Nürtingen, FH, Diplomarb., 2004. / Betreuer: Gerhard Schwarting.

Tierärztliche Hochsch., Diss., 2005--Hannover.

Thèse d'exercice : Pharmacie : Université de Nantes : 2005. / Bibliogr. f. 111-121 [139 réf.].

Tierärztl. Hochsch., Diss., 2004--Hannover.

München, Universiẗat, Diss., 2007.

Tierärztl. Hochsch., Diss., 2003--Hannover.

Universiẗat, Diss., 2004--München.

L’utilisation intensive des antibiotiques a conduit à l’émergence inquiétante de souches bactériennes multi-résistantes, notamment chez les salmonelles et les colibacilles responsables de maladies infectieuses préoccupantes en santé publique et vétérinaire. Les peptides de défense de l’hôte (HDP) constituent les effecteurs antimicrobiens essentiels de l’immunité innée des animaux. La principale famille d’HDPs chez les oiseaux sont les défensines aviaires, dont deux membres (AvBD2 et AvBD7) isolés de la moelle osseuse du poulet présentent un large spectre antibactérien et constituent ainsi des molécules candidates alternatives aux antibiotiques. Pour démontrer l’intérêt thérapeutique de l’AvBD2 et de l’AvBD7, nous avons (1) prouvé leur efficacité antibactérienne in vitro contre des souches cliniques multirésistantes, (2) montré leur stabilité structurale et fonctionnelle face aux protéases digestives majeures, (3) mis en évidence un nouvel effet antimicrobien dans les macrophages infectés, et finalement (4) prouvé le concept thérapeutique en réduisant la mortalité et la charge bactérienne après injection d’AvBD7 dans un modèle de salmonellose systémique létale chez la souris. / Large-scale use of antibiotics has leaded to the emergence of multi drug resistant bacterial strains, particularly in the genus Salmonella and Escherichia coli responsible for infectious diseases outbreaks. This constitutes a major veterinary and public health concern. Host defense peptides (HDPs) represent major effector molecules of the animal’s innate immune system. In birds, the main family of HDPs is composed of avian defensins whose two members (AvBD2 and AvBD7) isolated from chicken bone marrow exhibit large spectrum antibacterial activity. Thus, they both constitute potential candidate molecules as alternative to antibiotics. To demonstrate the therapeutic interest of AvBD2 and AvBD7, we have (1) proved their antibacterial efficiency in vitro towards clinical and multi drug resistant bacterial strains, (2) shown their functional and structural stability when facing major digestive proteases, (3) identified a novel antibacterial effect in infected macrophages, and finally (4) proved the therapeutic concept by reducing mortality and bacterial load after AvBD7 injection in a murine model of lethal salmonellosis.

Les salmonelles sont l'une des causes les plus importantes de maladie transmise par les produits laitiers crus. L'appréciation du risque associé à la consommation de ces produits est nécessaire et la méthode la plus appropriée pour réaliser ce but est l'utilisation du processus d'analyse de risque qui associe les microbes pathogènes dans l'aliment au problème de santé publique. Le but principal de cette thèse est donc d'évaluer quantitativement le risque de salmonellose humaine lié à la consommation de viande hachée. Les lacunes qui sont en général identifiées pour l'appréciation des risques sont le manque de données quantitatives sur les microbes pathogènes contaminant les aliments. Donc, comme premier objectif de cette thèse, nous avons développée une méthode rapide, sensible et fiable pour la quantification des salmonelles dans les échantillons fécaux bovins artificiellement contaminés. La méthode a combiné les principes de la méthode du nombre-le plus-probable (NPP) avec une analyse PCR en temps réel. Avec cette analyse (NPP-PCR en temps réel) fiable niveau de la contamination (1-5 ufc/mL) du fécal peut être énuméré après 8 h d'enrichissement non-sélectif dans l'eau peptone tamponée. Toutes les valeurs de nombre le plus probable ont bien correspondu au niveau estimé de contamination des salmonelles inoculées dans les échantillons fécaux. Afin d'évaluer l'utilité de cette analyse de quantification, notre deuxième objectif était de l'appliquer aux échantillons fécaux naturellement contaminés recueillis de l'abattoir trouvé dans Meaux, la France chaque semaine en février et le mars de 2006 (une moyenne de 40 échantillons par visite). 9.12 % (27/296) et 34.62 % (9/26) les échantillons fécaux et de l'environnement, respectivement, ont été trouvés positif de salmonella, avec les valeurs de NPP estimées ou les comptes de Salmonella aux limites de <1.8 - 1609 MPN/g d'échantillons fécaux. The moyen de la concentration log10 de Salmonella est 0.6189 MPN/g avec les déviations standrdard de 2.7112 en utilisant l'approche de rétrogradation censurée. Les comptes étaient généralement bas, à l'exception de 6 animaux (> 1400 MPN/g), pendant que tous les autres 21 Salmonella les animaux positifs avait des matières fécales avec moins de 80 MPN/g (d'eux 13 animaux avec les valeurs de MPN <1.8 MPN/g. La prédominance de Salmonella n'a montré aucune différence significative (p=1) entre le français (8.63 %, 17/197) et bétail belge (10 %, 10/99). En outre, aucun la région des animaux d'origine (p=0.75), l'âge (p=0.18), la course (p=0.94), la race (p=0.23), ou le mouvement de l'animal (p=0.89) n'avait aucun impact sur la prédominance de Salmonella. L'application de l'essai de PCR NPP-en-temps-réel pour quantifier la Salmonella dans fécal s'est avérée être rapide, facile à exécuter et extrêmement sensible. Dans l'appréciation de risques potentiels associés à la Salmonella dans la viande hachée il était nécessaire d'examiner la capacité des salmonelles à se développer dans la viande hachée. Donc, nous avons présenté dans cette thèse comme un troisième objectif, le modèle d'une croissance / aucune interface de croissance de Salmonella dans la viande hachée. Des données de croissance / non croissance ont été modelées par la rétrogradation de polynôme logistique sur les données de croissance disponibles pour la Salmonella dans la viande hachée dans les papiers publiés et toutes les données rattachées a la viande hachée dans ComBase nous mènent afin d'à une description exacte des conditions que la Salmonella ne peut la croissance / aucune croissance. Les résultats généraux indiquent clairement que la température est la plus importante et le seul facteur significatif dans l'étude. Il n'y avait aucune croissance observée à la température moins que 10°C. Où comme la température 10°C et 12°C sont la seule température; nous n'avons vraiment observé la croissance / aucune croissance (quelquefois avec les mêmes conditions). Bien que pH et l'activité d'eau soient des facteurs importants pour la croissance microbienne, dans notre étude ils n'ont aucun effet en raison de la structure de viande. Finalement, un modèle d'appréciation du risque de salmonellose humaine liée à la consommation viande haché est présentée qui est basée sur les résultats des objectifs précédemment mentionnés dans cette thèse. Différentes distributions ont été posées en hypothèse pour des paramètres du modèle et une simulation de Monte Carlo a été employée pour modeler le processus et pour mesurer le risque lié à la consommation de la portion de 100 g de bœuf haché. Le pourcentage attendu de portions de bœuf haché avec la contamination plus grande que 5, 10 et 100 cellules de Salmonella était 29 %, 17,1 % et 0,02 %, respectivement au moment de la consommation. Le risque de salmonellose par portion de 100g varie de 0 à 2,33 x 10-6 en fonction au type de cuisson et de la teneur en matière grasse. Pour 10 millions de portions de 100 g, le nombre attendu de cas de salmonellose prévu par le modèle est en moyenne 11, 12 pour les teneurs en matière grasse 7 % et 24. Le risque de salmonellose par portion de 100g varie de 0 à 2,33 x 10-6 en fonction au type de cuisson et de la teneur en matière grasse. Le risque de salmonellose est proche de zéro quand le bœuf haché est consommé bien cuit. Le risque relatif de salmonellose avec le bœuf haché saignant est 312 ou 61 fois plus élevé pour les teneurs 7 % et 24 % en matière grasse par comparaison avec la viande hachée bien cuit. Il y a 35 lots sur 2000 qui provoquent des cas (1,8 %). Quinze d'entre eux causent 2 cas ou plus (0,75 %, 15/2000).

Huit cent trente et un troupeaux de vaches laitières répartis dans 5 états américains ont été enrôlés dans une étude de cohorte prospective. Un modèle d’équations d'estimation généralisées a été utilisé pour étudier l'association entre les signes cliniques et la détection de salmonelles dans les fèces des animaux soupçonnés de salmonellose clinique. La sensibilité et la spécificité de la culture bactériologique ont été estimées à l’aide d’un modèle de classes latentes. Dix-huit pour cent des 874 échantillons provenant de veaux et 29% des 1479 échantillons de vaches adultes étaient positifs pour Salmonella spp. Il n’a pas été possible d’établir une association claire entre les différents signes cliniques observés et la détection de salmonelles. Les 2 sérotypes les plus fréquemment isolés étaient Typhimurium et Newport. La probabilité de détecter des salmonelles était plus élevée chez les veaux où un autre agent entéropathogène était également détecté. La proportion d’échantillons positifs était plus élevée parmi les vaches ayant reçu des antibiotiques dans les jours précédant l’échantillonnage. La sensibilité de la culture a été estimée à 0,48 (intervalle de crédibilité à 95% [ICr95%]: 0,22-0,95) pour les veaux et 0,78 (ICr95%: 0,55-0,99) pour les vaches. La spécificité de la culture était de 0,94 (ICr95%: 0,87-1,00) pour les veaux et de 0,96 (ICr95%: 0,90-1,00) pour les vaches. Malgré une sensibilité imparfaite, la culture bactériologique demeure utile pour obtenir une meilleure estimation de la probabilité post-test de salmonellose clinique chez un bovin laitier, par rapport à la probabilité estimée suite au seul examen clinique. / Eight hundred and thirty-one dairy herds in 5 states in the northeast USA were enrolled in a prospective cohort study. A generalized estimating equations model including herd as a random effect was built to study the association between clinical signs and detection of Salmonella spp. in the faeces of animals suspected of clinical salmonellosis. The sensitivity and specificity of the bacteriological culture were estimated using a latent class model. Eighteen percent of the 874 samples from calves and 29% of the 1479 samples from adult cows were positive for Salmonella spp. It was not possible to establish a clear association between the various clinical signs and detection of Salmonella spp. in the faeces. The two most frequently isolated serotypes were Typhimurium and Newport. The probability of detecting salmonellas was higher for calves when another enteric pathogen was also detected. The proportion of positive samples was higher among cows that received antibiotics in the days preceding the sampling. The sensitivity of the bacteriological culture was estimated at 0.48 (95% credibility interval [95%CrI]: 0.22 to 0.95) for calves and 0.78 (95%CrI 0.55 to 0.99) for cows. The specificity of the culture was 0.94 (95%CrI: 0.87 to 1.00) for calves and 0.96 (95%CrI: 0.90 to 1.00) for cows. Despite imperfect sensitivity, bacterial culture remains useful to obtain a better estimate of the post-test probability of clinical salmonellosis in dairy cattle, compared to the estimated probability following the clinical examination alone.