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Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Embora a resistência ao anoikis seja considerada um importante processo
envolvido no fenótipo maligno, a relação causal entre transformação neoplásica e
crescimento independente de ancoragem continua indefinida. Para estudar essa
correlação, foi desenvolvido em nosso laboratório um modelo experimental de
transformação maligna de melanócitos murinos, em que melanócitos melan-a foram
submetidos a ciclos seqüenciais de bloqueio de ancoragem. Ao longo deste processo,
foram estabelecidas tanto linhagens celulares correspondendo a fases intermediárias
da progressão tumoral como linhagens de melanoma, as quais são progressivamente
resistentes ao anoikis e representam fases distintas da progressão tumoral. Análises de
expressão gênica mostraram aumento da expressão de Timp1 nas linhagens de
melanoma quando comparadas à linhagem parental de melanócitos. Ainda que descrita
como inibidora de MMPs, essa proteína foi recentemente associada à resistência ao
anoikis em células epiteliais de mama humana. Deste modo foram analisadas neste
trabalho: 1) a relação entre expressão de Timp1 e aquisição do fenótipo resistente ao
anoikis e 2) a possível regulação epigenética da expressão de Timp1 por metilação de
DNA neste modelo. Enquanto células melan-a expressam baixos níveis de Timp1,
todas as linhagens derivadas desta expressam níveis elevados desta proteína. O
tratamento dos melanócitos melan-a com o agente desmetilante 5-aza-2’-deoxicitidina
resultou em aumento significativo da expressão de Timp1. De fato, a análise pelo
ensaio Methylation sensitive-Single Nucleotide Primer Extension (Ms-SNuPE) mostrou
aumento progressivo na desmetilação do gene Timp1 em paralelo a sua crescente
expressão ao longo da transformação maligna. A superexpressão de Timp1 em células
melan-a resultou no aumento da sobrevivência das mesmas em condições
independentes de ancoragem, mas foi incapaz de transformá-las. Além disso, o tempo
de latência para o aparecimento de tumores foi menor para células de melanoma
transfectadas com Timp1, indicando que esta molécula pode estar associada com a
agressividade do tumor. Esses resultados mostram aumento da expressão de Timp1
durante a transformação maligna, em decorrência da desmetilação gênica progressiva,
associado ao aumento da resistência ao anoikis, mas não à aquisição de um fenótipo
maligno transformado. / Although anoikis resistance has been considered a hallmark of malignant
phenotype, the causal relation between neoplastic transformation and anchorageindependent
growth remains undefined. We developed an experimental model of
murine melanocyte malignant transformation, where a murine melanocyte lineage
(melan-a) was submitted to sequential cycles of substrate adhesion blockade. Cells
corresponding to intermediate phases of tumor progression and melanoma cell lines
were established and show progressive anoikis-resistance. Gene expression analysis
showed up-regulation of Timp1 in all melan-a-derived lineages. Treatment with a
demethylating agent resulted in marked expression of Timp1 in melan-a melanocytes.
In fact, Ms-SNuPE analysis showed increased demethylation in Timp1 gene in parallel
with its expression along malignant transformation. Although described as a MMP
inhibitor, this protein has been recently associated with apoptosis resistance in human
breast epithelial cells. Melan-a cells overexpressing the Timp1 gene showed increased
survival in anchorage-independent conditions, but were unable to form tumors in vivo,
whereas Timp1-overexpressing melanoma cells showed reduced latency time for tumor
appearance. Our results show an increment in Timp1 expression along carcinogenesis,
possibly associated to a progressive gene demethylation, which is causally related with
an increase in anoikis-resistance but not with the acquisition, by itself, of a fully
transformed malignant phenotype. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unifesp.br:11600/24092 |
| Date | January 2008 |
| Creators | Ricca, Tatiana Iervolino [UNIFESP] |
| Contributors | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Jasiulionis, Miriam Galvonas [UNIFESP] |
| Publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 214 f. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNIFESP, instname:Universidade Federal de São Paulo, instacron:UNIFESP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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