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Desenvolvimento de nanosistemas contendo 17-AAG com propriedade antitumoral

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-07-28T13:28:28Z
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Previous issue date: 2016-02-17 / CNPQ / O 17-N-alil-amino-17-demetoxigeldanamicina (17-AAG) é um inibidor da
proteína chaperona Hsp90 e tem sido estudado extensivamente como um
agente anticancerígeno. O seu uso terapêutico ainda é limitado devido a sua
baixa hidrofilicidade e toxicidade. Diante disso, o estudo tem como objetivo
principal desenvolver um nanossistema contendo 17-AAG e verificar a sua
ação antiproliferativa com efeitos tóxicos reduzidos. Primeiro, foram
desenvolvidos lipossomas catiônicos contendo 17-AAG avaliando sua ação
através de análises in vitro (viabilidade celular para linhagem de células Hela,
MCF-7, J774 e Sarcoma 180) e in vivo (atividade antintumoral utilizando o
tumor de Ehrlich). No segundo momento, foram preparados complexos de
inclusão (17-AAG:HPβCD) obtidos por liofilização e caracterizados físicoquimicamente.
Por último, os lipossomas contendo complexo de inclusão do
17-AAG foram preparados pelo método de hidratação do filme lipídico e
submetidos a análise de citotoxicidade frente as células Hela e MCF-7. Os
lipossomas catiônicos desenvolvidos apresentaram monodispersos e com
tamanho inferior a 200 nm. O 17-AAG na bicamada dos lipossomas influenciou
apenas na diminuição do potencial zeta passando de +21,13 para +11, 43 mV.
O tratamento nas três células de câncer com estes lipossomas contendo o 17AAG
e nas diferentes concentrações estudadas, demonstraram percentuais
maiores de inibição em relação ao composto livre. Já os lipossomas branco
não foram tóxicos frente as células sadias como macrófagos (J774). Nos
estudos in vivo foi verificado que não houve diferença estatística quanto ao
volume do tumoral, peso dos animais, peso do tumor, peso dos órgãos e índice
mitótico. No entanto, alterações foram visíveis na histomorfologia do baço,
fígado e rins. Os complexos de inclusão obtidos demonstraram a integridade do
17-AAG identificado através do teor (99 ± 0.79%).O diagrama de solubilidade
de fases de 17-AAG:HPβCD apresentou uma curva do tipo AL, com K1:1 = 5,3
CAMPOS, T.A., (2016) Desenvolvimento de um nanosistema contendo 17-AAG ... 11
M-1. Na presença de 1000 mM de HPβCD, a solubilidade do 17-AAG aumentou
39 vezes. O complexo de inclusão 17-AAG:HPβCD apresentou modificações
no IV, difração de raios-X, microscopia e DSC e TG, sugerindo a formação do
complexo de inclusão. A citotoxicidade frente a células sadias (J774)
evidenciaram que o complexo de inclusão apresentou efeitos inibitórios
similares ao composto livre em concentrações <10 µM. Após o processo de
preparação, os lipossomas contendo complexo de inclusão apresentaram
diâmetro médio variando iando entre 142 e 157 nm, e o índice de polidispersão não
superior a 0,37. As formulações mantiveram-se estáveis após 30 dias quando
armazenadas a 4ºC. Os resultados apresentaram, que não há diferença
significativa nas formas de encapsular o 17-AAG nos lipossomas, revelando
uma EE% de 99% para ambos tipos. Os lipossomas desenvolvidos neste
estudo, obtiveram uma carga positiva e sua morfologia microscópica confirma o
tamanho e o tipo de lipossomas preparados. Nos estudos de citotoxicidade a
ação inibitória do LP-17-AAG e o LP-17-AAG:HPβCD demonstraram-se mais
eficientes comparado ao fármaco livre. Estes resultados demonstram que a
complexação do 17-AAG a ciclodextrina, e sua incorporação em lipossomas,
proporcionou uma melhoria na estabilidade e hidrossolubilidade do composto,
viabilizando, portanto, seu uso terapêutico. / The 17-N-allylamino-17-demethoxygeldanamycin (17-AAG) is an inhibitor of
Hsp90 chaperone protein and has been extensively studied as an anticancer
agent. The therapeutic use is still limited due to its low hydrophilicity and
hepatotoxicity. Thus, the study aims to develop a nanossistema containing 17AAG
and check their antiproliferative action with reduced toxicity. First, cationic
liposomes containing 17-AAG were developed evaluating their action through in
vitro tests (cell viability for line of Hela cells, MCF-7, J774 and Sarcoma 180)
and in vivo (antintumoral activity using the Ehrlich tumor). In the second phase,
they were prepared inclusion complexes (17-AAG: HPβCD) obtained by
lyophilization and physico-chemically characterized. Finally, liposomes
containing the inclusion complex of 17-AAG were prepared by lipid film
hydration method and subjected forward cytotoxicity assay Hela and MCF-7
cells. Developed cationic liposomes showed monodisperse and smaller than
200 nm. The 17-AAG in the bilayer of the liposomes only influenced the
decrease in zeta potential of passing +21.13 +11 to 43 mV. The treatment in all
three cancer cells with these liposomes containing 17-AAG and different
concentrations studied showed greater percentage inhibition compared to the
free compound. Already the white liposomes were no toxicity in healthy cells
such as macrophages (J774). In vivo studies it was found that there was no
statistical difference in the volume of tumor, animal weight, tumor weight, organ
weight and mitotic index. However, changes were visible on histomorphology of
spleen, liver and kidneys. The solubility phase diagram of 17-AAG: HPβCD
showed a curved-type LA, K1: 1 = 5.3 m-1. In the presence of HPβCD 1000 mm,
the solubility of 17-AAG increased 39 times. The inclusion complex of 17-AAG:
HPβCD presented modifications IR, X-ray diffraction, microscopy and DSC and
TG, suggesting the formation of the inclusion complex. After the manufacturing
process, liposome proved to be homogeneous with a mean diameter ranging
between 142 and 157 nm and a polydispersity not exceeding 0.37.The front
cytotoxic to healthy cells (J774) showed that the inclusion complex showed
similar inhibitory effects to the free compound in concentrations of <10 µM. After
the process of preparation of the inclusion complex containing liposomes had
an average diameter between 142 and 157 nm and the polydispersion index not
greater than 0.37. The formulations were stable after 30 days when stored at 4 °
C. The results showed that there is no significant difference in the ways of
encapsulating 17-AAG in liposomes, revealing an EE% 99% for both types. The
Liposomes developed in this study obtained a positive charge and their
microscopic morphology confirms the size and type of liposomes. In cytotoxicity
studies the inhibitory action of the LP-17-AAG and the LP-17-AAG: HPβCD
proved to be more efficient compared to the free drug.These results
demonstrate that the complexation of cyclodextrin 17-AAG, and their
incorporation into liposome gave an improvement in stability and water solubility
of the compound, allowing therefore their therapeutic use.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/20119
Date17 February 2016
CreatorsCAMPOS, Thiers Araújo
Contributorshttp://lattes.cnpq.br/2869680994075940, MACHADO, Giovanna, MELO, Janaina Viana de
PublisherUniversidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas, UFPE, Brasil
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguageBreton
Detected LanguageEnglish
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE
RightsAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess

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