A água é, sem dúvida, a matéria-prima de maior volume empregada, considerando de forma global, na produção farmacêutica. Pode ser usada direta ou indiretamente, com profundo potencial de impacto na qualidade do produto e na segurança do paciente. Consiste em meio de crescimento que, embora não rico, apresenta variações em suas características microbianas. Sendo assim, os métodos tradicionais utilizados em sua análise, apesar de simples, exigem vários dias para obtenção de resultados e muitas vezes não são sensíveis o suficiente para recuperar microrganismos em determinados estados fisiológicos, como por exemplo, biofilmes ou em estado viável não cultivável. Em virtude disso, o presente trabalho foi elaborado com intuito de desenvolver pesquisas para inovar no controle de qualidade microbiológico da água utilizada para fins farmacêuticos e, além de agregar novas técnicas, visa que os produtos farmacêuticos estejam disponíveis no mercado de modo rápido, seguro, eficaz e com a qualidade desejada. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial das tecnologias alternativas, em específico a citometria de fluxo, no monitoramento microbiano da água purificada, de forma a assegurar a manutenção de baixo risco de falha microbiana. O estudo foi conduzido em três etapas: a primeira etapa foi denominada de prova de conceito e teve por objetivo avaliar se existia alguma correlação entre os resultados obtidos com o método alternativo com aqueles obtidos com o método tradicional; a segunda etapa foi a validação da metodologia alternativa, etapa na qual foram avaliados todos os parâmetros de validação exigidos pelas principais normas e compêndios farmacêuticos; a terceira e última etapa foi denominada de equivalência, etapa na qual foi demonstrada a equivalência entre o método alternativo e os métodos farmacopeicos quando desafiados com amostras de água purificada coletadas de reservatórios da Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF/USP). Os resultados obtidos no presente estudo demonstraram que a citometria de fluxo é não só uma opção válida em relação ao método tradicional por semeadura em profundidade como também oferece como principal vantagem a possibilidade de se ter resultados em tempo real, possibilitando efetuar qualquer correção no processo produtivo a tempo. / Water certainly is the most used raw material used in pharmaceutical industry, considering volume of material and manufacturing process. It may be used either directly or indirectly, causing a considerable impact on product quality and patient safety. It may be considered a poor culture media that presents variable microbiologic characteristics. Even though the traditional microbiological methods used for water evaluation are simple, data obtainment requires several days. In addition, these methods are unable to recover microorganisms from determined physiological conditions, such as those observed in biofilms or in a viable but non-culturable state. Therefore, the present work aimed to research innovative methods for microbiologic quality control of water for pharmaceutical use. The new techniques intend to provide pharmaceutical product to market more rapidly, while maintaining its safety and quality. Specifically, the objective of this work was to evaluate alternative technologies, namely flow cytometry, and their application on microbiological assessment of purified water ensuring the low risk of microbiological fail. This study was conducted in three steps: the first, named as proof of concept, aimed to determine whether occurred any correlation between results obtained from traditional methods and results obtained from alternative method. Validation of alternative method was performed in the second step. This step was executed considering all validation parameters required for main pharmaceuticals norms and compendia. The last step was named equivalency, in which was showed the equivalence between traditional and alternative methods when challenged against purified water sampled from School of Pharmaceutical Sciences (FCF/USP) reservoirs. Results showed that flow citometry is equivalent to traditional methods and was also able to provide real-time evaluation, which enables to adjust the manufacturing process as soon as a deviation is detected.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-03-12T13:20:56Z No. of bitstreams: 1 FabricioRooseveltMeloDaSilva_DISSERT.pdf: 12566402 bytes, checksum: d3f722d0746536b7850d988ebea66e60 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-03-14T13:01:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 FabricioRooseveltMeloDaSilva_DISSERT.pdf: 12566402 bytes, checksum: d3f722d0746536b7850d988ebea66e60 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-14T13:01:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FabricioRooseveltMeloDaSilva_DISSERT.pdf: 12566402 bytes, checksum: d3f722d0746536b7850d988ebea66e60 (MD5) Previous issue date: 2017-12-19 / Este trabalho tem como objetivo a adequa??o de uma esta??o de tratamento de ?gua, atrav?s do desenvolvimento e a implanta??o de um sistema de automa??o e supervis?o voltado para produ??o de ?gua purificada para fins farmac?uticos. A ?gua tem import?ncia fundamental na ind?stria farmac?utica, participa dos processos de limpeza de materiais e superf?cies, al?m de ser utilizada como ve?culo em formula??es, exigindo uma s?rie de especifica??es f?sico-qu?mica e microbiol?gicas. O processo de purifica??o da ?gua deve passar rotineiramente por um controle de qualidade r?gido e deve possuir um processo industrial conciso, automatizado e eficiente, de acordo com a legisla??o vigente. A utiliza??o de redes de automa??o e sistemas supervis?rios est? longe de ser novidade em qualquer tipo de ind?stria, por?m, neste caso, a planta industrial objeto de estudo n?o utilizava estas ferramentas. Para atingir o objetivo proposto fez-se a implementa??o de uma rede de comunica??o industrial entre os equipamentos da planta, atrav?s de uma rede padr?o MODBUS, uma rede instrumental com sinal de corrente el?trica e uma rede padr?o Ethernet. Concentrou-se os dados de leituras das vari?veis dos equipamentos no CLP mestre, este por sua vez ligado a um sistema SCADA. Este SCADA fornece ao operador uma vis?o panor?mica do processo, informando-o em tempo real o comportamento das vari?veis provenientes das etapas do processo, facilitando qualquer interven??o ou mudan?a no sistema. Os dados mais importantes s?o armazenados diariamente em arquivos na esta??o do SCADA, ficando dispon?veis para futuras auditorias ou durante a valida??o anual da planta, comprovando a efic?cia e seguran?a de todo o sistema. / This document propose the adequace of a water treatment station, through the development and implementation of an automation and supervision system for purified water production used in the manufacture of medicines. Water is of fundamental importance in the pharmaceutical industry, it participates in the cleaning processes of materials and surfaces, as well as being used as a carrier in formulations, requiring a series of physicochemical and microbiological specifications. The process of water purification must routinely pass through a strict quality control and must have a concise, automated and efficient industrial process, according to the current legislation. The use of automation networks and supervisory systems is far from novelty in any type of industry, however, in this case, the industrial plant under study did not use these tools. In order to reach the proposed objective, an industrial communication network was implemented between the plant equipments, through a MODBUS default network, an electric current signal instrument network and an Ethernet network. The variables input data of equipaments were concentrated in the master PLC, which was connected to a SCADA system. This SCADA provides the operator with a panoramic view of the process, informing it in real time the behavior of the variables from the process steps, facilitating any intervention or change in the system. The most important data is stored daily in files at the SCADA station, becoming available for future audits or during the annual validation of the station, proving the effectiveness and security of the entire system.

A água é, sem dúvida, a matéria-prima de maior volume empregada, considerando de forma global, na produção farmacêutica. Pode ser usada direta ou indiretamente, com profundo potencial de impacto na qualidade do produto e na segurança do paciente. Consiste em meio de crescimento que, embora não rico, apresenta variações em suas características microbianas. Sendo assim, os métodos tradicionais utilizados em sua análise, apesar de simples, exigem vários dias para obtenção de resultados e muitas vezes não são sensíveis o suficiente para recuperar microrganismos em determinados estados fisiológicos, como por exemplo, biofilmes ou em estado viável não cultivável. Em virtude disso, o presente trabalho foi elaborado com intuito de desenvolver pesquisas para inovar no controle de qualidade microbiológico da água utilizada para fins farmacêuticos e, além de agregar novas técnicas, visa que os produtos farmacêuticos estejam disponíveis no mercado de modo rápido, seguro, eficaz e com a qualidade desejada. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial das tecnologias alternativas, em específico a citometria de fluxo, no monitoramento microbiano da água purificada, de forma a assegurar a manutenção de baixo risco de falha microbiana. O estudo foi conduzido em três etapas: a primeira etapa foi denominada de prova de conceito e teve por objetivo avaliar se existia alguma correlação entre os resultados obtidos com o método alternativo com aqueles obtidos com o método tradicional; a segunda etapa foi a validação da metodologia alternativa, etapa na qual foram avaliados todos os parâmetros de validação exigidos pelas principais normas e compêndios farmacêuticos; a terceira e última etapa foi denominada de equivalência, etapa na qual foi demonstrada a equivalência entre o método alternativo e os métodos farmacopeicos quando desafiados com amostras de água purificada coletadas de reservatórios da Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF/USP). Os resultados obtidos no presente estudo demonstraram que a citometria de fluxo é não só uma opção válida em relação ao método tradicional por semeadura em profundidade como também oferece como principal vantagem a possibilidade de se ter resultados em tempo real, possibilitando efetuar qualquer correção no processo produtivo a tempo. / Water certainly is the most used raw material used in pharmaceutical industry, considering volume of material and manufacturing process. It may be used either directly or indirectly, causing a considerable impact on product quality and patient safety. It may be considered a poor culture media that presents variable microbiologic characteristics. Even though the traditional microbiological methods used for water evaluation are simple, data obtainment requires several days. In addition, these methods are unable to recover microorganisms from determined physiological conditions, such as those observed in biofilms or in a viable but non-culturable state. Therefore, the present work aimed to research innovative methods for microbiologic quality control of water for pharmaceutical use. The new techniques intend to provide pharmaceutical product to market more rapidly, while maintaining its safety and quality. Specifically, the objective of this work was to evaluate alternative technologies, namely flow cytometry, and their application on microbiological assessment of purified water ensuring the low risk of microbiological fail. This study was conducted in three steps: the first, named as proof of concept, aimed to determine whether occurred any correlation between results obtained from traditional methods and results obtained from alternative method. Validation of alternative method was performed in the second step. This step was executed considering all validation parameters required for main pharmaceuticals norms and compendia. The last step was named equivalency, in which was showed the equivalence between traditional and alternative methods when challenged against purified water sampled from School of Pharmaceutical Sciences (FCF/USP) reservoirs. Results showed that flow citometry is equivalent to traditional methods and was also able to provide real-time evaluation, which enables to adjust the manufacturing process as soon as a deviation is detected.

A água exerce papel fundamental nas diferentes fases do processo de fabricação de artigos para saúde (médico-hospitalares, farmacêuticos, e clínicos), exigindo elevado grau de pureza, que certifique a sua inocuidade. Portanto, se faz necessário maior controle dos sistemas de purificação de água e suas etapas de tratamento, onde a formação de biofilmes pode contaminar os artigos para saúde e, consequentemente, causar injúria a pacientes submetidos à aplicação dos mesmos. Embora os artigos médicos sejam esterilizados por óxido de etileno (ETO), seu processo de manufatura deve prever o mínimo acréscimo possível de contaminantes. Considerando que a água purificada e a esterilização dos artigos para saúde são fatores determinantes para o sucesso de sua aplicação, este trabalho foi dividido em duas partes distintas. A primeira parte aborda o controle das etapas de purificação da água, que é destinada à lavagem de componentes termoplásticos, que são utilizados na fabricação de artigos para saúde. Os níveis máximos de carga microbiana (expressos em ciclos de log10 UFC/100mL) encontrados ao longo do sistema de purificação de água foram: 3,48 log10 na água de entrada; 3,57 log10 nos filtros multimeios; 3,75 log10 nos abrandadores; 4,97 log10 no filtro de carvão ativado; 2,53 log10 na osmose reversa; 2,70 log10 no tanque de estocagem e distribuição; 2,56 log10 na lâmpada ultravioleta; 2,53 log10 nos filtros 0,05 µm; 1,98 log10 nos pontos de uso. Flavimonas oryzihabitans e Micrococcus luteus foram as bactérias Gram-negativa e Grampositiva, respectivamente, isoladas e identificadas com maior freqüência na água, em diferentes estágios do sistema, inclusive após a passagem dessa através das membranas de osmose reversa. A segunda parte do estudo teve como objetivo determinar o tempo de aeração necessário para que os oxigenadores de sangue e conjuntos de tubos de PVC, após esterilização por ETO, permaneçam em aeração, para dissipação dos resíduos de ETO. Avaliou-se também a potencialidade da proteína verde fluorescente (GFP) como biossensor no processo de esterilização. O processo de esterilização destes artigos médicos foi monitorado com indicadores biológicos Bacillus atrophaeus, proteína verde fluorescente (GFP) e controles de temperatura, pressão e umidade em ciclos de 2 h (ciclo curto), 4 h (meio ciclo) e 8 h (ciclo longo). As curvas de dissipação, determinadas por cromatografia gasosa, confirmaram níveis residuais menores que 25 ppm para ETO e etileno cloridrina (EC); e inferiores a 250 ppm para etileno glicol (EG), ao final do processo de esterilização para os oxigenadores; e, após 221 horas de aeração, para os conjuntos de tubos de PVC. Nos ciclos de esterilização, as reduções na intensidade de fluorescência da GFP ocorreram em função do tempo de exposição ao ETO; enquanto germinação de esporos e/ou crescimento de B. atrophaeus não foi observado. / The water exerts important paper in different phases of critical items manufacture in the health care units, pharmaceutical industries, hospitals and clinics, becoming necessary a rigorous control of the water purification systems, storage and distribution, in order to prevent biofilms formation and cross-contamination between devices and patients, who are submitted to critical articles and parenteral solution application. The sterilization of critical devices by ethylene oxide (ETO) should predict minimum addition of possible contaminants and residues. Considering that the purified water and the sterilization are crucial factors for medical devices, this work was divided in two parts. The first part evaluated continuously the stages of the system for the purification of the water, which purity level is critical and determines the quality of the washing of thermoplastic components used in the manufacture of critical items. The maximum levels of heterotrophic load (log10 UFC/100mL) found throughout the water purification system were: 3.48 log10 in the water inlet; 3.57 log10 in the multimedium filters; 3.75 log10 in the softeners; 4.97 log10 in the activated carbon filter; 2.53 log10 in the reverse osmosis; 2.70 log10 in the tank of storage and distribution; 2.56 log10 in the UV lamp; 2.53 log10 in the 0.05µm filters; 1.98 log10 in the consumption points. Flavimonas oryzihabitans and Micrococcus luteus were the main Gram-negative and Grampositive bacteria, respectively found in the purified water after reverse osmosis. The second part of this study had as objective the determination of the needed aeration time for blood oxygenators and sets of PVC tubing must be kept in aeration room for dissipation of ETO residues; and also evaluated the possibility of GFP as biosensor. ETO is used as in a mixture (10% ETO and 90% CO2). Residual levels of ETO and its derivatives, ethylene chloridrin (ECH) and ethylene glycol (EG), which remain in these devices, must be controlled to prevent serious injuries to the patients. The sterilization process of the oxygenators and sets of PVC tubing was monitored with Bacillus atrophaeus and fluorescent green protein (GFP). The temperature, pressure and humidity were controlled in the sterilization cycles of 2 h (short cycle), 4 h (half cycle) and 8 h (long cycle). The dissipation curves of the residues were determined by gaseous chromatography and the residual concentrations were lower than 25 ppm of ETO and ECH and lower than 250 ppm of EG immediately after the sterilization processes for oxygenators and after 221 hours of aeration for the sets of PVC tubing. Reductions in the fluorescence intensity of GFP were observed as a function of the exposition time to the ETO. No growth of B. atrophaeus spores was observed after cycles.

A água exerce papel fundamental nas diferentes fases do processo de fabricação de artigos para saúde (médico-hospitalares, farmacêuticos, e clínicos), exigindo elevado grau de pureza, que certifique a sua inocuidade. Portanto, se faz necessário maior controle dos sistemas de purificação de água e suas etapas de tratamento, onde a formação de biofilmes pode contaminar os artigos para saúde e, consequentemente, causar injúria a pacientes submetidos à aplicação dos mesmos. Embora os artigos médicos sejam esterilizados por óxido de etileno (ETO), seu processo de manufatura deve prever o mínimo acréscimo possível de contaminantes. Considerando que a água purificada e a esterilização dos artigos para saúde são fatores determinantes para o sucesso de sua aplicação, este trabalho foi dividido em duas partes distintas. A primeira parte aborda o controle das etapas de purificação da água, que é destinada à lavagem de componentes termoplásticos, que são utilizados na fabricação de artigos para saúde. Os níveis máximos de carga microbiana (expressos em ciclos de log10 UFC/100mL) encontrados ao longo do sistema de purificação de água foram: 3,48 log10 na água de entrada; 3,57 log10 nos filtros multimeios; 3,75 log10 nos abrandadores; 4,97 log10 no filtro de carvão ativado; 2,53 log10 na osmose reversa; 2,70 log10 no tanque de estocagem e distribuição; 2,56 log10 na lâmpada ultravioleta; 2,53 log10 nos filtros 0,05 µm; 1,98 log10 nos pontos de uso. Flavimonas oryzihabitans e Micrococcus luteus foram as bactérias Gram-negativa e Grampositiva, respectivamente, isoladas e identificadas com maior freqüência na água, em diferentes estágios do sistema, inclusive após a passagem dessa através das membranas de osmose reversa. A segunda parte do estudo teve como objetivo determinar o tempo de aeração necessário para que os oxigenadores de sangue e conjuntos de tubos de PVC, após esterilização por ETO, permaneçam em aeração, para dissipação dos resíduos de ETO. Avaliou-se também a potencialidade da proteína verde fluorescente (GFP) como biossensor no processo de esterilização. O processo de esterilização destes artigos médicos foi monitorado com indicadores biológicos Bacillus atrophaeus, proteína verde fluorescente (GFP) e controles de temperatura, pressão e umidade em ciclos de 2 h (ciclo curto), 4 h (meio ciclo) e 8 h (ciclo longo). As curvas de dissipação, determinadas por cromatografia gasosa, confirmaram níveis residuais menores que 25 ppm para ETO e etileno cloridrina (EC); e inferiores a 250 ppm para etileno glicol (EG), ao final do processo de esterilização para os oxigenadores; e, após 221 horas de aeração, para os conjuntos de tubos de PVC. Nos ciclos de esterilização, as reduções na intensidade de fluorescência da GFP ocorreram em função do tempo de exposição ao ETO; enquanto germinação de esporos e/ou crescimento de B. atrophaeus não foi observado. / The water exerts important paper in different phases of critical items manufacture in the health care units, pharmaceutical industries, hospitals and clinics, becoming necessary a rigorous control of the water purification systems, storage and distribution, in order to prevent biofilms formation and cross-contamination between devices and patients, who are submitted to critical articles and parenteral solution application. The sterilization of critical devices by ethylene oxide (ETO) should predict minimum addition of possible contaminants and residues. Considering that the purified water and the sterilization are crucial factors for medical devices, this work was divided in two parts. The first part evaluated continuously the stages of the system for the purification of the water, which purity level is critical and determines the quality of the washing of thermoplastic components used in the manufacture of critical items. The maximum levels of heterotrophic load (log10 UFC/100mL) found throughout the water purification system were: 3.48 log10 in the water inlet; 3.57 log10 in the multimedium filters; 3.75 log10 in the softeners; 4.97 log10 in the activated carbon filter; 2.53 log10 in the reverse osmosis; 2.70 log10 in the tank of storage and distribution; 2.56 log10 in the UV lamp; 2.53 log10 in the 0.05µm filters; 1.98 log10 in the consumption points. Flavimonas oryzihabitans and Micrococcus luteus were the main Gram-negative and Grampositive bacteria, respectively found in the purified water after reverse osmosis. The second part of this study had as objective the determination of the needed aeration time for blood oxygenators and sets of PVC tubing must be kept in aeration room for dissipation of ETO residues; and also evaluated the possibility of GFP as biosensor. ETO is used as in a mixture (10% ETO and 90% CO2). Residual levels of ETO and its derivatives, ethylene chloridrin (ECH) and ethylene glycol (EG), which remain in these devices, must be controlled to prevent serious injuries to the patients. The sterilization process of the oxygenators and sets of PVC tubing was monitored with Bacillus atrophaeus and fluorescent green protein (GFP). The temperature, pressure and humidity were controlled in the sterilization cycles of 2 h (short cycle), 4 h (half cycle) and 8 h (long cycle). The dissipation curves of the residues were determined by gaseous chromatography and the residual concentrations were lower than 25 ppm of ETO and ECH and lower than 250 ppm of EG immediately after the sterilization processes for oxygenators and after 221 hours of aeration for the sets of PVC tubing. Reductions in the fluorescence intensity of GFP were observed as a function of the exposition time to the ETO. No growth of B. atrophaeus spores was observed after cycles.

Made available in DSpace on 2016-03-04T13:55:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 7.pdf: 2671790 bytes, checksum: 3ea789720d5aa831716c6bfe2ca4f9b6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Fármacos/Farmanguinhos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O Instituto de Tecnologia em Fármacos (Farmanguinhos), unidade técnico-científica da Fundação Oswaldo Cruz, representa o maior laboratório farmacêutico oficial vinculado ao Ministério da Saúde brasileiro responsável pela produção de mais de um bilhão de medicamentos por ano. As legislações sanitárias vigentes definem que devem ser utilizadas instalações segregadas e dedicadas para a produção de medicamentos, como penicilinas, minimizando os riscos de contaminação cruzada, que consequentemente possam gerar danos à saúde. Por isso, Farmanguinhos possui, atualmente, uma área dedicada à produção de amoxicilina, assim como o sistema gerador de água purificada, que atende à referida fabricação, também é dedicado à mesma. A água é a matéria-prima de mais elevado volume empregada na produção farmacêutica, exercendo profundo impacto na qualidade do produto e na segurança do paciente. O controle microbiológico da qualidade da água utilizada em processos farmacêuticos torna-se fundamental, já que micro-organismos podem sobreviver e proliferar em sistemas de água, tornando-se fontes de contaminação microbiana e pirogênica. A identificação destes micro-organismos e as informações obtidas sobre os mesmos podem ser extremamente úteis na identificação da fonte de contaminação microbiana de um produto ou processo, alem de direcionar ações corretivas, se necessário. O objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade microbiana presente em sistema gerador de água purificada, dedicado à produção de penicilínicos, de Farmanguinhos. Para isto, as amostras de água coletadas a partir do ponto de entrada, ponto de água potável, e do ponto de saída do sistema, ponto de água purificada, foram analisadas microbiologicamente quanto à contagem de micro-organismos mesófilos e quanto à presença de patógenos: Escherichia coli; coliformes totais e Pseudomonas aeruginosa. As amostras foram analisadas entre janeiro e maio de 2013. Todas as colônias obtidas foram isoladas e submetidas à identificação, através de equipamento MALDI-TOF. Não foram observados resultados acima da especificação para ambos os pontos, no período analisado. Do ponto de água potável foram isoladas apenas três espécies bacterianas: Bacillus cereus, Delftia acidovorans e Acinetobacter sp. Uma diversidade microbiana maior foi isolada a partir do ponto de água purificada, como: Burkholderia sp, Delftia acidovorans, Stenotrophomonas maltophilia, Bacillus cereus, Pseudomonas oryzihabitans e Pseudomonas putida. A espécie Delftia acidovorans, associada a fenômenos de biocorrosão foi o micro-organismo mais encontrado, sendo identificado em cerca de 1/3 do total de isolados. O sistema de água de Farmanguinhos é sanitizado mensalmente com sanitizante à base de glutaraldeído. Pode-se concluir que a sanitização está sendo eficiente para manter a contagem total de micro-organismos mesófilos dentro dos limites especificados. No entanto, algumas ações podem ser tomadas para evitar a presença de biofilmes, o que aprimorará ainda mais a qualidade da água purificada gerada. / The Instituto de Tecnologia em Fármacos (Farmaguinhos), technical- scientific unit of Fundação Oswaldo Cruz, is the largest official pharmaceutical laboratory under the Brazilian Ministry of Health responsible for producing more than one billion drugs per year. The current sanitary laws define that segregated facilities must be dedicated and used for the production of drugs such as penicillin, thus the risk of serious damage to health, due to crosscontamination, can be minimized. Because of this, Farmanguinhos has a dedicated production of amoxicillin, as well as a purified water generator system that caters to such manufacturing is also dedicated to this area. Water is the raw material of the highest volume used in pharmaceutical production so that it has a profound impact on the product quality and patient safety. Therefore, the microbiological quality control of water used in pharmaceutical processes becomes crucial, since microorganisms can survive and proliferate in water systems, becoming sources of microbial and pyrogenic contamination. The identification of these microorganisms and the information obtained about them can be extremely useful in identifying the source of microbial contamination of a product or process, in addition to direct corrective actions, if necessary. The objective of this study was to evaluate the microbial diversity present in the purified water generator system, dedicated to the area of manufacturing penicillin-based drugs of Farmanguinhos. To aim this objective, water samples collected from the entry point of the system, point of drinking water, and the point of departure, point of purified water, were analyzed microbiologically for the count of mesophilic and for the presence of pathogens: Escherichia coli; coliforms and Pseudomonas aeruginosa, respectively. The samples were analyzed between January and May of 2013. All colonies obtained were isolated and subjected to identification by MALDI - TOF equipment. No results above specification for both points were observed in the analyzed period. From the point of drinking water only three bacterial species were isolated: Bacillus cereus, Acinetobacter sp and Delftia acidorovans. A higher microbial diversity was observed from the purified water source, such as Burkholderia sp, Delftia acidovorans, Stenotrophomonas maltophilia, Bacillus cereus, Pseudomonas putida and Pseudomonas oryzihabitans. The species Delftia acidovorans associated with biocorrosion phenomena was the microorganism most frequently found and was identified in about 1/3 of the total isolates. The water system of Farmaguinhos water is sanitized monthly with sanitizing agent comprising glutaraldehyde. It can be concluded that sanitization is being effective to maintain the total count of mesophilic within the specified limits. However, some actions can be taken to avoid the presence of biofilms, which will improve even more the quality of purified water generated.

A água empregada na produção de doses inseminantes (DIs) de suínos pode ser um dos veículos de introdução de bactérias contaminantes, podendo levar à perda de qualidade das mesmas. O objetivo do presente estudo foi avaliar o número de mesófilos aeróbios totais (MAT) na água utilizada em centrais de inseminação de suínos e sua influência nas contagens bacterianas das DIs produzidas. Foram conduzidos três ciclos de amostragem em seis centrais de inseminação (A-F), intencionalmente incluídas no estudo de acordo com os critérios: estar localizada no sul do Brasil; produzir >1.000 DIs mensais; e concordar em participar do estudo. A cada ciclo, eram colhidas amostras de água antes da purificação, água após a passagem pelo sistema de purificação, água após armazenamento, diluente, sêmen in natura de três machos distintos de fertilidade comprovada; e das respectivas doses inseminantes preparadas com sêmen e diluente amostrados. A água colhida antes do sistema de purificação foi avaliada quanto ao número mais provável (NMP) de coliformes totais e Escherichia coli, em 100 mL. pela técnica dos tubos múltiplos. Todas as amostras colhidas foram avaliadas quanto ao número de mesófilos aeróbios totais (MAT), por meio da semeadura em profundidade em Ágar para Contagem (PCA). Todas as 18 amostras de água colhidas antes da purificação apresentaram <1,1 NMP.100 mL-1 de Escherichia coli. A média de MAT nas amostras de água variou entre 0,1 log UFC.mL-1 na água após-purificação da central E e 3,5 log.UFC.mL-1 na água antes da purificação da central F. Não houve diferença significativa (P>0,05) entre as contagens médias de MAT obtidas em diferentes tipos de amostra de água e entre as centrais de inseminação. A média de MAT nas amostras de diluente variou de 0,16 log UFC. mL-1 à 2,78 log UFC.mL-1. As centrais D e F apresentaram diluentes significativamente (P<0,05) mais contaminados. No sêmen, a média de MAT variou de 1,75 log. UFC.mL-1 à 3,79 log UFC.mL-1 e nas DIs entre 0,73 log.UFC.mL-1 e 2,88 log UFC.mL-1. A central de inseminação F apresentou média de MAT significativamente (P<0,05) maior que as demais centrais. Considerando os padrões existentes, conclui-se que a água captada, purificada e armazenada apresentou boa qualidade microbiológica em todas as centrais de inseminação e não influenciou a média de mesófilos aeróbios totais das DIs preparadas. O incremento de bactérias, quando observado, foi provavelmente resultante da contaminação de origem ambiental durante o preparo do diluente e das doses inseminantes. / The water employed in the production of insemination doses (IDs) of swine may be one of the vehicles for introduction of contaminant bacteria, and can lead to their quality loss. The objective of this study was to assess the number of total aerobic mesophilic (TAM) in water used in swine artificial insemination centers (SAIC) and its influence in the total bacterial counting of the IDs produced. Three cycles of sampling were conducted in six SAIC (A-F) intentionally included in the study according to the following criteria: to be located in the south of Brazil, to produce > 1.000 (IDs) monthly, and to agree in participating of the study. At each cycle, samples were collected from water before the purification, water after passage through the purification system, water after storage, extenders, fresh semen collected from three different boars and the respective (ID) prepared with the semen and extender sampled. The water collected before the purification system was evaluated for total coliforms and Escherichia coli most probable number (NMP) in 100 mL using the multiple tubes technic. All samples collected were evaluated for the number of total aerobic mesophilic (TAM) by the pour plate technic. All the 18 samples of water collected before the purification presented < 1.1 NMP. 100 mL-1 of Escherichia coli. The average of TAM in the water samples varied between 0.1 log.CFU. ml-1 in the water after purification of the central E and 3.5 log. CFU.mL-1 in the water before purification of the central F. There was no significant difference (P>0.05) among the average counting of TAM obtained in different water samples types and among SAICs. The average TAM in samples of diluents varied from 0.16 log.CFU.mL-1 to 2.78 log.CFU.mL-1; the SAICs D and F presented diluents significantly (P< 0.05) more contaminated. Among the semen samples, the TAM average varied from 1.75 log.CFU.mL-1 to 3.79 log CFU.mL-1 and in the DIs between 0.73 log.CFU.mL-1 and 2.88 log.CFU.mL-1. The SAIC F presented average of TAM significantly (P<0.05) higher than the others SAICs. Considering the available standards, it was concluded that water collected, purified and stored presented a good microbiological quality in all insemination centers and did not influence the number of TAM in the prepared IDs. The increase on bacterial population may have resulted from contamination of environmental origin during the preparation of the extender and insemination doses.

A água empregada na produção de doses inseminantes (DIs) de suínos pode ser um dos veículos de introdução de bactérias contaminantes, podendo levar à perda de qualidade das mesmas. O objetivo do presente estudo foi avaliar o número de mesófilos aeróbios totais (MAT) na água utilizada em centrais de inseminação de suínos e sua influência nas contagens bacterianas das DIs produzidas. Foram conduzidos três ciclos de amostragem em seis centrais de inseminação (A-F), intencionalmente incluídas no estudo de acordo com os critérios: estar localizada no sul do Brasil; produzir >1.000 DIs mensais; e concordar em participar do estudo. A cada ciclo, eram colhidas amostras de água antes da purificação, água após a passagem pelo sistema de purificação, água após armazenamento, diluente, sêmen in natura de três machos distintos de fertilidade comprovada; e das respectivas doses inseminantes preparadas com sêmen e diluente amostrados. A água colhida antes do sistema de purificação foi avaliada quanto ao número mais provável (NMP) de coliformes totais e Escherichia coli, em 100 mL. pela técnica dos tubos múltiplos. Todas as amostras colhidas foram avaliadas quanto ao número de mesófilos aeróbios totais (MAT), por meio da semeadura em profundidade em Ágar para Contagem (PCA). Todas as 18 amostras de água colhidas antes da purificação apresentaram <1,1 NMP.100 mL-1 de Escherichia coli. A média de MAT nas amostras de água variou entre 0,1 log UFC.mL-1 na água após-purificação da central E e 3,5 log.UFC.mL-1 na água antes da purificação da central F. Não houve diferença significativa (P>0,05) entre as contagens médias de MAT obtidas em diferentes tipos de amostra de água e entre as centrais de inseminação. A média de MAT nas amostras de diluente variou de 0,16 log UFC. mL-1 à 2,78 log UFC.mL-1. As centrais D e F apresentaram diluentes significativamente (P<0,05) mais contaminados. No sêmen, a média de MAT variou de 1,75 log. UFC.mL-1 à 3,79 log UFC.mL-1 e nas DIs entre 0,73 log.UFC.mL-1 e 2,88 log UFC.mL-1. A central de inseminação F apresentou média de MAT significativamente (P<0,05) maior que as demais centrais. Considerando os padrões existentes, conclui-se que a água captada, purificada e armazenada apresentou boa qualidade microbiológica em todas as centrais de inseminação e não influenciou a média de mesófilos aeróbios totais das DIs preparadas. O incremento de bactérias, quando observado, foi provavelmente resultante da contaminação de origem ambiental durante o preparo do diluente e das doses inseminantes. / The water employed in the production of insemination doses (IDs) of swine may be one of the vehicles for introduction of contaminant bacteria, and can lead to their quality loss. The objective of this study was to assess the number of total aerobic mesophilic (TAM) in water used in swine artificial insemination centers (SAIC) and its influence in the total bacterial counting of the IDs produced. Three cycles of sampling were conducted in six SAIC (A-F) intentionally included in the study according to the following criteria: to be located in the south of Brazil, to produce > 1.000 (IDs) monthly, and to agree in participating of the study. At each cycle, samples were collected from water before the purification, water after passage through the purification system, water after storage, extenders, fresh semen collected from three different boars and the respective (ID) prepared with the semen and extender sampled. The water collected before the purification system was evaluated for total coliforms and Escherichia coli most probable number (NMP) in 100 mL using the multiple tubes technic. All samples collected were evaluated for the number of total aerobic mesophilic (TAM) by the pour plate technic. All the 18 samples of water collected before the purification presented < 1.1 NMP. 100 mL-1 of Escherichia coli. The average of TAM in the water samples varied between 0.1 log.CFU. ml-1 in the water after purification of the central E and 3.5 log. CFU.mL-1 in the water before purification of the central F. There was no significant difference (P>0.05) among the average counting of TAM obtained in different water samples types and among SAICs. The average TAM in samples of diluents varied from 0.16 log.CFU.mL-1 to 2.78 log.CFU.mL-1; the SAICs D and F presented diluents significantly (P< 0.05) more contaminated. Among the semen samples, the TAM average varied from 1.75 log.CFU.mL-1 to 3.79 log CFU.mL-1 and in the DIs between 0.73 log.CFU.mL-1 and 2.88 log.CFU.mL-1. The SAIC F presented average of TAM significantly (P<0.05) higher than the others SAICs. Considering the available standards, it was concluded that water collected, purified and stored presented a good microbiological quality in all insemination centers and did not influence the number of TAM in the prepared IDs. The increase on bacterial population may have resulted from contamination of environmental origin during the preparation of the extender and insemination doses.

A água empregada na produção de doses inseminantes (DIs) de suínos pode ser um dos veículos de introdução de bactérias contaminantes, podendo levar à perda de qualidade das mesmas. O objetivo do presente estudo foi avaliar o número de mesófilos aeróbios totais (MAT) na água utilizada em centrais de inseminação de suínos e sua influência nas contagens bacterianas das DIs produzidas. Foram conduzidos três ciclos de amostragem em seis centrais de inseminação (A-F), intencionalmente incluídas no estudo de acordo com os critérios: estar localizada no sul do Brasil; produzir >1.000 DIs mensais; e concordar em participar do estudo. A cada ciclo, eram colhidas amostras de água antes da purificação, água após a passagem pelo sistema de purificação, água após armazenamento, diluente, sêmen in natura de três machos distintos de fertilidade comprovada; e das respectivas doses inseminantes preparadas com sêmen e diluente amostrados. A água colhida antes do sistema de purificação foi avaliada quanto ao número mais provável (NMP) de coliformes totais e Escherichia coli, em 100 mL. pela técnica dos tubos múltiplos. Todas as amostras colhidas foram avaliadas quanto ao número de mesófilos aeróbios totais (MAT), por meio da semeadura em profundidade em Ágar para Contagem (PCA). Todas as 18 amostras de água colhidas antes da purificação apresentaram <1,1 NMP.100 mL-1 de Escherichia coli. A média de MAT nas amostras de água variou entre 0,1 log UFC.mL-1 na água após-purificação da central E e 3,5 log.UFC.mL-1 na água antes da purificação da central F. Não houve diferença significativa (P>0,05) entre as contagens médias de MAT obtidas em diferentes tipos de amostra de água e entre as centrais de inseminação. A média de MAT nas amostras de diluente variou de 0,16 log UFC. mL-1 à 2,78 log UFC.mL-1. As centrais D e F apresentaram diluentes significativamente (P<0,05) mais contaminados. No sêmen, a média de MAT variou de 1,75 log. UFC.mL-1 à 3,79 log UFC.mL-1 e nas DIs entre 0,73 log.UFC.mL-1 e 2,88 log UFC.mL-1. A central de inseminação F apresentou média de MAT significativamente (P<0,05) maior que as demais centrais. Considerando os padrões existentes, conclui-se que a água captada, purificada e armazenada apresentou boa qualidade microbiológica em todas as centrais de inseminação e não influenciou a média de mesófilos aeróbios totais das DIs preparadas. O incremento de bactérias, quando observado, foi provavelmente resultante da contaminação de origem ambiental durante o preparo do diluente e das doses inseminantes. / The water employed in the production of insemination doses (IDs) of swine may be one of the vehicles for introduction of contaminant bacteria, and can lead to their quality loss. The objective of this study was to assess the number of total aerobic mesophilic (TAM) in water used in swine artificial insemination centers (SAIC) and its influence in the total bacterial counting of the IDs produced. Three cycles of sampling were conducted in six SAIC (A-F) intentionally included in the study according to the following criteria: to be located in the south of Brazil, to produce > 1.000 (IDs) monthly, and to agree in participating of the study. At each cycle, samples were collected from water before the purification, water after passage through the purification system, water after storage, extenders, fresh semen collected from three different boars and the respective (ID) prepared with the semen and extender sampled. The water collected before the purification system was evaluated for total coliforms and Escherichia coli most probable number (NMP) in 100 mL using the multiple tubes technic. All samples collected were evaluated for the number of total aerobic mesophilic (TAM) by the pour plate technic. All the 18 samples of water collected before the purification presented < 1.1 NMP. 100 mL-1 of Escherichia coli. The average of TAM in the water samples varied between 0.1 log.CFU. ml-1 in the water after purification of the central E and 3.5 log. CFU.mL-1 in the water before purification of the central F. There was no significant difference (P>0.05) among the average counting of TAM obtained in different water samples types and among SAICs. The average TAM in samples of diluents varied from 0.16 log.CFU.mL-1 to 2.78 log.CFU.mL-1; the SAICs D and F presented diluents significantly (P< 0.05) more contaminated. Among the semen samples, the TAM average varied from 1.75 log.CFU.mL-1 to 3.79 log CFU.mL-1 and in the DIs between 0.73 log.CFU.mL-1 and 2.88 log.CFU.mL-1. The SAIC F presented average of TAM significantly (P<0.05) higher than the others SAICs. Considering the available standards, it was concluded that water collected, purified and stored presented a good microbiological quality in all insemination centers and did not influence the number of TAM in the prepared IDs. The increase on bacterial population may have resulted from contamination of environmental origin during the preparation of the extender and insemination doses.

Água purificada para uso em ambientes de saúde e preparação industrial de produtos médico-odonto-hospitalar deve ter uma carga reduzida de contaminação microbiológica e pirogênio. As amostras analisadas foram coletadas em 13 (treze) diferentes estágios de um sistema de purificação de água, sendo isoladas 78 colônias. Para a identificação dos microrganismos foram utilizados: (i) identification system for non-enteric gram-negative rods (api 20 NE, bio Mérieux) e (ii) identification system for enteric and nonfermenter (BBL crystal, Becton Dickinson). De acordo com os resultados pode-se observar uma maior prevalência para Pseudomonas aeruginosa 32,05% (25 colônias dentre as 78 isoladas); Pseudomonas picketti 23,08% (18); Pseudomonas vesiculares 12,82% (10); Pseudomonas diminuta 11,54% (09); Flavobacterium aureum 6,42% (05); Pseudomonas fluorescences 5,13% (04); Acinetobacter Iwoffi 2,56% (02); Pseudomonas putida 2,56% (02); Pseudomonas alcaligenes 1,28% (01); Pseudomonas paucimobilis 1,28% (01), Flavobacterium multivorum 1,28% (01). A eficácia dos agentes sanitizantes utilizados para higienização dos diferentes pontos foi determinada pela concentração inibitória mínima (CIM) e tempo de redução decimal (valor D). Como o hipoclorito de sódio é largamente utilizado na higienização do tanque de água de alimentação, tanque de estocagem da água purificada e nas linhas de distribuição aos pontos de uso, este foi testado frente a todos os microrganismos sendo observado menor resistência para Escherichia coli ATCC 25922 (0.06%=600mg/L), quando comparada a P. aeruginosa isolada e identificada (O,25%=2500mg/L). O tempo de redução decimal (Valor D) da Escherichia coli ATCC 25922 foi de 4 minutos e o valor D da P. aeruginosa isolada e identificada e isolada in house foi de 9 minutos. / The samples of water, which were taken directly from the public distribution water tank and at twelve different stages of a typical purification system, were analyzed for the identification of isolated bacteria. The efficacy of the chemical sanitizers used in the stages of the system, over the isolated and identified bacteria in the sampling water, was valuated by the minimum inhibitory concentration (MIC and decimal reduction time (D-values). According to the miniature kits used in the identification, there was a prevalence of isolation by P. aeruginosa 32,05 % , P. picketti (Ralstonia picketti) 23,08%, P. vesiculares 12,82%, P. diminuta 11.54%, F.aureum 6,42%, P.fluorescens 5,13%, A.lowffi 2,56%, P.putida 2,56%, P. alcaligenes 1,28%, P.paucimobilis 1,28%, and F. multivorum 1,28%. The efficacy of the agents varied with the concentration and time of contact to reduce a decimal logarithmic (loglO) population (n cycles): (i) 0.5% citric acid (0= 4 min) for 30 min reduced n=7 cycles; (ii) 0.5% chloridric acid (0= 6 min) for 30 min reduced n= 4 cycles; (iii) 70% alcohol (0= 9 min) for 1.0 min (n=0.2 cycles); (iv) 0.5% sodium bisulphite (0= 6 min) for 90 min (n=14 cycles); (v) 0.4% sodium hydroxide (0= 8 min) for 30 min (n=3.0 cycles); (vi) 0.5% sodium hypochlorite (0=9 min) for 180 min (n = 19 cycles); (vii) mixture of hydrogen peroxide (2,2%) plus peracetic acid (0.45%), 0= 6 min, contact time of 180 min, reduced n = 32 cycles of the population. The sterility assurance level (SAL) of 10-6 was attained for the 0.5% sodium hypochlorite solution applied in the water purified storage tank and distribution loop; and for the mixture of H2O2 plus peracetic acid, used in the reverse osmose and in the deionizator systems.