A manutenção de altas taxas de morbimortalidade devidas ao câncer cervical está relacionada à dificuldade dos programas de rastreio em “alcançar” todas as portadoras de lesões cervicais precursoras. A necessidade de organização do sistema de saúde, evitando o rastreio oportunístico e a necessária exposição do genital, vêm sendo apontadas como limitadores para o rastreio. O objetivo desta Tese foi testar a performance do dispositivo de Fournier® para o diagnóstico citológico das lesões cervicais precursoras ou neoplásicas a partir da coleta às cegas do fundo vaginal, realizada pelo examinador, e utilizando, como padrão-ouro, a colposcopia com biópsia cervical. Além disto, comparar os resultados das citologias obtidas com o dispositivo proposto em relação àquelas obtidas de forma tradicional, com o exame especular. Para tanto, foi desenvolvido estudo de casos e controles ambientado em ambulatório de Patologia Cervical no período de janeiro de 2008 a outubro de 2009. Lâminas de citologia de meio líquido, obtidas com o dispositivo proposto e coradas com a técnica de Papanicolaou e pela imunocitoquímica com anti-p16ink4a foram lidas por dois patologistas cegados quanto aos diagnósticos histológicos e colposcópicos. A sensibilidade para o diagnóstico de lesões intraepiteliais de baixo grau, a partir da técnica de Papanicolaou e com o dispositivo de Fournier®, variou entre 41,1% e 55,9% e, quando avaliados casos de lesões de alto grau e câncer cervical, a sensibilidade atingiu 68,7% e 75,0%. Com a utilização da imunocitoquímica com anti-p16ink4a a sensibilidade para o diagnóstico das lesões intraepiteliais de baixo grau, atingiu valores de 57,1% e 48,8% e, entre os casos de lesão de alto grau e câncer, 87,5% e 93,7%. Quanto à especificidade do método diagnóstico, verificam-se valores de 91,0% e 89,5% quando da utilização da técnica Papanicolaou além de 75,0% e 55,9% quando utilizada a imunocitoquímica com anti-p16ink4a. Os resultados mostram que, em ambiente ambulatorial e com coletas de citologias realizadas “às cegas” pelo próprio examinador, o dispositivo de Fournier® obteve sensibilidade e especificidade comparáveis àquelas obtidas pela citologia Papanicolaou coletadas da forma tradicional, mediante exame especular.

Com o desenvolvimento da citogenética convencional, a partir da metade do século passado, houve um enorme crescimento no entendimento da etiologia das síndromes malformativas, sendo as anomalias cromossômicas reconhecidas como a causa genética mais freqüente dos defeitos congênitos. Assim sendo, a investigação de aberrações cromossômicas através do cariótipo se tornou uma rotina na investigação das malformações e de outras condições. Desde os anos 70, quando o diagnóstico pré-natal para a detecção de anomalias cromossômicas no feto foi estabelecido, este tem se tornado uma prática usual em muitos países, e uma importante ferramenta para o aconselhamento genético. A introdução da ultra-sonografia pré-natal na obstetrícia permitiu a identificação precoce de fetos com malformações, os quais têm grande probabilidade de serem portadores de alguma anormalidade cromossômica. O conhecimento da etiologia de sua doença é fundamental para diminuir a ansiedade da família e para tomada de decisões sobre a gestação em curso e sobre gestações futuras. Foi realizado um estudo retrospectivo de 18 anos (1989-2007) que teve como objetivos gerais: estimar a freqüência das anormalidades cromossômicas mais comuns através do cariótipo convencional e suas indicações para as gestantes do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (artigo 1). Embora o cariótipo seja considerado o exame padrão ouro para este tipo de investigação, o mesmo possui algumas limitações. Entre elas se destaca a dependência de uma cultura de células, o que significa uma espera de 10 a 14 dias para se obter um resultado, tempo este precioso para a família e para a gestante. Além disto, corre-se o risco de perda da cultura por contaminação ou falta de crescimento celular, e com isso nenhum resultado é atingido, permanecendo a família sem um esclarecimento sobre a situação. Na tentativa de solucionar estes problemas, nesta tese, também foi proposta uma continuação do estudo (de 2006 a 2008) em fetos com múltiplas malformações, para testar a aplicação de técnicas moleculares, como QF-PCR e MLPA em diferentes materiais fetais (artigo 2). Ainda, quando a coleta de materiais tradicionais como líquido amniótico, ou biópsia de vilosidades coriônicas, eram impossíveis de se coletar por alguma dificuldade, incluindo os problemas morfológicos do feto, materiais alternativos, como urina, foram obtidos para se testar sua utilidade para se atingir o diagnóstico citogenético. Os achados citogenéticos relatados no artigo 1 foram compatíveis com os da literatura, sendo a trissomia do 21 a anormalidade cromossômica mais freqüentemente detectada no pré-natal. Entretanto, como o risco de recorrência desta síndrome foi zero neste estudo, um filho anterior com síndrome de Down foi considerado uma indicação fraca, sendo priorizadas para a realização do exame outras famílias carentes de maior risco. Por outro lado, com a técnica de MLPA (artigo 2) não foram obtidos resultados satisfatórios, provavelmente porque as amostras não permitiam obter DNA na qualidade necessária para esse procedimento. Com a técnica de QF-PCR pode-se obter 30 resultados (alguns parciais) nas 50 amostras coletadas. O estudo citogenético convencional de 13 amostras em que materiais diversos dos usuais foram empregados teve 100% de sucesso. Com a aplicação desse arsenal de técnicas, a chance de se obter uma informação citogenética ficou bem maior, diminuindo a ansiedade do casal e auxiliando nas suas decisões reprodutivas. / With the development of conventional cytogenetic techniques, since the second half of the last century, there was an enormous growth in knowledge of the etiology of malformed syndromes, being the chromosomal abnormalities considered the most common genetic causes of congenital defects. Therefore, the investigation of chromosomal aberrations by karyotype became a routine in the investigation of the malformations and many other conditions. Since the 70's, when prenatal diagnosis to detect chromosomal abnormalities in the fetus was set up, this became usual practice in many countries, and an important tool for genetic counseling. The introduction of the ultrasound in the obstetrician practice allowed the early identification of the malformed fetus, which has a great probability of being a carrier of some chromosomal aberration. The knowledge of the etiology of the disease is essential to reduce the anxiety of the family and to plan future pregnancies. From 1989 to 2007, 905 pregnant women from Hospital de Clinicas de Porto Alegre had an investigation for their fetus conditions by conventional karyotypes. With this information, a study was made which the main objectives were: to estimate the frequency of the most common chromosomal abnormalities and to estimate the most frequent indications that lead those women to make this invasive procedure (manuscript 1). Although the karyotype is considered the gold standard test for this type of research, it has some limitations, among them: the necessity of a cell culture, which means an expected time between 10 to 14 days to obtain the desired result, and time is a very precious aspect in pregnancy. Moreover, there is a risk of loss of culture because of contamination or lack of cell growth, leaving the family without a result. In an attempt to solve these problems, we proposed another study (from 2006 to 2008) to check the application of molecular techniques such as MLPA and QF-PCR in different malformed fetal materials (manuscript 2). Still, when the collection of traditional materials such as amniotic fluid, blood cord or chorionic villus biopsy were impossible to collect because of morphological problems on the malformed fetus, other alternative materials such as urine or intraperitoneal fluid were collected in an attempt to test these materials as a manner to reach the cytogenetic diagnosis. Our cytogenetics findings were similar to the literature, being trisomy 21 the most frequent chromosomal abnormalities. On the other hand, we did not find any recurrent case of this syndrome, so the indication for doing the exam, as having a previous child with Down syndrome, stayed as a weak indication that comes after others priorities, like pregnancies with greater risks. When we tried to introduce the MLPA technique, we did not achieve satisfactory results, probably because the samples were not suitable for good quality of DNA extraction. We then applied QF-PCR, and obtained 30 results (some partials) from 50 samples collected. The karyotype results of 13 samples from additional materials, not commonly used elsewhere, achieved 100% of success. With all these alternatives techniques, the chance to achieve a diagnosis was much higher, reducing the anxiety of the couple and helping the family to make decisions for futures pregnancies.

As condições para uma eficiente transfecção pelo método de fosfato de cálcio podem variar substancialmente. Neste estudo foi estabelecido o tipo de célula apropriada para transfecção de herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5). Para atingir este objetivo foram testadas amostras de DNA de células infectadas com BoHV-1gE-, DNA purificado de BoHV-5, assim como DNA de 3 plasmídeos. Este material foi transfectado em células de rim de macaco verde africano (VERO), de rim de suíno (PKsC3), de testículo de terneiro (TT) e células de rim de bovino (MDBK) e células resistentes a vírus da diarréia viral bovina (CRIB). Os procedimentos da transfecção com DNA plasmideal expressando o gene repórter EGFP foram feitos para identificar as melhores células transfectadas. Os resultados mostraram um percentual de 0,5% de células fluorescentes para VERO, 2,9% para PKsC3, 4,5% para TT e 0,05% para MDBK. Foi averiguada a capacidade do BoHV-5 de se replicar nestes quatro tipos de células. Uma amostra de vírus foi titulada em células VERO, PKsC3, TT e MDBK. Células VERO e PKsC3 apresentaram um título de 103,3 TCID/mL, enquanto que as células MDBK mostraram um título de 106,8 TCID/mL, o mesmo encontrado para as células TT. Quando células PKsC3 e TT foram transfectadas com 0,5 µg de DNA purificado de BoHV-5, somente as células TT apresentaram resultado positivo com duas placas virais por poço em placa de seis poços. Para investigar a influência da concentração de DNA viral, células TT foram transfectadas com 0,5 µg e 1 µg de DNA purificado de BoHV-5, sendo verificadas 2 e 4 placas, respectivamente. Estes resultados indicam que as células TT são boas candidatas para serem utilizadas na transfecção de DNA de BoHV-5, no entanto, experimentos adicionais são necessários para melhorar a eficiência de transfecção neste tipo de célula. / The conditions for efficient transfection using the calcium phosphate technique may vary substantially. In this study it was the type of cell suitable for transfection of bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5). To achieve this goal DNA samples from cells infected with BoHV-1gE-, purified DNA from BoHV-5, as well as three plasmid DNA were tested. This material was transfected into cells of African green monkey kidney (VERO), pig kidney cells (PKsC3), calf testicle cells (TT), bovine kidney cells (MDBK) and kidney cells resistant to bovine viral diarrhea virus (CRIB). The procedures of transfection with DNA plasmideal expressing the EGFP reporter gene were carried out to identify the best transfected cells. Results showed 0.5% of fluorescent cells for VERO, 2.9% for PKsC3, 4.5% for TT and 0.05% for MDBK cells. It was also investigated the ability of BoHV-5 to replicate in these four types of cells. A sample of virus was titrated in VERO, PKsC3, TT and MDBK cells. VERO and PKsC3 cells presented a titre of 103,3 TCID/mL, whereas MDBK cells reached a value of 106,8 TCID/mL, the same displayed by TT cells. When PKsC3 and TT cells were transfected with 0.5µg of BoHV-5 purified DNA, only TT cells gave positive result with two viral plaques per well in six-well plate. To investigate the influence of viral DNA concentration, TT cells were transfected with 0.5 µg and 1µg of BoHV-5 purified DNA, which yielded 2 and 4 plates, respectively. These results indicate that TT cells are good candidates for using in transfection of BoHV-5 DNA, however, additional experiments are needed to improve the efficiency of transfection in this type of cell.

p. 1-134 / Submitted by Santiago Fabio (fabio.ssantiago@hotmail.com) on 2013-03-26T18:02:58Z No. of bitstreams: 13 REFERÊNCIAS.pdf: 82537 bytes, checksum: 0680a12feac9455492cfc4d0cb2c9116 (MD5) parte II - cap 8 - conclusao.pdf: 85316 bytes, checksum: a3cfd851dde62f994c6dc539285a7994 (MD5) parte II - cap 7 - Analisando as motivacoes para a mudanca.pdf: 127174 bytes, checksum: 6f5707d4b9bc1efde7047c82807bb9ef (MD5) parte II - cap 6 - Analisando as inovacoes gerenciais.pdf: 99162 bytes, checksum: 3134b4385ea07445d0d1125dc25c9ece (MD5) parte II - cap 5 - Procedimentos Metodologicos.pdf: 179048 bytes, checksum: 2498eceb6ad3d608f8c47044e7e2bb6a (MD5) parte II - cap 4 - Organizações hospitalares.pdf: 128679 bytes, checksum: 2973a1386dba2f278df2a1eda2498341 (MD5) parte I - cap 3 - Difusão e adoção de Inovações gerenciais.pdf: 212201 bytes, checksum: d61594900668578320df43bfaa30eb96 (MD5) parte I - cap 2 - Organizacoes e ambiente.pdf: 64894 bytes, checksum: 9175038c486f3efbcc997185a3a72778 (MD5) parte I - cap 1 - Introdução.pdf: 57333 bytes, checksum: 15c5983bb7ffb4f5712da46402e82848 (MD5) apresentacao.pdf: 62256 bytes, checksum: d38f3152f3f62e248acf692f8d85922e (MD5) apendice A - Instrumento de coleta de dados.pdf: 105229 bytes, checksum: 8bd92e24ac79de1c18f2a4106c6240d7 (MD5) anexo B - protocolo.pdf: 51336 bytes, checksum: 23fd3eaa84899c5be1b5700c4222886b (MD5) anexo A - organizacoes acreditadas.pdf: 24570 bytes, checksum: 6369d15d8a4fad31572c33c77cecc1ac (MD5) / Approved for entry into archive by Tatiana Lima(tatianasl@ufba.br) on 2013-04-03T18:54:23Z (GMT) No. of bitstreams: 13 REFERÊNCIAS.pdf: 82537 bytes, checksum: 0680a12feac9455492cfc4d0cb2c9116 (MD5) parte II - cap 8 - conclusao.pdf: 85316 bytes, checksum: a3cfd851dde62f994c6dc539285a7994 (MD5) parte II - cap 7 - Analisando as motivacoes para a mudanca.pdf: 127174 bytes, checksum: 6f5707d4b9bc1efde7047c82807bb9ef (MD5) parte II - cap 6 - Analisando as inovacoes gerenciais.pdf: 99162 bytes, checksum: 3134b4385ea07445d0d1125dc25c9ece (MD5) parte II - cap 5 - Procedimentos Metodologicos.pdf: 179048 bytes, checksum: 2498eceb6ad3d608f8c47044e7e2bb6a (MD5) parte II - cap 4 - Organizações hospitalares.pdf: 128679 bytes, checksum: 2973a1386dba2f278df2a1eda2498341 (MD5) parte I - cap 3 - Difusão e adoção de Inovações gerenciais.pdf: 212201 bytes, checksum: d61594900668578320df43bfaa30eb96 (MD5) parte I - cap 2 - Organizacoes e ambiente.pdf: 64894 bytes, checksum: 9175038c486f3efbcc997185a3a72778 (MD5) parte I - cap 1 - Introdução.pdf: 57333 bytes, checksum: 15c5983bb7ffb4f5712da46402e82848 (MD5) apresentacao.pdf: 62256 bytes, checksum: d38f3152f3f62e248acf692f8d85922e (MD5) apendice A - Instrumento de coleta de dados.pdf: 105229 bytes, checksum: 8bd92e24ac79de1c18f2a4106c6240d7 (MD5) anexo B - protocolo.pdf: 51336 bytes, checksum: 23fd3eaa84899c5be1b5700c4222886b (MD5) anexo A - organizacoes acreditadas.pdf: 24570 bytes, checksum: 6369d15d8a4fad31572c33c77cecc1ac (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-03T18:54:23Z (GMT). No. of bitstreams: 13 REFERÊNCIAS.pdf: 82537 bytes, checksum: 0680a12feac9455492cfc4d0cb2c9116 (MD5) parte II - cap 8 - conclusao.pdf: 85316 bytes, checksum: a3cfd851dde62f994c6dc539285a7994 (MD5) parte II - cap 7 - Analisando as motivacoes para a mudanca.pdf: 127174 bytes, checksum: 6f5707d4b9bc1efde7047c82807bb9ef (MD5) parte II - cap 6 - Analisando as inovacoes gerenciais.pdf: 99162 bytes, checksum: 3134b4385ea07445d0d1125dc25c9ece (MD5) parte II - cap 5 - Procedimentos Metodologicos.pdf: 179048 bytes, checksum: 2498eceb6ad3d608f8c47044e7e2bb6a (MD5) parte II - cap 4 - Organizações hospitalares.pdf: 128679 bytes, checksum: 2973a1386dba2f278df2a1eda2498341 (MD5) parte I - cap 3 - Difusão e adoção de Inovações gerenciais.pdf: 212201 bytes, checksum: d61594900668578320df43bfaa30eb96 (MD5) parte I - cap 2 - Organizacoes e ambiente.pdf: 64894 bytes, checksum: 9175038c486f3efbcc997185a3a72778 (MD5) parte I - cap 1 - Introdução.pdf: 57333 bytes, checksum: 15c5983bb7ffb4f5712da46402e82848 (MD5) apresentacao.pdf: 62256 bytes, checksum: d38f3152f3f62e248acf692f8d85922e (MD5) apendice A - Instrumento de coleta de dados.pdf: 105229 bytes, checksum: 8bd92e24ac79de1c18f2a4106c6240d7 (MD5) anexo B - protocolo.pdf: 51336 bytes, checksum: 23fd3eaa84899c5be1b5700c4222886b (MD5) anexo A - organizacoes acreditadas.pdf: 24570 bytes, checksum: 6369d15d8a4fad31572c33c77cecc1ac (MD5) Previous issue date: 2003 / O objetivo desta dissertação foi analisar o processo de adoção de inovações, concentrando-se nas motivações que o determinam e nos seus principais fatores de influência. Utiliza-se o aporte teórico da teoria institucional para compreensão do papel do ambiente nessas motivações e de sua dinâmica na estruturação e desenvolvimento das organizações. Como campo empírico, toma-se o setor hospitalar privado de Salvador, que vem passando por várias mudanças, dentre as quais foca-se na adoção de novas técnicas de gestão. A partir de uma concepção de inovação que se fundamenta na percepção do adotante, procura-se identificar as motivações atribuídas por gestores de instituições hospitalares privadas para o desenvolvimento desse processo, com o pressuposto da prevalência de fatores externos. Para tanto, realiza-se um levantamento com gestores de doze hospitais privados de Salvador, a partir de entrevistas estruturadas. A esta coleta de dados, acrescentam-se também informações obtidas por outros profissionais do setor, pesquisa documental e bibliográfica. Identificou-se que os fatores que exerceram mais influência para adoção dessas inovações não se limitam a fatores externos, mas correspondem a aspectos ambientais, a partir de uma concepção institucionalista de ambiente. São esses os fatores principais: a pressão exercida pelas fontes pagadoras – os planos de saúde – e a profissionalização do setor, que possibilita uma nova cultura e visão gerencial para essas instituições. Adicionalmente, são identificados fatores internos de influência no processo de inovação organizacional nessas instituições. / Salvador

Submitted by Francisco Costa (xcosta@ufba.br) on 2013-07-04T16:09:30Z No. of bitstreams: 1 Groetelaars, Natalie- Fotogrametria Digital.pdf: 12092238 bytes, checksum: a829b2b652c6d3d798c9c0d64b901dad (MD5) / Approved for entry into archive by NELIJANE MENEZES(rubi2276@gmail.com) on 2013-07-08T17:01:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Groetelaars, Natalie- Fotogrametria Digital.pdf: 12092238 bytes, checksum: a829b2b652c6d3d798c9c0d64b901dad (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-08T17:01:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Groetelaars, Natalie- Fotogrametria Digital.pdf: 12092238 bytes, checksum: a829b2b652c6d3d798c9c0d64b901dad (MD5) / FAPESB / Esta pesquisa apresenta as potencialidades e aplicações das técnicas fotogramétricas digitais para o levantamento de formas arquitetônicas e urbanas. O trabalho foi desenvolvido a partir de procedimentos teóricos e experimentais, e embasado no estudo e discussão das técnicas de levantamento existentes, nos fundamentos da Fotogrametria, nas técnicas de restituição, nos sistemas de aquisição de imagens fotográficas e nas ferramentas para Fotogrametria Arquitetônica digital existentes. A parte prática apresenta estudos de caso que visaram apreender e testar um programa para Fotogrametria Digital, desenvolver metodologias de trabalho, analisar limites e potencialidades da tecnologia e avaliar a qualidade e a precisão dos resultados. Os experimentos foram realizados com o software PhotoModeler e outros programas, e permitiram a restituição de diversos tipos de objetos, a obtenção de uma série de produtos por meio de diferentes técnicas e procedimentos, e a comprovação do potencial da Fotogrametria Digital para documentação de formas arquitetônicas. A Fotogrametria Digital prova ser uma poderosa tecnologia para o levantamento de objetos, tanto para a obtenção de medidas e desenhos, como para a criação de modelos geométricos tridimensionais fotorrealísticos. Pode-se comprovar que as técnicas digitais simplificaram o processo de restituição, reduziram os custos e ampliaram o leque de aplicações, graças à maior flexibilidade das técnicas e dos equipamentos necessários. Espera-se que a Fotogrametria seja utilizada de modo crescente por profissionais da área de projeto e de preservação de sítios e monumentos históricos, devido à necessidade de se documentar os objetos de forma rápida, precisa, com a utilização de recursos acessíveis e de baixo custo. Entretanto, mesmo admitindo as vantagens oferecidas pela Fotogrametria, ela não resolve todos os problemas de um cadastro. Desse modo, destaca-se a importância de se conhecer as diversas técnicas de levantamento existentes, de forma a permitir a escolha da ou das técnicas mais adequadas para cada situação. / Salvador/PPGAU - UFBA

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-16T22:47:30Z No. of bitstreams: 1 Adriana de Souza Azevedo completo.pdf: 9819625 bytes, checksum: 2453578116f0a15f3832c81fccd0979e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-16T22:47:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adriana de Souza Azevedo completo.pdf: 9819625 bytes, checksum: 2453578116f0a15f3832c81fccd0979e (MD5) Previous issue date: 2011-06-06 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A dengue é uma doença causada pelo vírus da dengue (DENV1-4). Apesar dos vários estudos, ainda não existe uma vacina comercialmente disponível. A proteína do envelope (E) de DENV apresenta-se como o maior componente protéico da superfície viral. Consequentemente, esta proteína é o principal alvo para a indução de uma resposta imune protetora, provavelmente baseada em anticorpos neutralizantes. No presente trabalho, nós avaliamos o potencial protetor de vacinas de DNA baseadas na proteína E de DENV2. Para isto, foram construídos dois plasmídeos, pE1D2 e pE2D2, que contêm as sequências que codificam o ectodomínio da proteína E (domínios I, II e III) ou somente o seu domínio III, respectivamente, clonadas da montante à sequência que codifica o peptídeo sinal do ativador de plasminogênio de tecido humano (t-PA). Os dois plasmídeos mediaram à expressão e secreção das proteínas recombinantes in vitro em células eucarióticas, detectadas com anticorpos anti-DENV2 e avaliadas por ensaios de imunofluorescência ou marcação metabólica seguida de imunoprecipitação. Ambas as vacinas de DNA foram capazes de induzir respostas imunes com produção de anticorpos neutralizantes em camundongos Balb/c, com títulos mais elevados nos animais imunizados com o pE1D2. A vacina pE1D2 também se mostrou mais protetora nos testes de desafio com uma dose letal de DENV2, induzindo 100% de sobrevivência nos camundongos imunizados, enquanto que 45% dos animais vacinados com o plasmídeo pE2D2 morreram após a infecção. Além disso, 10% e 65% dos camundongos imunizados com pE1D2 ou pE2D2, respectivamente, apresentaram morbidade frente ao desafio letal. As vacinas pE1D2 e pE2D2 também foram testadas combinadas com o vírus quimérico YF17D-D2, em um sistema de dose e reforço ou em imunizações simultâneas. O vírus quimérico YF17D-D2 foi construído com a substituição dos genes prM e E do vírus vacinal da febre amarela 17DD pelos genes prM e E de DENV2. A vacina de DNA pE1D2 combinada com a quimera YF17D-D2 induziu altos níveis de anticorpos neutralizantes nos animais vacinados com os diferentes esquemas de imunização. Além disso, esses animais apresentaram 100% de sobrevivência frente ao desafio letal com DENV2, com ausência de qualquer sinal clínico da infecção. O efeito sinérgico da imunização combinada também foi evidenciado quando combinamos a vacina pE2D2 e YF17D-D2, que gerou 100% de sobrevivência nos animais desafiados. A resposta imune celular foi avaliada pela produção de IFN-por células TCD8+ em ensaios de ELISPOT, evidenciando a ativação destas células nos animais imunizados com as pE1D2 independente da sua combinação com a quimera YF17D-D2. Além disso, a análise do perfil fenotípico das células TCD4+ e TCD8+ mostrou um percentual menor de linfócitos CD62L+ nos animais vacinados com o pE1D2 isolado ou combinado com o vírus quimérico, indicando que a vacina de DNA pode influenciar nos processos de ativação das células T. Posteriormente, foram construídas novas vacinas de DNA que codificam os ectodomínios da proteína E de DENV1, 3 e 4 (pE1D1, pE1D3 e pE1D4), cuja expressão foi confirmada in vitro, e que serão testadas futuramente em modelos animais. / Dengue is a disease caused by the dengue virus (DENV1-4). Despite several studies, no effective vaccine is yet commercially available. The envelope protein (E) of DENV is the viral surface major protein component, associated with numerous biological activities. Thus, this protein is the main target for the induction of a protective immune response based on neutralizing antibodies. In the present study, we evaluated the potential of DNA vaccines expressing the DENV2 E protein for the induction of protection. Two plasmids were constructed, pE1D2 and pE2D2, which contain sequences encoding the ectodomain of the E protein (domains I, II and III) or only its domain III, respectively, cloned upstream the encoding sequence of the human tissue plasminogen activator signal peptide (t-PA). Both plasmids mediated expression and secretion of the recombinant proteins in vitro in eukaryotic cells, detected with anti-DENV2 antibodies and evaluated by immunofluorescence or metabolic labeling assay followed by imunopreciptation. Both DNA vaccines were elicited neutralizing antibodies in Balb/c mice, with the highest antibody titers detected in animals immunized with the pE1D2. The pE1D2 vaccine was also more protective in challenge tests with a lethal dose of DENV2, inducing 100% survival in immunized mice, while 45% of animals vaccinated with the plasmid pE2D2 died after infection. Furthermore, 10% and 65% of the mice immunized with pE1D2 or pE2D2, respectively, showed morbidity after virus challenge. The vaccines pE1D2 and pE2D2 were also tested in combination with the chimeric YF17D-D2 virus, in a prime and booster system or with simultaneous immunizations. The YF17D-D2 chimeric virus was previously constructed by replacing the prM and E genes of 17DD yellow fever vaccinal virus with those from DENV2. The pE1D2 DNA vaccine combined with the YF17D-D2 chimera induced high levels of neutralizing antibodies in animals vaccinated with any of the different immunization schedules. Moreover, these animals showed 100% survival rates against a lethal challenge with DENV2, with no clinical signs of infection. The synergistic effect of combined immunization was also evident when we used the pE2D2 DNA vaccine and the YF17D-D2 virus, which generated 100% survival in challenged animals. The cellular immune response was evaluated by the production of IFN- by CD8+ T cells in ELISPOT assays, revealing the activation of these cells in animals immunized with the pE1D2 alone or in combination with the YF17D-D2 chimera. Furthermore, analysis of the phenotypic profile of CD4+ and CD8+ T cells showed low percentage of CD62L+ lymphocytes in animals vaccinated with pE1D2, alone or combined with the chimeric virus, thus indicating that the DNA vaccine can influence the processes of T cell activation. New DNA vaccines encoding the ectodomains of DENV1, 3 and 4 of the envelope protein (pE1D1, pE1D3 and pE1D4) were constructed and the expression of recombinant proteins was confirmed in vitro. These DNA vaccines will be further tested animal models.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química. / Made available in DSpace on 2012-10-22T09:32:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 236846.pdf: 3341934 bytes, checksum: 795eed913f9a71409e2ecc36266754a7 (MD5) / A presente dissertação avalia o desempenho de uma nova metodologia de análise molecular pela reação em cadeia da polimerase (PCR), conhecida como Enhanced PCR, no diagnóstico da Síndrome do X Frágil (SXF), e faz um estudo comparativo com a técnica padrão. A SXF é causada pela expansão da repetição de uma seqüência de trinucleotídeos (CGG) na região reguladora do gene FMR1, localizado no cromossomo X (Xq27.3). Indivíduos portadores da síndrome são classificados em zona gray, pré-mutados ou afetados, conforme o número de repetições de CGG presentes no gene. Técnicas de PCR são utilizadas como triagem e suas limitações dificultam a conclusividade do diagnóstico de mulheres normais homozigotas, e de homens e mulheres com grandes expansões de repetições de CGG. Para comparação da eficácia de diagnóstico das técnicas avaliadas, o DNA de 122 pacientes foi extraído e submetido a dois métodos de PCR, conforme os protocolos descritos na literatura, aqui denominados PCR de Triagem (PCR-T) e PCR para Pré-mutação (PCR-P). A nova metodologia, PCR-P, produziu 60% de resultados conclusivos contra 26% de conclusividade pela técnica padrão (PCR-T). Alelos de até 130 CGG em mulheres e 93 CGG em homens foram amplificados pela PCR-P, possibilitando, assim, o diagnóstico de pré-mutação. Por outro lado os maiores alelos amplificados pela PCR-T foram de apenas 41 CGG em mulheres e 46 CGG em homens, ou seja, a técnica padrão, como está limitada ao diagnóstico da zona gray, não permitiu a identificação de alelos pré-mutados. A partir destas observações propõe-se uma estratégia para o diagnóstico da síndrome utilizando a PCR-P na pesquisa de pré-mutação em pais de indivíduos com resultados inconclusivos. Considerando os resultados bem sucedidos e aprimorados da nova técnica de PCR, incluindo o fácil diagnóstico da pré-mutação, sugere-se a sua implementação em laboratórios de genética para o diagnóstico da SXF.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2006 / Inclui bibliografia / A extração de características e recuperação de informações visuais de imagens digitais é uma área que cresce juntamente com as tecnologias de geração e armazenamento de informações digitais. A demanda por melhores soluções de gestão e manipulação deste co

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2012 / Bibliografia: f. 104-108 / O presente estudo tem como objetivo contribuir para o aprimoramento do processo de etiquetagem de edificações comerciais, sobretudo da parcela referente aos sistemas de condicionamento de ar. Haja vista que, para o cálculo da carga térmica de instalações / The aim of this study is to be a contribution to the improvement of labeling process of commercial buildings, especially processes related to air conditioning systems; considering that to calculate heat load of small facilities, the ABNT NBR 16401:2008 st

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2007 / Bibliografia: f. 88-92 / Com o avanço da tecnologia digital e o consequente crescimento na utilização de vídeos digitais, aumenta-se a necessidade de recuperação de informação de interesse nesta mídia que apresenta enormes volumes de dados. Muitas pesquisas sobre indexação e proc / With the advance of digital technology and consequent increase in the use of the digital videos, the necessity for recovering interesting information in this enormous volume of data increases. Many researches on digital video indexing and processing have