Les ATPases de type P1 assurent le transport d'ions métalliques lourds tels que le Cu+, le<br />Cd2+ ou le Zn2+ à travers une membrane. Ce transport, qualifié d'actif parce que s'exerçant<br />en sens inverse du gradient électrochimique de l'ion transporté, utilise l'énergie libérée lors<br />de l'hydrolyse de l'ATP. Une étude accomplie en 1992 indique que 36% des Listeria<br />monocytogenes sont résistantes à de hautes concentrations de Cd2+. Cette résistance est<br />associée à la présence de plasmides, parmi lesquels pLm74 qui présente une séquence de<br />2136 paires de bases codant pour un polypeptide de 711 acides aminés nommé CadA. Ce<br />polypeptide possède les 3 séquences signatures des ATPases de type P, les motifs DKTGT,<br />MxTGD et TGDGxNDxP et les 2 séquences signatures des ATPases de type P1, les motifs<br />CXXC et CPC. L'objectif de cette thèse était la recherche des acides aminés constituant la<br />voie de passage du Cd2+ au sein du domaine transmembranaire de CadA. Ce travail a<br />nécessité l'expression de CadA dans la levure Saccharomyces cerevisiae et la<br />caractérisation du phénotype de sensibilité au Cd2+ induit par la présence de CadA. Il a aussi<br />nécessité une étude enzymatique de CadA au cours de laquelle nous avons montré que le<br />Cd-ATP pouvait remplacer le Mg-ATP dans le cycle enzymatique de la protéine. Quatre<br />hélices transmembranaires (3, 4, 6 et 8) constitueraient la voie de passage du Cd2+ dans<br />CadA. Au sein de ces hélices, les acides aminés M149, C354 et T684 pourraient faire partie<br />du site de liaison tandis que E164 et C356 pourraient être importants dans le processus de<br />dissociation du métal. P355 et D692 seraient nécessaires à la phosphorylation de l'enzyme.<br />L'étude des domaines cytoplasmiques N (liaison des nucléotides) et P (phosphorylation) de<br />CadA a été aussi abordée au cours de cette thèse. La caractérisation fonctionnelle<br />d'ATPases chimériques a mis en évidence la possibilité d'échanger le domaine de<br />phosphorylation entre différentes ATPases de type P.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:CCSD/oai:tel.archives-ouvertes.fr:tel-00121780 |
| Date | 20 January 2005 |
| Creators | Wu, Chen-Chou |
| Source Sets | CCSD theses-EN-ligne, France |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | PhD thesis |
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