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Previous issue date: 2010 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / A pinça óptica (PO) é uma ferramenta que utiliza luz para capturar e mover partículas.
Por exercer forças da ordem de Piconewtons sob as partículas capturadas, sua principal aplicação é
de interesse microscópico, especialmente no estudo de células e biomoléculas que podem ser
manipuladas individualmente sem danos térmicos. Devido a essas características, a PO pode ser
utilizada para medir importantes propriedades eritrocitárias, tais como elasticidade e cargas elétricas
da membrana. O concentrado de hemácias (CH) é o hemocomponente mais utilizado na prática
transfusional. As hemácias quando estocadas sofrem progressiva deteriorização metabólica e celular
com diminuição gradual da elasticidade (μ) e da morfologia bicôncava. Por outro lado, a membrana
da hemácia é carregada negativamente. Estas cargas influenciam a distribuição de íons ao redor da
célula, criando um potencial elétrico repulsivo denominado potencial Zeta (ζ), que atua impedindo
a agregação das hemácias na corrente sangüínea. Alterações de cargas nos eritrócitos podem refletir
lesões de membrana ocorridas durante o armazenamento. Neste trabalho, realizamos a montagem
do sistema de PO e estabelecemos metodologias para quantificar o ζ e μ. Aplicamos essa
metodologia para medidas do ζ em hemácias recém coletadas com EDTA e, visando avaliar
alterações relacionadas a lesões oxidativas do armazenamento, também realizamos um estudo
temporal do ζ e da μ em células do CH coletadas com CPD/SAG-M. O ζ é obtido através da
velocidade terminal das células após serem liberadas da armadilha óptica, sob diferentes voltagens.
Já a μ é medida movimentando as células aprisionadas com velocidades progressivas e a máxima
deformação é registrada. A μ é obtida analisando-se a deformação da hemácia em função da
velocidade. Quanto maior for o valor obtido, menos elástica a hemácia. Para todos os estudos
realizados, pelo menos 20 células foram analisadas. As medidas do ζ e da μ foram realizadas no
primeiro dia de cada semana durante o período de 35 dias. O ζ em EDTA foi -8,0 mV. Para
hemácias estocadas em CPD/SAG-M os valores do ζ foram decrescentes a partir do 1º dia de
armazenamento. Os valores médios foram de -14,8 mV (1ª semana), da 2ª semana até a 4ª semana
de ζ = -10,0 mV, decaindo para valores mais baixos a partir da 5ª semana, estabelecendo assim em -
8,0 mV. Já para a μ, após a primeira 1a semana, o valor médio foi 4,1x10-4 dina/cm, permanecendo
constante até o final da 2a semana. Ao final da 3a semana observou-se o valor de 4,6x10-4 dina/cm,
ao término da 4a semana de 6,4x10-4 dina/cm, atingindo 9,6x10-4 dina/cm na 5a semana. A redução
mais acentuada do ζ na 1ª semana pode ser devido a enzimas liberadas de leucócitos lisados que
podem alterar as glicoproteínas da membrana eritrocitária levando a uma redução das cargas
negativas. Assim, avaliamos o efeito da leucorredução sobre as cargas elétricas das hemácias
estocadas e observamos que as mesmas apresentaram o mesmo perfil de decaimento de cargas que
as não deleucocitadas, mostrando que a presença de leucócitos não é a responsável por este
decaimento. Visto que a maioria dos testes imunohematológicos de reação antígeno-anticorpo,
realizados em bancos de sangue, são baseados no princípio de aglutinação e necessitam da
diminuição do ζ para que a reação ocorra, substâncias potencializadoras como a papaína, que atuam
diminuindo este ζ são empregadas rotineiramente nestes centros. Como esses testes podem ser
realizados em hemácias coletadas em EDTA ou em bolsas de doação e sabendo que hemácias
coletadas em EDTA apresentaram valores menores do ζ em relação às em CPD/SAG-M, avaliamos
o ζ de hemácias papainizadas coletadas nestes dois meios. Os ζ foram em módulo 3,2 (EDTA) e 4,0
mV (CDP/SAG-M). Esses resultados mostram que mesmo que o ζ seja diferente inicialmente em
EDTA e CPD/SAG-M, em ambos os casos ocorre à redução necessária para a que haja a
aglutinação. Além disso, observamos que após o tratamento com papaína, algumas hemácias se
tornam carregadas positivamente, mas o ζ continua reduzido em módulo. Em conclusão, através da
PO foram estabelecidas metodologias sensíveis e capazes de quantificar importantes propriedades
eritrocitárias, que poderão contribuir tanto para a compreensão dos efeitos do armazenamento nas
cargas de membrana e na elasticidade das hemácias em diferentes e variadas situações, como para a
padronização de técnicas de hemaglutinação na rotina transfusional, melhorando a sensibilidade da
reação sem perda significativa da especificidade
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/2142 |
| Date | 31 January 2010 |
| Creators | César Nunes da Silva, Diego |
| Contributors | Fontes, Adriana |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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