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Previous issue date: 2013-02-27 / FACEPE / A solasodina, alcalóide esteroidal obtido principalmente de plantas do gênero Solanum, pertencente à família Solanaceae, que apresenta duas formas glicosiladas: solamargina e solasonina. A potente ação antitumoral da solasodina frente tumores malignos e benignos de pele, é decorrente da presença de uma mistura de glicosídeos presentes na molécula e já vem sendo comercializado como Curadem®. A porção glicosídica, portanto, viabiliza o reconhecimento de receptores de membrana induzindo sua internalização e viabilizando sua ação biológica. As limitações de rendimento na extração dos glicosídeos da solasodina permite a extração da aglicona em maior rendimento. Assim sendo, este trabalho visa o desenvolvimento de um nanosistema mais efetivo na entrega da solasodina e avaliação da ação antiproliferativa frente a diferentes linhagens celulares. Nanocápsulas furtivas contendo solasodina (SSD-NC) foram obtidas pelo método de precipitação de um polímero pré-formado e caracterizadas através da avaliação da morfologia por microscopia eletrônica de varredura, determinação do pH, tamanho médio, índice de polidispersão e carga de superfície de partículas. A atividade antiproliferativa da solasodina nanoencapsulada foi avaliada frente às linhagens celulares NIH 3T3 (fibroblastos normais), 4T1 (câncer de glândula mamária de murino) e MCF- 7 (câncer de tumor de mama). A citotoxidade das SSD-NCS foi determinada pelo método MTT após tratamento de 48 horas, utilizando concentrações de 100 a 0,78 μg/mL de SSD-NC. O mecanismo de morte celular avaliado através da marcação com anexina V e iodeto de propídio, a determinação do potencial de membrana mitocondrial e a fragmentação de DNA das células tratadas com SSD-NC (3,125 e 6,25 μg/mL) foram realizados por citometria de fluxo. As células 4T1 e MCF-7 apresentaram uma redução significativa dose e tempo-dependente na viabilidade, enquanto que as células NIH 3T3 apresentaram citoxidade reduzida até concentrações ≥ 25 μg/mL. Os valores de IC50 de SSD-NC nas linhagens 4T1 e MCF-7 foram de 5,31 e 4,14 μg/mL, respectivamente. Aumento na fragmentação do DNA das células 4T1 e na MCF-7 foi observado em função do aumento da concentração de SSD-NC. As células foram marcadas apenas pelo iodeto de propídio, demonstrando perda da permeabilidade da membrana celular, sugerindo necrose como mecanismo de morte celular. A análise do potencial de membrana mitocondrial revelou que o tratamento com SSD-NC induziu alterações na membrana dessas organelas, confirmando os resultados obtidos através do método MTT, onde as células apresentaram alteração em sua viabilidade. Estes achados sugerem que o tratamento das células 4T1 e MCF-7 com SSD-NC induz o processo de necrose associado a severas alterações morfológicas nas células. A encapsulação da solasodina apresentou um potencial efeito antiproliferativo, viabilizando futuros estudo in vivo da ação antitumoral. / Solasodine, a steroidal alkaloid obtained mainly from plants of the genus Solanum and Solanaceae family, is presented in two glycosylated forms: solamargine and solasonine. The potent antitumor action of solasodine against benign and malignant skin tumors is due to the presence of a mixture of glycosides present in its molecular structure, alredy being marketed as Curaderm®. A glycoside moiety, therefore, enables the recognition of membrane receptors and induces the cellular internalization allowing the biological activity. The extraction yield of solasodine glycosides is limited, but the extraction of aglycone occurs in higher yield. Thus, this study aims to develop and characterize more effective delivery nanosystems of solasodine and evaluate its antiproliferative activity against different cell lines. Stealth nanocapsules containing solasodine (SSD-NC) were obtained by the method of interfacial precipitation of a preformed polymer and characterized trough the morphology using scanning electron microscopy, and measurements of pH, particle size, polydispersity and surface charge. The antiproliferative activity of SSD-NC was evaluated against the cell lines NIH 3T3 (normal fibroblasts), 4T1 (murine breast cancer) and MCF-7 (human breast cancer) at concentrations ranging from 25.0 to 0.78μg/ml. The cytotoxicity of SSD-NC was determined by MTT assay after treatment of cells with concentrations varying from 25 to 0.78 μg/mL for 48 hours. The mechanism of cell death was evaluated by annexin V or propidium iodide staining, the mitochondrial membrane potential and DNA fragmentation of cells using flow cytometry at the concentrations of 3.125 and 6.25 μg/mL. A significant reduction in the viability of 4T1 and MCF-7 cells was verified in a dose and time-dependent manner, whereas the normal cells NIH 3T3 showed a lower cytotoxicity up to concentrations ≥ 25 μg/mL. IC50 values of solasodine encapsulated against 4T1 and MCF-7 cells were 5.31 and 4.14 μg/mL, respectively. A slight increase in DNA fragmentation of 4T1 and MCF-7 cells was found with the increase in SSDNC concentrations. Cells were labeled only with propidium iodide, indicating loss of cell membrane permeability and suggesting necrosis as the death mechanism. Analysis of mitochondrial membrane potential showed that the treatment with SSD-NC induces changes in the organelle membranes, confirming the results of the MTT assay, where the cells presented alterations in viability. These findings suggest that treatment of 4T1 and MCF-7 cells with SSDNC induces necrosis process associated with severe morphological changes. Encapsulation of solasodine presented a potential antiproliferative effect, allowing future in vivo study of antitumor action.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/25584 |
| Date | 27 February 2013 |
| Creators | CÂMARA, Ana Lygia dos Santos |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/1063790618901917, MAGALHÃES, Nereide Stela Santos, SANTOS, Noemia Pereira da Silva |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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