Η παρούσα εργασία στοχεύει στην «χαρτογράφηση» της περιοχής 3’UTR του ανθρώπινου γονιδίου της β-σφαιρίνης, ως προς την παρουσία σ’ αυτήν δομών που έχουν σημασία στο μεταβολισμό του mRNA – την ωρίμανση του 3’ άκρου του μηνύματος, ή / και την σταθεροποίησή του. Η μελέτη έγινε με τον σχεδιασμό μεταλλάξεων στην 3’UTR οι οποίες επιφέρουν μεταβολές στην πρωτοταγή και τη δευτεροταγή αλληλουχία της περιοχής, και την δημιουργία τριών μεταλλαγμένων γονιδίων β-σφαιρίνης στην 3’ UTR τους. Στη συνέχεια μελετήθηκε η έκφραση των μεταλλαγμένων γονιδίων σε διαγονιδιακές κυτταροκαλλιέργειες ερυθρολευχαιμικών κυττάρων ποντικού (mouse erythroleukaemia cells, MEL), με λειτουργικά πειράματα ανάλυσης του RNA με τη μέθοδο της προστασίας από τη νουκλεάση S1. Η έκφραση των μεταλλαγμένων διαγονιδίων προσδιορίστηκε σε σχέση με την έκφραση του φυσιολογικού γονιδίου της β-σφαιρίνης, λαμβάνοντας υπόψη τον αριθμό των αντιγράφων των διαγονιδίων στα κύτταρα, και την έκφραση του ενδογενούς σφαιρινικού γονιδίου βmaj του ποντικού. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι και τα τρία μεταλλαγμένα γονίδια παρουσιάζουν μειωμένα ποσοστά έκφρασης και μειωμένη επάρκεια ωρίμανσης του 3’ άκρου του mRNA, ενώ ο ρυθμός αποδόμησης του –μεταλλαγμένου– mRNA δεν διαφέρει από το φυσιολογικό για κανένα από τα τρία γονίδια. Συμπερασματικά, με την μελέτη αυτή επιβεβαιώνεται ο ρόλος της περιοχής 3’UTR του γονιδίου της β-σφαιρίνης στην διαδικασία ωρίμανσης του 3’ άκρου του mRNA, και η απουσία ειδικού σταθεροποιητικού μηχανισμού για το mRNA στην περιοχή του γονιδίου που μελετήθηκε με τις παρούσες μεταλλάξεις. / The present work aimed at mapping of the 3’UTR of the human β-globin gene as to the possible presence of structures that are involved in mRNA metabolism; in particular effective 3’ end formation or / and stability of the message. The study involved the design of 3’ UTR mutations that alter the primary and secondary structure of the sequence, and the subsequent formation of three mutant β-globin genes. The expression of the mutated genes was studied in transgenic mouse erythroleukaemia cell (MEL) lines, with functional analysis of mRNA expression using S1 nuclease protection assays. The expression of the mutated transgenes was compared to the relevant expression of the normal β-globin transgene, after correcting for transgene copy number and expression of the endogenous murine globin gene βmaj. Our results show that all three studied mutant transgenes have decreased expression levels, and decreased efficiency in 3’ end formation of the mRNA, whereas the stability of the –mutant– mRNA is not affected for any of the three transgenes. We conclude that the β-globin 3’ UTR plays an important role in the efficiency of message 3’ end formation, and that the mutations studied do not disrupt any stabilising mechanism.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:upatras.gr/oai:nemertes:10889/371 |
| Date | 27 June 2007 |
| Creators | Ψιούρη, Λαμπρινή |
| Contributors | Αθανασιάδου, Αγλαϊα, Μανιάτης, Γεώργιος, Antoniou, Michael, Psiouri, Lambrini, Παπαχατζοπούλου, Αδαμαντία, Γρέκα-Σπηλιώτη, Βασιλική, Δραϊνας, Διονύσιος, Ζούμπος, Νικόλαος, Μανταγός, Στέφανος, Ζαρκάδης, Ιωάννης, Αθανασιάδου, Αγλαϊα |
| Source Sets | University of Patras |
| Language | gr |
| Detected Language | Greek |
| Relation | Η ΒΥΠ διαθέτει αντίτυπο της διατριβής σε έντυπη μορφή στο βιβλιοστάσιο διδακτορικών διατριβών που βρίσκεται στο ισόγειο του κτιρίου της. |
Page generated in 0.1126 seconds