Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Zabrotes subfasciatus is the most common pest of the stored beans
(Phaselous vulgaris). This study was carried out to characterize ATPase from Z.
subfasciatus larvae and to investigate its phytotherapy modulation. Larvae
extracted from Phaseolus vulgaris were firstly homogenised in extraction buffer,
and then centrifuged 45000g for 30min at 4ºC. Supernatant was fractioned with
ammonium sulfate, precipitaded fraction on 45-80% saturation was homogenized
in reduction ionic strength buffer, centrifuged and the supernatant was applied in
ion exchange chromatography on Q-Sepharose. The column was eluted with
200mM NaCl and after that with salt gradient containing 200 to 500mM NaCl. After
chromatography, fractions that presented Ca2+/Mg2+-ATPase activity constituted Z.
subfasciatus larvae ATPase fraction. The main polypeptide from this fraction
showed relative molecular weight similar of the myosin VII. This fraction presented
significant K+/EDTA-ATPase activity. Both pyrophosphate and ADP were not
hydrolyzed. Tapsgargin, ouabain and azide did not inhibit Ca2+/Mg2+-ATPase
activity. Aqueous extracts from leaves of C. ambrosioides, R. officinalis and E.
citriodora inhibited Ca2+/Mg2+-ATPase activity, being the last one more effective.
These results strongly indicate the presence of myosin in Z. subfasciatus larvae
ATPase fraction, considering that it presented high K+/EDTA activity. / Zabrotes subfasciatus (Boheman) é a principal praga do feijão comum
(Phaselous vulgaris). O objetivo do presente estudo foi a purificação,
caracterização e modulação fitoterápica de uma ATPase a partir da fração solúvel
de larvas de Z. subfasciatus. As larvas, recém extraídas do feijão, foram
homogeneizadas em tampão de extração e centrifugadas a 45.000 g por 30 min a
4ºC. O sobrenadante foi fracionado com sulfato de amônio. A fração precipitada
45-80% de saturação foi homogeneizada em tampão de baixa força iônica e
centrifugada, o sobrenadante resultante foi aplicado em coluna de Q-Sepharose.
A coluna foi eluída com NaCl 200mM e, posteriormente, com um gradiente de
NaCl 200 a 500mM. Após a cromatografia, as frações que expressaram maior
atividade Ca2+/Mg2+-ATPase foram reunidas, constituindo a fração ATPase de
larvas de Z. subfasciatus. O principal polipeptídio dessa fração apresentou massa
molecular relativa um pouco acima da cadeia pesada de miosina II. A fração
ATPase apresentou atividade K+/EDTA-ATPase significativa. O PPi e o ADP
praticamente não foram hidrolisados,. Tapsigargina, ouabaína e azida não inibiram
a atividade Ca2+/Mg2+-ATPase. Extrato aquoso de Eucalyptus citriodora,
Chenopodium ambrosioides e Rosmarinus officinalis inibiram a atividade
Ca2+/Mg2+-ATPase, sendo que o Eucalyptus citriodora inibiu por completo essa
atividade. A caracterização desta fração excluiu a possibilidade da presença de
várias ATPases e apresentou um forte indício da presença de miosina, devido a
alta atividade K+/EDTA. / Mestre em Genética e Bioquímica
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/urn:repox.ist.utl.pt:RI_UFU:oai:repositorio.ufu.br:123456789/15819 |
| Date | 16 April 2009 |
| Creators | França, Juliana Luzia |
| Contributors | Coelho, Milton Vieira, Hamaguchi, Amélia, Leone, Francisco de Assis |
| Publisher | Universidade Federal de Uberlândia, Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica, UFU, BR, Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFU, instname:Universidade Federal de Uberlândia, instacron:UFU |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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