Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-06-15T16:27:53Z No. of bitstreams: 1 Claudia Ulisses de Carvalho Silva.pdf: 4146224 bytes, checksum: 6784f9f313a424713c8adbf526388205 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T16:27:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Claudia Ulisses de Carvalho Silva.pdf: 4146224 bytes, checksum: 6784f9f313a424713c8adbf526388205 (MD5) Previous issue date: 2005-06-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The aim of this work was to establish protocols for the induction of embryogenic calluses in heliconia species. Two experiments were carried out. The first one had three assays. The first assay consisted of combinations of AIA (indole-3-acetic) (0, 1, 1.5, 2, and 2.5 mg.L-1) with 2,4-D (2,4-dichlorofenoxyacetic acid) (0, 3, 4, and 5 mg.L-1) and the second essay combined BAP (6-benzylamino purine) (0, 1, 1.5, 2, and 2.5 mg.L-1) with 2,4-D (0, 3, 4, and 5 mg.L-1). Sections of ovaries of H. chartacea Lane ex Barreiros cv. Sexy Pink were used in the assays above. The third assay was established from combinations among three levels of AIA (0, 1 and 2 mg.L-1) and five levels of 2,4-D (0, 5, 10, 15, and 20 mg.L-1) within cultivars Sexy Pink and Sexy Scarlet of H.chartacea. The second experiment used explant zygotic embryos of H. bihai cv. (L.) L.Lobster Claw Two in combinations of AIA (0, 1 and 2 mg.L-1) and 2,4-D (0, 5, 10, 15, and 20 mg.L-1). Evaluations in both experiments were carried out on days 30, 60 and 90 after innoculation. Aspects of the callus and the presence of nodules were assessed by visual observations with the help of a stereomicroscope and cytochemical, histologic and scanning electron microscopy analyses were performed. At the end of experiment 1, the index of formation of callus in explants treated with AIA+2,4-D (Assay 1) was greater than that observed with the combinations of BAP+2,4-D (Assay 2). The AIA+2.4-D assay also produced proembryonary cells. In the third assay the Sexy Pink cultivar showed a greater index of formation of callus than the Sexy Scarlet cultivar, but these calluses didn t show somatic embryos at the end of 90 days of cultivation. In the second experiment, formation of somatic proembryos occurred only in zygotic embryos from mature fruit of H. bihai (L.) L. cv. Lobster Claw Two cultivated in the absence of growth regulators. The objective of the second work was to evaluate micropropagation processes for cultivation of zygotic embryos. Initially, an analysis of the internal structure of the embyo was carried out using immature and mature fruits. This was accomplished by embedding the fruits in paraffin and sectioning them with a microtome. Embryos from immature and mature fruits were innoculated in an MS (Murashige and Skoog) environment with different concentrations of salts (full MS and ½ MS), AG3 (0, 2.5 and 5 mg.L-1) and saccharose or glucose (30 g.L-1), and their development was evaluated. Evaluations were carried out 15, 30 and 60 days after innoculation based on visual observations, quantitative parameters, and number of roots. Then, plants were replicated and transferred to an MS environment (full MS or ½ MS), added 0 or 2.5 mg.L-1 BAP, with the objective to evaluate their development after 30 and 45 days after innoculation. The genetic variability of plants from zygotic embryos was estimated using isoenzymatic analyses (PO, EST, ACP, GOT, ADH, and MDH). The internal structure of mature embryos showed tissues in more advanced stages of differentiation than immature embryos, as expected. In the ½ MS environment with saccharose, 85% of the innoculated embryos were converted into plants, just 41% converted into plants in the glucose environment. During the multiplication phase, plants cultivated in an MS environment with a 50% concentration of salts and 2.5 mg.L-1 of BAP showed a greater number of buds. The isoenzymatic analyses showed some changes of isoenzymatic patterns, for example in intensity of coloration and migration of some bands. These results can be associated respectively with the difference of the ages among mother plant and plants obtained in vitro and/or variations in eletrophoretic phenotypes of the plants from in vitro cultivation of zygotic embryos. / Visando estabelecer protocolos para a indução de calos embriogênicos em espécies de helicônia, foram realizados dois experimentos, onde o primeiro constou de três ensaios. O primeiro ensaio consistiu de combinações de AIA (ácido 3-indolilacético) (0; 1; 1,5; 2 e 2,5 mg.L-1) com 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético) (0; 3; 4; e 5 mg.L-1) e o segundo ensaio combinou o BAP (6- benzilaminopurina) (0; 1; 1,5; 2; 2,5 mg.L-1) com 2,4-D (0; 3; 4; e 5 mg.L-1), utilizando em ambos secções de ovários de H. chartacea Lane ex Barreiros cv. Sexy Pink. O terceiro ensaio foi estabelecido a partir de combinações entre três níveis de AIA (0; 1 e 2 mg.L-1) e cinco níveis de 2,4-D (0; 5; 10; 15 e 20 mg.L-1), utilizando como explante, secções de ovários das cultivares Sexy Pink e Sexy Scarlet da espécie H. chartacea. No segundo experimento foi utilizado como explante, embriões zigóticos de H. bihai (L.) L. cv. Lobster Claw Two em combinações de AIA (0; 1 e 2 mg.L-1) e 2,4-D (0; 5; 10; 15 e 20 mg.L-1). As avaliações em ambos experimentos foram realizadas aos 30, 60 e 90 dias após a inoculação, considerando o aspecto dos calos e a presença de nódulos, através de observações visuais com o auxílio de estereomicroscópio, além de análises citoquímica, histológica e de microscopia eletrônica de varredura. No experimento 1 o índice de formação de calos nos explantes tratados com AIA+2,4-D (Ensaio I), foi superior àquele observado com as combinações de BAP+2,4-D (Ensaio II), ao final dos 90 dias de cultivo, onde observou-se a presença de células pró-embriogênicas. No terceiro ensaio a cultivar Sexy Pink apresentou um maior índice de formação de calos do que a cultivar Sexy Scarlet , mas, esses calos não apresentaram a formação de embriões somáticos ao final dos 90 dias de cultivo. No segundo experimento, a formação de pró-embriões somáticos ocorreu apenas nos embriões zigóticos provenientes de frutos maduros de H. bihai (L.) L. cv. Lobster Claw Two cultivados na ausência de reguladores de crescimento. Objetivando avaliar o processo de micropropagação a partir do cultivo de embriões zigóticos, foi realizada inicialmente uma análise da estrutura interna do embrião proveniente de frutos imaturos e maduros. Para isto, foram incluídos em parafina e seccionados em micrótomo. Os embriões provenientes de frutos imaturos e maduros foram inoculados em meio MS (Murashige e Skoog) com diferentes concentrações de sais (MS completo e ½ MS), de GA3 (ácido giberélico) (0; 2,5 e 5,0 mg.L-1), além de sacarose ou glicose (30 g.L-1), para avaliar a conversão do embrião em planta. As avaliações considerando o desenvolvimento da parte aérea e o número de raízes foram realizadas aos 15, 30 e 60 dias após a inoculação, com base em observações visuais e parâmetros quantitativos. Em seguida, as plantas obtidas foram repicadas e transferidas para meio MS (MS completo ou ½ MS), acrescido de 0 ou 2,5 mg.L-1 BAP com o objetivo de avaliar a multiplicação aos 30 e 45 dias após a inoculação. Para avaliar a variabilidade genética das plantas provenientes de embriões zigóticos, utilizou-se sistemas isoenzimáticos (PO, EST, ACP, GOT, ADH e MDH). Avaliando a estrutura interna dos embriões, observou-se que os embriões maduros apresentam tecidos em estádios de diferenciação mais avançados do que os embriões imaturos, como já era esperado. Na fase de conversão dos embriões em plantas, observou-se que 85% dos embriões provenientes de frutos maduros converteram-se em plantas normais em meio MS reduzido à metade da concentração dos sais, utilizando a sacarose como fonte de carboidrato, enquanto que os embriões cultivados em meios com glicose, apenas 41% converteram-se em plantas. Na fase de multiplicação, as plantas cultivadas em meio MS com 50% da concentração dos sais acrescido de 2,5 mg.L-1 de BAP, apresentaram maior número de gemas aos 45 dias de cultivo. Quanto a análise isoenzimática foi observado algumas alterações nos padrões isoenzimáticos no que se refere a intensidade de coloração e a migração de algumas bandas. Esses comportamentos podem estar associados respectivamente, a diferença de idade entre a planta matriz e as plantas obtidas in vitro e/ou alguma variação no fenótipo eletroforético das plantas provenientes do cultivo in vitro de embrião zigótico.