Le développement de principe actif à partir de ressources naturelles pourrait être un moyen pour développer de nouvelles alternatives aux antibiotiques. L’huile essentielle d’arbre à thé est reconnue pour ses nombreuses propriétés et son activité antimicrobienne à spectre large, mais aussi pour sa toxicité et sa forte teneur en allergènes liée à sa composition en monoterpènes. Dans cette étude, nous cherchons de nouveaux principes actifs naturels issus de l’huile essentielle d’arbre à thé, qui auraient une activité antimicrobienne équivalente mais une toxicité et un pouvoir allergène réduit. Deux principes actifs ont ainsi été étudiés au cours de ce travail. Le Titroléane™, qui est une fraction de l’huile essentielle d’arbre à thé enrichi en monoterpène alcools mais avec un très faible taux de monoterpène, a montré des activités microbiologiques similaires à l’huile essentielle d’arbre à thé. La Synterpicine™ quant à elle, est uniquement composée des deux molécules majoritaires de l’huile essentielle, et présente une cytotoxicité réduite. La caractérisation de l’activité des principes actifs a été menée avec différentes méthodes d’études in vitro, pour définir leur activité inhibitrice et bactéricide, sur des bactéries planctoniques et en biofilm. Enfin, la recherche de nouvelles molécules actives au sein des principes actifs, s’est poursuivie à l’aide d’une méthode de chromatographie sur couche mince haute performance, couplée à une étude d’activité microbiologique par bioautographie. Cette étude a mis en évidence l’activité antimicrobienne de deux nouveaux principes actifs d’origine naturelle, pouvant être valorisés sur différents marchés notamment la santé humaine / The development of a natural bioactive compounds could be a mean of developing new alternatives to antibiotics. Tea tree essential oil is known for its numerous properties and its broad-spectrum antimicrobial activity, but also for its toxicity and its high content in allergens due to its composition in monoterpenes. In this study, we search for new natural compounds extracted from tea tree essential oil, which has equivalent antimicrobial activity but less toxicity and a reduced allergenic activity. Two bioactive compounds have been thus studied. Titroléane™ - a fraction of tea tree essential oil enriched in monoterpene alcohols but with a very low rate of monoterpenes - has shown microbiological activities similar to tea tree essential oil. As for Synterpicine™, it is only composed of the two main molecules of the essential oil, and presents a reduced cytotoxicity. The characterization of the compounds’ efficacy was carried out with different in vitro study methods, to define their inhibitory and bactericide activity, on planktonic and biofilm bacteria. Finally, the research of new active molecules within the active compounds, was pursued thanks to a high performance thin layer chromatography, paired up with a microbiological study by bioautography. This study has highlighted the antimicrobial activity of two new natural active extracts which can be valorised on different markets- especially human health