Orientador: Prof. Dr. Alexandre Hiroaki Kihara / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Neurociência e Cognição, 2015. / No sistema nervoso (SN), o óxido nítrico (NO) está associado a diversos processos
fisiológicos e patológicos. A produção endógena do NO depende das sintases de óxido nítrico (NOS), nNOS, eNOS e iNOS; cujos nomes estão relacionados à produção majoritária em
neurônios, endotélio e processos inflamatórios, respectivamente. Embora semelhantes
estruturalmente, estas enzimas possuem propriedades distintas de expressão e regulação. Este projeto teve como objetivo avaliar a expressão gênica (por PCR em tempo real) e distribuição proteica (por imunofluorescência) das três isoformas de NOS na retina de rato. Também foram mensurados os níveis de produção de NO (pela técnica de EPR - ressonância
paramagnética eletrônica) durante o desenvolvimento (P0, P5, P10 e P60) e sob efeito de
intervenção farmacológica (bloqueadores L-NAME e 7-NI). Além disso, os efeitos causados
pelos bloqueadores em genes envolvidos na sinaptogênese foram avaliados (por PCR em
tempo real). Os resultados mostraram que o RNAm das três isoformas de NOS estão
presentes em todas as idades estudadas. Por outro lado, apenas eNOS e nNOS parecem estar
distribuídas no plexo vascular e em camadas específicas da retina, respectivamente. Foi
constatada a presença de nNOS em células amácrinas e, após experimentos de duplamarcação
e observações morfológicas, foram identificadas duas populações distintas de
células amácrina nNOS positivas, denominadas round e balloon cells. Os dados obtidos a
partir dos bloqueios das três isofromas (L-NAME) e especificamente da nNOS (7-NI)
mostraram redução dos transcritos de sinapsina, sinaptofisina e conexina 45. Os dados deste
estudo sugerem que as NOS estão presentes nas idades estudas e que nNOS exerce um
importante papel nas sinapses químicas e elétricas durante o desenvolvimento do SN. / In the nervous system (NS), nitric oxide (NO) is associated with various physiological
and pathological processes. The endogenous NO production dependents on nitric oxide
synthases (NOS), nNOS, eNOS and iNOS; whose names are related to the majority
production in neurons, endothelium and inflammatory processes, respectively. Although
structurally similar, these enzymes have different properties of expressions and regulations.
The aim of this project was to evaluate gene expression (by real-time PCR) and protein
distribution (by immunofluorescence) of the three NOS isoforms. We also measured the
levels of NO production (by the EPR technique - electron paramagnetic resonance) during
development (P0, P5, P10 and P60) and under the effect of pharmacological intervention
(blocker L-NAME and 7-NI). Moreover, the effects caused by the blocking of genes involved
in synaptogenesis were evaluated (by real-time PCR). The results showed the mRNA of the
three isoforms are present at all ages studied. Moreover, eNOS and nNOS only seem to be
distributed in the vascular plexus and in specific layers of the retina, respectively. The
presence of nNOS in amacrine cells was observed, and double-labeling experiments and
morphological observations revealed two distinct populations of nNOS positive amacrine
cells, named as round and balloon cells. The data obtained from the nonspecific NOS blockers (L-NAME) and specific nNOS blocker (with 7-NI) showed reduction of synapsin,
synaptophysin and connexin 45 transcripts. The data suggest the NOS are present in early
ages and nNOS plays an important role in electrical and chemical synapses during
development of NS.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:BDTD:101115 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Walter, Lais Takata |
| Contributors | Kihara, Alexandre Hiroaki, Echeverry, Marcela Bermúdez, Debbio, Carolina Beltrame del |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf, 103 f. : il. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFABC, instname:Universidade Federal do ABC, instacron:UFABC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=101115&midiaext=72378, http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=101115&midiaext=72377, Cover: http://biblioteca.ufabc.edu.brphp/capa.php?obra=101115 |
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