O fluido multifásico complexo (suco de açaí) tem uma forte interação com membranas poliméricas ou cerâmicas de microfiltração e a formação de incrustação depende da composição e das condições de dinâmica de fluidos. Neste estudo experimental foi investigada a influência dos dois principais ácidos graxos presentes no açaí, ácido oleico e ácido palmítico, em misturas com água e no processo de microfiltração tangencial com membranas cerâmicas de alumina com um tamanho de poro nominal de 0,2 \'mü\'m. Mediu-se o fluxo de permeado em função do tempo, nas pressões transmembranas de 300 kPa, 400 kPa e 500 kPa. Para o fluxo da corrente de alimentação foram encontrados valores de Reynolds numa faixa de 9500 a 31000. Cada amostra de misturas de água/ácido oleico, água/ácido palmítico e água/ácidos oleico e palmítico, foi estudada em três séries de ensaios realizados durante 180 minutos e 72 minutos para a mistura água/ácido palmítico, a temperatura em 25 ºC. Analisou-se as incrustações resultantes e as fortes interações fluido/membrana utilizando o modelo de resistência em série e imagens tomadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os melhores resultados de permeado encontrados para a mistura de água/ácido oleico foram para Re = 33000, no entanto, resultados satisfatórios foram encontrados para Re = 20000. Agora para a água/ácido palmítico foram encontrados para Re = 20000. Os melhores resultados de permeado para a mistura água/ácidos oleico e palmítico foram para Re = 31000. De acordo com os resultados das resistências, a mistura água/ácido causa um bloqueio dos poros da membrana, resultando em uma maior diminuição do fluxo transmembrana. A limpeza foi eficiente para reduzir a resistência associada com a polarização. / The complex fluid multiphase (açaí juice) has a strong interaction with polymeric or ceramic membranes for microfiltration fouling and its formation depends on the fluid composition and fluid dynamics conditions. In this experimental study was investigated the influence of two major fatty acids present in açaí, oleic acid and palmitic acid in mixtures with water and in the process of crossflow microfiltration with ceramic membranes. In the separation process is used alumina ceramic membrane with a nominal pore size of 0.2 micrometers. The permeate flux was measured in function of time using the 300 kPa, 400 kPa and 500 kPa for the transmembrane pressure. The flow of feed stream and its respective value of Reynolds were in range of: 8900-3300. For each sample of mixtures oleic acid/water and palmitic acid/water and palmitic acid, oleic acid/ water, three series of experiments were conducted for 180 minutes and 72 minutes for mixture palmitic acid/water at temperature in 25 Celcius. For analyze of fouling resulting from strong interactions fluid/membrane was used the model of resistance in series and images taken via scanning electron microscopy (SEM). The best results for mixing oleic acid/water were to Re = 33000, however, satisfactory results were found for Re = 20000. Now for the palmitic acid/water were found to Re = 20000. For mixture palmitic acid, oleic acid/ water were found to Re = 31000. According to the results of the resistances, the mixture oleic acid/water cause a blockage of the pores of the membrane resulting in a greater decrease of the transmembrane flow. The cleaning is efficient for reducing the resistance associated with the polarization.

Orientadores: Antônio Fernando Ribeiro, Jose Dirceu Ribeiro, Francisco Ubaldo Vieira Júnior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T21:55:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Servidoni_MariadeFatimaCorreaPimenta_D.pdf: 12508528 bytes, checksum: b3b02333b5c69daaf09a90ff457cc849 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A Fibrose Cística (FC) é uma doença genética autossômica recessiva, comum em caucasianos. Tem incidência de 1: 2.500 a 1: 6.000 nascidos vivos e 1: 25 em portadores sãos na Europa e EUA e no Brasil a incidência estimada é de 1:10.000 nascidos vivos. É causada pela presença de dois genes CFTR (do inglês Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator) mutados, que codificam uma proteína também denominada CFTR. A CFTR é o principal canal de Cloro (Cl-), é expressa na membrana apical das células epiteliais dos tratos respiratório e digestório (pâncreas, fígado e intestino), nas glândulas sudoríparas e salivares, e no aparelho reprodutor masculino. Regula o transporte de iôns e de água. O comprometimento ou a ausência da função da CFTR promove a desidratação das mucosas com produção de um muco viscoso com consequente obstrução das vias respiratórias e ductos das glândulas exócrinas determinando o fenótipo da FC. O grau de função da CFTR será determinante da gravidade da doença. Até à data, já foram descritas cerca de 2000 mutações no gene CFTR. A F508del é a mutação mais prevalente, está presente em 85% dos pacientes a nível mundial e em 65% no Brasil. As mutações podem ser classificadas em 6 grupos de acordo com o defeito molecular e celular e determina o fenótipo da FC. Pode ser classificado em: clássico e não-clássico. O clássico é o mais conhecido e frequente e apresenta sintomas graves. O não-clássico ocorre em cerca de 15% dos doentes e apresenta sintomas mais brandos, com diagnóstico em geral complexo e tardio. A FC é assim um "espectro de doenças" e o seu rastreio precoce na triagem neonatal (TNN), antes mesmo dos primeiros sintomas, abre novas perspectivas de prognóstico por isso é emergente a necessidade de métodos acurados que determinem a função da CFTR, direcionando uma terapia individualizada, em busca da cura. A primeira parte deste trabalho procurou consolidar a medição da função do canal CFTR em biopsias retais como um marcador biológico para diagnóstico e prognóstico da FC; a segunda descreveu a realização da biópsia retal e suas particularidades sob a ótica dos pacientes e da técnica. A terceira abordou a realização do teste do suor (TS) no estado de São Paulo (SP) expressando o panorama brasileiro do TS. Desta forma, entre 2007 e 2010 foi realizado estudo prospectivo de pacientes atendidos no ambulatório de FC do Hospital das Clínicas (HC) da Universidade Estadual de Campinas (Unicamp) com e sem FC submetidos à biópsia retal. Em 2013 foi aplicado em 14 serviços (9 públicos, 5 privados) que realizam o TS, um questionário qualitativo através de visita às sete cidades que contam com Centros de Referência para atendimento de pacientes com FC em SP. Nossos resultados demonstraram que a determinação de Cl- em biópsias retais mediadas pela CFTR é um biomarcador robusto, sensível, preditivo e reprodutível para o diagnóstico e prognóstico da FC e com potencial uso para ensaios pré-clínicos de terapias moduladoras da CFTR. A pinça jumbo e a solução salina fisiológica determinaram as melhores amostras para os estudos bioquímicos e de eletrofisiologia, a grande maioria dos indivíduos entrevistados não relataram maiores desconforto (76%), sendo a técnica utilizada segura e reprodutível. O estudo do TS em SP demonstrou a necessidade urgente de equipamentos adequados de estimulação e dosagem do Cl- no suor, associado à normatização da técnica e treinamento de pessoal capacitado para a sua realização. Dando seguimento a este trabalho, estamos implementando novas ferramentas diagnósticas para a FC: a avaliação eletrofisiológica da CFTR em câmara de Ussing através da cultura de células nasais e/ou organoides e da unção da CFTR na glândula sudorípara pelo evaporímetro. Por fim, todos os métodos de avaliação diagnóstica devem respeitar procedimentos operacionais padrão (POP), sendo que alguns nomeadamente os de eletrofisiologia, ainda dispõem de aplicação limitada a poucos centros no mundo / Abstract: Cystic Fibrosis (CF) is an autosomal recessive genetic disease, common among Caucasians. In Europe and USA, it has an incidence of 1:2,500-1:6,000 in newborns and 1: 25 for healthy carriers. In Brazil, the estimated incidence is 1:10,000 in newborns. It is caused by the presence of two mutated CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator) genes encoding for CFTR protein, a Chloride (Cl-) channel expressed at the apical membrane of epithelial cells. CFTR is the main regulator of ion transport and water. Its defect leads to dehydrated epithelia and to the production of viscous mucus secretions that clogs the airways and ducts of exocrine glands, leading to the clinical manifestations of CF disease, mostly affecting the respiratory and digestive tracts (pancreas, liver and intestine). CFTR is also expressed in the sweat and salivary glands, and in the male reproductive system. The degree of CFTR function will determine the severity of the disease. About 2000 mutations have been already described in the CFTR gene. The F508del is the most prevalent, present in 85% of patients worldwide and 65% in Brazil. Mutations can be classified into six groups, depending on the molecular and cellular defect, and also determining the severity of the CF phenotype: Classical and Non-Classical. The Classical phenotype is best-known and frequent, presenting severe symptoms; but the Non-Classical phenotype, representing ~15 % of all CF patients, shows atypical symptoms, with variable organ involvement, which make the diagnosis difficult and often late. CF thus includes a "spectrum of diseases" and its early detection in newborn screening, even before the first symptoms, opens up new perspectives for prognosis. Since CF diagnosis requires proof of CFTR dysfunction, there is an emerging need for accurate methods capable of detecting CFTR function with high sensitivity and of directing CF therapy, in the quest for the most appropriate treatment. The first part of this study sought to consolidate the measurements of CFTR channel function in rectal biopsies as a biomarker for CF diagnosis and prognosis. The second part focused on the rectal biopsies procedure and its technical aspects and also on how it is perceived in the patients' perspective. The third part, approached how the sweat test (ST) procedure is carried out in CF centers in the state of São Paulo (SP), so as to assess the Brazilian scenario for the ST. To this end, between 2007 and 2010, we conducted a prospective study of patients seen at CF outpatient clinic, of the Clinical Hospital (HC) ¿ State University of Campimas (Unicamp) who underwent rectal biopsy and we also included non-CF subjects as controls. In 2013, a qualitative questionnaire was applied to 14 services (9 public, 5 private) which perform the ST by visiting the 7 cities of SP which have reference CF care centers. Data shown that determination of CFTR-mediated Cl- secretion in rectal biopsies proved to be a robust, sensitive, and reproducible predictive biomarker for CF diagnosis and prognosis, besides being a safe technique with the potential for use in preclinical trials of CFTR modulating therapies. The jumbo forceps and saline solution determined the best samples for electrophysiology and biochemical studies. Moreover, the great majority of the individuals tested by this procedure did not report major discomfort (76%). The work assessing the achievement of ST in SP, demonstrated an urgent need for adequate equipment for the stimulation of sweat and also for the measurement of Cl- in sweat, associated with standardization and training of specialized personnel for its implementation. As a follow up of this work, we are already implementing new diagnostic tools for CF, namely: the study of CFTR function in the sweat gland by the evaporimeter and in cultured nasal cells by Ussing chamber. Finally, all diagnostic methods must comply with strict standardized operation procedures (SOP) and some, including electrophysiology, still have limited use in few centers worldwide / Doutorado / Saude da Criança e do Adolescente / Doutora em Ciências

Orientador: Carmen Sílvia Bertuzzo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T19:02:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bonadia_LucianaCardoso_D.pdf: 3915251 bytes, checksum: 0ec73a6295f4f385eff99d2de851f6c8 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A Fibrose Cística (FC) é uma doença autossômica recessiva letal com alta incidência na região sudeste brasileira. É causada por mutações no gene CFTR que codifica uma proteína que se localiza na membrana apical das células epiteliais das vias aeríferas, pâncreas, glândulas salivares e sudoríparas, intestino e aparelho reprodutor, constituindo um canal de cloro. O aumento da viscosidade do muco extracelular é responsável pela maioria das complicações clínicas relacionadas à FC, sendo o acometimento respiratório a principal causa de morbidade e mortalidade. Mais de 1500 mutações foram associadas à FC, divididas em seis classes de acordo com o efeito que causam na produção e atividade da proteína CFTR, sendo a F508del a mais frequente delas. Com o aumento do diagnóstico precoce e melhora da abordagem terapêutica, cada vez mais pacientes chegam à idade adulta. A atenção ao paciente deve acompanhar a mudança demográfica tendo em vista as necessidades específicas da idade sejam clínicas, psicológicas ou sociais. O objetivo desse projeto foi caracterizar uma amostra de pacientes adultos com hipótese diagnóstica de FC e correlacionar os aspectos clínicos, moleculares e fisiológicos. A caracterização clínica foi realizada por pesquisa de dados clínicos no arquivo médico dos pacientes; a molecular foi realizada por métodos de genotipagem como DHPLC, sequenciamento do DNA e MLPA e a fisiológica foi realizada por medidas de corrente intestinal por micro-câmara de Ussing. Foi observado que pacientes sem atividade da CFTR tendem a ser diagnosticados mais cedo. Houve associação entre as classes de mutação de CFTR e a atividade do canal e uma relação entre a gravidade da mutação/inatividade de CFTR e a idade ao diagnóstico, função pulmonar e gravidade avaliada por Escore de Shwachman. Houve associação entre a colonização crônica por Pseudomonas aeruginosa e a obstrução pulmonar avaliada por dados de espirometria. As principais contribuições desse estudo foram: implementação de um método pioneiro no Brasil que além de servir como ferramenta diagnóstica tem sido muito utilizado na pesquisa de novos fármacos para tratamento mutação-dirigidos; caracterização clínica, molecular e fisiológica dos adultos com hipótese diagnóstica de fibrose cística, um grupo de pacientes cada vez mais frequente no atendimento médico dessa doença / Abstract: Cystic Fibrosis (CF) is a lethal autosomal recessive disease with high incidence in Southeast Brazil. It is caused by mutations in the CFTR gene, which encodes a protein that is located in the apical membrane of epithelial cells of airway tract, pancreas, salivary and sweat glands, intestine and reproductive system, forming a chloride channel. The increasing of the viscosity of extracellular mucus is responsible for most clinical complications related to CF, with pulmonary impairment as a major cause of morbidity and mortality. More than 1500 mutations have been associated with CF, divided in six different classes according to the effect on CFTR protein production and activity, F508del being the most common type. With the increase of early diagnosis and improved therapeutic approach, more and more patients reach adulthood. The patient care should follow the demographic shift regarding the specific needs of the age are clinical, psychological or social. The aim of this study was to characterize a sample of adult CF patients with diagnosis of CF and to correlate the clinical, molecular and physiological features. Clinical characterization was obtained from archived medical records. Molecular characterization was performed by genotyping methods such as DHPLC, MLPA and sequencing and physiological characterization was performed by intestinal current measurements by micro-Ussing chamber. It was observed that patients in whom the CFTR channel does not show any residual activity tend to be diagnosed earlier. There was an association between the classes of CFTR mutation and the activity of the channel and a relationship of mutation severity/inactivity of CFTR with the age at diagnosis, lung function and severity score assessed by Shwachman-Kulczycki. There was an association between chronic colonization by Pseudomonas aeruginosa and pulmonary obstruction. The main contributions of this study were: implementation of a method pioneered in Brazil that serves as a diagnostic tool and has been used in researching new drugs for treatment of specifics mutation and clinical, physiological and molecular characterization of adults with cystic fibrosis, a growing group in medical care / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

O mecanismo responsável pela exposição da fosfatidilserina (PS) nas membranas celulares não está bem definido. Uma atividade dependente de ATP está envolvida, provavelmente uma ATPase tipo-P. ATPases tipo P são uma família de proteínas transmembranares envolvidas no transporte de metais, íons e fosfolipídios através da membrana plasmática. As P4 ATPases translocam aminofosfolipidios (APTLs) como a PS durante a apoptose. No entanto, o sentido do transporte de PS pela APLT não está claramente definido. Os macrófagos reconhecem a PS exposta na superfície das células apoptóticas, o que inibe sua capacidade microbicida. Formas promastigotas e amastigotas de Leishmania ssp. sofrem apoptose, porém a exposição de PS na superfície dos promastigotas sempre leva à morte, enquanto que nos amastigotas não está necessariamente associada à morte e permite a internalização desses protozoários e sua sobrevivência no macrófago. Esse trabalho teve como objetivo a caracterização molecular da APLT de L. (L.) amazonensis e a avaliação de seu papel na exposição de PS nesse parasita. / The mechanism responsible for phosphatidylserine (PS) exposure in biological membranes is still an open subject. An ATP-dependent activity is involved, probably a Type P- ATPase. Type P ATPases are a family of transmembrane proteins involved in the transport of metals, ions and phospholipids across plasma membrane. P4 ATPases mediate phospholipid transport (APLT) as PS during the process of cell death by apoptosis. However, the direction (inwards or outwards) of this translocation has not been defined. Macrophages recognize exposed PS on the surface of apoptotic cells, what inhibits their microbicidal capacity. Promastigotes and amastigotes of Leishmania ssp. die by apoptosis, but PS exposure on promastigotes always leads to apoptosis, whereas PS exposure by amastigotes is not necessarily associated to death and allows their internalization and survival in the macrophage. This work aimed to characterize APLT from L. (L.) amazonensis and to evaluate its role in PS exposure in this parasite.

O TSPO (Translocator protein 18 KDa) é uma proteína intracelular localizada na membrana mitocondrial externa, mas também na membrana citoplasmática, e no núcleo. O TSPO está envolvido na biossíntese de esteroides, proliferação celular, apoptose, estresse oxidativo, e na modulação da inflamação, principalmente no sistema nervoso central, onde a proteína é considerada um marcador da neuroinflamação. Os neutrófilos representam células-chave no processo inflamatório sendo as primeiras células a chegarem no foco inflamatório onde exercem atividades fagocíticas, secretórias e microbicidas. O presente trabalho investigou os efeitos de diferentes ligantes de TSPO Diazepam, Ro5-4864 (agonistas parciais) e PK-11195 (antagonista) na ativação dos neutrófilos in vitro focando na via de ativação do Toll-like receptor (TLR) e de receptores transmembranas ligados a proteína G (GPCR). Neutrófilos obtidos da cavidade peritoneal de camundongos BalbC machos quatro horas após injeção do glicogênio de ostra (1%), foram tratados in vitro com meio de cultura, veículo, Diazepam, Ro5-4864, PK-11195 (10, 100, e 1000 nM), e estimulados ou não com Lipopolissacarídeo (LPS) ou Leucotrieno B4 (LTB4). Foram avaliados em condições basais e após estímulo: a expressão de TSPO e de moléculas de adesão por citometria de fluxo; a migração pelo ensaio de quimiotaxia em placa; a produção de citocinas e do óxido nítrico por ELISA e pela reação de Griess, respectivamente; e finalmente, a geração de espécies reativas de oxigênio por espectrofotômetro de fluorescência. Os resultados obtidos mostram que o TSPO é expresso em neutrófilos em condições basais, e que os estímulos inflamatórios com LPS ou LTB4 não alteram essa expressão. Os ligantes de TSPO não afetam as funções de neutrófilos ativados pelo LPS, salvo a acentuação da geração de espécies reativas (ROS) observada com Ro5-4864 em células estimuladas com LPS. Os neutrófilos estimulados pelo LTB4, quando pré-tratados com os ligantes de TSPO, apresentaram redução na clivagem da L-selectina, redução de quimiotaxia, e indução da geração de ROS. Baseado nestes resultados e nos dados da literatura, concluímos que os efeitos dos ligantes de TSPO sobre as funções neutrofílicas concentram-se na expressão de moléculas de adesão, no estresse oxidativo e na migração. Estes efeitos dependem da via de ativação e do tipo celular. / TSPO (Translocator protein 18 kDa) is an intracellular protein located on the out mitochondrial membrane, but also on the cytoplasmatic membrane and in the nucleus. TSPO is involved in endogen steroids substances biosynthesis, cellular proliferation, apoptosis, oxidative stress and in the modulation of inflammatory process, principally in the central nervous system where the protein is a marker of neuroinflammation. Neutrophils are key-cells in the inflammatory process, being the first cell line that reach the inflammatory focus, where they realize their phagocytic, secretory and microbicidal activities. This study assessed the effects of TSPO ligands Diazepam, Ro5-4864 (partial agonists) and PK-11195 (antagonist) on in vitro neutrophils activation, focusing on the Toll-like receptor (TLR) and G protein coupled receptors (GPCRs) pathways. Neutrophils obtained from de peritoneal cavity of male BalbC mouse after four hours of Oyster glycogen injection (1%), were treated in vitro with culture medium, vehicle, Diazepam, Ro5-4864, PK-11195 (10, 100, e 1000 nM) and stimulated or not with lipopolysaccharide (LPS) or Leukotriene B4 (LTB4). We assessed in basal conditions and after stimulus:The TSPO and adhesion molecules proteic expression by flow cytometry; the migration by a plate chemotaxis assay; Nitric oxide and cytokines production by ELISA and the Griess reaction, respectively; and finally the reactive oxygen species generation by a fluorescence spectrophotometer. The results show that TSPO is expressed in neutrophils in basal conditions, and that inflammatory stimulus with LPS and LTB4 did not alter this expression. We also show that TSPO ligands did not affect neutrophil function activated by LPS. However, neutrophils stimulated by LTB4, when pre-treated with TSPO ligands shown a reduced L-selectina cleavage, chemotaxis reduction and induction of ROS generation. Based on these data and in literature data, we concluded that the effects of TSPO ligands in neutrophilic functions is concentrated on adhesion molecules expression, on oxidative stress and on the migration. These effects depend to the activation pathways and to the cellular type.

O TSPO (Translocator protein 18 KDa) é uma proteína intracelular localizada na membrana mitocondrial externa, mas também na membrana citoplasmática, e no núcleo. O TSPO está envolvido na biossíntese de esteroides, proliferação celular, apoptose, estresse oxidativo, e na modulação da inflamação, principalmente no sistema nervoso central, onde a proteína é considerada um marcador da neuroinflamação. Os neutrófilos representam células-chave no processo inflamatório sendo as primeiras células a chegarem no foco inflamatório onde exercem atividades fagocíticas, secretórias e microbicidas. O presente trabalho investigou os efeitos de diferentes ligantes de TSPO Diazepam, Ro5-4864 (agonistas parciais) e PK-11195 (antagonista) na ativação dos neutrófilos in vitro focando na via de ativação do Toll-like receptor (TLR) e de receptores transmembranas ligados a proteína G (GPCR). Neutrófilos obtidos da cavidade peritoneal de camundongos BalbC machos quatro horas após injeção do glicogênio de ostra (1%), foram tratados in vitro com meio de cultura, veículo, Diazepam, Ro5-4864, PK-11195 (10, 100, e 1000 nM), e estimulados ou não com Lipopolissacarídeo (LPS) ou Leucotrieno B4 (LTB4). Foram avaliados em condições basais e após estímulo: a expressão de TSPO e de moléculas de adesão por citometria de fluxo; a migração pelo ensaio de quimiotaxia em placa; a produção de citocinas e do óxido nítrico por ELISA e pela reação de Griess, respectivamente; e finalmente, a geração de espécies reativas de oxigênio por espectrofotômetro de fluorescência. Os resultados obtidos mostram que o TSPO é expresso em neutrófilos em condições basais, e que os estímulos inflamatórios com LPS ou LTB4 não alteram essa expressão. Os ligantes de TSPO não afetam as funções de neutrófilos ativados pelo LPS, salvo a acentuação da geração de espécies reativas (ROS) observada com Ro5-4864 em células estimuladas com LPS. Os neutrófilos estimulados pelo LTB4, quando pré-tratados com os ligantes de TSPO, apresentaram redução na clivagem da L-selectina, redução de quimiotaxia, e indução da geração de ROS. Baseado nestes resultados e nos dados da literatura, concluímos que os efeitos dos ligantes de TSPO sobre as funções neutrofílicas concentram-se na expressão de moléculas de adesão, no estresse oxidativo e na migração. Estes efeitos dependem da via de ativação e do tipo celular. / TSPO (Translocator protein 18 kDa) is an intracellular protein located on the out mitochondrial membrane, but also on the cytoplasmatic membrane and in the nucleus. TSPO is involved in endogen steroids substances biosynthesis, cellular proliferation, apoptosis, oxidative stress and in the modulation of inflammatory process, principally in the central nervous system where the protein is a marker of neuroinflammation. Neutrophils are key-cells in the inflammatory process, being the first cell line that reach the inflammatory focus, where they realize their phagocytic, secretory and microbicidal activities. This study assessed the effects of TSPO ligands Diazepam, Ro5-4864 (partial agonists) and PK-11195 (antagonist) on in vitro neutrophils activation, focusing on the Toll-like receptor (TLR) and G protein coupled receptors (GPCRs) pathways. Neutrophils obtained from de peritoneal cavity of male BalbC mouse after four hours of Oyster glycogen injection (1%), were treated in vitro with culture medium, vehicle, Diazepam, Ro5-4864, PK-11195 (10, 100, e 1000 nM) and stimulated or not with lipopolysaccharide (LPS) or Leukotriene B4 (LTB4). We assessed in basal conditions and after stimulus:The TSPO and adhesion molecules proteic expression by flow cytometry; the migration by a plate chemotaxis assay; Nitric oxide and cytokines production by ELISA and the Griess reaction, respectively; and finally the reactive oxygen species generation by a fluorescence spectrophotometer. The results show that TSPO is expressed in neutrophils in basal conditions, and that inflammatory stimulus with LPS and LTB4 did not alter this expression. We also show that TSPO ligands did not affect neutrophil function activated by LPS. However, neutrophils stimulated by LTB4, when pre-treated with TSPO ligands shown a reduced L-selectina cleavage, chemotaxis reduction and induction of ROS generation. Based on these data and in literature data, we concluded that the effects of TSPO ligands in neutrophilic functions is concentrated on adhesion molecules expression, on oxidative stress and on the migration. These effects depend to the activation pathways and to the cellular type.

Orientador: Erick da Cruz Castelli / Resumo: O Complexo Principal de Histocompatibilidade (MHC) é um complexo gênico que está intimamente envolvido com a regulação do sistema imune. Esse complexo comporta o sistema de Antígenos Leucocitários Humano (HLA), cuja principal importância está relacionada com o reconhecimento do que é próprio ou não do organismo. HLA-C é o gene polimórfico menos variável dos genes HLA clássicos e o que tem menor expressão nos tecidos, exceto na interface materno-fetal, em que é o único gene clássico expresso. A molécula codificada por esse gene possui significante função na apresentação antigênica e regulação da atividade de células NK, o que permite uma íntima associação com situações fisiológicas, como gestação, e patológicas, como doenças infecciosas, autoimunes, inflamatórias, neoplasias e rejeições a enxertos transplantados. Sua porção gênica mais estudada é a que codifica a fenda de ligação a peptídeos antigênicos, devido sua destacada importância na apresentação de antígenos a células T citotóxicas. No entanto, outras regiões do gene, que são negligenciadas nos estudos de variabilidade, também merecem destaque por influenciarem na sinalização e modulação da citotoxicidade de células efetoras, na ancoragem e estabilidade da molécula na membrana plasmática e na internalização e reciclagem da molécula HLA-C. Desta maneira, nós exploramos a variabilidade dos segmentos que codificam α3 (éxon 4), transmembrana (éxon 5) and cauda citoplasmática (éxon 6 and éxon 7) da molécula HLA-C em uma popu... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Major Histocompatibility Complex (MHC) is a gene complex closely involved in the regulation of the immune system. This complex includes the Human Leukocyte Antigen (HLA) system, whose main role is related to the recognition of self/non-self structures of humans. HLA-C is the least variable polymorphic gene of classical HLA genes and has the lowest expression in tissues, except at the maternal-fetal interface, where it is the only classical HLA class I expressed gene. The molecule encoded by this gene has a significant role in the antigen presentation and regulation of NK cells activities, which allows an intimate association with physiological conditions, such as pregnancy, and pathological conditions like infectious, autoimmune, and inflammatory diseases, cancer, and transplantation rejection. The most studied HLA-C portion is that encoding the peptide-binding groove, due to its outstanding importance in presentation of antigens to cytotoxic T cells. However, other regions of the gene, which are neglected in the variability studies, are also important in influencing the signaling and modulation of effector cell cytotoxicity, in the anchorage and stability of the molecule on the cell surface, and in the internalization and recycling of the HLA-C molecule. Here, we explore the variability of the segments encoding the α3 (exon 4), transmembrane (exon 5) and cytoplasmic tail (exon 6 and exon 7) domains of the HLA-C molecule in an admixed population sample from Southeastern B... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Carmen Silvia Bertuzzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T09:38:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arruda_LeonardoVicentini_M.pdf: 2764603 bytes, checksum: 06a4165f1f812c7be015b1e98fdfc702 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A incidência da fibrose cística no Brasil é significativamente variável, com diferenças de até 20 vezes de acordo com o grupo étnico e região geográfica estudada. A população brasileira é composta da mistura de muitos grupos étnicos. Os portugueses começaram a colonização no século XVI. Os holandeses invadiram o nordeste em 1630. Os africanos foram trazidos ao Brasil, numa contínua migração forçada, que perdurou do século XVI ao século XIX. No final do século XIX, tiveram início novos movimentos migratórios, principalmente da Alemanha, Itália, Arábia e Espanha. Durante as três primeiras décadas do século XX, nova corrente migratória ocorreu, principalmente da Itália, Espanha e Portugal Após a segunda guerra mundial, o Brasil recebeu novos imigrantes (japoneses, judeus) compondo esta população. Este estudo gerou os primeiros dados sobre a incidência da FC no nordeste e também foram obtidos novos dados para a região sudeste. Na época do estudo, na cidade de Campinas estão sob atendimento no ambulatório 70 pacientes não aparentados com dois testes de suor alterados. Nestes pacientes, foram triadas as seguintes mutações. ?F508 (50%), G542X (4,29%), R1162X (2,14%), N1303K (1,43%) e R553X (0,71%). A mutação G551D não foi encontrada. A mutação ?F508 também foi analisada em 1.138 mulheres saudáveis, sendo 694 da cidade de Campinas - SP e 444 de João Pessoa ¿ PB com idade média de 26,3 anos (15-39, ±6,8), que participaram voluntariamente de projeto de pesquisa anterior. Nas amostras coletadas em Campinas n=694 não foi encontrado nenhum alelo mutante 0/1.388, o que nos impediu de calcular a incidência nesta cidade através deste método. Dos 888 alelos analisados de João Pessoa, foram encontrados quatro alelos mutantes (p=0,0045). Sabendo que a mutação ?F508 corresponde a aproximadamente 50% dos alelos de indivíduos com FC no Brasil, a freqüência dos alelos causadores da FC foi estimada utilizando a proporção: (0,0045/0,5)=0,0090. Com isso, para a cidade de João Pessoa a incidência estimada desta doença autossômica recessiva é de 1:12.321 indivíduos. Esta incidência é similar à encontrada por afro-brasileiros, entretanto difere por exemplo, da encontrada na população do RS. Quando utilizamos o método de cruzamento de dados étnicos das duas regiões estudadas com dados literários da doença nos diferentes grupos étnicos, na cidade de Campinas a incidência da FC ficaria em 1/4.434 e na cidade de João Pessoa ficaria 1/6.087 / Abstract: The incidence of the Cystic Fibrosis (CF) is significantly variable in Brazil, with differences larger than 20 fold, according with the ethnic group and geographic studied region. Brazilian population is composed by ethnic admixture. Portuguese started colonization in the 16th century. The Netherlander invaded the northeast in 1630. The Africans were brought to Brazil, in a continuous forced migration, which lasted from 16th to 19th centuries. In the 19th century, new migratory movements have begun from Germany, Italy, Arab and Spain. In the first three decades of the 20th century, started a new migratory flow, mainly from Italy, Spain and Portugal. After the World War II, Brazil received additional immigrants (Japanese, Jewish) compounding its population. These studies generated the first data about the CF incidence on the Brazilian northeast and also were obtained new data about the southeast region. At the time of this study, 70 non related patients were attended at the local CF center in Campinas, with two positive sweat tests in the city of Campinas-SP. On theses patients were screened the following mutations: ?F508 (50%), G542X (4.29%), R1162X (2.14%), N1303K (1.43%) and R553X (0.71%). The mutation G551D wasn¿t found. The ?F508 mutation was also analyzed in 1,138 healthy voluntary women, 694 from Campinas ¿ SP and 444 from João Pessoa ¿ PB, with average age of 26.3 years (15-39, ±6.8), who previously participated from another research. In the samples collected in Campinas ¿ SP n=694 wasn¿t found any mutated allele 0/1,388 and so, we wasn¿t able to make any incidence calculation through this method. In the 888 alleles from João Pessoa, four carry the ?F508 mutation (p=0.0045). Knowing that this mutation accounts for approximately 50% of the FC patients alleles in Brazil, the incidence of the CF in this region was estimated using the proportion: (0.0045/0.5)=0.009. Thus, the estimated incidence of this recessive disease in João Pessoa was 1:12,321. This incidence is similar to the found in African-Brazilians, although differs for example, to the found on the RS population. When we use the method of crossing ethnic data of both studied regions with literary data of the disease in the different ethnic groups, in the city of Campinas, the incidence of the CF would be in 1/4,434 and in the city of João Pessoa would be 1/6,087 / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores: José Dirceu Ribeiro, Francisco Ubaldo Vieira Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T00:51:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SouzaGomez_CarlaCristina_M.pdf: 3648408 bytes, checksum: 8fc98c01df413aea0740fb6bb16723a1 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Introdução: O teste do suor clássico (TSC) é aceito como padrão-ouro para o diagnóstico da fibrose cística (FC). Objetivo: Comparara estimulação e peso do suor produzido, os efeitos colaterais associados ao uso das correntes, contínua pulsada (CCP) e contínua constante (CCC) e determinar o tempo ideal para a estimulação e para a coleta de suor em indivíduos com e sem FC. Método: Estudo de intervenção prospectivo de corte transversal. Experimento 1(braço direito): CCC e CCP. Tempo de estimulação (TE) de 10min e o de coleta do suor de 30min. Correntes de 0,5; 0,75; 1,0; e 1,5mA e frequências de 0; 200; 1000; e 5000Hz. Experimento 2 (braço esquerdo): Corrente de 1,0mA; TE: 5 e 10min e coleta de 15 e 30min com frequências de 0; 200; 1000; e 5000Hz. Ambos os experimentos foram testados com densidade de corrente (DC) de 0,07 a 0,21mA/cm2. Experimento 3: Avaliar a CCP e a CCC como métodos diagnósticos para a FC comparando com diagnósticos estabelecidos por estudos na biópsia retal e sequenciamento do gene CFTR(do inglês, Cystic Fibrosis Transmembrane Condutance Regulator). Resultados: Participaram do estudo48 sujeitos (79,16% do sexo feminino), com média de 29,54±8,87 anos de idade. Não houve diferença estatística entre a interação da frequência e da corrente no peso do suor (p=0,75). Houve associação do peso do suor com a frequência de estímulo (p=0,0088) e corrente utilizada para a obtenção de sudorese (p=0,0025). A produção de suor foi maior no tempo de 10min de estimulação (p=0,0023). A coleta do suor foi maior no tempo de 30min (p=0,0019). A impedância da pele não foi influenciada pelo TE e de coleta do suor (p>0,05). A frequência da corrente utilizada mostrou associação inversa com a impedância da pele (p<0,0001). A temperatura da pele mensurada antes da estimulação foi maior que a temperatura após a estimulação (p=0,0001). No experimento 3 (29 indivíduos)a CCP mostrou melhor índice kappa comparada a CCC (0.92versus 0.52, respectivamente). Conclusão: A realização do TSC tanto com CCC quanto CCP utilizando DC de 0,14 a 0,21mA/cm2 mostrou eficácia nas etapas de estimulação e coleta de suor, sem efeitos colaterais. O tempo ideal para a estimulação e para a coleta de suor foi, respectivamente, 10 e 30min / Abstract: Background: The classic sweat test (CST) is still accepted as the goldstandard method for cystic fibrosis (CF) diagnosis. Objective: To compare the production and volume of sweat, the side-effects caused by direct pulsed current (DPC) and direct constant current (DCC) and to determine the stimulation time for stimulation and sweat for collection in CF and non-CF individuals. Method: Prospective study of cross-sectional intervention. Experiment 1 (right arm): DPC and DCC. Stimulation time (ST) of 10min and sweat collection every 30min. Currents of 0.5; 0.75; 1.0; and 1.5mA and frequencies of 0; 200; 1000; and 5000Hz. Experiment 2 (left arm): current of 1mA, ST: 5 and 10min and collection at 15 and 30min interval with frequencies of 0; 200; 1000; and 5000Hz. Both experiments were tested with current density (CD) ranging from 0.07 to 0.21mA/cm2. Experiment 3: To assess CF diagnosis by DPC and DCC methods by comparison with the established by rectal biopsy diagnosis studies and sequencing of the CFTR (Cystic Fribrosis Transmembrane Condutance Regulator) gene. Results: 48 subjects (79.16% female) with mean average of 29.54 ± 8.87 years old participated in this study. There was no statistical differences between the interaction of frequency and current in sweat weight (p=0.7488). An association was found between sweat weight with the frequency of stimulation (p=0.0088) and the current used for sweating (p=0.0025). The sweat production was higher for the 10min stimulation interval (p=0.0023). The best time interval for sweat collection was 30min (p=0.0019). The skin impedance was not influenced by ST and sweat collection time (p>0.05). The frequency of the current used was inversely associated with skin impedance (p<0.0001). The skin temperature measured before the stimulation was higher than after stimulation (p=0.0001). In experiment 3 (29 subjects), the DPC showed better kappa index compared to DCC (0.92 versus 0.52, respectively). Conclusion: ST performance with both DCC and DPC using a CD of 0.14 to 0.21mA/cm2 showed efficacy in both of stimulation and sweat collection steps, without side-effects. The optimal time for stimulation and sweat collection were, respectively, 10 and 30min / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestra em Ciências

Orientador: Carmen Silvia Bertuzzo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T02:22:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Furgeri_DanielaTenorio_D.pdf: 7382335 bytes, checksum: edfcfca14ac645a69fd4e8e2d2777246 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A fibrose cística (FC) é uma doença autossômica recessiva com características de doença complexa. Complicações clínicas parece ser fator decisivo para o prognóstico dos pacientes. Os polimorfismos nos genes ADRA2A e TCF7L2 são importantes para elucidar parte da variabilidade encontrada nas características clínicas de doenças inflamatórias, incluindo a FC, que tem a Diabetes Mellitus como uma importante co-morbidade. Os objetivos deste estudo foram determinar a frequência do polimorfismo rs12255372 no gene TCF7L2 e sua associação com Diabetes Mellitus em pacientes com fibrose cística, e investigar a associação de 27 variáveis clínicas da FC com os polimorfismos rs553668 e rs10885122 do gene ADRA2A. Em nosso estudo, 145 pacientes foram avaliados em relação ao genótipo do polimorfismo rs12255372 no gene TCF7L2 e 176 pacientes foram avaliados em relação à associação dos polimorfismos rs553668 e rs10885122 no gene ADRA2A com 27 variáveis clínicas da FC. Todos os pacientes em atendimento no Ambulatório de Pediatria da Faculdade de Ciências Médicas da UNICAMP foram confirmados como tendo fibrose cística por dois testes de suor alterados (valor de sódio e de cloro superior a 60 mmol / L) e por análise de diferencial do epitélio da membrana do intestino através da dosagem de CFTR pela câmara Ussing. A identificação das mutações do gene CFTR foi realizada no laboratório de Genética Molecular da FCM/Unicamp. O rastreio do polimorfismo rs12255372 foi feito através da técnica de PCR associada à digestão enzimática específica. O rastreio dos polimorfismos rs553668 e rs10885122 no gene ADRA2A foi feito por PCR ARMS. Uma comparação genotípica foi realizada com as 27 variáveis clínicas, da FC considerando as mutações do gene CFTR. Encontramos associações clínicas, sem considerar as mutações no gene CFTR, com as variáveis categóricas: raça [para o polimorfismo rs553668 (p = 0,002), grupo haplotípico (p = 0,014)], íleo Meconial [para o polimorfismo rs553668 (p = 0,030) Quando consideradas as duas mutações no gene CFTR, encontramos associações com as variáveis íleo meconial (p = 0,0012) e IMC [para o polimorfismo rs553668 (p = 0,014)]. A associação com dados numéricos, sem considerar as mutações no gene CFTR, foi positiva para a idade ao diagnóstico [para o polimorfismo rs553668 (p = 0,022)]. Considerando as duas mutações no gene CFTR, a associação com dados numéricos foi positiva para o Escore de Bhalla [para o polimorfismo rs553668 (p = 0,014)], Escore de Shwachman-Kulczycki [para o polimorfismo rs553668 (p = 0,008) e haplótipos (p = 0,050)]. Os polimorfismos rs553668 e rs10885122 no gene ADRA2A parecem ser moduladores da gravidade da FC em nossa amostra. Em nossa amostra, não houve associação entre o polimorfismo rs12255372 no gene TCF7L2 e a Diabetes Mellitus / Abstract: Cystic fibrosis (CF) is an autosomal recessive disease with characteristics of complex disease. Clinical complications appear to be a decisive factor in the prognosis of patients. The ADRA2A and TCF7L2 gene polymorphisms are important to elucidate part of the variability encountered in clinical characteristics in inflammatory diseases, including CF, which has diabetes-associated as an important comorbidity. The aims of this study ware to determine the frequency of polymorphism rs12255372 in the TCF7L2 gene and its association with Diabetes Mellitus in Cystic Fibrosis patients and to investigate the association of 27 CF clinical variables with ADRA2A polymorphisms. In our study, 145 patients were evaluated in relation to the genotype of the rs12255372 polymorphism in the TCF7L2 gene. 176 patients were evaluated in relation to associate rs553668 and rs10885122 polymorphisms in the ADRA2A gene with 27 CF clinical variables. All patients in attendance at the Pediatric Clinic at the Faculty of Medical Sciences, UNICAMP, were confirmed as having cystic fibrosis by two altered sweat tests (sodium and chlorine value greater than 60 mmol/L) and by analysis of differential membrane epithelium of the intestine by the dosage of active CFTR through the Ussing chamber. The identification of CFTR gene mutations was performed in the laboratory of Molecular Genetics, FCM/Unicamp. The rs12255372 polymorphism was screening by PCR method associated with specific enzymatic digestion. The rs553668 and rs10885122 polymorphisms in ADRA2A gene were screening by ARMS-PCR. A genotypic comparison was performed with 27 CF clinical variables, considering CFTR mutations. We found clinical associations, without considering the mutations in the CFTR gene, with categorical variables: race [for polymorphism rs553668 (p = 0.002), haplotype group (p = 0.014)], meconium ileus [for polymorphism rs553668 (p = 0.030). Considering the two mutations in the CFTR gene, we find associations with categorical variables meconium ileus (p = 0.0012) and BMI [for polymorphism rs553668 (p = 0.014)]. The association with numerical data, without considering the mutations in the CFTR gene, was positive for age at diagnosis [for polymorphism rs553668 (p = 0.022)]. Considering the two mutations in the CFTR gene, the association with numerical data was positive for Bhalla score [for polymorphism rs553668 (p = 0.014)], Shwachman-Kulczycki score [for polymorphism rs553668 (p = 0.008) and haplotypes (p = 0.050)]. Polymorphisms rs553668 and rs10885122 in ADRA2A gene appear to be modulators of CF severity in our sample. In our sample, there was no association between the polymorphism rs12255372 in the TCF7L2 gene and Diabetes Mellitus / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Clínica Médica