La détection de l'apoptose revêt un intérêt considérable en raison de son implication
dans de nombreuses pathologies d'incidence élevée, comme le cancer ou la maladie d'Alzheimer
pour n'en citer que deux. Des méthodes de mise en évidence de ce phénomène se multiplient et se développent sans cesse visant à détecter in vitro voire même in vivo, cette forme de mort cellulaire programmée. Grâce à son pouvoir de résolution élevé et à des agents de contraste spécifiques, l'Imagerie par Résonance Magnétique (IRM) offre la possibilité de
détecter, de manière non invasive, les cellules apoptotiques. Cette approche trouvera son
utilité pour la mise au point de traitements anti-tumoraux et pour leur suivi en clinique. Aujourd'hui, il existe des agents de contraste magnétiques capables de reconnaître les cellules
apoptotiques, mais leurs molécules vectrices sont constituées de protéines, d'anticorps ou
de leurs domaines dont on ne peut ignorer l'important pouvoir immunogène. Des molécules
mimétiques ou des oligomères de petite taille comme des peptides seraient plus adaptés et
plus simples à synthétiser chimiquement. Notre travail porte sur la sélection, de peptides
capables de reconnaître spécifiquement les cellules apoptotiques, en se fixant à la phosphatidylsérine (molécule marqueur des cellules apoptotiques). Ces peptides ont été sélectionnés par la méthode du phage display. Le phage display est une technique de biologie moléculaire permettant de sélectionner, entre autre, des peptides de longueur déterminée, en fonction de leur affinité pour une cible donnée. Plusieurs milliards de séquences peptidiques exposées par les phages constituant la bibliothèque, peuvent être testés simultanément. Les meilleures séquences sont ensuite synthétisées chimiquement et testées indépendamment du phage.
Dans la première partie de ce travail, plusieurs protocoles de phage display basés sur
différentes méthodes d'immobilisation de la cible, et différents types de bibliothèques de
phages ont été testés et comparés. A l'issue de ces sélections, plusieurs phages présentant
une affinité élevée pour la phosphatidylsérine ont été sélectionnés. Un des peptides exposés par un de ces phages, nommé E3, a été synthétisé et étudié dans la seconde partie
de ce travail. Le peptide E3 a été d'abord greffé à un contrastophore magnétique de type
superparamagnétique (Ultra Small Particle Iron Oxide) pour être testé in vitro sur des systèmes biologiques (apoptose induite chez des cellules Hep G2 par la camptothécine). Après
avoir été testé avec succès sur culture cellulaire, ce nouvel agent de contraste magnétique a été utilisé, in vivo dans le modèle murin d'apoptose hépatique induite par injection i.v. d'anticorps anti-Fas. Comme tout agent de contraste de type particulaire, le GG-E3-USPIO
(peptide E3 greffé aux USPIOs par un pont diglycyle) serait capté de manière non spécifique
par le foie. Il doit donc être rendu "furtif" pour permettre l'exploitation de sa spécificité.
Afin de contourner le problème de capture non spécifique par le foie, le GG-E3-Gd-DTPA
(peptide E3 greffé au Gd-DTPA par un pont diglycyle), un autre agent de contraste, cette
fois de type paramagnétique, a été synthétisé. Les agents de contraste GG-E3-USPIO-PEG
(peptide E3 greffé aux USPIO recouvertes de polyéthylèneglycol par un pont diglycyle) et
GG-E3-Gd-DTPA se sont avérés efficaces, provoquant respectivement une diminution et un
rehaussement du signal des foies apoptotiques de souris en IRM.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:BICfB/oai:umh.ac.be:ETDUMH:UMHetd-03182009-124934 |
| Date | 24 June 2005 |
| Creators | Laumonier, Catherine |
| Contributors | Vander Elst Luce, Le Jeune Jean-Jacques, Corot Claire, Belayew, Alexandra, Noël Agnès, Muller, Robert N. |
| Publisher | Universite de Mons Hainaut |
| Source Sets | Bibliothèque interuniversitaire de la Communauté française de Belgique |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | text |
| Format | application/pdf |
| Source | http://theses.umh.ac.be/ETD-db/collection/available/UMHetd-03182009-124934/ |
| Rights | unrestricted, J'accepte que le texte de la thèse (ci-après l'oeuvre), sous réserve des parties couvertes par la confidentialité, soit publié dans le recueil électronique des thèses UMH. A cette fin, je donne licence à UMH : - le droit de fixer et de reproduire l'oeuvre sur support électronique : logiciel ETD/db - le droit de communiquer l'oeuvre au public Cette licence, gratuite et non exclusive, est valable pour toute la durée de la propriété littéraire et artistique, y compris ses éventuelles prolongations, et pour le monde entier. Je conserve tous les autres droits pour la reproduction et la communication de la thèse, ainsi que le droit de l'utiliser dans de futurs travaux. Je certifie avoir obtenu, conformément à la législation sur le droit d'auteur et aux exigences du droit à l'image, toutes les autorisations nécessaires à la reproduction dans ma thèse d'images, de textes, et/ou de toute oeuvre protégés par le droit d'auteur, et avoir obtenu les autorisations nécessaires à leur communication à des tiers. Au cas où un tiers est titulaire d'un droit de propriété intellectuelle sur tout ou partie de ma thèse, je certifie avoir obtenu son autorisation écrite pour l'exercice des droits mentionnés ci-dessus. |
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