of immediate earky genes like ICP4 and ICP27, and a latent phase characterized by the expression of the long non-coding RNA LAT. In this study, we have shown that the LAT is expressed as several highly spliced transcripts, all placing the microRNA clyster mdv1-miR-M8-M10 in their first intron. One of those microRNAs regulated the expression of ICP4 and ICP27. Studies on the ICP27 promoter allowed us to identify several important response elements (REs), including a GC box and AP1 and CRE REs, and to show that the viral protein VP16 does not transactivate the promoter. We identified a spliced transcript driven by the gK promoter that encodes a truncated ICP27 isoforms. Both isoforms of ICP27 are colocalized with spliceosomal SR proteins in the nucleus, but show a slightly different localization.

CRUZ, Carlos Eduardo Braga. Anacardato de cálcio como fonte de ácido anacárdico na alimentação de frangos de corte. 2015. 109 f. Tese (doutorado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-07T17:50:11Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_cebcruz.pdf: 1478766 bytes, checksum: 3bec6055033e4412bb0639a3b56aef69 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-25T17:50:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_cebcruz.pdf: 1478766 bytes, checksum: 3bec6055033e4412bb0639a3b56aef69 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-25T17:50:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_cebcruz.pdf: 1478766 bytes, checksum: 3bec6055033e4412bb0639a3b56aef69 (MD5) Previous issue date: 2015 / The research aims to evaluate the effects of adding calcium anacardic (CAC) as a source of anacardic acid in the feed of broiler about the performance, carcass characteristics, quality and lipid stability meat, blood parameters, enzyme activity and lipid peroxidation liver and growth, composition and quality of the bones. For this, 840 male chicks with a day Ross 308 line were randomly assigned to six treatments, with seven replicates of twenty birds. The treatments consisted of: diet without growth promoter (PC); diet with PC and the others without PC and adding CAC levels of 0.25; 0.50; 0.75 to 1%. The addition of CAC in the feed didn’t affect the biochemical blood parameters (uric acid, creatinine, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, total cholesterol, HDL, LDL and triglycerides) in the enzyme activity (superoxide dismutase, non-protein sulfhydryl groups) and peroxidation of liver lipids, growth and bone quality (weight, length, diameter, Seedor index, strength, deformity, dry matter and mineral matter), in the carcass characteristics (% of carcass, breast and thigh + drumstick) and quality meat (L *, a *, b *, pH, loss of water by cooking and water holding capacity). However, the addition of from 0.75% CAC reduced weight gain and feed conversion detracted from the chickens up to 21 days old, however, the addition of up to 1 % did not affect performance when considering the total period (1 to 42 days old). For TBARS values for beef, the levels of 0.75% to 1% have provided the lowest values while treatment without growth promoter yielded higher value. The CAC can be added in the feed of broilers to the level of 1 %, no changes occur in the blood parameters and enzyme of the liver, the performance at the end of the growing period (42 days old), carcass characteristics and growth, composition and quality of the bones. However, the quality of the meat can improve with reduced lipid oxidation from 0,75. The CAC can be added in the feed of broiler until the level of 1%, without change the blood parameters, enzymatic liver, the performance at the end of the growing period (42 days old), carcass characteristics and growth, composition and quality of the bones. However, the quality of the flesh can be improved by reducing lipid oxidation as 0.75%. / A pesquisa foi desenvolvida com o objetivo de avaliar os efeitos da adição do anacardato de cálcio (ACC), como fonte de ácido anacárdico na ração de frangos de corte sobre o desempenho, as características de carcaça, qualidade e a estabilidade lipídica da carne, parâmetros sanguíneos, atividade enzimática e peroxidação lipídica do fígado e no crescimento, composição e qualidade dos ossos. Para isso, 840 pintos machos de um dia da linhagem Ag Ross 308 foram distribuídos ao acaso em seis tratamentos, com sete repetições de vinte aves. Os tratamentos consistiram em: ração sem promotor de crescimento (PC); ração com PC e, os demais, rações sem o PC e adição de ACC nos níveis de 0,25; 0,50; 0,75 e 1%. A adição de ACC na ração não influenciou nos parâmetros bioquímicos do sangue (ácido úrico, creatinina, alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase, colesterol total, HDL, LDL e triglicerídeos), na atividade enzimática (superóxido dismutase, grupos sulfidrílicos não-protéicos) e peroxidação dos lipídeos do fígado, no crescimento e qualidade óssea (peso, comprimento, diâmetro, índice de Seedor, resistência, deformidade, matéria seca e matéria mineral), nas características de carcaça (% de carcaça, peito e coxa+sobrecoxa) e na qualidade da carne ( L*, a*, b*, pH, perda de água por cocção e capacidade de retenção de água). No entanto, a adição a partir de 0,75% de ACC reduziu o ganho de peso e prejudicou a conversão alimentar dos frangos até 21 dias de idade, porém, a adição de até 1% não afetou o desempenho quando se considerou o período total de criação (1 a 42 dias de idade). Para os valores de TBARS da carne, os níveis de 0,75% e 1% proporcionaram os menores valores, enquanto, o tratamento sem promotor de crescimento proporcionou maior valor. O ACC pode ser adicionado na ração dos frangos de corte até o nível de 1%, sem que ocorram alterações nos parâmetros sanguíneos, enzimáticos do fígado, no desempenho ao final do período de criação (42 dias de idade), nas características de carcaça e no crescimento, composição e qualidade dos ossos. Contudo, a qualidade da carne pode melhorar com a redução da oxidação lipídica a partir de 0,75%.

CRUZ, Carlos Eduardo Braga. Anacardato de cálcio como fonte de ácido anacárdico na alimentação de frangos de corte. 2015. 109 f. Tese (doutorado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-26T17:32:42Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_cebcruz.pdf: 1478766 bytes, checksum: 3bec6055033e4412bb0639a3b56aef69 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-27T19:15:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_cebcruz.pdf: 1478766 bytes, checksum: 3bec6055033e4412bb0639a3b56aef69 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T19:15:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_cebcruz.pdf: 1478766 bytes, checksum: 3bec6055033e4412bb0639a3b56aef69 (MD5) Previous issue date: 2015 / The research aims to evaluate the effects of adding calcium anacardic (CAC) as a source of anacardic acid in the feed of broiler about the performance, carcass characteristics, quality and lipid stability meat, blood parameters, enzyme activity and lipid peroxidation liver and growth, composition and quality of the bones. For this, 840 male chicks with a day Ross 308 line were randomly assigned to six treatments, with seven replicates of twenty birds. The treatments consisted of: diet without growth promoter (PC); diet with PC and the others without PC and adding CAC levels of 0.25; 0.50; 0.75 to 1%. The addition of CAC in the feed didn’t affect the biochemical blood parameters (uric acid, creatinine, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, total cholesterol, HDL, LDL and triglycerides) in the enzyme activity (superoxide dismutase, non-protein sulfhydryl groups) and peroxidation of liver lipids, growth and bone quality (weight, length, diameter, Seedor index, strength, deformity, dry matter and mineral matter), in the carcass characteristics (% of carcass, breast and thigh + drumstick) and quality meat (L *, a *, b *, pH, loss of water by cooking and water holding capacity). However, the addition of from 0.75% CAC reduced weight gain and feed conversion detracted from the chickens up to 21 days old, however, the addition of up to 1 % did not affect performance when considering the total period (1 to 42 days old). For TBARS values for beef, the levels of 0.75% to 1% have provided the lowest values while treatment without growth promoter yielded higher value. The CAC can be added in the feed of broilers to the level of 1 %, no changes occur in the blood parameters and enzyme of the liver, the performance at the end of the growing period (42 days old), carcass characteristics and growth, composition and quality of the bones. However, the quality of the meat can improve with reduced lipid oxidation from 0,75. The CAC can be added in the feed of broiler until the level of 1%, without change the blood parameters, enzymatic liver, the performance at the end of the growing period (42 days old), carcass characteristics and growth, composition and quality of the bones. However, the quality of the flesh can be improved by reducing lipid oxidation as 0.75%. / A pesquisa foi desenvolvida com o objetivo de avaliar os efeitos da adição do anacardato de cálcio (ACC), como fonte de ácido anacárdico na ração de frangos de corte sobre o desempenho, as características de carcaça, qualidade e a estabilidade lipídica da carne, parâmetros sanguíneos, atividade enzimática e peroxidação lipídica do fígado e no crescimento, composição e qualidade dos ossos. Para isso, 840 pintos machos de um dia da linhagem Ag Ross 308 foram distribuídos ao acaso em seis tratamentos, com sete repetições de vinte aves. Os tratamentos consistiram em: ração sem promotor de crescimento (PC); ração com PC e, os demais, rações sem o PC e adição de ACC nos níveis de 0,25; 0,50; 0,75 e 1%. A adição de ACC na ração não influenciou nos parâmetros bioquímicos do sangue (ácido úrico, creatinina, alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase, colesterol total, HDL, LDL e triglicerídeos), na atividade enzimática (superóxido dismutase, grupos sulfidrílicos não-protéicos) e peroxidação dos lipídeos do fígado, no crescimento e qualidade óssea (peso, comprimento, diâmetro, índice de Seedor, resistência, deformidade, matéria seca e matéria mineral), nas características de carcaça (% de carcaça, peito e coxa+sobrecoxa) e na qualidade da carne ( L*, a*, b*, pH, perda de água por cocção e capacidade de retenção de água). No entanto, a adição a partir de 0,75% de ACC reduziu o ganho de peso e prejudicou a conversão alimentar dos frangos até 21 dias de idade, porém, a adição de até 1% não afetou o desempenho quando se considerou o período total de criação (1 a 42 dias de idade). Para os valores de TBARS da carne, os níveis de 0,75% e 1% proporcionaram os menores valores, enquanto, o tratamento sem promotor de crescimento proporcionou maior valor. O ACC pode ser adicionado na ração dos frangos de corte até o nível de 1%, sem que ocorram alterações nos parâmetros sanguíneos, enzimáticos do fígado, no desempenho ao final do período de criação (42 dias de idade), nas características de carcaça e no crescimento, composição e qualidade dos ossos. Contudo, a qualidade da carne pode melhorar com a redução da oxidação lipídica a partir de 0,75%.

O Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença autoimune inflamatória crônica que possui uma etiopatogênese complexa. Diversos fatores participam da patogênese da doença, dentre eles alterações no balanço de citocinas e quimiocinas. As quimiocinas e seus receptores são fundamentais na regulação da migração de leucócitos durante a inflamação e acredita-se que elas possam ter um papel importante na patogênese de doenças autoimunes, inclusive no LES. Diversos estudos abordaram o papel de quimiocinas e seus receptores no LES, porém, principalmente se tratando dos receptores de quimiocinas CCR5 e CCR2, não existe um consenso. Devido à falta de consenso em relação ao papel dos receptores de quimiocinas na patogênese do LES e considerando a necessidade de mais estudos nesta área, o presente trabalho tem por objetivo investigar o possível papel de polimorfismos na região promotora do CCR5 no desenvolvimento do LES, comparando as frequências dos genótipos e haplótipos entre pacientes e controles, e analisar o possível envolvimento destes polimorfismos nas manifestações clínicas/laboratoriais da doença. O estudo incluiu 382 pacientes com LES (289 Euro-descendentes e 93 Afro-descendentes) e 375 controles (243 Euro-descendentes e 132 Afro-descendentes) genotipados para os polimorfismos CCR2-64I G>A (rs1799864), CCR5-59353 C>T (rs1799988), CCR5-59356 C>T (rs41469351), CCR5-59402 A>G (rs1800023) e CCR5-59653 C>T (rs1800024) através de PCR-RFLP e sequenciamento, respectivamente. Dados prévios de nosso grupo em relação ao CCR5delta32 foram incluídos no estudo para a inferência dos haplótipos e como um possível fator de confusão na regressão binária logística. Os resultados obtidos indicam que, em pacientes Euro-descendentes, as frequências reduzidas o polimorfismo CCR5delta32 e o haplótipo HHG*2 observadas em pacientes quando comparados com controles foram associadas com a doença (p=0,001; OR 3,5; 95%CI 1,6-7,5 e 2,0% vs. 7,2%; presidual=2,9E-5; respectivamente). Em pacientes Afrodescendentes, as frequências dos haplótipos HHA/HHB, HHC e HHG*2 foram diferentes em pacientes e controles (10% vs. 20,5%, presidual = 0,003; 29,4% vs. 17,4%; presidual=0,003 e 3,9% vs. 0,8%; presidual=0,023; respectivamente). Em relação às manifestações clínicas da doença, a presença do CCR5delta32 foi confirmada como um fator de susceptibilidade para nefrite classe IV em pacientes Afro-descendentes e no grupo de pacientes como um todo (pcorrigido=0,012; OR 3,0; 95%CI 3,0-333,3 e pcorrigido=0,0006; OR 6,8; 95%CI 1,9-2,48; respectivamente). Em conclusão, o presente estudo indica que polimorfismos na região promotora do CCR5 podem atuar como modificadores no LES. Os resultados observados reforçam o papel do polimorfismo CCR5delta32 como um fator de proteção para o desenvolvimento do LES em Euro-descendentes e como um fator de susceptibilidade à nefrite classe IV em pacientes Afro-descendentes. Além disto, também foram descritos a redução da frequência dos haplótipos HHA/HHB e o aumento da frequência dos haplótipos HHC e HHG*2 em pacientes Afro-descendentes, que possivelmente podem estar associados com uma maior expressão do CCR5 em subtipos específicos celulares e com uma menor expressão deste receptor de maneira geral. / Systemic Lupus erythematosus (SLE) is a chronic inflammatory autoimmune disease, characterized by a complex etiopathogenesis. Many factors are known to participate in the pathogenesis of SLE, including alterations in the cytokines or chemokines balance. Chemokines and their receptors are central players in the regulation of leucocytes chemotaxis in inflammation and they are thought to have an important role in the pathogenesis of autoimmune diseases, including SLE. Several studies have addressed the role of chemokines and their receptors in SLE, however there is no consensus regarding their involvement on the pathogenesis of the disease. Given the lack of consensus considering the role of chemokine receptors in SLE pathogenesis and the need for more studies in this area, the present work aims to investigate a possible role of the CCR5 promoter region polymorphisms in the development of SLE comparing the frequencies of the genotypes and haplotypes with ethnically matched controls and analyze if there is a possible involvement of the polymorphisms in the clinical outcome of the disease. This study included 388 SLE patients (289 classified as Europeanderived and 93 as African-derived) and 375 controls (243 European-derived and 132 African-derived) genotyped for the CCR2-64I G>A (rs1799864), CCR5-59353 C>T (rs1799988), CCR5-59356 C>T (rs41469351), CCR5-59402 A>G (rs1800023) and CCR5-59653 C>T (rs1800024) polymorphisms though PCRRFLP and direct sequencing, respectively. Previous data from CCR5delta32 were included in the study to infer the haplotypes and also as a possible confounding factor in the binary logistic regression. Our results indicated that, in Europeanderived patients, CCR5delta32 and the HHG*2 haplotype reduced frequencies in patients when compared to controls were associated with the disease (p=0.001; OR 3.5; 95%CI 1.6-7.5 and 2.0%, vs. 7.2% residual p= 2.9E-5, respectively). In African-derived patients, the HHA/HHB, HHC and HHG*2 haplotype frequencies differed between patients and controls (10% vs. 20.5%, residual p= 0.003; 29.4% vs. 17.4%, residual p=0.003 and 3.9% vs. 0.8%, residual p=0.023; respectively). Considering the clinical manifestations of the disease, CCR5delta32 presence was confirmed as a susceptibility factor to class IV nephritis in the African-derived group and when patients were considered together (pcorrected=0.012; OR 3.0; 95%CI 3.0-333.3 and pcorrected= 0.0006; OR 6.8; 95%CI 1.9-2.48, respectively). In conclusion, this study indicates that CCR5 promoter polymorphisms are important disease modifiers in SLE. Present data reinforces CCR5delta32 polymorphism as a protective factor for the development of the disease in European-derived patients and as a susceptibility factor for class IV nephritis in African-derived patients. Furthermore, we also describe a reduced frequency of HHA/HHB and an enhanced frequency of HHC and HHG*2 haplotypes in our African-derived patients, which potentially could reflect in a higher expression of CCR5 in specific cell subsets and in a lower expression of CCR5 overall.

abstract: Synthetic biology is a novel method that reengineers functional parts of natural genes of interest to build new biomolecular devices able to express as designed. There is increasing interest in synthetic biology due to wide potential applications in various fields such as clinics and fuel production. However, there are still many challenges in synthetic biology. For example, many natural biological processes are poorly understood, and these could be more thoroughly studied through model synthetic gene networks. Additionally, since synthetic biology applications may have numerous design constraints, more inducer systems should be developed to satisfy different requirements for genetic design. This thesis covers two topics. First, I attempt to generate stochastic resonance (SR) in a biological system. Synthetic bistable systems were chosen because the inducer range in which they exhibit bistability can satisfy one of the three requirements of SR: a weak periodic force is unable to make the transition between states happen. I synthesized several different bistable systems, including toggle switches and self-activators, to select systems matching another requirement: the system has a clear threshold between the two energy states. Their bistability was verified and characterized. At the same time, I attempted to figure out the third requirement for SR – an effective noise serving as the stochastic force – through one of the most widespread toggles, the mutual inhibition toggle, in both yeast and E. coli. A mathematic model for SR was written and adjusted. Secondly, I began work on designing a new genetic system capable of responding to pulsed magnetic fields. The operators responding to pulsed magnetic stimuli in the rpoH promoter were extracted and reorganized. Different versions of the rpoH promoter were generated and tested, and their varying responsiveness to magnetic fields was recorded. In order to improve efficiency and produce better operators, a directed evolution method was applied with the help of a CRISPR-dCas9 nicking system. The best performing promoters thus far show a five-fold difference in gene expression between trials with and without the magnetic field. / Dissertation/Thesis / Masters Thesis Bioengineering 2016

We develop machine learning approaches to predict context specific enhancer-promoter interactions using evidence from changes in genomic protein occupancy over time. Occupancy of estrogen receptor alpha (ER-alpha), RNA polymerase (Pol II) and histone marks H2AZ and H3K4me3 were measured over time using ChIP-Seq experiments in MCF7 cells stimulated with estrogen. Two Bayesian classifiers were developed, unsupervised and supervised. The supervised approach uses the correlation of temporal binding patterns at enhancers and promoters and genomic proximity as features and predicts interactions. The method was trained using experimentally determined interactions from the same system and achieves much higher precision than predictions based on the genomic proximity of nearest ER-alpha binding. We use the method to identify a confident set of ER-alpha target genes and their regulatory enhancers genome-wide. Validation with publicly available GRO-Seq data shows our predicted targets are much more likely to show early nascent transcription than predictions based on genomic ER-alpha binding proximity alone. Accuracy of the predictions from the supervised model was compared against the second more complex unsupervised generative approach which uses proximity-based prior and temporal binding patterns at enhancers and promoters to infer protein-mediated regulatory complexes involving individual genes and their networks of multiple distant regulatory enhancers.

Objetivou-se avaliar a influência da monensina sódica sobre o acúmulo hepático de cobre em ovinos. Haja vista, que ionóforos podem alterar a absorção, disponibilidade e distribuição tecidual de minerais em muitos tecidos do organismo. Foram utilizados 24 ovinos mestiços das raças Santa Inês x Dorper com média de três meses de idade e peso medio de 30 kg ao início do experimento, que receberam dieta basal calculada em 2,75% do peso corpóreo, sendo 50% de concentrado comercial (7,13 ppm de Cu) e 50% de feno de capim coast-cross (3,72 ppm de Cu) e 10 gramas de sal mineral (5,9 ppm de Cu). Os cordeiros foram distribuídos em quatro grupos distintos, sendo: Controle apenas dieta basal; Monensina (Mon) - dieta basal e 30 ppm de monensina sódica; Cobre (Cu) - dieta basal acrescida de 10 mg/kg P.V./dia de cobre, na forma de sulfato de cobre pentahidratado; e grupo Monensina+Cobre (MonCu) - dieta basal acrescida de 10 mg/kg P.V./dia de cobre e 30 ppm de monensina sódica. O período experimental teve duração de 14 semanas. Foram coletadas amostras de figado e bile no início por biópsia, e ao final do experimento por necropsia, para determinação de minerais, assim como amostras semanais de sangue para avaliação bioquímica, hematológica e mineral. Foi realizada análise estatística por meio de fatorial 2x2 considerando como fatores a inclusão ou não de cobre e monensina na dieta. Somente um animal apresentou quadro clínico de intoxicação cúprica acumulativa. As concentrações de cobre no fígado no início do experimento variaram entre 243,8 e 345,4 ppm não havendo diferença entre os grupos experimentais. As concentrações médias e desvios-padrão em ppm do cobre hepático ao final do experimento foram 3.363 ± 576 para o grupo MonCu; 2560 ± 524 para o grupo Cu; 562 ± 168 para o grupo Mon e 253 ± 131 para o grupo Controle. Ao final do estudo a concentração de cobre hepático foi influenciada pela suplementação com cobre (P = 0,0001) e monensina (P = 0,0003). Os grupos suplementados com cobre tiveram redução dos teores de ferro hepático (P = 0,0287) e aumento das concentrações de cobre na bile. A avaliação bioquimica demonstrou elevação da atividade sérica da GGT e AST (P < 0,05) nos grupos Cu e MonCu a partir da décima primeira semana do experimento em relação aos grupos Controle e Mon. O aumento da atividade destas enzimas foram influenciadas pela suplementação de cobre (P = 0,0340), enquanto os grupos suplementados com monensina apresentaram menores valores de creatinina quinase. Os resultados obtidos permitem concluir que a monensina interfere positivamente com o acúmulo hepático de cobre sendo que a sumplentação deste aditivo pode predispor a quadros de intoxicações cúprica em ovinos. / The aim of this study was to verify if monensin can change the accumulation of cooper in the liver of sheep, in view of ionophores can alter the absorption, availability, tiissue distribution of many minerals in the body. Twenty four crossbred Dorper X Santa Inês lambs wiht mean age of 3 months and wheitgh 30 kg at the begining of trial recived a basal diete calculated by 2,75% of body wheigth of 50% concentrade (7,13 ppm of Cu) and 50% cost-cross hay (3,72 ppm of Cu) and 10 g of mineral salt (5,9 ppm of Cu). Lambs were randomly distributed in four groups: Control: basal diet, Mon Group reciving basal diet plus 30 mg of monensin; Cu group: basal diet plus 10 mg Cu B.W of CuSO4.5H2O solution; Group CuMon: basal diet plus 30 mg of monensin and 10 mg of Cu B.W. The exeperimental period lasted for fourteen weeks. Liver samples were obtined by liver biopsy initially and at the end by necropsy when lambs were slaughterd. Blood samples were obtained weekly for determination of biochemical, hematological and mineral. Statistical analysis using a 2x2 factorial was conducted considering the factors copper and monensin in the diet and the interaction between them to evaluate the hepatic copper at the beginning and at the end of the study. Only one of animal of group MonCu exhibit clinical sings of copper toxicosis. Copper concentrations in the liver at the beginning of the experiment ranged between 243,8 and 345,4 ppm with no difference between experimental groups. Mean concentrations and standard deviations in ppm of hepatic copper at the end of the experiment were 3,363 ± 576 for MonCu group; 2560 ± 524 for Cu group; 562 ± 168 for the Mon group and 2538 ± 131 for the control group. At the end of the study liver concentrations and total hepatic copper accumulation were influenced both by the amount of dietary copper (P = 0.0001) and of monensin (P = 0.0003). The groups supplemented with copper had reduced levels of hepatic iron (P = 0.0287) and increased concentrations of copper in the bile. The biochemical evaluation demonstrated elevated serum AST and GGT activity (P <0.05) with Cu and MonCu from the eleventh week of the experiment compared to the control groups and Mon. The increased activity of these enzymes were influenced by copper supplementation (P = 0.0340), while group monensin had lower values of creatinine kinase. The results indicate that monensin interferes positively with hepatic copper accumulation and supplementation of this additive can predispose cupric poisoning in sheep.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-07-13Bitstream added on 2014-06-13T19:15:08Z : No. of bitstreams: 1 demattefilho_lc_me_botfmvz.pdf: 222908 bytes, checksum: 500b796e341bc8ad080cd223c82b84f7 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo deste trabalho foi avaliar diferentes tipos de bokashi e seus níveis de inclusão sobre o desempenho, rendimento de carcaça e partes, peso de órgãos e morfometria intestinal de frangos de corte criados no sistema alternativo. Foram utilizados 2592 frangos de corte machos da linhagem Ross distribuídos em um delineamento em blocos casualizados com esquema fatorial 2x4 (dois tipos de bokashi: comum-C e ativado-F e quatro níveis de inclusão do bokashi nas rações: 0,50, 1,00, 2,00 e 4,00%), com seis repetições de 54 aves cada. Os dados de desempenho foram obtidos para os períodos de 1-21 e 1-42 dias de idade. Aos 42 dias de idade, foram retiradas cinco aves de cada parcela para análises de rendimento de carcaça e duas aves de cada parcela para análises de peso de órgão e morfometria intestinal. Com exceção do rendimento de carcaça, não houve interação entre tipo de bokashi e nível de inclusão para nenhuma das características avaliadas. Embora não significativos, os maiores valores numéricos do fator de produção para o bokashi F e para o nível de inclusão de 0,50% de bokashi, indicam melhores resultados zootécnicos. O uso de bokashi C e F em níveis de inclusão de até 4,00% na ração não influenciou o desempenho aos 21 e 42 dias de idade, de frangos de corte criados no sistema alternativo. Nos frangos que receberam bokashi F, o nível de inclusão de 0,50% apresentou maior rendimento de carcaça que o 1,00%; e para o nível de inclusão de 1,00%, o bokashi C foi superior ao bokashi F para esta característica. Conclui-se que os melhores níveis de inclusão de bokashi na ração de frangos de corte situam-se entre 0,50 e 1,00 % e que o nível de 4,00%, embora não tenha afetado o desempenho das aves, parece ser excessivo, quando se consideram todas as variáveis analisadas. / The objective of this study was to evaluate the effects of different bokashi types and inclusion levels on growth performance, carcass yield and cut up parts yield of broilers raised on alternative system. Data were analyzed as a randomized complete blocks. A group of two thousand five hundred and ninety two day-old male Ross broiler chicks were used in a 2x4 factorial design (two types of bokashi C and F, and four inclusion levels in feed: 0,50; 1,00; 2,00 and 4,00%) with six replicates of 54 birds each. Growth performance data were obtained from 1 to 21 and 1 to 42 days period. At 42 days of age thirty 42 day-old birds, five from each treatment, were sampled to carcass yield analysis. Except for carcass yield, there was not interaction between type of bokashi and level of inclusion for any of the evaluated characteristics. Although not significant, higher efficiency production factor values using 0.50% of bokashi in feed could suggest better growth performance. Both bokashi types, C and F, in all inclusion levels studied, have not shown changes on growth performance of broiler raised on alternative system in the period of 1 to 21 and 1 to 42 days of age. For carcass yield values, birds treated with 0.05% of bokashi F in feed showed higher values compared with the 1.00% treatment. Also, using a 1.00% inclusion for both types of bokashi, bokashi C resulted in higher values of carcass yield.

O Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença autoimune inflamatória crônica que possui uma etiopatogênese complexa. Diversos fatores participam da patogênese da doença, dentre eles alterações no balanço de citocinas e quimiocinas. As quimiocinas e seus receptores são fundamentais na regulação da migração de leucócitos durante a inflamação e acredita-se que elas possam ter um papel importante na patogênese de doenças autoimunes, inclusive no LES. Diversos estudos abordaram o papel de quimiocinas e seus receptores no LES, porém, principalmente se tratando dos receptores de quimiocinas CCR5 e CCR2, não existe um consenso. Devido à falta de consenso em relação ao papel dos receptores de quimiocinas na patogênese do LES e considerando a necessidade de mais estudos nesta área, o presente trabalho tem por objetivo investigar o possível papel de polimorfismos na região promotora do CCR5 no desenvolvimento do LES, comparando as frequências dos genótipos e haplótipos entre pacientes e controles, e analisar o possível envolvimento destes polimorfismos nas manifestações clínicas/laboratoriais da doença. O estudo incluiu 382 pacientes com LES (289 Euro-descendentes e 93 Afro-descendentes) e 375 controles (243 Euro-descendentes e 132 Afro-descendentes) genotipados para os polimorfismos CCR2-64I G>A (rs1799864), CCR5-59353 C>T (rs1799988), CCR5-59356 C>T (rs41469351), CCR5-59402 A>G (rs1800023) e CCR5-59653 C>T (rs1800024) através de PCR-RFLP e sequenciamento, respectivamente. Dados prévios de nosso grupo em relação ao CCR5delta32 foram incluídos no estudo para a inferência dos haplótipos e como um possível fator de confusão na regressão binária logística. Os resultados obtidos indicam que, em pacientes Euro-descendentes, as frequências reduzidas o polimorfismo CCR5delta32 e o haplótipo HHG*2 observadas em pacientes quando comparados com controles foram associadas com a doença (p=0,001; OR 3,5; 95%CI 1,6-7,5 e 2,0% vs. 7,2%; presidual=2,9E-5; respectivamente). Em pacientes Afrodescendentes, as frequências dos haplótipos HHA/HHB, HHC e HHG*2 foram diferentes em pacientes e controles (10% vs. 20,5%, presidual = 0,003; 29,4% vs. 17,4%; presidual=0,003 e 3,9% vs. 0,8%; presidual=0,023; respectivamente). Em relação às manifestações clínicas da doença, a presença do CCR5delta32 foi confirmada como um fator de susceptibilidade para nefrite classe IV em pacientes Afro-descendentes e no grupo de pacientes como um todo (pcorrigido=0,012; OR 3,0; 95%CI 3,0-333,3 e pcorrigido=0,0006; OR 6,8; 95%CI 1,9-2,48; respectivamente). Em conclusão, o presente estudo indica que polimorfismos na região promotora do CCR5 podem atuar como modificadores no LES. Os resultados observados reforçam o papel do polimorfismo CCR5delta32 como um fator de proteção para o desenvolvimento do LES em Euro-descendentes e como um fator de susceptibilidade à nefrite classe IV em pacientes Afro-descendentes. Além disto, também foram descritos a redução da frequência dos haplótipos HHA/HHB e o aumento da frequência dos haplótipos HHC e HHG*2 em pacientes Afro-descendentes, que possivelmente podem estar associados com uma maior expressão do CCR5 em subtipos específicos celulares e com uma menor expressão deste receptor de maneira geral. / Systemic Lupus erythematosus (SLE) is a chronic inflammatory autoimmune disease, characterized by a complex etiopathogenesis. Many factors are known to participate in the pathogenesis of SLE, including alterations in the cytokines or chemokines balance. Chemokines and their receptors are central players in the regulation of leucocytes chemotaxis in inflammation and they are thought to have an important role in the pathogenesis of autoimmune diseases, including SLE. Several studies have addressed the role of chemokines and their receptors in SLE, however there is no consensus regarding their involvement on the pathogenesis of the disease. Given the lack of consensus considering the role of chemokine receptors in SLE pathogenesis and the need for more studies in this area, the present work aims to investigate a possible role of the CCR5 promoter region polymorphisms in the development of SLE comparing the frequencies of the genotypes and haplotypes with ethnically matched controls and analyze if there is a possible involvement of the polymorphisms in the clinical outcome of the disease. This study included 388 SLE patients (289 classified as Europeanderived and 93 as African-derived) and 375 controls (243 European-derived and 132 African-derived) genotyped for the CCR2-64I G>A (rs1799864), CCR5-59353 C>T (rs1799988), CCR5-59356 C>T (rs41469351), CCR5-59402 A>G (rs1800023) and CCR5-59653 C>T (rs1800024) polymorphisms though PCRRFLP and direct sequencing, respectively. Previous data from CCR5delta32 were included in the study to infer the haplotypes and also as a possible confounding factor in the binary logistic regression. Our results indicated that, in Europeanderived patients, CCR5delta32 and the HHG*2 haplotype reduced frequencies in patients when compared to controls were associated with the disease (p=0.001; OR 3.5; 95%CI 1.6-7.5 and 2.0%, vs. 7.2% residual p= 2.9E-5, respectively). In African-derived patients, the HHA/HHB, HHC and HHG*2 haplotype frequencies differed between patients and controls (10% vs. 20.5%, residual p= 0.003; 29.4% vs. 17.4%, residual p=0.003 and 3.9% vs. 0.8%, residual p=0.023; respectively). Considering the clinical manifestations of the disease, CCR5delta32 presence was confirmed as a susceptibility factor to class IV nephritis in the African-derived group and when patients were considered together (pcorrected=0.012; OR 3.0; 95%CI 3.0-333.3 and pcorrected= 0.0006; OR 6.8; 95%CI 1.9-2.48, respectively). In conclusion, this study indicates that CCR5 promoter polymorphisms are important disease modifiers in SLE. Present data reinforces CCR5delta32 polymorphism as a protective factor for the development of the disease in European-derived patients and as a susceptibility factor for class IV nephritis in African-derived patients. Furthermore, we also describe a reduced frequency of HHA/HHB and an enhanced frequency of HHC and HHG*2 haplotypes in our African-derived patients, which potentially could reflect in a higher expression of CCR5 in specific cell subsets and in a lower expression of CCR5 overall.