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Previous issue date: 2004-12-07 / Universidade Federal de Minas Gerais / Down syndrome (DS) is the most common congenital disease occurring in
approximately 1 out of 700 live births. In addition to the full HC21 trisomy, rare
individuals with clinically recognized DS have only a partial trisomy, carrying a region
common to all patients dubbed as Down Syndrome Critical Region (DSCR). Several genes
contained in this portion of the HC21 are probably related to the DS phenotypes. In an
attempt to characterize some of the DSCR genes, heterologous expression and subcellular
localization analyses were performed for the genes DCRB (DSCR4), c21orf45, c21orf59,
c21orf83-2, c21orf 95 and c21orf101. Analyses of the recombinant proteins produced in
Escherichia coli showed that most of them remained in the insoluble fraction. DCRB was
expressed as a soluble protein in E. coli Rosetta (DE3), purified and subjected to assays for
secondary structure analyses. Also, deletion and site directed mutagenesis as well as the
production of polyclonal antisera against DCRB were performed. Subcellular localization
analyses revealed that the proteins DCRB, c21orf45, c21orf59 and c21orf83-2 were
distributed in the cytoplasm of mammalian cells and that c21orf95 and c21orf101 resided
in the nucleus. Considering the lack of information concerning these proteins encoded in
the DSCR our results allowed a insight into some of the proteins provably involved in
Down syndrome. / A Síndrome de Down (SD) é o distúrbio genético mais freqüente em humanos,
sendo detectado em média um caso a cada 700 nascimentos. Esta anomalia é decorrente
principalmente da trissomia total do cromossomo 21 porém, em alguns casos, ocorre a
trissomia parcial deste cromossomo o que possibilitou a definição de uma região comum a
todos os portadores denominada Região Crítica da Síndrome de Down (DSCR). Nesta
região encontram-se vários genes que possivelmente estão relacionados às características
fenotípicas apresentadas pelos indivíduos portadores. Entre eles estão os genes estudados
neste trabalho: DCRB ou DSCR4 e as ORFS c21orf45, c21orf59, c21orf83-2, c21orf 95 e
c21orf101. Com o objetivo de contribuir para os estudos realizados com genes localizados
na DSCR foram realizadas a expressão heteróloga em E. coli e a localização subcelular das
proteínas codificadas pelos genes descritos acima. Assim, os experimentos de expressão
heteróloga em E. coli demonstraram que as proteínas expressas encontram-se na forma
insolúvel para a maioria das condições testadas, entretanto foi possível a expressão de uma
pequena fração solúvel da c21orf45, c21orf59 e da DCRB quando utilizou-se células da
linhagem Rosetta (DE3) o que permitiu que a última proteína fosse purificada em
condições nativas e que ensaios iniciais de estrutura secundária fossem realizados.
Experimentos de deleção e mutação sítio dirigida também foram realizados com esta
proteína assim como a produção de anticorpos policlonais. Estudos da localização
subcelular revelaram que quatro das proteínas analisadas (DCRB, c21orf45, c21orf59 e
c21orf83-2) são citoplasmáticas enquanto que duas (c21orf95 e c21orf101) são nucleares.
Considerando a escassez de informações a respeito dos genes localizados na DSCR, esses
resultados vem contribuir para o conhecimento das proteínas possivelmente envolvidas
com a Síndrome de Down.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufscar.br:ufscar/5420 |
| Date | 07 December 2004 |
| Creators | Justino, Daniela Morilha Néo |
| Contributors | Silva, Flávio Henrique da |
| Publisher | Universidade Federal de São Carlos, Programa de Pós-graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular, UFSCar, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSCAR, instname:Universidade Federal de São Carlos, instacron:UFSCAR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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