Espécies silvestres com grande potencial zootécnico devem ser exploradas de forma racional a fim de se evitar a extinção das mesmas. Assim se dá a importância de pesquisas voltadas à reprodução daquelas criadas em cativeiro, como a cutia (Dasyprocta sp.). Este animal é um mamífero e roedor vivente, em sua maioria, na Caatinga brasileira. A ultraestrutura é a base para determinar os estágios celulares e, assim, facilitar as comparações dos processos entre cutias e roedores silvestres ou outros mamíferos. As enzimas P450 aromatase e P450c17 são responsáveis pela regulagem da produção de estrógenos e andrógenos, respectivamente. Considerando a hipótese de que o comportamento de expressão das enzimas do complexo citocromo P540 permanece o mesmo no testículo e na via espermática de cutias durante as fases de desenvolvimento sexual, objetivou-se observar a atuação das enzimas P450 aromatase e P450c17 (17-α-hidroxilase/17,20-liase) nas diferentes fases do desenvolvimento sexual, detalhar a ultraestrutura dos componentes desta via e constatar o desenvolvimento do processo espermatogênico. Segmentos do ducto deferente, epidídimo e testículo de 28 cutias machos em diferentes idades (um dia, 2-14 meses) foram fixados em paraformoldeído e glutaraldeído. O material foi coletado no Centro de Multiplicação da Universidade Federal Rural do Semiárido, Mossoró, RN (Autorização IBAMA nº 2028236/2008). Foram feitos: histologia, seguindo o protocolo padrão para hematoxilina e eosina; processamento para corte semifino (azul de toluidina); microscopia eletrônica de transmissão e varredura; e imunohistoquímica. Este trabalho foi pioneiro ao observar que o epidídimo de cutias é composto por células basais, células principais, células haloides e, quando impúbere, por células \"limpas\", e por células apicais, quando a partir da puberdade. O ducto deferente de cutias antes da puberdade era caracterizado por duas camadas musculares, possivelmente devido à falta de trânsito espermático. No epitélio germinativo foram encontradas, em sua maioria, células em prófase I, principalmente em paquíteno. A espermiogênese é completa quando na pré-puberdade, entretanto, a espermiação ocorre a partir dos 9 meses de idade. A expressão da enzima P450 aromatase variou ao longo do desenvolvimento sexual, sendo na puberdade seu pico de atividade. A P450c17 não mostrou nenhuma ação em qualquer fase sexual. Pode-se concluir que o epitélio germinativo testicular e intersticial, bem como o epitélio pseudoestratificado estereociliado do epidídimo e do ducto deferente de cutias criadas em cativeiro sofrem mudanças morfológicas e funcionais ao longo do desenvolvimento sexual. As atividades androgênicas preponderantes em cutias criadas em cativeiro ocorrem no período da puberdade. / Wild species with great potential livestock should be explored rationally in order to prevent the extinction of the same. Thus is the importance of research aimed at reproducing those bred in captivity, such as agouti (Dasyprocta sp.). This animal is a mammal and rodent living mostly in the Brazilian Caatinga. The ultrastructure is the basis for determining the stages and thus facilitates comparisons of cases between agouti and wild rodents or other mammals. The enzymes P450 aromatase and P450c17 are responsible for regulating the production of estrogens and androgens, respectively. On the assumption that the behavior of expression of the enzymes of complex cytochrome P540 remains the same in the testis and excurrent canals of the agouti during the stages of sexual development, aimed to observe the activity of the enzymes P450 aromatase and P450c17 (17-α- hidroxilase/17,20-lyase) in different stages of sexual development, detail the ultrastructure of the components of this pathway and observe the development of spermatogenesis. Segments of the vas deferens, epididymis and testis of 28 agouti males at different ages (1 day, 2-14 months) were fixed in glutaraldehyde and paraformoldehyde. The material was collected on Center of Multiplication of Federal Rural University of the Semi-arid, Natal, RN (IBAMA Authorization No. 2028236/2008). Were made: histology following the standard protocol for hematoxylin and eosin; processing to semithin (blue toluidine), electron microscopy of transmission and scanning; and immunohistochemistry. This work was pioneered by observing that the epididymis is composed by basal cells, principal cells, haloids cells; and for clean cells when impubertal and apical cells after puberty in agoutis. The vas deferens before puberty was characterized by two muscle layers, possibly due to the lack of sperm transit. In the germinal epithelium were found mostly cells in prophase I, mainly in pachytene. Spermiogenesis is complete when prepubertal phase; however, spermiation takes place from 9 months of age. The expression of enzymes of the cytochrome complex varied over sexual development and peak activity of P450 aromatase was at puberty. The P450c17 showed no action at any stage of sexual development. It can be concluded that the testicular germinal epithelium and interstitial epithelium as well as the pseudostratified estereociliated epithelium of the epididymis and vas deferens undergo morphological and functional changes during the sexual development. Androgenic activities prevalent in agoutis kept in captivity occur during puberty.

O preá (Galea spixii),é um roedor da família Caviidae que vive na Caatinga do Nordeste brasileiro e vêm sendo criados em cativeiro, para sua utilização como fonte alternativa de alimento, preservação da espécie e utilização como modelo biológico em pesquisas. Poucos trabalhos são focados no estudo detalhado da morfologia dos diferentes tipos celulares e expressão enzimática em cada uma das zonas do córtex adrenal, sobretudo em espécies de mamíferos silvestres. As glândulas adrenais fetais de 20 dias de gestação apresentaram córtex indiferenciado. O início de formação da zona fasciculada foi observado nos fetos de 25 dias de gestação e a zona reticulada surgiu nos fetos aos 40 dias de gestação. As zonas descritas anteriormente persistiram nos fetos aos 50 dias de gestação, nos animais de 15 e 30 dias pós-natais e nos animais púberes. A expressão das enzimas citocromo P450c17 e da citocromo b5 nas zonas glomerular, fasciculada e reticulada de embriões e fetos de preás não estão somente relacionadas à produção, respectivamente, de mineralocorticoides, glicocorticoides e esteroides sexuais, pois a citocromo b5 é responsável pela diferenciação cortical em diferentes fases de desenvolvimento da adrenal e a imunoexpressão da citocromo P450c17 na fase final da gestação estão relacionadas com o processo de maturação da glândula adrenal e podem estar relacionadas coma síntese de esteroides sexuais devido a proximidade da puberdade. A imunomarcação da enzima citocromo b5 nas células cromafins das medulas das adrenais de 50 dias de gestação e adulta, podem estar relacionadas à síntese de adrenalina e noradrenalina devido a fatores de estresse. O aumento da duração da gestação para 50 dias ou mais, pode estar relacionado com deficiências na síntese de cortisol/corticosterona pelas enzimas esteroidogênicas / The Spixs yellow-toothed cavy (Galea spixii), is a Caviidae family rodent living in the Brazilian Northeast Caatinga and have been bred in captivity for use as an alternative food source, species preservation and use as animal model research. Few studies are focused on a detailed study of the morphology and ultrastructure of different cell types and expression of enzyme in each of the zones of the adrenal cortex, particularly in wild mammalian species. The fetal adrenal glands 20 days of gestation showed undifferentiated cortex. The early formation of the zona fasciculata was observed in fetuses of 25 days of pregnancy and the reticulated area emerged in fetuses at 40 days of gestation. The areas described above persisted in fetuses at 50 days of gestation, animals at 15 and 30 postnatal days and pubertal animals. The expression of P450c17 enzyme cytochrome b5 and cytochrome in glomerular areas fasciculata and guinea pigs crosslinked embryos and fetuses are not only related to production, respectively, mineralocorticoids and glucocorticoids, sex steroids, as the cytochrome b5 is responsible for cortical differentiation different stages of development and adrenal cytochrome P450c17 immunoreactivity of the final stage of pregnancy are associated with the adrenal gland maturation process and may be associated with the synthesis of sex steroids due to the proximity of puberty. The immunostaining of the enzyme cytochrome b5 in the chromaffin cells of the adrenal marrow 50 days of gestation and adult, may be related to the synthesis of adrenaline and noradrenaline due to stress factors. The increased length of gestation for 50 days or more, may be related to impaired cortisol synthesis / corticosterone by steroidogenic enzymes

A gonadotrofina coriônica equina (eCG) tem sido utilizada em programas de sincronização para inseminação artificial em tempo fixo e normalmente promove o aumento do volume do corpo lúteo e a da produção de progesterona. Além disso, esta mesma gonadotrofina pode ser utilizada para superovulação. Desse modo, hipóteses relativas aos mecanismos pelos quais gonadotrofinas exógenas alteram as funções celulares nos corpos lúteos resultantes foram formuladas. Para testar tais hipóteses, 18 vacas (Bos indicus) foram divididas em grupos: controle (n=5), estimulado (n=6) e superovulado (n=7) e a ovulação das mesmas foi sincronizada usando um protocolo já estabelecido com dispositivo de progesterona. Os animais estimulados receberam 400 UI de eCG no dia de remoção do dispositivo de progesterona e os animais superovulados 4 dias antes. No dia 7 após injeção de GnRh, os animais foram abatidos para a coleta de CLL e sangue. Análises de peso e volume de CL, concentração de progesterona (P4), bem como da expressão gênica e proteica de fatores angiogênicos e de proteínas esteroidogênicas foram realizadas. Além disso, o transcriptoma foi analisado por microarranjo. Foi observado que o volume do CL foi maior nos animais do grupo estimulado (1177,37 ± 167,07 mm3) e ainda maior nos do superovulado (1495,18 ± 137,01 mm3) quando comparados ao grupo controle (830,33 ± 234,99 mm3; p = 0,03). A concentração média de progesterona por CL nos animais do grupo estimulado foi maior que nos animais do grupo controle (5,95 ± 0,17 vs 3,69 ± 0,72 ng/ml; p = 0,03) e que nos superovulados (4,11 ± 0.73; p = 0,01). Além disso, os tratamentos com eCG aumentaram a expressão do FGFR2 e também da STAR nos animais estimulados e superovulados (p < 0,05). Quanto aos resultados do microarranjo, no total 242 transcritos foram aumentados e 111 foram diminuídos nos animais estimulados e 111 foram aumentados e 113 diminuídos nos animais superovulados em relação aos animais controle (~1,5 vezes, p 0.05). Entre os genes diferencialmente expressos, muitos estavam envolvidos na síntese de lipídios e na produção de progesterona, tais como: PPARG, HMGCR, STAR, receptores de prolactina e folistatina. Estes achados demonstraram que os tratamentos com eCG modularam a expressão gênica diferencialmente, dependendo do tratamento, e que nossos dados contribuem para entender as vias relacionadas ao aumento do volume do CL e da produção de progesterona observada após os tratamentos. Em um segundo experimento, foi realizado análises da influência do FSH na expressão de VEGF no cultivo de células da granulosa. Neste experimento foi possível observar que o FSH aumentou a expressão gênica e proteica do VEGF, colaborando com a ideia de que as gonadotrofinas têm propriedades angiogênicas. / Equine chorionic gonadotropin (eCG) has been widely used in synchronization protocol to artificial insemination program and usually promote corpus luteum (CL) volume increases and stimulates progesterone production. Furthermore the same gonadotropin can be used to superovulation protocols. Thus, hypotheses concerning the mechanisms by which exogenous gonadotropins alter cellular functions in resulting corpora lutea were formulated. To test that hypothesis, 18 (Bos indicus) cows were divided into control (n=5), stimulated (n=6) and superovulated groups (n=7). Ovulation was synchronized using a progesterone device-based protocol. Stimulated animals received 400 IU of eCG of device removal and superovulated animals received 2000 IU of eCG 4 days prior. Corpora lutea (CLL) and blood samples were collected seven days after GnRH administration. Analyses of CL weight and volume, progesterone (P4) concentration, as well as the gene and protein expression of angiogenic and steroidogenic proteins were performed. Furthermore, the transcriptome was evaluated by microarray. The CL volume was higher in superovulated (1495.18 ± 137.01) than in stimulated (1177.37 ± 167.07) cows and higher in stimulated than in the control (830.33 ± 234.99) cows, and the P4 concentration per CL was higher in stimulated (5.95 ± 0.17 ng/ml) animals than in the control (3.69 ± 0.72 ng/ml) and superovulated (4.11 ± 0.73 ng/ml; P = 0.01) animals. Overall, 242 transcripts were up-regulated and 111 transcripts were downregulated in stimulated cows (P 0.05) and 111 were up-regulated and 113 down-regulated in superovulated cows in relation to the control (1.5 fold, P 0.05). Among the differentially expressed genes, many were involved in lipid biosynthesis and progesterone production, as PPARG, HMGCR, STAR, prolactin receptors and follistatin. In conclusion, eCG modulates gene expression differently depending on the treatment. Our data contribute to the understanding of the pathways involved in increased CL volume and progesterone levels observed after eCG treatment. In a second experiment, analyzes were performed about the influence of FSH on the expression of VEGF in the culture of granulosa cells. In this experiment it was observed that FSH increases the expression of the VEGF gene and protein, these finding collaborate with the idea that gonadotrophins have angiogenic properties.

Phthalate esters (phthalates) such as dibutylphthalate (DBP) are commonly used as plasticisers and pesticides in a variety of products such as children‟s plastic toys, food packaging, cosmetics, medical equipment (including surgical equipment), and acaricides. Because of their widespread use phthalates are ubiquitous environmental contaminants that humans are commonly exposed to. Phthalates are known endocrine-disrupting chemicals (EDCs) that are well known to cause male reproductive defects such as cryptorchidism (failed descent of the testes) and hypospadias (malformations in the urethra) in a range of different species if they are exposed in utero. They do this by reducing testosterone production in Leydig cells, which are the primary site of testosterone biosynthesis in the male. Because phthalates are dose-additive they are considered to share the same mechanism of toxicity. However, the details of phthalates mechanism of toxicity are not fully understood. The aim of this research was to investigate the effects of DBP on the steroidogenesis pathway using the cultured rat Leydig cell cancer line R2C as a Leydig cell model. R2C cells were exposed to a range of DBP concentrations (10 μg/mL, 5 μg/mL, 1 μg/mL, and 0.1 μg/mL) and their steroid hormone production was analysed using reverse phase HPLC. R2C cells did not synthesise testosterone at detectable levels. However, DBP exposure stimulated cortisol biosynthesis at all concentrations but caused no change in progesterone biosynthesis. This cortisol stimulation in Leydig cells has not been observed before. Because cortisol and testosterone compete for precursors an increase in cortisol synthesis could starve testosterone synthesis of precursors. On top of this it has been shown that glucocorticoids including cortisol have an adverse effect on Leydig cell development reducing steroid production and even causing apoptosis. This could explain how DBP and other phthalates can cause male developmental defects such as cryptorchidism and hypospadias.

Follicular growth and maturation are tightly regulated processes, which involve the participation of endocrine, autocrineparacrine factors and intracellular molecules. Due to the numerous research efforts, a large number of regulators and their mechanisms of regulation of follicular growth and differentiation have been established. Although the abnormal expression and activities of some of these regulators are believed to be associated with ovarian dysfunction diseases, such as polycystic ovarian syndrome (PCOS), the etiology and pathogenesis of this syndrome are not completely understood. In this thesis, we have identified two novel regulators of follicular growth and differentiation and examined the cellular and molecular mechanisms that contribute to the folliculogenesis. We present here that chemerin reduces FSH-induced steroidogenic enzyme expression and steroid hormone production in follicles and granulosa cells. Prohibitin expression is upregulated by chemerin and knockdown of prohibitin attenuates the suppressive role of chemerin on steroidogenesis, an action regulated by Akt. Using an androgenized rodent model, we also present the dysregulation of chemerin and prohibitin and their association with dysregulated follicular steroidogenesis. Our data and preliminary clinical studies demonstrate the potential involvement of chemerin and prohibitin in the etiology of PCOS. These studies significantly improve the knowledge of ovarian functions and the pathophysiology of PCOS, and provide important clues for the development of novel diagnosis biomarkers and new treatment strategies for this complex syndrome.

O preá (Galea spixii),é um roedor da família Caviidae que vive na Caatinga do Nordeste brasileiro e vêm sendo criados em cativeiro, para sua utilização como fonte alternativa de alimento, preservação da espécie e utilização como modelo biológico em pesquisas. Poucos trabalhos são focados no estudo detalhado da morfologia dos diferentes tipos celulares e expressão enzimática em cada uma das zonas do córtex adrenal, sobretudo em espécies de mamíferos silvestres. As glândulas adrenais fetais de 20 dias de gestação apresentaram córtex indiferenciado. O início de formação da zona fasciculada foi observado nos fetos de 25 dias de gestação e a zona reticulada surgiu nos fetos aos 40 dias de gestação. As zonas descritas anteriormente persistiram nos fetos aos 50 dias de gestação, nos animais de 15 e 30 dias pós-natais e nos animais púberes. A expressão das enzimas citocromo P450c17 e da citocromo b5 nas zonas glomerular, fasciculada e reticulada de embriões e fetos de preás não estão somente relacionadas à produção, respectivamente, de mineralocorticoides, glicocorticoides e esteroides sexuais, pois a citocromo b5 é responsável pela diferenciação cortical em diferentes fases de desenvolvimento da adrenal e a imunoexpressão da citocromo P450c17 na fase final da gestação estão relacionadas com o processo de maturação da glândula adrenal e podem estar relacionadas coma síntese de esteroides sexuais devido a proximidade da puberdade. A imunomarcação da enzima citocromo b5 nas células cromafins das medulas das adrenais de 50 dias de gestação e adulta, podem estar relacionadas à síntese de adrenalina e noradrenalina devido a fatores de estresse. O aumento da duração da gestação para 50 dias ou mais, pode estar relacionado com deficiências na síntese de cortisol/corticosterona pelas enzimas esteroidogênicas / The Spixs yellow-toothed cavy (Galea spixii), is a Caviidae family rodent living in the Brazilian Northeast Caatinga and have been bred in captivity for use as an alternative food source, species preservation and use as animal model research. Few studies are focused on a detailed study of the morphology and ultrastructure of different cell types and expression of enzyme in each of the zones of the adrenal cortex, particularly in wild mammalian species. The fetal adrenal glands 20 days of gestation showed undifferentiated cortex. The early formation of the zona fasciculata was observed in fetuses of 25 days of pregnancy and the reticulated area emerged in fetuses at 40 days of gestation. The areas described above persisted in fetuses at 50 days of gestation, animals at 15 and 30 postnatal days and pubertal animals. The expression of P450c17 enzyme cytochrome b5 and cytochrome in glomerular areas fasciculata and guinea pigs crosslinked embryos and fetuses are not only related to production, respectively, mineralocorticoids and glucocorticoids, sex steroids, as the cytochrome b5 is responsible for cortical differentiation different stages of development and adrenal cytochrome P450c17 immunoreactivity of the final stage of pregnancy are associated with the adrenal gland maturation process and may be associated with the synthesis of sex steroids due to the proximity of puberty. The immunostaining of the enzyme cytochrome b5 in the chromaffin cells of the adrenal marrow 50 days of gestation and adult, may be related to the synthesis of adrenaline and noradrenaline due to stress factors. The increased length of gestation for 50 days or more, may be related to impaired cortisol synthesis / corticosterone by steroidogenic enzymes

Espécies silvestres com grande potencial zootécnico devem ser exploradas de forma racional a fim de se evitar a extinção das mesmas. Assim se dá a importância de pesquisas voltadas à reprodução daquelas criadas em cativeiro, como a cutia (Dasyprocta sp.). Este animal é um mamífero e roedor vivente, em sua maioria, na Caatinga brasileira. A ultraestrutura é a base para determinar os estágios celulares e, assim, facilitar as comparações dos processos entre cutias e roedores silvestres ou outros mamíferos. As enzimas P450 aromatase e P450c17 são responsáveis pela regulagem da produção de estrógenos e andrógenos, respectivamente. Considerando a hipótese de que o comportamento de expressão das enzimas do complexo citocromo P540 permanece o mesmo no testículo e na via espermática de cutias durante as fases de desenvolvimento sexual, objetivou-se observar a atuação das enzimas P450 aromatase e P450c17 (17-&#945;-hidroxilase/17,20-liase) nas diferentes fases do desenvolvimento sexual, detalhar a ultraestrutura dos componentes desta via e constatar o desenvolvimento do processo espermatogênico. Segmentos do ducto deferente, epidídimo e testículo de 28 cutias machos em diferentes idades (um dia, 2-14 meses) foram fixados em paraformoldeído e glutaraldeído. O material foi coletado no Centro de Multiplicação da Universidade Federal Rural do Semiárido, Mossoró, RN (Autorização IBAMA nº 2028236/2008). Foram feitos: histologia, seguindo o protocolo padrão para hematoxilina e eosina; processamento para corte semifino (azul de toluidina); microscopia eletrônica de transmissão e varredura; e imunohistoquímica. Este trabalho foi pioneiro ao observar que o epidídimo de cutias é composto por células basais, células principais, células haloides e, quando impúbere, por células \"limpas\", e por células apicais, quando a partir da puberdade. O ducto deferente de cutias antes da puberdade era caracterizado por duas camadas musculares, possivelmente devido à falta de trânsito espermático. No epitélio germinativo foram encontradas, em sua maioria, células em prófase I, principalmente em paquíteno. A espermiogênese é completa quando na pré-puberdade, entretanto, a espermiação ocorre a partir dos 9 meses de idade. A expressão da enzima P450 aromatase variou ao longo do desenvolvimento sexual, sendo na puberdade seu pico de atividade. A P450c17 não mostrou nenhuma ação em qualquer fase sexual. Pode-se concluir que o epitélio germinativo testicular e intersticial, bem como o epitélio pseudoestratificado estereociliado do epidídimo e do ducto deferente de cutias criadas em cativeiro sofrem mudanças morfológicas e funcionais ao longo do desenvolvimento sexual. As atividades androgênicas preponderantes em cutias criadas em cativeiro ocorrem no período da puberdade. / Wild species with great potential livestock should be explored rationally in order to prevent the extinction of the same. Thus is the importance of research aimed at reproducing those bred in captivity, such as agouti (Dasyprocta sp.). This animal is a mammal and rodent living mostly in the Brazilian Caatinga. The ultrastructure is the basis for determining the stages and thus facilitates comparisons of cases between agouti and wild rodents or other mammals. The enzymes P450 aromatase and P450c17 are responsible for regulating the production of estrogens and androgens, respectively. On the assumption that the behavior of expression of the enzymes of complex cytochrome P540 remains the same in the testis and excurrent canals of the agouti during the stages of sexual development, aimed to observe the activity of the enzymes P450 aromatase and P450c17 (17-&#945;- hidroxilase/17,20-lyase) in different stages of sexual development, detail the ultrastructure of the components of this pathway and observe the development of spermatogenesis. Segments of the vas deferens, epididymis and testis of 28 agouti males at different ages (1 day, 2-14 months) were fixed in glutaraldehyde and paraformoldehyde. The material was collected on Center of Multiplication of Federal Rural University of the Semi-arid, Natal, RN (IBAMA Authorization No. 2028236/2008). Were made: histology following the standard protocol for hematoxylin and eosin; processing to semithin (blue toluidine), electron microscopy of transmission and scanning; and immunohistochemistry. This work was pioneered by observing that the epididymis is composed by basal cells, principal cells, haloids cells; and for clean cells when impubertal and apical cells after puberty in agoutis. The vas deferens before puberty was characterized by two muscle layers, possibly due to the lack of sperm transit. In the germinal epithelium were found mostly cells in prophase I, mainly in pachytene. Spermiogenesis is complete when prepubertal phase; however, spermiation takes place from 9 months of age. The expression of enzymes of the cytochrome complex varied over sexual development and peak activity of P450 aromatase was at puberty. The P450c17 showed no action at any stage of sexual development. It can be concluded that the testicular germinal epithelium and interstitial epithelium as well as the pseudostratified estereociliated epithelium of the epididymis and vas deferens undergo morphological and functional changes during the sexual development. Androgenic activities prevalent in agoutis kept in captivity occur during puberty.

A gonadotrofina coriônica equina (eCG) tem sido utilizada em programas de sincronização para inseminação artificial em tempo fixo e normalmente promove o aumento do volume do corpo lúteo e a da produção de progesterona. Além disso, esta mesma gonadotrofina pode ser utilizada para superovulação. Desse modo, hipóteses relativas aos mecanismos pelos quais gonadotrofinas exógenas alteram as funções celulares nos corpos lúteos resultantes foram formuladas. Para testar tais hipóteses, 18 vacas (Bos indicus) foram divididas em grupos: controle (n=5), estimulado (n=6) e superovulado (n=7) e a ovulação das mesmas foi sincronizada usando um protocolo já estabelecido com dispositivo de progesterona. Os animais estimulados receberam 400 UI de eCG no dia de remoção do dispositivo de progesterona e os animais superovulados 4 dias antes. No dia 7 após injeção de GnRh, os animais foram abatidos para a coleta de CLL e sangue. Análises de peso e volume de CL, concentração de progesterona (P4), bem como da expressão gênica e proteica de fatores angiogênicos e de proteínas esteroidogênicas foram realizadas. Além disso, o transcriptoma foi analisado por microarranjo. Foi observado que o volume do CL foi maior nos animais do grupo estimulado (1177,37 ± 167,07 mm3) e ainda maior nos do superovulado (1495,18 ± 137,01 mm3) quando comparados ao grupo controle (830,33 ± 234,99 mm3; p = 0,03). A concentração média de progesterona por CL nos animais do grupo estimulado foi maior que nos animais do grupo controle (5,95 ± 0,17 vs 3,69 ± 0,72 ng/ml; p = 0,03) e que nos superovulados (4,11 ± 0.73; p = 0,01). Além disso, os tratamentos com eCG aumentaram a expressão do FGFR2 e também da STAR nos animais estimulados e superovulados (p < 0,05). Quanto aos resultados do microarranjo, no total 242 transcritos foram aumentados e 111 foram diminuídos nos animais estimulados e 111 foram aumentados e 113 diminuídos nos animais superovulados em relação aos animais controle (~1,5 vezes, p 0.05). Entre os genes diferencialmente expressos, muitos estavam envolvidos na síntese de lipídios e na produção de progesterona, tais como: PPARG, HMGCR, STAR, receptores de prolactina e folistatina. Estes achados demonstraram que os tratamentos com eCG modularam a expressão gênica diferencialmente, dependendo do tratamento, e que nossos dados contribuem para entender as vias relacionadas ao aumento do volume do CL e da produção de progesterona observada após os tratamentos. Em um segundo experimento, foi realizado análises da influência do FSH na expressão de VEGF no cultivo de células da granulosa. Neste experimento foi possível observar que o FSH aumentou a expressão gênica e proteica do VEGF, colaborando com a ideia de que as gonadotrofinas têm propriedades angiogênicas. / Equine chorionic gonadotropin (eCG) has been widely used in synchronization protocol to artificial insemination program and usually promote corpus luteum (CL) volume increases and stimulates progesterone production. Furthermore the same gonadotropin can be used to superovulation protocols. Thus, hypotheses concerning the mechanisms by which exogenous gonadotropins alter cellular functions in resulting corpora lutea were formulated. To test that hypothesis, 18 (Bos indicus) cows were divided into control (n=5), stimulated (n=6) and superovulated groups (n=7). Ovulation was synchronized using a progesterone device-based protocol. Stimulated animals received 400 IU of eCG of device removal and superovulated animals received 2000 IU of eCG 4 days prior. Corpora lutea (CLL) and blood samples were collected seven days after GnRH administration. Analyses of CL weight and volume, progesterone (P4) concentration, as well as the gene and protein expression of angiogenic and steroidogenic proteins were performed. Furthermore, the transcriptome was evaluated by microarray. The CL volume was higher in superovulated (1495.18 ± 137.01) than in stimulated (1177.37 ± 167.07) cows and higher in stimulated than in the control (830.33 ± 234.99) cows, and the P4 concentration per CL was higher in stimulated (5.95 ± 0.17 ng/ml) animals than in the control (3.69 ± 0.72 ng/ml) and superovulated (4.11 ± 0.73 ng/ml; P = 0.01) animals. Overall, 242 transcripts were up-regulated and 111 transcripts were downregulated in stimulated cows (P 0.05) and 111 were up-regulated and 113 down-regulated in superovulated cows in relation to the control (1.5 fold, P 0.05). Among the differentially expressed genes, many were involved in lipid biosynthesis and progesterone production, as PPARG, HMGCR, STAR, prolactin receptors and follistatin. In conclusion, eCG modulates gene expression differently depending on the treatment. Our data contribute to the understanding of the pathways involved in increased CL volume and progesterone levels observed after eCG treatment. In a second experiment, analyzes were performed about the influence of FSH on the expression of VEGF in the culture of granulosa cells. In this experiment it was observed that FSH increases the expression of the VEGF gene and protein, these finding collaborate with the idea that gonadotrophins have angiogenic properties.

Follicular growth and maturation are tightly regulated processes, which involve the participation of endocrine, autocrineparacrine factors and intracellular molecules. Due to the numerous research efforts, a large number of regulators and their mechanisms of regulation of follicular growth and differentiation have been established. Although the abnormal expression and activities of some of these regulators are believed to be associated with ovarian dysfunction diseases, such as polycystic ovarian syndrome (PCOS), the etiology and pathogenesis of this syndrome are not completely understood. In this thesis, we have identified two novel regulators of follicular growth and differentiation and examined the cellular and molecular mechanisms that contribute to the folliculogenesis. We present here that chemerin reduces FSH-induced steroidogenic enzyme expression and steroid hormone production in follicles and granulosa cells. Prohibitin expression is upregulated by chemerin and knockdown of prohibitin attenuates the suppressive role of chemerin on steroidogenesis, an action regulated by Akt. Using an androgenized rodent model, we also present the dysregulation of chemerin and prohibitin and their association with dysregulated follicular steroidogenesis. Our data and preliminary clinical studies demonstrate the potential involvement of chemerin and prohibitin in the etiology of PCOS. These studies significantly improve the knowledge of ovarian functions and the pathophysiology of PCOS, and provide important clues for the development of novel diagnosis biomarkers and new treatment strategies for this complex syndrome.

Philosophiae Doctor - PhD / The testes play a central role in the male reproductive system, as they represent the sites of male sex steroidogenesis and of spermatogenesis. Leydig cells, located at the testicular interstitium, produce predominantly testosterone upon stimulation with either chorionic gonadotropin (CG) or luteinising hormone by a series of enzymatic modifications of cholesterol. Sertoli cells respond to testosterone and follicle stimulating hormone to secrete inhibin and facilitate spermatogenesis by additional activities like maintaining Sertoli cell barrier (SCB) integrity and lactate secretion. Ultimately the Leydig cells, Sertoli cells etc. all work together to confer male fertility. However, infertility occurs globally; leading to the pursuit of treatment, including herbal medicines.