Actuellement, la prise en charge pharmacologique des troubles anxieux et de ceux liés au stress est d’une efficacité limitée, ce qui motive la recherche de nouveaux traitements. Dans ce contexte, les propriétés que possède un hydrolysat trypsique des caséines bovines (HTC) semblent prometteuses mais restent à préciser, à condition de développer des modèles animaux d’anxiété et de stress pertinents. Ce travail a d’abord consisté à valider les conditions d’utilisation d’un modèle d’anxiété, le labyrinthe en croix surélevé (LCS), et à développer des modèles de stress aigu et chronique induisant des troubles de type anxieux ou dépressifs. Puis, ces modèles ont été appliqués à la caractérisation des propriétés anxiolytiques et antistress d’un HTC administré per os. Les résultats montrent 1) que la détection d’une activité anxiolytique dépend des conditions d’application du LCS (lumière, structure du labyrinthe, espace de travail) et 2) que l’HTC présente dans ce test et celui de l’enfouissement défensif conditionné une activité anxiolytique différente de celle du diazépam utilisé comme référence. Par ailleurs, il a été montré 1) que les réponses physiologiques et comportementales à un stress aigu varient selon la modalité de stress utilisée (contention ou nage forcée), et 2) que l’HTC réduit ces deux types de réponses. Enfin, deux modèles d’exposition chronique au stress ont été développés, un seul ayant été appliqué à l’étude de l’HTC (stress chronique varié). Dans ce cas, l’HTC a réduit les effets comportementaux du stress en lien avec l’activité sans pour autant prévenir les troubles physiologiques liés au stress. En conclusion, ces résultats confirment les propriétés anxiolytiques et antistress de l’HTC, suggérant un mode d’action différent de celui des benzodiazépines. / Currently, the pharmacological care of anxiety- and stress-related disorders presents a limited efficacy, and then justifies the need for developing new treatments. In this context, the properties of a tryptic hydrolysate from bovine caseins (CTH) are of interest and remain to be clarified. For that, this work aimed in a first part to define the most sensitive conditions for detecting the effects of potent anxiolytic compounds in the well-known behavioural model of anxiety, the elevated plus-maze (EPM), and to develop both acute and chronic stress models able to modify anxiety- and depression-like behaviour in rat. In a second part, these models have been applied to the evaluation of the anxiolytic and antistress putative properties of CTH when orally administrated. The results indicated that 1) the anxiety level of rats tested in the plus-maze is related to methodological parameters (luminosity, closed wall type, extramaze space), and 2) the CTH shows in behavioural tests as the EPM and the conditioned defensive burying an anxiolytic activity that is different from diazepam used as a reference. The results also indicated that 1) the physiological and behavioural responses to an acute stress exposure depend on the model of stress (restraint or forced swim), and 2) the CTH reduces both stress induce responses. Finally, two models of chronic stress have been developed. The CTH has been tested only in one model that consists in submitting rats to chronic variable stresses.In these conditions, the CTH reduced the behavioural hyperactivity induced by the chronic stress exposure, but not the stress-related physiological alterations. In conclusion, this study confirms the anxiolytic and antistress properties of the CTH when orally administrated and suggests a mechanism of action that may be different from that of benzodiazepines.

La quantification des anticorps monoclonaux (mAbs) dans le plasma est un pré-requis essentiel pour les études PK/PD. Les méthodes de références pour quantifier actuellement les mAbs sont de type ELISA mais les difficultés rencontrées notamment lorsque l’analyse porte sur des mAbs dont la cible pharmacologique est circulante, suggèrent que la spectrométrie de masse serait une alternative intéressante. Appliquée au bevacizumab, la stratégie développée fait appel à la spectrométrie de masse en tandem utilisée en mode MRM (HPLC-ESI-QqQ) et porte sur l’analyse des peptides spécifiques du bevacizumab obtenus à l’issu d’une protéolyse trypsique. La quantification absolue est réalisée à l’aide d’une droite de calibration obtenue à partir du ratio des aires des peptides du bevacizumab et de l’étalon interne. Afin de proposer une méthodologie de quantification de référence, nous avons définie les points clés du développement pour la transposition à d’autre mAbs et comparé les deux stratégies d’étalonnage interne les plus employées : l’une utilisant une protéine analogue et l’autre un peptide marqué par des isotopes stables (SIL-peptide). A travers ce développement la stratégie proposée présente un caractère universel vis-à-vis des anticorps monoclonaux de type IgG dont le traitement des échantillons repose sur une purification par protéine A suivit d’une concentration par ultrafiltration et dont la quantification fait appel à l’approche d’étalonnage interne SIL-peptide. Validée selon les recommandations de la FDA, notre méthode présente les performances analytiques attendues en termes de sensibilité, répétabilité et spécificité pour être appliquée à des études cliniques. / The quantification in plasma of monoclonal antibodies (mAbs) is an essential prerequisite to any PK/PD preclinical and clinical study. To date, reference techniques used to quantify mAbs, rely on enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) but the difficulties encountered in particular when the analysis focuses on the mAbs whose pharmacological target is circulating, suggest that mass spectrometry would be an interesting alternative. Applied to bevacizumab, the quantification developed strategy involves tandem mass spectrometry (HPLC-ESI-QqQ) used in MRM mode and focuses on the analysis of specific peptides bevacizumab obtained after tryptic proteolysis. Absolute quantification is achieved through calibration curve obtained from peak area ratios of bevacizumab surrogate peptide and internal standard. To propose a reference quantification methodology, we have identified the key points of development for transposition to other mAbs and compared the two most commonly used internal calibration approaches: one using protein analogue and the other a stable isotope labeled surrogate peptide (SIL-peptide). Through this development, the proposed strategy has a universal character with respect to IgG monoclonal antibodies subclasses which is based on sample processing purification using protein A followed by concentration by ultra filtration and whose quantification involves the internal calibration approach SIL-peptide. Validated according to FDA guidelines, our method shows the expected analytical performance in terms of sensitivity, specificity and repeatability for application in clinical studies