Reservatórios de petróleo são ambientes únicos por apresentarem uma combinação de condições extremas referentes à temperatura, pressão e salinidade, e que sustentam o desenvolvimento de procariotos. Várias espécies dos Domínios Bactéria e Archaea têm sido isoladas deste ambiente, com destaque aos microrganismos redutores de sulfato (BRS), metanogênicos e fermentadores. Estes últimos utilizam como fonte de energia uma grande variedade de compostos orgânicos e uma grande parte de seus representantes em reservatórios pertence ao Filo Thermotogae. Estas bactérias apresentam uma estrutura característica envolvendo a célula, semelhante a uma bainha, chamada toga. Alguns gêneros deste Filo são habitantes exclusivos de reservatórios, como por exemplo, o gênero Petrotoga. O presente trabalho teve como objetivo isolar e caracterizar bactérias da classe Thermotogae a partir de fluidos de água/óleo de poços de um reservatório de petróleo localizado na região Nordeste, com vistas a contribuir para o conhecimento da diversidade e metabolismo microbianos deste tipo de ambiente. O reservatório tem salinidade média de 7%, temperatura média de 60ºC, o pH dos fluidos situa-se entre 6,6-6,8, e a profundidade média dos poços é de 1.100 metros. Dois meios propostos na literatura para o cultivo de Petrotoga foram testados para o isolamento deste gênero: meio P-mexicana e meio P. olearia. Os meios foram preparados em anaerobiose, sob atmosfera de N2 e salinidade de 70g/L de NaCl. Inóculos de cultivos pré-existentes em meios enriquecidos foram feitos nestes meios e incubados a 60ºC. Ambos os meios se mostraram seletivos para linhagens de Petrotoga. Os isolados foram identificados pelo sequenciamento do gene RNAr 16S, e um deles, o isolado MG414-03, foi submetido a testes de crescimento sob as variáveis temperatura, salinidade e fonte de carbono. MG414-03 pertence ao gênero Petrotoga, com similaridade de 99,2% com a espécie Petrotoga miotherma. Suas células têm forma de bastonete e são envolvidas por toga; são Gram-negativas; têm comprimento médio de 1,8±0,9 μm e largura média de 0,7±0,1 μm, podendo ser individuais ou formar filamentos. Motilidade foi observada em células individuais e em arranjos de dois. Endósporos não foram observados em nenhuma fase de crescimento. Forma colônias circulares lisas, com borda lisa, transparentes, com diâmetro máximo de 1,0 mm. O isolado apresentou temperatura e salinidade ótimas de 60ºC e 4%, respectivamente. Utiliza glicose, xilose, maltose e sacarose como fontes de carbono, mas não utiliza xilana e carboximetilcelulose (CMC). É inibido pelos antibióticos canamicina e cloranfenicol nas concentrações de 10 μg/mL e 100 μg/mL, respectivamente. As atividades enzimáticas sobre os substratos xilana e carboximetilcelulose (CMC) foram testadas para o isolado MG414-03 e para as linhagens Petrotoga mobilis-DSM10674 e Petrotoga mexicana-DSM14811. O método utilizado foi o ensaio colorimétrico com DNS (Ácido Dinitrossalicílico) e o isolado MG414-03 não apresentou atividade enzimática sobre os substratos testados. Petrotoga mobilis-DSM10674 e Petrotoga mexicana-DSM14811 foram utilizadas como padrões no ensaio pois ambas são descritas como produtoras de xilanases, fato confirmado pelos resultados apresentados no teste. Petrotoga mobilis-DSM10674 apresentou atividade enzimática sobre o CMC, na ordem de 73±18 U/L, fato não registrado na literatura para esta espécie. / Oil reservoirs are unique environments for having a combination of extreme conditions relating to temperature, pressure, salinity, and that support the growth of microorganisms. Several species of Domains Bacteria and Archaea have been recovered from oil reservoirs, especially the sulfate-reducing microorganisms (SRB), methanogens and fermenters. The latter use as a carbon source a wide variety of organic compounds and a large fraction of the strains are members of the Phylum Thermotogae. Thermotogae species share a common characteristic: a balloon-like sheath or “toga” present outside the cell membrane. Some genera of the phylum have been exclusively recovered from oil reservoirs, as the genus Petrotoga. This study aimed to isolate and characterize strains members of Thermotogae from water/oil fluids of an onshore oil reservoir located in the Northeast of Brazil, in order to contributes to the knowledge of diversity and microbial metabolism of this type of environment. The reservoir has an average salinity of 7%, an average temperature of 60 º C, the pH of the fluid is between 6.6-6.8 and the average depth of the wells is 1,100 meters. Two culture media proposed in the literature for Petrotoga cultivation were tested: P-mexicana Medium and P. olearia medium. The media was prepared anaerobically under N2 flush and salinity adjusted for 70g/L NaCl. Aliquots from pre-existing enriched cultures were inoculated in those media and incubated at 60 º C. Both media proved be selective for Petrotoga strains. The isolates were identified by 16S rRNA gene sequencing, and the isolate MG414-03 was tested for the growth under variables temperature, salinity and carbon source. MG414-03 belongs to the genus Petrotoga, with 99.2% similarity with Petrotoga miotherma species. Cells are rods, 1.8 (± 0.9) x 0.7 (± 0.1) μm in size, with an outer sheath-like structure (toga), occurring singly or in sheaths. It stains Gram-negative. Motility was observed in single or in double cells. No spore formation was detected. Colonies are circular, with a smooth edge, transparent, with a maximum diameter of 1.0 mm. Optimum salinity at 4% and optimum temperature at 60ºC. Ferments glucose, xylose, maltose and sucrose, but not xylan and carboxymethylcellulose (CMC). It is inhibited by the antibiotics kanamycin and chloramphenicol at concentrations of 10 μg/mL and 100 μg/mL, respectively. The enzymatic activity on xylan and carboxymethylcellulose (CMC) were tested for isolate MG414-03, Petrotoga mobilis DSM10674 and Petrotoga Mexicana DSM14811. The method used was the colorimetric assay with DNS (dinitrosalicylic acid) and isolate MG414-03 showed no enzymatic activity on the tested substrates. Petrotoga mobilis DSM10674 and Petrotoga Mexicana DSM14811 were used as standards in the DNS assay, as both strains are described as xylanase producers, and this ability was confirmed by the results presented in the test. Petrotoga mobilis-DSM10674 showed enzymatic activity on CMC, of 73 ± 18 U/L, which was not recorded in the literature for this species.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-02T13:41:55Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1452750 bytes, checksum: 7baac87b3c69d1ac1f3266ebf2b62ff3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T13:41:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1452750 bytes, checksum: 7baac87b3c69d1ac1f3266ebf2b62ff3 (MD5) Previous issue date: 2014-07-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os biossurfactantes são compostos anfipáticos que possuem aplicações potenciais em diversas áreas. São considerados atóxicos e biodegradáveis, além de exibirem ótimas propriedades de superfície, como abaixamento de tensão superficial e da tensão entre duas fases imiscíveis (tensão interfacial) e excelente capacidade de emulsificação. Esses compostos têm composição variada, a qual depende do tipo de microrganismo que os produz e das condições de cultivo. O presente trabalho visou o isolamento e a triagem de microrganismos extremófilos obtidos a partir de material de compostagem de resíduos sólidos urbanos com potencial para a produção de biossurfactantes Foram obtidos 340 isolados, dos quais 37 produziram biossurfactante, em temperatura que variou de 40 oC a 70 oC e em meio de cultivo com concentração de NaCl de 50 g L–1. Foi estimada a velocidade específica de crescimento dos quatro isolados que apresentaram maior capacidade de produção de biossurfactantes, sendo que o isolado T1A63D apresentou maior velocidade de crescimento (μ = 0,83). A maior concentração de biossurfactantes, expressa como surfactina equivalente, foi detectado no isolado S1A1C (1295 mg L–1) em meio TSB. O uso dos solutos compatíveis mostrou-se eficiente para o isolamento de hipertermófilos que crescem a 70 oC, demonstrando que esses osmoprotetores desempenham papel relevante na sobrevivência dos microrganismos crescendo em altas temperaturas. / Biosurfactants are amphipathic compounds that have potential applications in various fields, considered non-toxic and biodegradable, and exhibit excellent surface properties such as surface tension and lowering the tension between two immiscible phases (interfacial tension) and excellent emulsifying capacity. These compounds are of variable composition which depends on the type of microorganism which produces and cultivation conditions. This study aimed at the isolation and screening extremophile microorganisms obtained from compost of municipal solid waste with potential for the production of biosurfactants were obtained 340 isolates, of which 37 produced biosurfactant in temperature ranging from 40 ° C to 70 oC and in culture medium with a concentration of 50 g L-1 NaCl. The specific growth rate was estimated from the four isolates had higher biosurfactants production capacity, and the isolated T1A63D had the highest growth rate (μ = 0.83). The highest concentration of biosurfactants, expressed as equivalent surfactin, was detected in isolated S1A1C (1295 mg L-1) in TSB medium. The use of compatible solutes was efficient for the isolation of hyperthermophilic growing at 70 ° C, showing that these osmoprotectors play an important role in the survival of microorganisms growing at high temperatures.

Reservatórios de petróleo são ambientes únicos por apresentarem uma combinação de condições extremas referentes à temperatura, pressão e salinidade, e que sustentam o desenvolvimento de procariotos. Várias espécies dos Domínios Bactéria e Archaea têm sido isoladas deste ambiente, com destaque aos microrganismos redutores de sulfato (BRS), metanogênicos e fermentadores. Estes últimos utilizam como fonte de energia uma grande variedade de compostos orgânicos e uma grande parte de seus representantes em reservatórios pertence ao Filo Thermotogae. Estas bactérias apresentam uma estrutura característica envolvendo a célula, semelhante a uma bainha, chamada toga. Alguns gêneros deste Filo são habitantes exclusivos de reservatórios, como por exemplo, o gênero Petrotoga. O presente trabalho teve como objetivo isolar e caracterizar bactérias da classe Thermotogae a partir de fluidos de água/óleo de poços de um reservatório de petróleo localizado na região Nordeste, com vistas a contribuir para o conhecimento da diversidade e metabolismo microbianos deste tipo de ambiente. O reservatório tem salinidade média de 7%, temperatura média de 60ºC, o pH dos fluidos situa-se entre 6,6-6,8, e a profundidade média dos poços é de 1.100 metros. Dois meios propostos na literatura para o cultivo de Petrotoga foram testados para o isolamento deste gênero: meio P-mexicana e meio P. olearia. Os meios foram preparados em anaerobiose, sob atmosfera de N2 e salinidade de 70g/L de NaCl. Inóculos de cultivos pré-existentes em meios enriquecidos foram feitos nestes meios e incubados a 60ºC. Ambos os meios se mostraram seletivos para linhagens de Petrotoga. Os isolados foram identificados pelo sequenciamento do gene RNAr 16S, e um deles, o isolado MG414-03, foi submetido a testes de crescimento sob as variáveis temperatura, salinidade e fonte de carbono. MG414-03 pertence ao gênero Petrotoga, com similaridade de 99,2% com a espécie Petrotoga miotherma. Suas células têm forma de bastonete e são envolvidas por toga; são Gram-negativas; têm comprimento médio de 1,8±0,9 μm e largura média de 0,7±0,1 μm, podendo ser individuais ou formar filamentos. Motilidade foi observada em células individuais e em arranjos de dois. Endósporos não foram observados em nenhuma fase de crescimento. Forma colônias circulares lisas, com borda lisa, transparentes, com diâmetro máximo de 1,0 mm. O isolado apresentou temperatura e salinidade ótimas de 60ºC e 4%, respectivamente. Utiliza glicose, xilose, maltose e sacarose como fontes de carbono, mas não utiliza xilana e carboximetilcelulose (CMC). É inibido pelos antibióticos canamicina e cloranfenicol nas concentrações de 10 μg/mL e 100 μg/mL, respectivamente. As atividades enzimáticas sobre os substratos xilana e carboximetilcelulose (CMC) foram testadas para o isolado MG414-03 e para as linhagens Petrotoga mobilis-DSM10674 e Petrotoga mexicana-DSM14811. O método utilizado foi o ensaio colorimétrico com DNS (Ácido Dinitrossalicílico) e o isolado MG414-03 não apresentou atividade enzimática sobre os substratos testados. Petrotoga mobilis-DSM10674 e Petrotoga mexicana-DSM14811 foram utilizadas como padrões no ensaio pois ambas são descritas como produtoras de xilanases, fato confirmado pelos resultados apresentados no teste. Petrotoga mobilis-DSM10674 apresentou atividade enzimática sobre o CMC, na ordem de 73±18 U/L, fato não registrado na literatura para esta espécie. / Oil reservoirs are unique environments for having a combination of extreme conditions relating to temperature, pressure, salinity, and that support the growth of microorganisms. Several species of Domains Bacteria and Archaea have been recovered from oil reservoirs, especially the sulfate-reducing microorganisms (SRB), methanogens and fermenters. The latter use as a carbon source a wide variety of organic compounds and a large fraction of the strains are members of the Phylum Thermotogae. Thermotogae species share a common characteristic: a balloon-like sheath or “toga” present outside the cell membrane. Some genera of the phylum have been exclusively recovered from oil reservoirs, as the genus Petrotoga. This study aimed to isolate and characterize strains members of Thermotogae from water/oil fluids of an onshore oil reservoir located in the Northeast of Brazil, in order to contributes to the knowledge of diversity and microbial metabolism of this type of environment. The reservoir has an average salinity of 7%, an average temperature of 60 º C, the pH of the fluid is between 6.6-6.8 and the average depth of the wells is 1,100 meters. Two culture media proposed in the literature for Petrotoga cultivation were tested: P-mexicana Medium and P. olearia medium. The media was prepared anaerobically under N2 flush and salinity adjusted for 70g/L NaCl. Aliquots from pre-existing enriched cultures were inoculated in those media and incubated at 60 º C. Both media proved be selective for Petrotoga strains. The isolates were identified by 16S rRNA gene sequencing, and the isolate MG414-03 was tested for the growth under variables temperature, salinity and carbon source. MG414-03 belongs to the genus Petrotoga, with 99.2% similarity with Petrotoga miotherma species. Cells are rods, 1.8 (± 0.9) x 0.7 (± 0.1) μm in size, with an outer sheath-like structure (toga), occurring singly or in sheaths. It stains Gram-negative. Motility was observed in single or in double cells. No spore formation was detected. Colonies are circular, with a smooth edge, transparent, with a maximum diameter of 1.0 mm. Optimum salinity at 4% and optimum temperature at 60ºC. Ferments glucose, xylose, maltose and sucrose, but not xylan and carboxymethylcellulose (CMC). It is inhibited by the antibiotics kanamycin and chloramphenicol at concentrations of 10 μg/mL and 100 μg/mL, respectively. The enzymatic activity on xylan and carboxymethylcellulose (CMC) were tested for isolate MG414-03, Petrotoga mobilis DSM10674 and Petrotoga Mexicana DSM14811. The method used was the colorimetric assay with DNS (dinitrosalicylic acid) and isolate MG414-03 showed no enzymatic activity on the tested substrates. Petrotoga mobilis DSM10674 and Petrotoga Mexicana DSM14811 were used as standards in the DNS assay, as both strains are described as xylanase producers, and this ability was confirmed by the results presented in the test. Petrotoga mobilis-DSM10674 showed enzymatic activity on CMC, of 73 ± 18 U/L, which was not recorded in the literature for this species.

Biossurfactantes (BS) são compostos tensoativos de baixo peso molecular produzidos por uma ampla variedade de microrganismos. Sua natureza anfipática faz com que esses compostos sejam capazes de reduzir a tensão superficial de líquidos ou formar emulsões estáveis, características que tornam os biossurfactantes altamente aplicáveis na indústria do petróleo. As condições extremas de reservatórios de petróleo quanto à temperatura e salinidade demandam estudos sobre a produção de biossurfactantes por linhagens bacterianas autóctones, bem como de sua estabilidade frente a estas condições. Neste contexto, este trabalho propôs a seleção de linhagens bacterianas produtoras de biossurfactante a partir de amostras rochosas de um reservatório localizado na Bacia de Campos (RJ), para possível aplicação em processos de recuperação de petróleo melhorada por microrganismos e/ou seus produtos ou Microbial Enhancement Oil Recovery (MEOR). Cultivos inoculados com as amostras rochosas foram usados para o isolamento das linhagens bacterianas. Os isolados positivos para produção de BS (avaliada pelo índice de emulsificação - E24) foram identificados por meio do sequenciamento do gene rRNA 16S. Dez dos isolados obtidos apresentaram 99% de similaridade com Bacillus alveayuensis, sendo escolhido um deles - Ar70C7-2 - para estudos de avaliação da agitação, salinidade, fontes de carbono (C) e nitrogênio (N) e relação C/N no crescimento e produção de BS. O Meio Mineral adicionado de glicerina e NH4Cl, na relação C/N=2, 70 g/L NaCl e incubado a 55°C forneceu o melhor resultado para o teste de E24 (69,1%). O BS produzido pelo isolado foi purificado parcialmente por precipitação ácida, obtendo-se, em média, 0,17g de extrato bruto (semi-purificado, SP) por litro de cultivo em Meio Mineral, e 0,24 g, em meio LB. O BS-SP produzido a partir dos cultivos nos meios LB modificado (BS-SP-LB) e Meio Mineral otimizado (BS-SP-MM) teve sua capacidade tensoativa testada frente às variações de pH, temperatura e salinidade. Ambos BS-SP apresentaram estabilidade térmica no intervalo de -18 a 121°C, registrando valores médios de E24 de 65,4(±2,5)% e 63,7(±0,6)% (BS-SP-LB e BS-SP-MM, respectivamente) e de tensão superficial mínima de 43,3 mN/m (BS-SP-LB) e 42,1 mN/m (BS-SP-MM). Amostras de BS-SP tiveram seu pH ajustado para valores entre 2 a 12, apresentando valores médios de E24 de 66,4(±3,4)% e 60,1(±3,2)% (BS-SP-LB e BS-SP-MM, respectivamente) e de tensão superficial mínima de 44,3 mN/m (BS-SP-LB) e 42,1 mN/m (BS-SP-MM). Quanto à salinidade, as amostras foram ajustadas para concentrações no intervalo de 0 a 21% de NaCl, apresentando valores médios de E24 de 65,4(±3,4)% e 64,4(±1,7)% (BS-SP-LB e BS-SP-MM, respectivamente) e de tensão superficial mínima de 42,2 mN/m (BS-SP-LB) e 42,9mN/m (BS-SP-MM). Quanto à ação antimicrobiana, o BS-SP não apresentou atividade bactericida ou bacteriostática sobre as linhagens E. coli, B. subtilis, P. fluorescens e S. epidermidis.O BS produzido por Ar70C7-2, em condições de alta temperatura e salinidade, mostrou alto índice de emulsificação e estabilidade. Estas características, associadas à boa capacidade emulsificante sobre diversos substratos orgânicos, particularmente de derivados de petróleo, sugerem uma potencial aplicação em processos de MEOR. / Biosurfactants (BS) are compounds of low molecular weight produced by a wide variety of microorganisms. Their amphipathic nature makes these compounds capable of reducing the surface tension of liquids and form stable emulsions, characteristics that make them highly applicable in the oil industry. The extreme conditions of temperature and salinity in oil reservoirs require research on the production of biosurfactants by indigenous bacteria, as well as its stability in these conditions. In this context, this work aimed the selection of biosurfactant-producing bacteria from rock samples of oil reservoir for potential use in microbial enhancement oil recovery (MEOR) processes. Cultures inoculated with rock samples were used for the isolation of bacterial strains. The positive isolates for biosurfactant production (measured by emulsification index - E24) were identified by 16S rRNA gene sequencing. Ten of the obtained isolates showed 99% similarity to Bacillus alveayuensis, being chosen one - Ar70C7-2 - for essays evaluating factors such as agitation, salinity, carbon sources (C) and nitrogen (N) and C/N ratio on growth and BS production. The mineral medium (MM) with glycerine and NH4Cl, at a C/N ratio equal to 2, temperature of 55°C and 70 g/L NaCl, provided the best results for the E24 index (69.1%). The BS produced by strain Ar70C7-2 was partially purified by acid precipitation, yielding on average 0.17g of crude extract (semi-purified, SP) per liter of culture in MM, and 0.24 g in LB medium. The BS-SP produced both from LB (BS-SP-LB) and Mineral Medium cultures (BS-SP-MM) had its surface-active action evaluated in relation to changes in pH, temperature and salinity. Both BS-SP presented thermal stability in the range -18 to 121°C, with E24 mean values of 65.4(±2.5)% and 63.7(±0.6)% (BS-SP-BL and BS-SP-MM, respectively) and minimal surface tension of 43.3 mN/m (BS-SP-BL) and 42.1 mN/m (BS-SP-MM). BS-SP samples were adjusted to pH values between 2 and 12, showing E24 mean values of 66.4(±3.4)% e 60.1(±3.2)% (BS-SP-BL and BS-SP-MM, respectively) and minimum surface tension of 44.3 mN/m (BS-SP-LB) and 42.1 mN/m (BS-SP-MM). Regarding salinity, samples were adjusted to concentrations in the range 0 to 21% NaCl, showing E24 mean values 65.4(±3.4)% e 64.4(±1.7)% (BS-SP-BL and BS-SP-MM, respectively) and surface tension minimum of 42.2 mN/m (BS-SP-LB) and 42.9 mN/m (BS-SP-MM). As for antimicrobial action, the BS-SP showed no bactericidal or bacteriostatic activity on the strains E. coli, B. subtilis, P. fluorescens and S. epidermidis. The BS produced by Ar70C7-2 in thermophilic and halophilic conditions showed a high rate of emulsification and stability. These features, coupled with good emulsifying capacity on various organic substrates, particularly petroleum products, suggest a potential application in MEOR processes.

Tese de mestrado. Engenharia de Minas e Geo-Ambiente. Universidade do Porto. Faculdade de Engenharia. 2009

Biossurfactantes (BS) são compostos tensoativos de baixo peso molecular produzidos por uma ampla variedade de microrganismos. Sua natureza anfipática faz com que esses compostos sejam capazes de reduzir a tensão superficial de líquidos ou formar emulsões estáveis, características que tornam os biossurfactantes altamente aplicáveis na indústria do petróleo. As condições extremas de reservatórios de petróleo quanto à temperatura e salinidade demandam estudos sobre a produção de biossurfactantes por linhagens bacterianas autóctones, bem como de sua estabilidade frente a estas condições. Neste contexto, este trabalho propôs a seleção de linhagens bacterianas produtoras de biossurfactante a partir de amostras rochosas de um reservatório localizado na Bacia de Campos (RJ), para possível aplicação em processos de recuperação de petróleo melhorada por microrganismos e/ou seus produtos ou Microbial Enhancement Oil Recovery (MEOR). Cultivos inoculados com as amostras rochosas foram usados para o isolamento das linhagens bacterianas. Os isolados positivos para produção de BS (avaliada pelo índice de emulsificação - E24) foram identificados por meio do sequenciamento do gene rRNA 16S. Dez dos isolados obtidos apresentaram 99% de similaridade com Bacillus alveayuensis, sendo escolhido um deles - Ar70C7-2 - para estudos de avaliação da agitação, salinidade, fontes de carbono (C) e nitrogênio (N) e relação C/N no crescimento e produção de BS. O Meio Mineral adicionado de glicerina e NH4Cl, na relação C/N=2, 70 g/L NaCl e incubado a 55°C forneceu o melhor resultado para o teste de E24 (69,1%). O BS produzido pelo isolado foi purificado parcialmente por precipitação ácida, obtendo-se, em média, 0,17g de extrato bruto (semi-purificado, SP) por litro de cultivo em Meio Mineral, e 0,24 g, em meio LB. O BS-SP produzido a partir dos cultivos nos meios LB modificado (BS-SP-LB) e Meio Mineral otimizado (BS-SP-MM) teve sua capacidade tensoativa testada frente às variações de pH, temperatura e salinidade. Ambos BS-SP apresentaram estabilidade térmica no intervalo de -18 a 121°C, registrando valores médios de E24 de 65,4(±2,5)% e 63,7(±0,6)% (BS-SP-LB e BS-SP-MM, respectivamente) e de tensão superficial mínima de 43,3 mN/m (BS-SP-LB) e 42,1 mN/m (BS-SP-MM). Amostras de BS-SP tiveram seu pH ajustado para valores entre 2 a 12, apresentando valores médios de E24 de 66,4(±3,4)% e 60,1(±3,2)% (BS-SP-LB e BS-SP-MM, respectivamente) e de tensão superficial mínima de 44,3 mN/m (BS-SP-LB) e 42,1 mN/m (BS-SP-MM). Quanto à salinidade, as amostras foram ajustadas para concentrações no intervalo de 0 a 21% de NaCl, apresentando valores médios de E24 de 65,4(±3,4)% e 64,4(±1,7)% (BS-SP-LB e BS-SP-MM, respectivamente) e de tensão superficial mínima de 42,2 mN/m (BS-SP-LB) e 42,9mN/m (BS-SP-MM). Quanto à ação antimicrobiana, o BS-SP não apresentou atividade bactericida ou bacteriostática sobre as linhagens E. coli, B. subtilis, P. fluorescens e S. epidermidis.O BS produzido por Ar70C7-2, em condições de alta temperatura e salinidade, mostrou alto índice de emulsificação e estabilidade. Estas características, associadas à boa capacidade emulsificante sobre diversos substratos orgânicos, particularmente de derivados de petróleo, sugerem uma potencial aplicação em processos de MEOR. / Biosurfactants (BS) are compounds of low molecular weight produced by a wide variety of microorganisms. Their amphipathic nature makes these compounds capable of reducing the surface tension of liquids and form stable emulsions, characteristics that make them highly applicable in the oil industry. The extreme conditions of temperature and salinity in oil reservoirs require research on the production of biosurfactants by indigenous bacteria, as well as its stability in these conditions. In this context, this work aimed the selection of biosurfactant-producing bacteria from rock samples of oil reservoir for potential use in microbial enhancement oil recovery (MEOR) processes. Cultures inoculated with rock samples were used for the isolation of bacterial strains. The positive isolates for biosurfactant production (measured by emulsification index - E24) were identified by 16S rRNA gene sequencing. Ten of the obtained isolates showed 99% similarity to Bacillus alveayuensis, being chosen one - Ar70C7-2 - for essays evaluating factors such as agitation, salinity, carbon sources (C) and nitrogen (N) and C/N ratio on growth and BS production. The mineral medium (MM) with glycerine and NH4Cl, at a C/N ratio equal to 2, temperature of 55°C and 70 g/L NaCl, provided the best results for the E24 index (69.1%). The BS produced by strain Ar70C7-2 was partially purified by acid precipitation, yielding on average 0.17g of crude extract (semi-purified, SP) per liter of culture in MM, and 0.24 g in LB medium. The BS-SP produced both from LB (BS-SP-LB) and Mineral Medium cultures (BS-SP-MM) had its surface-active action evaluated in relation to changes in pH, temperature and salinity. Both BS-SP presented thermal stability in the range -18 to 121°C, with E24 mean values of 65.4(±2.5)% and 63.7(±0.6)% (BS-SP-BL and BS-SP-MM, respectively) and minimal surface tension of 43.3 mN/m (BS-SP-BL) and 42.1 mN/m (BS-SP-MM). BS-SP samples were adjusted to pH values between 2 and 12, showing E24 mean values of 66.4(±3.4)% e 60.1(±3.2)% (BS-SP-BL and BS-SP-MM, respectively) and minimum surface tension of 44.3 mN/m (BS-SP-LB) and 42.1 mN/m (BS-SP-MM). Regarding salinity, samples were adjusted to concentrations in the range 0 to 21% NaCl, showing E24 mean values 65.4(±3.4)% e 64.4(±1.7)% (BS-SP-BL and BS-SP-MM, respectively) and surface tension minimum of 42.2 mN/m (BS-SP-LB) and 42.9 mN/m (BS-SP-MM). As for antimicrobial action, the BS-SP showed no bactericidal or bacteriostatic activity on the strains E. coli, B. subtilis, P. fluorescens and S. epidermidis. The BS produced by Ar70C7-2 in thermophilic and halophilic conditions showed a high rate of emulsification and stability. These features, coupled with good emulsifying capacity on various organic substrates, particularly petroleum products, suggest a potential application in MEOR processes.